Name: stretching micropatterned cells on a pdms membrane
Uploaded: 2014-01-22T13:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Stretching Micropatterned Cells on a PDMS Membrane at JoVE.com

Bu çalışma Fransa Institut Curie, Paris, tarafından kurulmuştur. Mekanik sedye Damien Cuvelier (Institut Curie) tarafından tasarlanan ve Grem tarafından üretilen (mecanique-grem.com). PDMS desenleme Ammar Azioune (Bordeaux II Üniversitesi) tarafından geliştirilmiştir.

1.. PDMS pasivasyon <ol><li> PDMS bir parça kesin yaklaşık olarak önceden yapılmış tabakasından x 20 mm 35 mm (örneğin, GelPak, malzeme tabloda listelenen gibi). </li><li> Plastik üst ve alt koruma tabakaları çıkarın (gerekli ise) ve Petri çanağı (muamele edilmiş kültür hücre) bir plastik PDMS yerleştirmek için cımbız kullanın. </li><li> / Dakika 30 salınım ile bir karıştırıcı üzerine 5 dakika için% 70 etanol ile PDMS yıkayın. </li><li> Bunun üzerine akan hava ile yüzeyi kurulay...

<ol>
	<li>Vogel, V., Sheetz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+force+and+geometry+sensing+regulate+cell+functions.">Local force and geometry sensing regulate cell functions.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 7, 265-275 (2006).</li><li>Terenna, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physical+mechanisms+redirecting+cell+polarity+and+cell+shape+in+fission+yeast.">Physical mechanisms redirecting cell polarity and cell shape in fission yeast.</a> Curr. Biol. 18 (22), 1748-1753 (2008).</li><li>Guillot, C., Lecuit, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanics+of+epithelial+tissue+homeostasis+and+morphogenesis.">Mechanics of epithelial tissue homeostasis and morphogenesis.</a> Science. 340 (6137), 1185-1189 (2013).</li><li>Bosveld, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+control+of+morphogenesis+by+Fat/Dachsous/Four-jointed+planar+cell+polarity+pathway.">Mechanical control of morphogenesis by Fat/Dachsous/Four-jointed planar cell polarity pathway.</a> Science. 336 (6082), 724-727 (2012).</li><li>Farhadifar, R., Roper, J. C., Aigouy, B., Eaton, S., Julicher, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+cell+mechanics,+cell-cell+interactions,+and+proliferation+on+epithelial+packing.">The influence of cell mechanics, cell-cell interactions, and proliferation on epithelial packing.</a> Curr. Biol. 17, 2095-2104 (2007).</li><li>Rauzi, M., Verant, P., Lecuit, T., Lenne, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nature+and+anisotropy+of+cortical+forces+orienting+Drosophila+tissue+morphogenesis.">Nature and anisotropy of cortical forces orienting Drosophila tissue morphogenesis.</a> Nat. Cell Biol. 10, 1401-1410 (2008).</li><li>Mitrossilis, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+single-cell+response+to+stiffness.">Real-time single-cell response to stiffness.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107 (38), 16518-16523 (2010).</li><li>Irimia, D., Charras, G., Agrawal, N., Mitchison, T., Toner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polar+stimulation+and+constrained+cell+migration+in+microfluidic+channels.">Polar stimulation and constrained cell migration in microfluidic channels.</a> Lab Chip. 12, 1783-1790 (2007).</li><li>Fink, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=External+forces+control+mitotic+spindle+positioning.">External forces control mitotic spindle positioning.</a> Nat. Cell. Biol. 13 (7), 771-778 (2011).</li><li>Azioune, A., Storch, M., Bornens, M., Th&#233;ry, M., Piel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+and+rapid+process+for+single+cell+micro-patterning.">Simple and rapid process for single cell micro-patterning.</a> Lab Chip. 9 (11), 1640-1642 (2009).</li><li>Azioune, A., Carpi, N., Tseng, Q., Th&#233;ry, M., Piel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+micropatterns:+A+direct+printing+protocol+using+deep+Uvs.">Protein micropatterns: A direct printing protocol using deep Uvs.</a> Methods Cell Biol. 97, 133-146 (2010).</li><li>Azioune, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Robust+method+for+high-throughput+surface+patterning+of+deformable+substrates.">Robust method for high-throughput surface patterning of deformable substrates.</a> Langmuir. 27 (12), 7349-7352 (2011).</li><li>Carpi, N., Piel, M., Azioun, A., Cuvelier, D., Fink, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micropatterning+on+silicon+elastomer+(PDMS)+with+deep+UVs.">Micropatterning on silicon elastomer (PDMS) with deep UVs.</a> Protoc. Exch. , (2011).</li><li>Sinha, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cells+respond+to+mechanical+stress+by+rapid+disassembly+of+caveolae.">Cells respond to mechanical stress by rapid disassembly of caveolae.</a> Cell. 144 (3), 402-413 (2011).</li></ol>

