Name: visualizing neuroblast cytokinesis during c. elegans embryogenesis
Uploaded: 2014-03-12T18:05:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualizing Neuroblast Cytokinesis During C. elegans Embryogenesis at JoVE.com

Forfatterne ønsker å erkjenne at dette arbeidet ble støttet av naturvitenskap og Engineering Research Council of Canada (NSERC) stipend.

En. Utarbeidelse av plater for å opprettholde Worm Stammer og Performing RNAi <ol><li> Nematode vekstmedier Plates <ol><li> Tallerkener <ol><li> Forbered nematode vekstmedier (NGM) plater for å opprettholde ormen stammer og å utføre genetiske kors. Kombiner 3 g NaCl, 17 g agar og 2,5 g Bactopeptone med 1 liter destillert vann i en 2 L kolbe og tilsett en metallrørestav. </li><li> Autoklaver i kolben for å oppløse agaren og steriliseres mediet. Deretter plasserer kolben på en røre plate og la media avkjøles u...

<ol>
	<li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans.">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77, 71-94 (1974).</li><li>Fire, A., Xu, S., Montgomery, M. K., Kostas, S. A., Driver, S. E., Mello, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potent+and+specific+genetic+interference+by+double-stranded+RNA+in+Caenorhabditis+elegans.">Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans.</a> Nature. 391, 806-811 (1998).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans+Sequencing+Consortium.+Genome+sequence+of+the+nematode+C.+elegans:+a+platform+for+investigating+biology.">C. elegans Sequencing Consortium. Genome sequence of the nematode C. elegans: a platform for investigating biology.</a> Science. 282, 2012-2018 (1998).</li><li>Pennisi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Worming+secrets+from+the+C.+elegans+genome.">Worming secrets from the C. elegans genome.</a> Science. 282, 1972-1974 (1998).</li><li>Tabara, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+rde-1+gene,+RNA+interference,+and+transposon+silencing+in+C.+elegans.">The rde-1 gene, RNA interference, and transposon silencing in C. elegans.</a> Cell. 99, 123-132 (1999).</li><li>Chisholm, A. D., Hardin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Epidermal morphogenesis. WormBook. The C. elegans Research Community. , 1-22 (2005).</li><li>Zhang, H., Gally, C., Labouesse, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+morphogenesis:+how+multiple+cells+cooperate+to+generate+a+tissue.">Tissue morphogenesis: how multiple cells cooperate to generate a tissue.</a> Curr. Opin. Cell Biol. 22, 575-582 (2010).</li><li>Kiehart, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+healing:+the+power+of+the+purse+string.">Wound healing: the power of the purse string.</a> Curr. Biol. 9, 602-605 (1999).</li><li>Ikegami, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Semaphorin+and+Eph+receptor+signaling+guide+a+series+of+cell+movements+for+ventral+enclosure+in+C.+elegans.">Semaphorin and Eph receptor signaling guide a series of cell movements for ventral enclosure in C. elegans.</a> Curr. Biol. 22, 1-11 (2012).</li><li>Chin-Sang, I. D., George, S. E., Ding, M., Moseley, S. L., Lynch, A. S., Chisholm, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ephrin+VAB-2/EFN-1+functions+in+neuronal+signaling+to+regulate+epidermal+morphogenesis+in+C.+elegans.">The ephrin VAB-2/EFN-1 functions in neuronal signaling to regulate epidermal morphogenesis in C. elegans.</a> C. elegans. Cell. 99, 781-790 (1999).</li><li>Wang, X., Roy, P. J., Holland, S. J., Zhang, L. W., Culotti, J. G., Pawson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+Ephrins+Control+Cell+Organization+in+C.+elegans+Using+Kinase-Dependent+and+-Independent+Functions+of+the+VAB-1+Eph.">Multiple Ephrins Control Cell Organization in C. elegans Using Kinase-Dependent and -Independent Functions of the VAB-1 Eph.</a> Mol. Cell. 4, 903-913 (1999).</li><li>Chin-Sang, I. D., Moseley, S. L., Ding, M., Harrington, R. J., George, S. E., Chisholm, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+divergent+C.+elegans+ephrin+EFN-4+functions+in+embryonic+morphogenesis+in+a+pathway+independent+of+the+VAB-1+Eph+receptor.">The divergent C. elegans ephrin EFN-4 functions in embryonic morphogenesis in a pathway independent of the VAB-1 Eph receptor.</a> Development. 129, 5499-5510 (2002).</li><li>Ghenea, S., Boudreau, J. R., Lague, N. P., Chin-Sang, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+VAB-1+Eph+receptor+tyrosine+kinase+and+SAX-3/Robo+neuronal+receptors+function+together+during+C.+elegans+embryonic+morphogenesis.">The VAB-1 Eph receptor tyrosine kinase and SAX-3/Robo neuronal receptors function together during C. elegans embryonic morphogenesis.</a> Development. 132, 3679-3690 (2005).</li><li>Bernadskaya, Y. Y., Wallace, A., Nguyen, J., Mohler, W. A., Soto, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=UNC-40/DCC,+SAX-3/Robo,+and+VAB-1/Eph+polarize+F-actin+during+embryonic+morphogenesis+by+regulating+the+WAVE/SCAR+actin+nucleation+complex.">UNC-40/DCC, SAX-3/Robo, and VAB-1/Eph polarize F-actin during embryonic morphogenesis by regulating the WAVE/SCAR actin nucleation complex.