Name: visualization of g3bp stress granules dynamics in live primary cells
Uploaded: 2014-05-21T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualization of G3BP Stress Granules Dynamics in Live Primary Cells at JoVE.com

Les auteurs tiennent à remercier la plate-forme Montpellier Rio Imaging (MRI) où les acquisitions ont été réalisées. Ils remercient Isabel Cristina Lopez Mejia, Alexandra Metz, Irina Lassot, Solange Desagher, Fabien Loustalot, et Virginie Georget pour leur aide dans différentes parties du protocole. Ce travail a été soutenu par la Fondation pour la Recherche Médicale (FRM) (Equipe FRM 2011-n ° DEQ20111223745).

Toutes les procédures d&#39;animaux dans ce protocole sont en stricte conformité avec les lignes directrices de la directive du Conseil communautaire européen du 24 Novembre 1986 (86-609/EEC). Maison des souris du groupe, permettant la nourriture et de l&#39;eau ad libitum. Les maintenir dans un environnement contrôlé (22 ± 1 ° C, 55 ± 5% d&#39;humidité) avec un 12 heures: 12 heures de lumière: cycle d&#39;obscurité (lumière sur à 7h00). 1 Culture de cellules murines prim...

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	<li>Thomas, M. G., Loschi, M., Desbats, M. A., Boccaccio, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+granules:+The+good,+the+bad+and+the+ugly.">RNA granules: The good, the bad and the ugly.</a> Cellular Signalling. 23 (2), 324-334 (2011).</li><li>Kedersha, N., Anderson, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+granules:+sites+of+mRNA+triage+that+regulate+mRNA+stability+and+translatability.">Stress granules: sites of mRNA triage that regulate mRNA stability and translatability.</a> Biochemical Society transactions. 30 (6), 963-969 (2002).</li><li>Anderson, P., Kedersha, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+granules:+the+Tao+of+RNA+triage.">Stress granules: the Tao of RNA triage.</a> Trends in Biochemical Sciences. 33 (3), 141-150 (2008).</li><li>Gilks, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+granule+assembly+is+mediated+by+prion-like+aggregation+of+TIA-1.">Stress granule assembly is mediated by prion-like aggregation of TIA-1.</a> Molecular biology of the cell. 15 (12), 5383-5398 (2004).</li><li>Tourri&#232;re, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+RasGAP-associated+endoribonuclease+G3BP+assembles+stress+granules.">The RasGAP-associated endoribonuclease G3BP assembles stress granules.</a> The Journal of Cell Biology. 160 (6), 823-831 (2003).</li><li>Parker, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Ras-GTPase-activating+protein+SH3-domain-binding+protein.">A Ras-GTPase-activating protein SH3-domain-binding protein.</a> Molecular and Cellular Biology. 16 (6), 2561-2569 (1996).</li><li>Annibaldi, A., Dousse, A., Martin, S., Tazi, J., Widmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revisiting+G3BP1+as+a+RasGAP+binding+protein:+sensitization+of+tumor+cells+to+chemotherapy+by+the+RasGAP+317-326+sequence+does+not+involve+G3BP1.">Revisiting G3BP1 as a RasGAP binding protein: sensitization of tumor cells to chemotherapy by the RasGAP 317-326 sequence does not involve G3BP1.</a> PLOS ONE. 6 (12), (2011).</li><li>Kennedy, D., French, J., Guitard, E., Ru, K., Tocque, B., Mattick, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+G3BPs:+tissue+specific+expression,+chromosomal+localisation+and+rasGAP(120)+binding+studies.">Characterization of G3BPs: tissue specific expression, chromosomal localisation and rasGAP(120) binding studies.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 84 (1), 173-187 (2001).</li><li>Kobayashi, T., Winslow, S., Sunesson, L., Hellman, U., Larsson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PKC&#945;+Binds+G3BP2+and+Regulates+Stress+Granule+Formation+Following+Cellular+Stress.">PKC&#945; Binds G3BP2 and Regulates Stress Granule Formation Following Cellular Stress.</a> PLOS ONE. 7 (4), (2012).</li><li>Tourri&#232;re, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RasGAP-associated+endoribonuclease+G3Bp:+selective+RNA+degradation+and+phosphorylation-dependent+localization.">RasGAP-associated endoribonuclease G3Bp: selective RNA degradation and phosphorylation-dependent localization.</a> Molecular and Cellular Biology. 21 (22), 7747-7760 (2001).</li><li>Costa, M., Ochem, A., Staub, A., Falaschi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+DNA+helicase+VIII:+a+DNA+and+RNA+helicase+corresponding+to+the+G3BP+protein,+an+element+of+the+ras+transduction+pathway.">Human DNA helicase VIII: a DNA and RNA helicase corresponding to the G3BP protein, an element of the ras transduction pathway.