Bu teknik çok kez kullanılan ve iyice test olmasına rağmen, başarısız bir deney yol açabilir çeşitli kritik adımlar vardır. PDMS Hakkında: Bu iş için, GelPak, piyasada mevcut ince PDMS levha kullanılmıştır. Alternatif PDMS yaprak PDMS karışımı doğrudan döküm alınabilir. Daha tekrarlanabilir ve özel yapılmış PDMS&#39;nin kıyasla kırmak için daha az olasıdır, çünkü GelPak kullanmanızı öneririz. Cihaz ...

Yüksek organizmalarda bir doku oluşturan hücreler mekanik gerilimler ve dış ortamdan ya da çevreleyen hücrelerden 1,2 dan ya geliyor germe güçlerine tabidir. Hücreler uyum ve doku bütünlüğünü korumak için bu güçlere direnmek gerekir. Bu tür güçler de kalkınma 3,4 sırasında dokular morfogenezisi önemlidir. Kültürlü hücreler üzerinde mekanik kuvvet uygulayarak bir doku içinde neler olabileceğini taklit etmek bir yoldur, ancak hücre şekli ve hücre deformasyon 5,6 nicel ve bağımsız kontrolü ile. Bunun için, çeşitli teknikler kullanılabilir. Bir (bütün hücre veya bunun bir parçası), örneğin, AFM veya 7,8 türevleri ya da hücrelerin büyüdüğü alt tabakanın esneme kullanılarak hücreler üzerinde basın olabilir. Bu yazıda anlatılan yöntem hücreleri ile kaplı bir uçak substratı germek için nasıl gösterir. Bu teknik, ilk olarak değerlendirmek için geliştirilmiştir kuvvetlerinin rolü m üzerine uygulananitotic memeli hücreleri 9. Mitotik hücreler geri çekme elyafların yoluyla alt-tabakaya bağlı kalmak ve membran germe da mitotik iğin dönmesini tahrik lifleri üzerine bir kuvvet uygulamıştır. Yapışkan birleştirme micropatterns ve germe kuvvetleri ilgi ve tek tek hücreler şeklinde bağımsız kontrol elde etmektir. Bu, tek eksenli germe uygulanır ise, mükemmel bir şekilde izotropik yuvarlak şekil, bir oval hücre uzatmak için, örneğin mümkündür. Hücreler micropatterns platted değilseniz, tek eksenli en hücreler germe ekseni ile hizalanan uzun bir eksene sahip olan, hücre uzaması sonucu germe. Bu, uzun eksen hizalama ve hücrelere uygulanan gerilme etkisinin etkisini ayırmak için daha sonra zordur. Cihaz, uzun zaman atlamalı floresan mikroskobu da dahil olmak üzere herhangi bir canlı hücre görüntüleme için uygun olan, ve uyuşturucu deney sırasında ilave edilebilir. Derin UV&#39;lerin micropatterning yöntemi 10Azioune ayrıntılı olarak tarif edilmiştir ve ark. PDMS 11 Desen nitelendirildi Azioune et al. 12 de protokol uzanan Mevcut Carpi et al. 13 içeren bir video versiyonu