</a> PLoS Genet. 8, (2012).</li><li>Piekny, A. J., Werner, M., Glotzer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokinesis:+welcome+to+the+Rho+zone.">Cytokinesis: welcome to the Rho zone.</a> Trends Cell Biol. 15, 651-658 (2005).</li><li>Piekny, A. J., Maddox, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+myriad+roles+of+Anillin+during+cytokinesis.">The myriad roles of Anillin during cytokinesis.</a> Sem. Cell Dev. Biol. 21, 881-891 (2010).</li><li>Zhao, W. M., Fang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anillin+is+a+substrate+of+anaphase-promoting+complex/cyclosome+(APC/C)+that+controls+spatial+contractility+of+myosin+during+late+cytokinesis.">Anillin is a substrate of anaphase-promoting complex/cyclosome (APC/C) that controls spatial contractility of myosin during late cytokinesis.</a> J. Biol. Chem. 280, 33516-33524 (2005).</li><li>Piekny, A. J., Glotzer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anillin+is+a+scaffold+protein+that+links+RhoA,+actin+and+myosin+during+cytokinesis.">Anillin is a scaffold protein that links RhoA, actin and myosin during cytokinesis.</a> Curr. Biol. 18, 30-36 (2008).</li><li>Hickson, G. R., O&#8217;Farrell, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rho-dependent+control+of+anillin+behavior+during+cytokinesis.">Rho-dependent control of anillin behavior during cytokinesis.</a> J. Cell Biol. 180, 285-294 (2008).</li><li>Fraser, A. G., Kamath, R. S., Zipperlen, P., Martinez-Campos, M., Sohrmann, M., Ahringer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+genomic+analysis+of+C.+elegans+chromosome+I+by+systematic+RNA+interference.">Functional genomic analysis of C. elegans chromosome I by systematic RNA interference.</a> Nature. 408, 325-330 (2000).</li><li>Kamath, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+functional+analysis+of+the+Caenorhabditis+elegans+genome+using+RNAi.">Systematic functional analysis of the Caenorhabditis elegans genome using RNAi.</a> Nature. 421, 231-237 (2003).</li><li>Duerr, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Immunohistochemistry. WormBook, The C. elegans Research Community. , 1-61 (2006).</li><li>Maddox, A. S., Habermann, B., Desai, A., Oegema, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+roles+for+two+C.+elegans+anillins+in+the+gonad+and+early+embryo.">Distinct roles for two C. elegans anillins in the gonad and early embryo.</a> Development. 132, 2837-2848 (2005).</li><li>Sulston, J. E., Schierenberg, E., White, J. G., Thomson, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+embryonic+cell+lineage+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">The embryonic cell lineage of the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Dev. Biol. 100, 64-119 (1983).</li><li>Chin-Sang, I. D., Chisholm, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Form+of+the+worm:+genetics+of+epidermal+morphogenesis+in+C.+elegans.">Form of the worm: genetics of epidermal morphogenesis in C. elegans.</a> Trends Genet. 16, 544-551 (2000).</li><li>Zhang, H., Labouesse, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+through+mechanical+inputs+&#8211;+a+coordinated+process.">Signaling through mechanical inputs &#8211; a coordinated process.</a> J. Cell Sci. 125, 3039-3049 (2012).</li><li>Guenther, C., Garriga, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+distribution+of+the+C.+elegans+HAM-1+protein+in+neuroblasts+enables+daughter+cells+to+adopt+distinct+fates.">Asymmetric distribution of the C. elegans HAM-1 protein in neuroblasts enables daughter cells to adopt distinct fates.</a> Development. 122, 3509-3518 (1996).</li><li>Audhya, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+complex+containing+the+Sm+protein+CAR-1+and+the+RNA+helicase+CGH-1+is+required+for+embryonic+cytokinesis+in+Caenorhabditis+elegans.">A complex containing the Sm protein CAR-1 and the RNA helicase CGH-1 is required for embryonic cytokinesis in Caenorhabditis elegans.</a> J. Cell Biol. 171, 267-279 (2005).</li><li>Maddox, A. S., Lewellyn , L., Desai, A., Oegema, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anillin+and+the+septins+promote+asymmetric+ingression+of+the+cytokinetic+furrow.">Anillin and the septins promote asymmetric ingression of the cytokinetic furrow.</a> Dev. Cell. 12, 827-835 (2007).</li><li>Dorn, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actomyosin+tube+formation+in+polar+body+cytokinesis+requires+Anillin+in+C.+elegans.">Actomyosin tube formation in polar body cytokinesis requires Anillin in C. elegans.</a> Curr. Biol. 20, 2046-2051 (2010).</li><li>Calixto, A., Ma, C., Chalfie, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+neuronal+RNAi+in+C.+elegans+using+SID-1.">Enhanced neuronal RNAi in C. elegans using SID-1.</a> Nat. Methods. 7, 554-559 (2010).</li></ol>

