Name: stretching micropatterned cells on a pdms membrane
Uploaded: 2014-01-22T13:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Stretching Micropatterned Cells on a PDMS Membrane at JoVE.com

Questo lavoro è stato fondato da Institut Curie, Parigi, Francia. La barella meccanico è stato progettato da Damien Cuvelier (Institut Curie) ed è prodotto da GREM (mecanique-grem.com). Il patterning su PDMS è stato sviluppato da Ammar Azioune (Bordeaux II University).

1. Passivazione del PDMS <ol><li> Tagliare un pezzo di PDMS circa 35 mm x 20 mm da una lamiera pre fatta (per esempio, GelPak, come elencato nella tabella dei materiali). </li><li> Rimuovere la parte superiore e gli strati protettivi peggiori di plastica (se necessario) e usare pinzette per posizionare i PDMS in plastica (non COLTURA CELLULARE trattati) piastra Petri. </li><li> Lavare le PDMS con etanolo al 70% per 5 minuti su un agitatore a 30 oscillazioni / min. </li><li> Asciugare la superficie scorre aria su di es...

<ol>
	<li>Vogel, V., Sheetz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+force+and+geometry+sensing+regulate+cell+functions.">Local force and geometry sensing regulate cell functions.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 7, 265-275 (2006).</li><li>Terenna, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physical+mechanisms+redirecting+cell+polarity+and+cell+shape+in+fission+yeast.">Physical mechanisms redirecting cell polarity and cell shape in fission yeast.</a> Curr. 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C., Aigouy, B., Eaton, S., Julicher, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+cell+mechanics,+cell-cell+interactions,+and+proliferation+on+epithelial+packing.">The influence of cell mechanics, cell-cell interactions, and proliferation on epithelial packing.</a> Curr. Biol. 17, 2095-2104 (2007).</li><li>Rauzi, M., Verant, P., Lecuit, T., Lenne, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nature+and+anisotropy+of+cortical+forces+orienting+Drosophila+tissue+morphogenesis.">Nature and anisotropy of cortical forces orienting Drosophila tissue morphogenesis.</a> Nat. 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Biol. 13 (7), 771-778 (2011).</li><li>Azioune, A., Storch, M., Bornens, M., Th&#233;ry, M., Piel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+and+rapid+process+for+single+cell+micro-patterning.">Simple and rapid process for single cell micro-patterning.</a> Lab Chip. 9 (11), 1640-1642 (2009).</li><li>Azioune, A., Carpi, N., Tseng, Q., Th&#233;ry, M., Piel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+micropatterns:+A+direct+printing+protocol+using+deep+Uvs.">Protein micropatterns: A direct printing protocol using deep Uvs.</a> Methods Cell Biol. 97, 133-146 (2010).</li><li>Azioune, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Robust+method+for+high-throughput+surface+patterning+of+deformable+substrates.">Robust method for high-throughput surface patterning of deformable substrates.</a> Langmuir. 27 (12), 7349-7352 (2011).</li><li>Carpi, N., Piel, M., Azioun, A., Cuvelier, D., Fink, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micropatterning+on+silicon+elastomer+(PDMS)+with+deep+UVs.">Micropatterning on silicon elastomer (PDMS) with deep UVs.</a> Protoc. Exch. , (2011).</li><li>Sinha, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cells+respond+to+mechanical+stress+by+rapid+disassembly+of+caveolae.">Cells respond to mechanical stress by rapid disassembly of caveolae.</a> Cell. 144 (3), 402-413 (2011).</li></ol>

Sebbene questa tecnica è stata utilizzata numerose volte e viene accuratamente testato, ci sono diversi passaggi critici che possono portare ad un esperimento fallito. Circa il PDMS: Per questo lavoro, GelPak, un foglio sottile PDMS disponibile in commercio, è stato utilizzato. In alternativa, i fogli di PDMS possono essere lanciate direttamente dalla miscela PDMS. Si consiglia di utilizzare GelPak perché è più riproducibile, ed è meno probabilità di rottura ...

