Name: isolation of double negative &#945;&#946; t cells from the kidney
Uploaded: 2014-05-16T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Double Negative ÃŽÂ±ÃŽÂ² T Cells from the Kidney at JoVE.com

이 작품은 NIH PBS (R21 AI095484)에 의해 지원된다. 우리는 CD1D 량체를위한 NHI의 테트라 핵심 시설을 감사합니다.

1. 악기의 제조, 문화, 미디어 및 시약 <ol><li> 상품 : 무균 조건 하에서 시약을 준비하고 층류 후드를 사용합니다. </li><li> 소 태아 혈청의 5 %, 수소 나트륨 2.1 g, 10 ㎖ 글루타민산 100 배, HEPES 10 ㎎, 1 밀리그램의 나트륨 피루 베이트 10 ㎖를 100 배의 페니실린 / 스트렙토 마이신을 추가, RPMI 조직 배양 배지 1 L를 준비합니다. 참고 : 권장되는 조직 배양 배지, RPMI는 DMEM에 교환 할 수있다. </li><li> 5 % ...

<ol>
	<li>Zhang, Z. X., Yang, L., Young, K. J., DuTemple, B., Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+previously+unknown+antigen-specific+regulatory+T+cell+and+its+mechanism+of+suppression.">Identification of a previously unknown antigen-specific regulatory T cell and its mechanism of suppression.</a> Nat Med. 6, 782-789 (2000).</li><li>Ford, M. S., Young, K. J., Zhang, Z., Ohashi, P. S., Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immune+regulatory+function+of+lymphoproliferative+double+negative+T+cells+in+vitro+and+in+vivo.">The immune regulatory function of lymphoproliferative double negative T cells in vitro and in vivo.</a> J Exp Med. 196, 261-267 (2002).</li><li>Ford McIntyre, M. S., Young, K. J., Gao, J., Joe, B., Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutting+edge:+in+vivo+trogocytosis+as+a+mechanism+of+double+negative+regulatory+T+cell-mediated+antigen-specific+suppression.">Cutting edge: in vivo trogocytosis as a mechanism of double negative regulatory T cell-mediated antigen-specific suppression.</a> J Immunol. 181, 2271-2275 (2008).</li><li>Young, K. J., Yang, L., Phillips, M. J., Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor-lymphocyte+infusion+induces+transplantation+tolerance+by+activating+systemic+and+graft-infiltrating+double-negative+regulatory+T+cells.">Donor-lymphocyte infusion induces transplantation tolerance by activating systemic and graft-infiltrating double-negative regulatory T cells.</a> Blood. 100, 3408-3414 (2002).</li><li>Chen, W., Ford, M. S., Young, K. J., Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infusion+of+in+vitro-generated+DN+T+regulatory+cells+induces+permanent+cardiac+allograft+survival+in+mice.">Infusion of in vitro-generated DN T regulatory cells induces permanent cardiac allograft survival in mice.</a> Transplant Proc. 35, 2479-2480 (2003).</li><li>Young, K. J., DuTemple, B., Phillips, M. J., Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+graft-versus-host+disease+by+double-negative+regulatory+T+cells.">Inhibition of graft-versus-host disease by double-negative regulatory T cells.</a> J Immunol. 171, 134-141 (2003).</li><li>Mohamood, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gld+mutation+of+Fas+ligand+increases+the+frequency+and+up-regulates+cell+survival+genes+in+CD25+CD4++TR+cells.">Gld mutation of Fas ligand increases the frequency and up-regulates cell survival genes in CD25+CD4+ TR cells.</a> Int Immunol. 18, 1265-1277 (2006).</li><li>Ascon, D. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+mouse+kidneys+contain+activated+and+CD3+CD4-+CD8-+double-negative+T+lymphocytes+with+a+distinct+TCR+repertoire.">Normal mouse kidneys contain activated and CD3+CD4- CD8- double-negative T lymphocytes with a distinct TCR repertoire.</a> J Leukoc Biol. 84, 1400-1409 (2008).</li><li>Hamad, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B220++double-negative+T+cells+suppress+polyclonal+T+cell+activation+by+a+Fas-independent+mechanism+that+involves+inhibition+of+IL-2+production.">B220+ double-negative T cells suppress polyclonal T cell activation by a Fas-independent mechanism that involves inhibition of IL-2 production.</a> J Immunol. 171, 2421-2426 (2003).</li><li>Rabb, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiological+role+of+T+lymphocytes+in+renal+ischemia-reperfusion+injury+in+mice.">Pathophysiological role of T lymphocytes in renal ischemia-reperfusion injury in mice.</a> Am J Physiol-Renal. 279, 525-531 (2000).</li><li>Burne, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+CD4(+)+T+cell+as+a+major+pathogenic+factor+in+ischemic+acute+renal+failure.">Identification of the CD4(+) T cell as a major pathogenic factor in ischemic acute renal failure.</a> J Clin Invest. 108, 1283-1290 (2001).</li><li>Yokota, N., Daniels, F., Crosson, J., Rabb, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+of+T+cell+depletion+in+murine+renal+ischemia-reperfusion+injury.">Protective effect of T cell depletion in murine renal ischemia-reperfusion injury.</a> Transplantation. 74, 759-763 (2002).</li><li>Crispin, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expanded+double+negative+T+cells+in+patients+with+systemic+lupus+erythematosus+produce+IL-17+and+infiltrate+the+kidneys.">Expanded double negative T cells in patients with systemic lupus erythematosus produce IL-17 and infiltrate the kidneys.</a> J Immunol. 181, 8761-8766 (2008).</li><li>Igarashi, S., Takiguchi, M., Kariyone, A., Kano, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+and+functional+analyses+on+T-cell+subsets+in+lymph+nodes+of+MRL/Mp-lpr/lpr+mice.">Phenotypic and functional analyses on T-cell subsets in lymph nodes of MRL/Mp-lpr/lpr mice.</a> Int Arch Allergy Appl Immunol. 86, 249-255 (1988).</li><li>Dowdell, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Somatic+FAS+mutations+are+common+in+patients+with+genetically+undefined+autoimmune+lymphoproliferative+syndrome.">Somatic FAS mutations are common in patients with genetically undefined autoimmune lymphoproliferative syndrome.</a> Blood. 115, 5164-5169 (2010).</li><li>Juvet, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FcRgamma+promotes+T+cell+apoptosis+in+Fas-deficient+mice.">FcRgamma promotes T cell apoptosis in Fas-deficient mice.</a> J Autoimmun. 42, 80-93 (2013).</li><li>Thomson, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FcR+gamma+presence+in+TCR+complex+of+double-negative+T+cells+is+critical+for+their+regulatory+function.">FcR gamma presence in TCR complex of double-negative T cells is critical for their regulatory function.</a> J Immunol. 177, 2250-2257 (2006).</li></ol>