Denne protokollen beskriver bruken av ulike typer mikros til bildecelledel under midten embryogenese. Spesielt fremhever denne protokollen skal avbilde delingen av neuroblasts, celler som kan legge til rette for epidermal morphogenesis. Celle-celle-kommunikasjon er viktig for vev formasjon under metazoan utvikling og C. elegans er en utmerket modell for å studere vev dannelse in vivo. En hendelse som pent skildrer samspillet av vev er epidermal morfogenese, som dekker fosteret i et lag av epitelceller...

Mens det finnes protokoller som beskriver hvordan du bilde celledeling i tidlig C. elegans embryo, beskriver denne protokollen skal avbilde celledeling i en vev under midten embryogenese. En av de store utfordringene i bildebehandling organismer under utvikling har vært deres følsomhet for fototoksisitet. Imidlertid har økt tilgjengelighet til spinnende disk confocal mikroskoper eller feide feltmikroskop tillatt mer utbredte bildebehandlingsprogrammer. Begge systemer bruker faststoff-lasere og spredt lys, å begrense nivåene av UV at organismene er utsatt for. Imidlertid kan Widefield står fortsatt brukes for imaging in vivo, særlig hvis de er utstyrt med kameraer med høy følsomhet (f.eks EMCCD), blenderkontroll og lyskontroll (f.eks LED eller justerbare kvikksølvpærer). Denne protokollen beskriver hvordan du bruker enten en confocal basert system eller et widefield system til bilde celledeling innen utvikling C. elegans &lt;/ Em&gt; embryoer. Som et eksempel, beskriver vi hvordan du bilde neuroblast celledeling. Neuroblasts kan lette epidermal morphogenesis ved å gi kjemiske eller mekaniske signaler til de overliggende epidermale celler, og gir et utmerket eksempel på viktigheten av interkommunikasjon i dannelsen av vev. Caenorhabditis elegans er en ideell modell organisme for mikros baserte studier på grunn av sin åpenhet og enkel vev organisasjon en. Videre C. elegans er mottagelig for genetiske metoder og RNAi, og siden mange av sine gener har humane homologer, kan den brukes til å identifisere konserverte mekanismer for vevsdannelse 2-5. I C. elegans, dannelsen av epidermis oppstår under midten embryogenese, når fosteret har&gt; 300 celler. Epidermal morphogenesis består av flere hovedfasene, hvor fosteret er omsluttet av et lag av epidermale celler som constrict og strekker seg til å transformere embryo fra en ovoid form til den langstrakte form av en snekke 6.. Ventral kapsling beskriver en av disse morfogenetiske arrangementer, da de ventrale epidermale celler migrere mot den ventrale midtlinje for å dekke den ventrale overflaten av embryoet (figur 1). Først, to par anterior ligger forkanten celler migrere mot ventral midtlinjen, hvor de holder og sikring med sine kontralateral naboer seks. Dette er fulgt av migrering av de bakre beliggende lomme-celler, som danner kilelignende former skaper en ventral lomme 6-7. Mekanismen som lukker lommen er ikke godt forstått. En mulighet er at en supracellular aktin myosin kontraktile struktur binder pocket cellene sammen i en håndveske streng som mote, ligner på sårtilheling åtte. Interessant, er migrasjon av noen av lommecellene formidlet av bestemte undergrupper av underliggende neuroblasts 9 (nevrale forløpere som er funnet under epidermis; Figur 1B). Tidligere studier viste at neuroblasts regulere ventral epidermal cellemigrering og ventral kabinett. VAB-1 (Efrin reseptor) og VAB-2 (Efrin ligand) blir høyt uttrykt i neuroblasts og forenkle sorteringen av fremre og bakre neuroblasts fra hverandre, og mutasjoner i VAB-en eller VAB-2 årsak ventral kabinett fenotyper 10-13. Men arrangøren rednings eksperimenter viste at VAB-en er også nødvendig i de overliggende ventral epidermale celler og reseptorer