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">GelPak</td>
			<td style="width:71px;">GelPak</td>
			<td style="width:119px;">PF-60-X4</td>
			<td style="width:167px;">Different thickness/stickiness are available. One alternative could be to cast your PDMS yourself.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Silicon grease</td>
			<td style="width:71px;">GE Bayer Silicones</td>
			<td style="width:119px;">Baysilone-Paste</td>
			<td>This one is biocompatible</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Stretching device</td>
			<td style="width:71px;">GREM m&#233;canique</td>
			<td style="width:119px;">Stretcher 2011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">EDC (N-(3-Dimethylaminopropyl)-N&#8242;-ethylcarbodiimide hydrochloride)</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td align="right" style="width:119px;">3450</td>
			<td>Stable 6 months at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">NHS (N-Hydroxysulfosuccinimide sodium salt)</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td align="right" style="width:119px;">56485</td>
			<td>Protect from humidity</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Pll-g-peg (PLL(20)-g[3.5]-PEG(2) 20 mg)</td>
			<td style="width:71px;">SurfaceSolutions (Zurich)</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Synthetic Quartz photomask</td>
			<td style="width:71px;">Toppan</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Take standard binary photomask in Quartz</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Fibronectin from bovine plasma</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">F1141</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

stretching micropatterned cells on a pdms membrane

Mekanik kuvvetler hücreleri üzerinde uygulanan ve / veya dokular, çok sayıda süreçlerinde önemli bir rol oynamaktadır. Bir polidimetilsiloksan görüntüleme ile uyumlu (PDMS) membran üzerine kaplanmıştır hücreleri uzatmak için bir cihaz geliştirdiler. Bu teknik, tekrarlanabilir ve çok yönlüdür. PDMS zar, belirli bir geometri için hücreler veya dokular sınırlandırmak amacıyla micropatterned edilebilir. İlk adım, bir derin UV tekniği ile PDMS membran üzerine micropatterns yazdırmaktır. PDMS zar daha sonra mekanik bir sedye üzerinde monte edilir. A odası boyunca uzanan kayma sağlamak için biyo-uyumlu yağı ile membran üzerine bağlıdır. Hücreler ekildi ve micropatterns birkaç saat boyunca yayılmasına izin verilir. Numune mikrometrik bir vida kullanımı ile birden çok kez gerilmiş gerek gerilmemiş edilebilir. Bu (% 30 civarında) tam ölçüde streç uygulamak için bir dakikadan az sürer. Burada sunulan tekniği için gerekli olan bir motorlu aygıt içermezhızlı bir şekilde ve / veya bilgisayar kontrollü gerilme tekrarlanan germe döngüsünden pplying, ancak bu uygulanabilir. Hücrelerin germe veya doku hücre kuvvetler, mekanik stres veya doku morfolojilerinden hücre yanıtı ile ilgili sorularınız için ilgi olabilir. Bu video sunumu görünüşte basit deney bu tür yaparken ortaya çıkabilecek tipik sorunları önlemek için nasıl gösterecektir.

<html> Bu ekran protokol sunulan teknik mitotik memeli hücrelerinin geri çekme lifleri üzerinde kuvvetlerinin uygulanmasını izin verdi. Gerçekten de, hücre bölünmesi esnasında, mitotik aşamasında, memeli hücreleri bir küre şeklini alır ve alt-tabakaya bağlı olan ince bir zar ile çevrili aktin kabloları geride bırakmak için çekin. Bu kablolar (geri çekilme lifler), bölünme girmeden önce hücre geometri hafızası vardır. PDMS ince film bir fotomaske aracılığıyla derin UV micropatterns yapma...

Watch this Scientific Journal Video about Stretching Micropatterned Cells on a PDMS Membrane at JoVE.com

Stretching Micropatterned Cells on a PDMS Membrane

Bu el yazması tek yönlü germe kullanarak yapışık hücreler ve dokular üzerindeki kuvvetleri uygulamak ya da serbest bırakmak için bir teknik sunuyor.