그들은 같은자가 면역 질환, 암, 이식 허용, 급성 신장 손상 (AKI)을 포함하여 신장의 주요 질환과 같은 다른 병리학 적 조건에 연루되고 있기 때문에 DN T 세포에 대한 관심이 증가가, 8, 13 사구체 신염. 따라서, 더 나은 DN T 세포의 병태 생리 학적 기능을 이해 및 특성화가 필요하다. 그러나, 현재 CD4와 CD8 T 세포에 비해 이러한 세포의 기능에 대한 이해의 부족이있다. 가장 큰 이유는 차 림프 ?...

주변 αβTCR + CD3 + CD4 - CD8 - 이중 부정은 (DN) T 세포는 별개의 표현형과 기능 1-4을 가지고 다양한 하위 집합으로 분할된다. DN T 세포는 제대로 이해하고 있지만 점점 다른 질병 모델 4-6의 병태 생리 학적 면역 반응에 연루된다. DN T 세포는 점점 더 다양한 면역 및자가 면역 반응의 조절과 이식 실험 관용의 변조에 연루되는 고유 한 면역 세포의 유형입니다. 4-6, 9 그들은 비장과 림프절 (말초 혈액 및 이차 림프 기관에 드문 ). 그러나, 그들은 정상 신장 및 소화관 상피 10-12의 주요 거주자. 약간은 정상 상태에서의 신장에서의 기능 7에 대해 이러한 신장 transpl과 관련된 급성 신장 손상 (AKI)과 같은 병적 인 조건에서 알려져있다개미. 이 때문에, 각 플레이어의 역할을 정의 alloresponses 포함한 면역 반응을 조절하는 다른 면역 세포의 복잡한 역할은 alloresponses 승낙 새로운 치료제를 설계하는데 중요하다. 생리적 및 다양한 질병 상태에서 신장에 존재 DN T 세포의 상당수 감안 DN T 세포는 이식 수혜자에서 중요한 마우스 및 인간 면역 및자가 면역 반응을 조절하는데 역할 및 alloresponses 재생할 가능성이있다. 아직도 흩어져있는 증거 불구하고 축적하는 것은 모두 병원성 및 면역 기능에 DN T 세포를 연루하지만, 왜, 어떻게 그들이 특정 유해하거나 억제 기능을 발휘하고 환경 영향을 그들이 어떻게 그것을 제대로 이해된다. 때문에 신장에서의 낮은 풍요, 분리의 개선 된 방법이 필요합니다. t에서 DN T 세포의 분리를위한 표준 프로토콜은 없습니다그는 비 림프 조직. 우리 프로토콜은 신장에서 DN T 세포의 분리를위한 신규 한 방법을 설명한다; 그러나, 상기 방법은 또한 다양한 비 - 림프 조직을 위해 사용될 수있다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1172">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:439px;">Laminar flow hood&#160;</td>
			<td style="width:257px;">Baker Company, Inc</td>
			<td style="width:276px;"></td>
			<td style="width:200px;">Or equivalent equipment&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:439px;">Centrifuge</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td></td>
			<td>Or equivalent equipment&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:439px;">Hemocytometer</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td style="width:276px;">63514-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:439px;">Atmosphere-controlled incubator</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td style="width:200px;">&#160;(37&#176;C with 5% CO2)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:439px;">Microscope&#160;</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>Or equivalent equipment&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:439px;">Analytical flow cytometer</td>
			<td style="width:257px;">LSR II&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:439px;">Name of the reagent</td>
			<td style="width:257px;">Company&#160;</td>
			<td style="width:276px;">Catalog&#160; Number</td>
			<td style="width:200px;">Comments&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:439px;">RPMI 1640</td>
			<td style="width:257px;">Media Tech</td>
			<td style="width:276px;">10-040-CV</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:439px;">Collagenase D</td>
			<td style="width:257px;">Roche</td>
			<td style="width:276px;">11088858001</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:439px;">Percoll&#160;</td>
			<td style="width:257px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:276px;">&#160;17-0891-01</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:439px;">Fetal bovine serum&#160;</td>
			<td>Corning Cellgro</td>
			<td>35-011-CV</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:439px;">0.1% sodium azide (NaN3)</td>
			<td style="width:257px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:276px;">S2002</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:439px;">Buffer phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td style="width:257px;">Corning Cellgro</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:439px;">PBS 10X</td>
			<td>Mediatech</td>
			<td>46-013-CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:439px;">EDTA buffer&#160;</td>
			<td style="width:257px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:276px;">E1161</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:439px;">LS columns&#160;</td>