for andre veilednings signaler skilles ut av neuroblasts er uttrykt i ventrale epidermale celler ni. Selv om mutasjoner i noen av disse reseptorene føre ventral kabinett fenotyper, er det ikke klart om defekter oppstår på grunn av problemer i neuroblast posisjonering eller på grunn av svikt i ventral epidermale celler å svare på veiledning Køer 14. Endring av delingen av neuroblasts without påvirker deres evne til å skille ut veilednings signaler kunne kaste lys over rollen som neuroblasts og deres evne til å gi mekanisk innspill under epidermal morphogenesis. Nylig ble det oppdaget at en celledeling genet, ani-1 (anillin) blir høyt uttrykt i neuroblasts (figur 2A) og dets uttømming forårsaker neuroblast delingsfeil. Interessant, disse embryoer vise ventral kabinett fenotyper (Fotopoulos, Wernike og piękny, upubliserte observasjoner). Anillin er nødvendig for celledeling, og spesielt for cytokinese, som beskriver en prosess der en mor celle fysisk deler seg i to datterceller. Cytokinesis er drevet av dannelsen av en actomyosin kontraktile ring, som må være strengt kontrollert i rom og tid for å sikre at det er riktig kombinert med søsterkromatidutveksling segregering. Hoved regulator av metazoan cytokinese er RhoA (RHO-en i C. elegans), en liten GTPase som er enctive i sin GTP-bundet skjema. GEF Ect2/ECT-2 aktiverer RhoA, etter som RhoA-GTP samhandler med nedstrøms effektorer som danner kontraktile ring og megle sin tätningssats 15. Anillin er en multidomeneprotein som binder til RhoA via sin C-terminus, og til aktin og myosin via sin N-terminus. Anillin er nødvendig for å stabilisere stillingen av kontraktile ring i pattedyr eller Drosophila S2-celler 16. Anillin uttømming fører kontraktile ringer for å gjennomgå laterale svingninger, og cytokinese slutt svikter forming multinucleate celler 17-19. Interessant, selv om C. elegans ani-en koordinerer actomyosin kontraktilitet i tidlig embryo, det er ikke avgjørende for cytokinese. Men, som beskrevet ovenfor, er ani-en som kreves for neuroblast cytokinese under mid-embryogenese (Fotopoulos, Wernike og piękny, upubliserte observasjoner). Cytokinesis fiasko vil endre antallet og plasseringen av neuroblasts og kunne påvirke locasjon av kjemiske veiledning pekepinner, eller det kan endre de mekaniske egenskapene til vevet. Begge modellene markere nonautonomous rolle neuroblasts for ventral kabinett, og viktigheten av vev-vev kommunikasjon under embryonal utvikling. Dette eksperimentelle protokollen beskriver hvordan bilde celledeling under C. elegans mid embryogenese bruker fluorescens mikroskopi. De fleste av forsøkene som studerer mekanismene for celledeling ble utført på enkelt-celler i kultur retter (f.eks. HeLa-eller S2-celler), eller i tidlige embryoer med et begrenset antall celler (f.eks C. elegans én-celle-embryo, Xenopus eller echinoderm embryo). Imidlertid er det også viktig å studere celledeling i vev, så er det eksterne signaler som kan påvirke timing og plassering av divisjonen planet. Videre kan celler gi kjemiske eller mekaniske signaler for å påvirke utviklingen av nabo vevs, og det er viktig å forstå hvordan intercellulær kommunikasjon hjelper vev til å danne under utvikling.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1056">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:291px;">Agar</td>
			<td style="width:247px;">BioShop Canada Inc.</td>
			<td style="width:185px;">#AGR001.1</td>
			<td style="width:335px;">For making C. elegans NGM and RNAi plates</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Agar</td>
			<td>Bio Basic Inc.</td>
			<td>#9002-18-0</td>
			<td>For making bacteria LB agar plates</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Agarose</td>