</a> Nucleic acids research. 27 (3), 817-821 (1999).</li><li>Solomon, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+structural+features+of+caprin-1+mediate+its+interaction+with+G3BP-1+and+its+induction+of+phosphorylation+of+eukaryotic+translation+initiation+factor+2alpha,+entry+to+cytoplasmic+stress+granules,+and+selective+interaction+with+a+subset+of+mRNAs.">Distinct structural features of caprin-1 mediate its interaction with G3BP-1 and its induction of phosphorylation of eukaryotic translation initiation factor 2alpha, entry to cytoplasmic stress granules, and selective interaction with a subset of mRNAs.</a> Molecular and Cellular Biology. 27 (6), 2324-2342 (2007).</li><li>Soncini, C., Berdo, I., Draetta, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ras-GAP+SH3+domain+binding+protein+(G3BP)+is+a+modulator+of+USP10,+a+novel+human+ubiquitin+specific+protease.">Ras-GAP SH3 domain binding protein (G3BP) is a modulator of USP10, a novel human ubiquitin specific protease.</a> Oncogene. 20 (29), 3869-3879 (2001).</li><li>Zekri, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+fetal+growth+and+neonatal+survival+by+the+RasGAP-associated+endoribonuclease+G3BP.">Control of fetal growth and neonatal survival by the RasGAP-associated endoribonuclease G3BP.</a> Molecular and Cellular Biology. 25 (19), 8703-8716 (2005).</li><li>Martin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficiency+of+G3BP1,+the+stress+granules+assembly+factor,+results+in+abnormal+synaptic+plasticity+and+calcium+homeostasis+in+neurons.">Deficiency of G3BP1, the stress granules assembly factor, results in abnormal synaptic plasticity and calcium homeostasis in neurons.</a> Journal of neurochemistry. , (2013).</li><li>Mazroui, R., Huot, M. -. E., Tremblay, S., Filion, C., Labelle, Y., Khandjian, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trapping+of+messenger+RNA+by+Fragile+X+Mental+Retardation+protein+into+cytoplasmic+granules+induces+translation+repression.">Trapping of messenger RNA by Fragile X Mental Retardation protein into cytoplasmic granules induces translation repression.</a> Human molecular genetics. 11 (24), 3007-3017 (2002).</li><li>Colombrita, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TDP-43+is+recruited+to+stress+granules+in+conditions+of+oxidative+insult.">TDP-43 is recruited to stress granules in conditions of oxidative insult.</a> Journal of neurochemistry. 111 (4), 1051-1061 (2009).</li><li>Thomas, M. G., Tosar, L. J. M., Desbats, M. A., Leishman, C. C., Boccaccio, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammalian+Staufen+1+is+recruited+to+stress+granules+and+impairs+their+assembly.">Mammalian Staufen 1 is recruited to stress granules and impairs their assembly.</a> Journal of Cell Science. 122 (4), 563-573 (2009).</li><li>Chen, Y., Stevens, B., Chang, J., Milbrandt, J., Barres, B. A., Hell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NS21:+re-defined+and+modified+supplement+B27+for+neuronal+cultures.">NS21: re-defined and modified supplement B27 for neuronal cultures.</a> Journal of neuroscience. 171 (2), 239-247 (2008).</li><li>Xia, Z., Dudek, H., Miranti, C. K., Greenberg, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+Influx+via+the+NMDA+Receptor+Induces+Immediate+Early+Gene+Transcription+by+a+MAP+Kinase/ERK-Dependent+Mechanism.">Calcium Influx via the NMDA Receptor Induces Immediate Early Gene Transcription by a MAP Kinase/ERK-Dependent Mechanism.</a> The Journal of Neuroscience. 16 (17), 5425-5436 (1996).</li><li>Dudek, H., Ghosh, A., Greenberg, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+phosphate+transfection+of+DNA+into+neurons+in+primary+culture.">Calcium phosphate transfection of DNA into neurons in primary culture.</a> Current protocols in neuroscience. 3, (2001).</li><li>Reineke, L. C., Dougherty, J. D., Pierre, P., Lloyd, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large+G3BP-induced+granules+trigger+eIF2&#945;+phosphorylation.">Large G3BP-induced granules trigger eIF2&#945; phosphorylation.</a> Molecular biology of the cell. 23 (18), (2012).</li><li>Kedersha, N., Tisdale, S., Hickman, T., Anderson, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+and+quantitative+imaging+of+mammalian+stress+granules+and+processing+bodies.">Real-time and quantitative imaging of mammalian stress granules and processing bodies.</a> Methods in enzymology. 448, 521-552 (2008).</li></ol>