PDMS Zarında Micropatterned Hücreler germe

Mechanical forces exerted on cells and/or tissues  play a major role in numerous processes. We have developed a device to stretch  cells plated on a ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Micropatterned Surfaces to Study Hyaluronic Acid Interactions with Cancer Cells

Micropatterned Yüzeyler Kanser Hücreleri ile Hyaluronik Asit Etkileşimleri Eğitim

Cancer invasion and progression involves a motile cell phenotype, which is under complex regulation by growth factors/cytokines and extracellular matrix ...

Improved Visualization and Quantitative Analysis of Drug Effects Using Micropatterned Cells

İlaç Etkisi Micropatterned Hücreler Geliştirilmiş Görselleştirme ve Kantitatif Analiz

To date, most HCA (High Content Analysis) studies are carried out with adherent cell lines grown on a homogenous substrate in tissue-culture treated ...

Stretching Short Sequences of DNA with Constant Force Axial Optical Tweezers

Sabit Kuvvet Eksenel Optik cımbız ile DNA Kısa Diziler Stretching

Single-molecule techniques for stretching DNA of contour lengths  less than a kilobase are fraught with experimental difficulties. However, many ...

A Novel Stretching Platform for Applications in Cell and Tissue Mechanobiology

Hücre ve Doku mechanobiology Applications A Novel Germe Platformu

Tools that allow the application of mechanical forces to cells and tissues or that can quantify the mechanical properties of biological tissues have ...

Luminescence Resonance Energy Transfer to Study Conformational Changes in Membrane Proteins Expressed in Mammalian Cells

Lüminesans Rezonans Enerji memeli hücrelerinde ifade Membran Proteinleri Konformasyonel Değişiklikleri Eğitim transfer

Luminescence Resonance Energy Transfer, or LRET, is a powerful technique used to measure distances between two sites in proteins within the distance range ...

Optimizing Attachment of Human Mesenchymal Stem Cells on Poly(&#949;-caprolactone) Electrospun Yarns

Optimizing Attachment of Human Mesenchymal Stem Cells on PolyÃƒÅ½Ã‚Âµ-caprolactone Electrospun Yarns

Poli (ε-kaprolakton) electrospun İplik İnsan Mezenkimal Kök Hücre Ek Optimize

Research into biomaterials and tissue engineering often includes cell-based in vitro investigations, which require initial knowledge of the starting cell ...

Gene Transfection toward Spheroid Cells on Micropatterned Culture Plates for Genetically-modified Cell Transplantation

Genetik olarak tadil edilmiş hücre transplantasyonu için Micropatterned kültür plakalarında Sferoid hücrelere karşı gene

To improve the therapeutic effectiveness of cell transplantation, a transplantation system of genetically modified, injectable spheroids was developed. ...

Microfluidic Genipin Deposition Technique for Extended Culture of Micropatterned Vascular Muscular Thin Films

Micropatterned Vasküler Musküler İnce Filmlerin Genişletilmiş Kültür mikroakışkan Genipin Biriktirme Tekniği

The chronic nature of vascular disease progression requires the development of experimental techniques that simulate physiologic and pathologic vascular ...

Construction of Modular Hydrogel Sheets for Micropatterned Macro-scaled 3D Cellular Architecture

Micropatterned Makro ölçekli 3D Hücresel Mimarlık Modüler Hidrojel Levhaların İnşaatı

Hydrogels can be patterned at the micro-scale using microfluidic or micropatterning technologies to provide an in vivo-like three-dimensional (3D) tissue ...

Double Emulsion Generation Using a Polydimethylsiloxane (PDMS) Co-axial Flow Focus Device

Double Emulsion Generation Using a Polydimethylsiloxane PDMS Co-axial Flow Focus Device

Bir Polidimetilsiloksan (PDMS) Koaksiyel Akış Odak Aygıtı Kullanma Çift Emülsiyon Üretimi

Double emulsions are useful in a number of biological and industrial applications in which it is important to have an aqueous carrier fluid. This paper ...