			<td>BioShop Canada Inc.</td>
			<td>#AGA001.500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-mouse Alexa 488 antibody</td>
			<td>Life Technologies Corporation (Invitrogen)</td>
			<td>#A11029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-mouse anti-GFP antibody</td>
			<td>Roche Applied Science</td>
			<td>#11814460001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-rabbit Alexa 568 antibody</td>
			<td>Life Technologies Corporation (Invitrogen)</td>
			<td>#A11011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ampicillin</td>
			<td>BioShop Canada Inc.</td>
			<td>#AMP201.5</td>
			<td>Store powder at 4 &#176;C and dissolved ampicillin at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bactopetone&#160; (peptone-A)</td>
			<td>Bio Basic Inc.</td>
			<td>#G213</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CaCl2 (calcium chloride)</td>
			<td>BioShop Canada Inc.</td>
			<td>#C302.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cholesterol</td>
			<td>BioShop Canada Inc.</td>
			<td>#CHL380.25</td>
			<td>Dissolve in ethanol</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DAPI&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>#D9542</td>
			<td>Use to stain nucleic acids (DNA)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glycerol</td>
			<td>BioShop Canada Inc.</td>
			<td>#GLY001.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">IPTG (isopropylthio-&#946;-galactoside)</td>
			<td>Bio Basic Inc.</td>
			<td>#367-93-1</td>
			<td>Store powder and dissolved IPTG at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">KH2PO4 (potassium phosphate, monobasic)</td>
			<td>BioShop Canada Inc.</td>
			<td>#PPM666.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">K2HPO4 (potassium phosphate, dibasic)</td>
			<td>BioShop Canada Inc.</td>
			<td>#PPD303.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L4440&#160; (feeding vector)</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>#1654</td>
			<td>Keep as glycerol stock at -80 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MgSO4&#160;&#160; (magnesium sulfate)</td>
			<td>BioShop Canada Inc.</td>
			<td>#MAG511.500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaCl (sodium chloride)</td>
			<td>Bio Basic Inc.</td>
			<td>#7647-14-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Na2HPO4 (sodium phosphate, dibasic)</td>
			<td>Bio Basic Inc.</td>
			<td>#7558-79-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Normal Donkey Serum (NDS)</td>
			<td>Wisent Bioproducts</td>
			<td>#035-110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">n-propyl 3.4.5-trihydroxybenzoate (propyl gallate)</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>#A10877</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Poly-L-lysine</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>#P8920</td>
			<td>For optimal results coat microscope slides three times&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Streptomycin</td>
			<td>BioShop Canada Inc.</td>
			<td>#STP101.50</td>
			<td>Store powder at 4 &#176;C and dissolved streptomycin at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tetracyclin</td>
			<td>BioShop Canada Inc.</td>
			<td>#TET701.10</td>
			<td>Store powder at 4 &#176;C and dissolved tetracycline at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tween-20</td>
			<td>Bio Basic Inc.</td>
			<td>CAS#9005-64-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tryptone</td>
			<td>BioShop Canada Inc.</td>
			<td>#TRP402.500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Yeast Extract</td>
			<td>Bio Basic Inc.</td>
			<td>#8013-01-2</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