			<td style="width:257px;">MiltenyiBiotec</td>
			<td style="width:276px;">130-042-401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:439px;">CD45+ microbeads</td>
			<td style="width:257px;">MiltenyiBiotec</td>
			<td style="width:276px;">6.78E-51</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:439px;">Biotin microbeads&#160;</td>
			<td style="width:257px;">MiltenyiBiotec</td>
			<td style="width:276px;">130-090-485</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:439px;">anti-CD45 (clone: 30-F11)&#160; PerCP&#160;</td>
			<td style="width:257px;">eBioscience&#160;</td>
			<td style="width:276px;">G1397</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:439px;">anti-CD45 (clone: 30-F11)&#160; APC-Cy7</td>
			<td style="width:257px;">Biolegend&#160;&#160;</td>
			<td style="width:276px;">103116</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:439px;">anti-TCR Pacific Blue&#160; (ab-chain, clone: H57-597)</td>
			<td style="width:257px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:276px;">HM3628</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:439px;">anti-CD4 PE</td>
			<td style="width:257px;">eBioscience&#160;</td>
			<td>12-0043</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:439px;">anti-CD8 FITC</td>
			<td style="width:257px;">eBioscience&#160;</td>
			<td>8011-0087</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:439px;">anti-CD4 biotinylated (GK1.5)</td>
			<td style="width:257px;">BD</td>
			<td style="width:276px;">553728</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:439px;">anti-CD8 biotinylated&#160; (clone 53-6.7)</td>
			<td style="width:257px;">BD</td>
			<td style="width:276px;">553029</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">anti-Fc receptor (CD16/32) biotinylated</td>
			<td style="width:257px;">BD</td>
			<td style="width:276px;">553143</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:439px;">anti-MHC class II (I-A d) biotinylated</td>
			<td style="width:257px;">BD</td>
			<td style="width:276px;">553609</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:439px;">anti-CD1d PBS-57 tetramer</td>
			<td style="width:257px;">NHI tetramer&#160;</td>
			<td style="width:276px;">lote # 15621-PBS57</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:439px;">AutoMACS Running Buffer-&#160; MACS Separation Buffer&#160;</td>
			<td style="width:257px;">MIlteny I Biotec</td>
			<td style="width:276px;">130-091-221</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:439px;">C57BL/6J mice</td>
			<td>Jackson Labs</td>
			<td style="width:276px;">000664</td>
			<td>Kidneys - Lymph Nodes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:439px;">Petri dish&#160;</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td style="width:276px;">356517</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:439px;">70mc filter&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22363548</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:439px;">Plunger&#160;</td>
			<td style="width:257px;"></td>
			<td></td>
			<td>Or equivalent equipment&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GeneMate Tubes 50 ml</td>
			<td>Bioexpress</td>
			<td>C-3394-3</td>
			<td>Or equivalent equipment&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:439px;">GeneMate Tubes 15 ml</td>
			<td>Bioexpress</td>
			<td style="width:276px;">C-3394-1</td>
			<td>Or equivalent equipment&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:439px;">Petri Dish&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td style="width:276px;">S33580</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:439px;">Plate 24 wells&#160;</td>
			<td style="width:257px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:276px;">354723</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of double negative &#945;&#946; t cells from the kidney