Le cellule che compongono un tessuto in organismi superiori sono soggetti a tensioni meccaniche e forze traenti o provenienti dall&#39;ambiente esterno o da cellule circostanti 1,2. Cellule devono adattarsi e resistere a queste forze al fine di mantenere l&#39;integrità del tessuto. Tali forze sono importanti anche per i tessuti morfogenesi durante lo sviluppo 3,4. Applicando forze meccaniche su cellule coltivate è un modo di imitare ciò che potrebbe accadere in un tessuto, ma con un controllo quantitativo e indipendente di forma delle cellule e deformazione cella 5,6. Per questo, possono essere utilizzate diverse tecniche. Si può premere sulle cellule (cellula intera o parte di essa), ad esempio utilizzando AFM o derivati ​​7,8 o allungare il substrato le cellule crescono su. Il metodo descritto in questo documento dimostra come allungare un substrato piano placcato con cellule. Questa tecnica è stato originariamente sviluppato per valutare il ruolo delle forze esercitate su mcellule di mammifero itotic 9. Le cellule mitotiche rimanere connessi al substrato attraverso le fibre di retrazione e stretching membrana esercitata una forza su quelle fibre, che a loro volta hanno provocato la rotazione del fuso mitotico. L&#39;interesse di combinare microdisegnature adesivi e stretching è quello di raggiungere un controllo indipendente delle forze e forma delle singole celle. E &#39;per esempio possibile allungare una cella ovoidale in una forma rotonda perfettamente isotropa, mentre è applicata tratto monoassiale. Se le cellule non sono intrecciata su microdisegnature, stiramento uniassiale risultati in allungamento cellulare, con la maggior parte delle cellule avente un asse longitudinale allineato con l&#39;asse tratto. È poi difficile separare l&#39;effetto dell&#39;allineamento asse lungo e l&#39;effetto del tratto applicata alle cellule. Il dispositivo è adatto per qualsiasi imaging cellulare dal vivo, tra cui la microscopia a fluorescenza lasso di tempo, e la droga può essere aggiunto durante l&#39;esperimento. Il metodo UV micropatterning profondo 10è stato descritto in dettaglio nel Azioune et al. 11 patterning su PDMS è stata descritta in Azioune et al. 12 La presente allungamento protocollo è una versione video di Carpi et al. 13

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">GelPak</td>
			<td style="width:71px;">GelPak</td>
			<td style="width:119px;">PF-60-X4</td>
			<td style="width:167px;">Different thickness/stickiness are available. One alternative could be to cast your PDMS yourself.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Silicon grease</td>
			<td style="width:71px;">GE Bayer Silicones</td>
			<td style="width:119px;">Baysilone-Paste</td>
			<td>This one is biocompatible</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Stretching device</td>
			<td style="width:71px;">GREM m&#233;canique</td>
			<td style="width:119px;">Stretcher 2011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">EDC (N-(3-Dimethylaminopropyl)-N&#8242;-ethylcarbodiimide hydrochloride)</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td align="right" style="width:119px;">3450</td>
			<td>Stable 6 months at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">NHS (N-Hydroxysulfosuccinimide sodium salt)</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td align="right" style="width:119px;">56485</td>
			<td>Protect from humidity</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Pll-g-peg (PLL(20)-g[3.5]-PEG(2) 20 mg)</td>
			<td style="width:71px;">SurfaceSolutions (Zurich)</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Synthetic Quartz photomask</td>
			<td style="width:71px;">Toppan</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Take standard binary photomask in Quartz</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Fibronectin from bovine plasma</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">F1141</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

stretching micropatterned cells on a pdms membrane

Forze meccaniche esercitate sulle cellule e / o tessuti svolgono un ruolo importante in numerosi processi. Abbiamo sviluppato un dispositivo di allungare le cellule placcato su un polidimetilsilossano (PDMS) membrana, compatibile con le immagini. Questa tecnica è riproducibile e versatile. La membrana PDMS può essere micropatterned al fine di limitare cellule o tessuti di una geometria specifica. Il primo passo è stampare microdisegnature sulla membrana PDMS con una tecnica UV profondo. La membrana PDMS è poi montato su un telaio meccanico. Una camera è vincolata in cima alla membrana con grasso biocompatibile per consentire scivolare durante l&#39;allungamento. Le cellule vengono seminate e ha permesso di diffondere per diverse ore sui microdisegnature. Il campione può essere allungato e non deformato più volte con l&#39;uso di una vite micrometrica. Ci vuole meno di un minuto per applicare il tratto per tutta la sua estensione (circa il 30%). La tecnica qui presentata non include un dispositivo motorizzato, che è necessario per unapplying cicli tratto ripetuti rapidamente e / o computer controllato stretching, ma questo può essere attuato. Stretching di cellule o di tessuto può essere di interesse per le questioni relative alle forze cellulari, risposta cellulare allo stress meccanico o morfogenesi dei tessuti. Questa presentazione video mostra come evitare i problemi tipici che potrebbero sorgere quando si fa questo tipo di apparentemente semplice esperimento.