visualizing neuroblast cytokinesis during c. elegans embryogenesis

Denne protokollen beskriver bruk av fluorescens mikroskopi til bilde dele celler i å utvikle Caenorhabditis elegans embryoer. Spesielt fokuserer denne protokollen på hvordan bilde dele neuroblasts, som er funnet under epidermal cellene og kan være viktige for epidermal morphogenesis. Vev dannelse er avgjørende for metazoan utvikling og er avhengig av eksterne signaler fra nabo vev. C. elegans er en utmerket modellorganisme for å studere vev morphogenesis in vivo på grunn av sin gjennomsiktighet og enkel organisasjon, noe som gjør dens vev lett å studere via mikroskopi. Ventral kapsling er prosessen hvor den ventrale overflaten av embryoet er dekket av et enkelt lag av epitelceller. Dette arrangementet er tenkt å bli understøttet av den underliggende neuroblasts, som gir kjemisk lede signaler for å mediere migrering av de overliggende epitelceller. Imidlertid neuroblasts er svært proliferative og også kan opptresom en mekanisk substrat for de ventrale epidermale celler. Studier ved hjelp av denne eksperimentelle protokollen kunne avdekke betydningen av intercellulær kommunikasjon under vev formasjon, og kan brukes for å avsløre rollene av gener som er involvert i celle-deling innenfor utviklings vev.

Dette eksperimentelle protokollen beskriver hvordan du bilde celledeling i C. elegans embryoer under midten embryogenese. Spesielt beskriver det hvordan bilde neuroblasts, som kan legge til rette for epidermal morphogenesis. Epidermal morfogenese oppstår på grunn av en kombinasjon av epidermal celle form endringer, migrasjon og vedheft, men også avhengig av kjemiske eller mekaniske signaler fra de underliggende neuroblasts (Figur 1b). De neuroblasts utsondre veiledning signaler som er mottat...