비 림프 조직에서 DN T 세포의 분리를위한 표준 프로토콜은 다양한 면역 반응에서의 점점보고 참여에도 불구하고 현재 없습니다. DN T 세포는 allotransplants 1-6로 면역 및자가 면역 반응과 내성을 조절에 연루되어 고유 한 면역 세포의 유형입니다. DN T 세포는 말초 혈액 및 이차 림프​​ 기관 (비장과 림프절)에서 드문,하지만,하지만, 정상적인 신장의 주요 거주자입니다. 아주 작은 인해 주변에서의 소수 자신의 병태 생리 학적 기능 7에 대한 알려져있다. 우리는 최근에 정상 상태 및 허혈 재관류 손상시 신장 8이 인구의 포괄적 인 표현형 및 기능 분석을 설명했다. DN T 세포 기능 분석을 크게 신장에서의 그들의 분리를위한 프로토콜을 개발함으로써 강화 될 것이다. 여기, 우리는 isolatio 수있는 새로운 프로토콜을 설명뮤린 신장으로부터 고순도 AB CD4 + CD8 + T 세포 및 DN T 세포의 N. 간단히 말해서, 우리는 콜라게나 제를 사용하여 신장 조직을 소화하고 밀도 구배에 의해 신장 단핵 세포 (KMNC)를 분리. 이것은 KMNC에서 70 %로 3 %에서 조혈 T 세포를 풍부하게하기 위해 두 단계로 이어진다. 첫 번째 단계는 CD45 + 분리 키트를 사용하여 조혈 세포의 포지티브 선택으로 구성된다. 두 번째 단계에서는, DN T 세포는 부정적인 CD4, CD8, 및 MHC 클래스 II 단일 클론 항체 및 CD1D α-galcer 량체를 사용하여 원하지 않는 세포의 제거에 의해 격리됩니다. 이 전략은 90 % 이상 순수 DN T 세포의 인구에 이르게한다. FACS 분석이어서 상기 항체 표면 염색은 순도를 확인하기 위하여 사용된다.

야생형 C57BL / 6 (B6) 신장 신장 당 약 1.5-2.1 × 10 6 단핵 세포가 포함되어 있습니다. 약 10 % 미만은 조혈 CD45 + 세포 수 있습니다. 5 % 콜라게나 제를 사용하여 분해 한 다음도 1에 나타낸 바와 같이 신장 단핵 세포 (KMNC)의 제조에 대하여, 신장이 작은 조각으로 절단된다. 이것은 KMNC 층 (도 2, 왼쪽 패널) 수집하는 밀도 구배 원심 분리를 수행...