<html> La tecnica presentata in questo protocollo video consentiva l&#39;applicazione di forze sulle fibre di retrazione di cellule di mammifero mitotiche. Infatti, durante la divisione cellulare, allo stadio mitotico, cellule di mammifero ritraggono a prendere la forma di una sfera e di lasciarsi alle spalle i cavi di actina sottili circondate da una membrana che sono attaccati al substrato. Questi cavi (fibre di retrazione), sono la memoria della geometria della cella prima di andare in divisione. Fare microdisegnature...

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Stretching Micropatterned Cells on a PDMS Membrane

Questo manoscritto presenta una tecnica per applicare o liberare forze su cellule o tessuti aderenti usando allungamento unidirezionale.

Stretching celle micropatterned su una membrana PDMS

Mechanical forces exerted on cells and/or tissues  play a major role in numerous processes. We have developed a device to stretch  cells plated on a ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Micropatterned Surfaces to Study Hyaluronic Acid Interactions with Cancer Cells

Superfici Micropatterned per studiare le interazioni acido ialuronico con le cellule tumorali

Cancer invasion and progression involves a motile cell phenotype, which is under complex regulation by growth factors/cytokines and extracellular matrix ...

Ricerca

Bioingegneria

Improved Visualization and Quantitative Analysis of Drug Effects Using Micropatterned Cells

Una migliore visualizzazione e analisi quantitativa degli effetti del farmaco utilizzando cellule Micropatterned

To date, most HCA (High Content Analysis) studies are carried out with adherent cell lines grown on a homogenous substrate in tissue-culture treated ...

Stretching Short Sequences of DNA with Constant Force Axial Optical Tweezers

Stretching brevi sequenze di DNA con pinzette costante forza assiale ottici

Single-molecule techniques for stretching DNA of contour lengths  less than a kilobase are fraught with experimental difficulties. However, many ...

A Novel Stretching Platform for Applications in Cell and Tissue Mechanobiology

Una piattaforma Novel Stretching per applicazioni in cellule e tessuti mechanobiology

Tools that allow the application of mechanical forces to cells and tissues or that can quantify the mechanical properties of biological tissues have ...

Luminescence Resonance Energy Transfer to Study Conformational Changes in Membrane Proteins Expressed in Mammalian Cells

Luminescence Resonance Energy Transfer allo Studio conformazionale Cambiamenti nella membrana proteine ​​espresse in cellule di mammifero

Luminescence Resonance Energy Transfer, or LRET, is a powerful technique used to measure distances between two sites in proteins within the distance range ...

Optimizing Attachment of Human Mesenchymal Stem Cells on Poly(&#949;-caprolactone) Electrospun Yarns

Optimizing Attachment of Human Mesenchymal Stem Cells on PolyÃƒÅ½Ã‚Âµ-caprolactone Electrospun Yarns

Ottimizzare Allegato di cellule staminali mesenchimali umane su Poli (ε-caprolattone) elettrofilate Filati

Research into biomaterials and tissue engineering often includes cell-based in vitro investigations, which require initial knowledge of the starting cell ...

Gene Transfection toward Spheroid Cells on Micropatterned Culture Plates for Genetically-modified Cell Transplantation

Gene Transfection verso Celle sferoide su lastre micropatterned coltura per trapianto di cellule geneticamente modificati

To improve the therapeutic effectiveness of cell transplantation, a transplantation system of genetically modified, injectable spheroids was developed. ...

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Microfluidic genipina Deposizione Tecnica per la cultura estesa di micropatterned vascolari muscolari Thin Films

The chronic nature of vascular disease progression requires the development of experimental techniques that simulate physiologic and pathologic vascular ...

Construction of Modular Hydrogel Sheets for Micropatterned Macro-scaled 3D Cellular Architecture

Costruzione di fogli modulare idrogel per micropatterned macro-scala 3D Cellular Architettura

Hydrogels can be patterned at the micro-scale using microfluidic or micropatterning technologies to provide an in vivo-like three-dimensional (3D) tissue ...

Double Emulsion Generation Using a Polydimethylsiloxane (PDMS) Co-axial Flow Focus Device

Double Emulsion Generation Using a Polydimethylsiloxane PDMS Co-axial Flow Focus Device

Doppia Emulsione Generazione Utilizzando un Polidimetilsilossano (PDMS) coassiale flusso fuoco Dispositivo

Double emulsions are useful in a number of biological and industrial applications in which it is important to have an aqueous carrier fluid. This paper ...