Watch this Scientific Journal Video about Visualizing Neuroblast Cytokinesis During C. elegans Embryogenesis at JoVE.com

Visualizing Neuroblast Cytokinesis During C. elegans Embryogenesis

Denne protokollen beskriver hvordan du bilde dele celler i en vev i Caenorhabditis elegans embryoer. Mens flere protokoller beskrive hvordan bildet celledeling i tidlig embryo, beskriver denne protokollen skal avbilde celledeling innenfor et utviklings vev under midten sent embryogenese.

Visualisering neuroblast Cytokinesis Under<em&gt; C. elegans</em&gt; Embryogenese

This protocol describes the use of fluorescence microscopy to image dividing cells within developing Caenorhabditis elegans embryos. In particular, this ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Visualizing Neuroblast Cytokinesis During C. elegans Embryogenesis

Assaying &beta;-amyloid Toxicity using a Transgenic C. elegans Model

Assaying ÃƒÅ½Ã‚Â²-amyloid Toxicity using a Transgenic C. elegans Model

Accumulation of the &beta;-amyloid peptide (A&beta;) is generally believed to be central to the induction of Alzheimer's disease, but the relevant ...

C. elegans Positive Butanone Learning, Short-term, and Long-term Associative Memory Assays

C. elegans Positive Butanone Learning, Short-term, and Long-term Associative Memory Assays

The memory of experiences and learned information is critical for organisms to make choices that aid their survival. C. elegans navigates its environment ...

In vivo Laser Axotomy in C. elegans

In vivo Laser Axotomy in C. elegans

Neurons communicate with other cells via axons and dendrites, slender membrane extensions that contain pre- or post-synaptic specializations. If a neuron ...

Automated Quantification of Synaptic Fluorescence in C. elegans

Automated Quantification of Synaptic Fluorescence in C. elegans

Automatisert Kvantifisering av Synaptic fluorescens i<em&gt; C. elegans</em

Synapse strength refers to the amplitude of postsynaptic responses to presynaptic neurotransmitter release events, and has a major impact on overall ...

C. elegans Tracking and Behavioral Measurement

C. elegans Tracking and Behavioral Measurement

C. elegans Sporing og Behavioral Måling

We have developed instrumentation, image processing, and data analysis techniques to quantify the locomotory behavior of C. elegans as it crawls on the ...

A Molecular Readout of Long-term Olfactory Adaptation in C. elegans

A Molecular Readout of Long-term Olfactory Adaptation in C. elegans

En molekylær Avlesning av Long-term olfactory Tilpasning i<em&gt; C. elegans</em

During sustained stimulation most sensory neurons will adapt their response by decreasing their sensitivity to the signal. The adaptation response helps ...

Hippocampal Insulin Microinjection and In vivo Microdialysis During Spatial Memory Testing

Hippocampal Insulin Microinjection and In vivo Microdialysis During Spatial Memory Testing

Hippocampus Insulin mikroinjeksjon og<em&gt; In vivo</em&gt; Mikrodialyse Under Spatial Memory Testing

Glucose metabolism is a useful marker for local neural activity, forming the basis of methods such as 2-deoxyglucose and functional magnetic resonance ...

In vivo Neuronal Calcium Imaging in C. elegans

In vivo Neuronal Calcium Imaging in C. elegans

In vivo Neuronal Kalsium Imaging i C. elegans

The nematode worm C. elegans is an ideal model organism  for relatively simple, low cost neuronal imaging in vivo. Its small transparent body and simple, ...

In Vivo Imaging of Dauer-specific Neuronal Remodeling in C. elegans

In Vivo Imaging of Dauer-specific Neuronal Remodeling in C. elegans

In vivo avbildning av Dauer-spesifikke nevronale ombygging i C. elegans

The mechanisms controlling stress-induced phenotypic plasticity in animals are frequently complex and difficult to study in vivo. A classic example of ...

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

En undersøkelse for å måle effekten av etanol på Locomotion Speed ​​av<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the ...