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Isolation of Double Negative ÃƒÅ½Ã‚Â±ÃƒÅ½Ã‚Â² T Cells from the Kidney

신장에서 더블 네거티브 (Double Negative) αβ의 T 세포의 분리

DNabT 세포가 말초 T 세포 사이 드물다; 그러나, 그들은 특정 비 림프 조직에 풍부합니다. 비 림프 조직에서 DN T 세포를 분리의 어려움은 병태 생리 학적 중요성을 인식 증가에도 불구하고 자신의 기능 분석을 방해한다. 우리는 쥐의 신장에서 고순도 DN T 세포의 분리를 위해 새로운 프로토콜을 설명합니다.

There is currently no standard protocol for the isolation of DN T cells from the non-lymphoid tissues despite their increasingly reported involvement in ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation of Double Negative &#945;&#946; T Cells from the Kidney

Separation of Single-stranded DNA, Double-stranded DNA and RNA from an Environmental Viral Community Using Hydroxyapatite Chromatography

히드록 시아파 타이트 크로마 토그래피를 사용하여 환경 바이러스성 커뮤니티에서 단일 좌초 DNA, 더블 좌초된 DNA와 RNA의 분리

Viruses, particularly bacteriophages (phages), are the most numerous biological entities on Earth1,2.  Viruses modulate host cell abundance and diversity, ...

연구

면역학 및 감염병학

Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human Na&iuml;ve and Memory T Cells

Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve and Memory T Cells

기본 인적 나이브 및 메모리 T의 세포로부터 유도된 규제 T 세포의 생성

The development and maintenance of immunosuppressive CD4+ regulatory T cells (Tregs) contribute to the peripheral tolerance needed to remain in ...

Isolation and Characterization of Dendritic Cells and Macrophages from the Mouse Intestine

마우스 소장에서 돌기 세포 및 Macrophages의 분리 및 특성화

Within the intestine reside unique populations of innate and adaptive immune cells that are involved in promoting tolerance towards commensal flora and ...

Isolation of Precursor B-cell Subsets from Umbilical Cord Blood

탯줄 혈액에서 전구체 B-세포 하위 집합의 절연

Umbilical cord blood is highly enriched for hematopoietic progenitor cells at different lineage commitment stages. We have developed a protocol for ...

Isolation and Th17 Differentiation of Na&iuml;ve CD4 T Lymphocytes

Isolation and Th17 Differentiation of NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve CD4 T Lymphocytes

분리 및 나이브 CD4 T 림프구의 TH17 분화

Th17 cells are a distinct subset of T cells that have been found to produce interleukin 17 (IL-17), and differ in function from the other T cell subsets ...

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

T 세포의 유도<em&gt; 체외</em&gt; 마우스 배아 줄기 세포에서

The OP9/OP9-DL1 co-culture system has become a well-established method for deriving differentiated blood cell types from embryonic and hematopoietic ...

Generation of Human Alloantigen-specific T Cells from Peripheral Blood

말초 혈액에서 인간 Alloantigen 특정 T 세포의 생성

The study of human T lymphocyte biology often involves examination of responses to activating ligands. T cells recognize and respond to processed peptide ...

Mouse Na&#239;ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Mouse NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

마우스 나이브 CD4<sup&gt; +</sup&gt; T 세포의 분리 및<em&gt; 시험관</em&gt; T 세포 하위 집합으로 차별화

Antigen inexperienced (na&#239;ve) CD4+ T cells undergo expansion and differentiation to effector subsets at the time of T cell receptor (TCR) recognition ...

T Cells Capture Bacteria by Transinfection from Dendritic Cells

T 세포는 수지상 세포에서 Transinfection에 의해 박테리아를 캡처

Recently, we have shown, contrary to what is described, that CD4+ T cells, the paradigm of adaptive immune cells, capture bacteria from infected dendritic ...

Efficient Isolation Protocol for B and T Lymphocytes from Human Palatine Tonsils

인간 팔라티노 편도선에서 B와 T 림프구에 대한 효율적인 분리 프로토콜

Tonsils form a part of the immune system providing the first line of defense against inhaled pathogens. Usually the term &#8220;tonsils&#8221; refers to ...