Les étapes les plus critiques dans le protocole concernent la transfection et plus particulièrement les acquisitions de laps de temps, qui doivent être surveillés attentivement afin d&#39;abaisser en bas de la cytotoxicité. Culture de cellules primaires n&#39;est pas une partie difficile, tant que les conditions stériles sont maintenus et la prudence sont prises afin d&#39;éviter des dommages lors de la dissection et de dissociation cellulaire étapes. MEF peut être conservé congel?...

granules de stress (SG) sont des foyers cytoplasmique non-membraneux formé comme une réponse protectrice cellulaire à un stress environnemental, tels que température élevée, le stress oxydatif, hypoxie, choc osmotique, irradiation UV, la privation de glucose, ou une infection virale. Ils peuvent être induits chimiquement par traitement avec des composés comme l&#39;arsénite de sodium, ce qui provoque un stress oxydatif. SG s&#39;accumulent au point mort traduction arrêté messager ribonucléoprotéique (mRNP) Complexes 2, la séquestration des ARNm de la machinerie traductionnelle, et leur assemblage peut être déclenchée par la phosphorylation de eIF2α (facteur d&#39;initiation eucaryote 2 α). SG sont des structures dynamiques qui échangent des composants avec les polysomes et autres granulés comme les P-organismes. Ils constituent un «centre de triage» où ARNm sont triés et traités soit pour la traduction, réamorçage, la dégradation ou l&#39;emballage dans stables mRNP non polysomique 3. L&#39;ensemble de la SGS est rapide but est un processus progressif avec de nombreux petits agrégats initiaux qui confluent en granules plus grands. L&#39;utilisation d&#39;inhibiteurs chimiques qui perturbent ou stabilisent les microtubules montre que le réseau de microtubules est nécessaire pour la dynamique de la SG y compris les processus ensemble, coalescence et de démontage. L&#39;assemblage dynamique de SG est également favorisée par l&#39;agrégation des protéines liant l&#39;ARN spécifiques (ARN-BP) comme la norme TIA-1 (T-cellule interne antigène-1) et TIAR (protéine liée TIA-1), qui sont capables de dimériser et promouvoir polysome démontage et l&#39;acheminement des ARNm dans SG 4. G3BP (domaine RasGAP SH3 de la protéine de liaison) est telle un ARN-BP qui localise à SG lorsque les cellules sont stressés à l&#39;arsénite ou une température élevée, et la surexpression de G3BP dephosphoryle peuvent induire SG ensemble 5. G3BP est un ARN-BP évolutivement conservées qui a été initialement caractérisée par son interaction avec une protéine d&#39;activation de Ras-GTPase (p RasGAP120 6); mais cette interaction a été récemment revisitée 7. La famille G3BP comprend deux membres chez les mammifères, G3BP1 (dénommé G3BP) et G3BP2 8. Les deux protéines colocalisent SGS, lorsque les cellules sont exposées à un stress 9. G3BPs comprennent un domaine de NTF2 N-terminal a suggéré d&#39;influer sur leur localisation et oligomérisation, suivie riche en proline (PxxP) motifs, puis des motifs C-terminaux associés à la liaison de l&#39;ARN: la canonique ARN motif de reconnaissance (RRM) avec RNP1 et RNP2 motifs conservés , suivie d&#39;un riche (RGG) boîte arginine-glycine. Chose intéressante, l&#39;analyse des différentes parties de la protéine par la construction de différents domaines fusionné à la EGFP a montré que le domaine NTF2-like et le domaine de liaison à l&#39;ARN étaient les plus efficacement recruté pour SG, ce qui suggère l&#39;importance des propriétés de dimérisation et de liaison d&#39;ARN dans l&#39;ensemble de la SGS. Modèles divers ont mis en évidence différentes fonctions des protéines G3BP in vitro 10-13.Perturbation de G3BP chez la souris ont montré l&#39;importance de cette protéine dans la croissance et la survie de développement 14, ainsi que d&#39;un rôle important pour G3BP dans le système nerveux central (SNC), caractérisé par une ataxie et des défauts dans la mémoire de travail spatiale 15. Carence G3BP conduit à altération neuronale et la plasticité calcium homéostasie, établissant un lien direct entre la formation de SG et les maladies neurodégénératives 15. Il est donc important d&#39;être en mesure d&#39;étudier la dynamique de la SG dans des cellules primaires comme les neurones. Ce protocole fournit un moyen simple d&#39;observer l&#39;ensemble de SG contenant G3BP1 dans les cellules primaires sous traitement de l&#39;arsénite. Il peut être utilisé pour étudier l&#39;assemblage SG dans des conditions différentes, par exemple différentes sortes de contraintes. Il peut également être adapté à d&#39;autres granules ou d&#39;autres constituants de la SGS. En effet, ce protocole met l&#39;accent sur ​​G3BP1, mais il ya d&#39;autres marqueurs de granules de stress comme la norme TIA-1 / R, TTP (tristetraprolin) 2,FMRP (Fragile X Mental Retardation protéine Syndrome) 16, (protéine de liaison à l&#39;ADN de réponse transactive 43) TDP-43 17 ou 18 Staufen. En particulier, les protéines comme la norme TIA-1 / R sont, comme G3BP, nucléation des protéines de liaison d&#39;ARN qui peuvent induire ensemble SG lorsqu&#39;il est surexprimé, même si les différentes SG formés peuvent différer en fonction, la régulation et les transcriptions associés. Transfection de la version fluorophore marqué de l&#39;un de ces composants clés de nucléation ou de SG peut être effectuée à l&#39;image notamment de montage et dynamique SG.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:881px;" width="881">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:153px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:312px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;"></td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">DMEM/F12</td>
			<td style="width:153px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">21331</td>
			<td>Pre-warm at 37 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Sodium Pyruvate</td>
			<td style="width:153px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">11360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Non essential amino acids</td>
			<td style="width:153px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">11140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">L-Glutamine</td>
			<td style="width:153px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">25030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Trypsin</td>
			<td style="width:153px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">15096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Glass bottom B-35</td>
			<td style="width:153px;">Greiner</td>
			<td style="width:119px;">627860/627861</td>
			<td>Treated or not (treated: increases attachment of adherent cells)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Poly-L-lysine</td>
			<td style="width:153px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P2636</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">DMEM</td>
			<td style="width:153px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">31966</td>
			<td>Pre-warm at 37 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">HeBS</td>
			<td style="width:153px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">51558</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Neurobasal</td>
			<td style="width:153px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">21103</td>
			<td>Pre-warm at 37 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">2-mercaptoethanol</td>
			<td style="width:153px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">31350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Forceps</td>
			<td style="width:153px;">Biotek</td>
			<td style="width:119px;">DU-110-A</td>
			<td>Very thin, tips 0,1 mm (useful to remove meninges)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Curved forceps</td>
			<td style="width:153px;">Biotek</td>
			<td style="width:119px;">P-110-BUF</td>
			<td>Very thin, tips 0,1 mm&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Small scissors</td>
			<td style="width:153px;">Biotek</td>
			<td style="width:119px;">CM-85-BS</td>
			<td>Can be useful to remove hippocampi</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyplus transfection JetPEI reagent&#160;</td>
			<td style="width:153px;">Ozyme</td>
			<td style="width:119px;">101-10</td>
			<td>MEFs transfection, follow the forward protocol</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Inverted laser scanning confocal microscope</td>
			<td style="width:153px;">Leica&#160;</td>
			<td style="width:119px;">SP5</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

visualization of g3bp stress granules dynamics in live primary cells

SG peut être visualisé dans les cellules par immunocoloration de composants protéiques spécifiques ou polyA + ARNm. SG sont très dynamique et l&#39;étude de leur assemblage et le destin est important de comprendre la réponse cellulaire au stress. Le déficit en facteurs clés de SG comme G3BP (RasGAP domaine SH3 de Binding Protein) conduit à des anomalies du développement chez les souris et les altérations du système nerveux central. Pour étudier la dynamique de SG dans les cellules d&#39;un organisme, une des cellules primaires de culture de boîtes et de suivre la localisation d&#39;un composant marqué transfectées de SG. Nous décrivons expérience time-lapse pour observer SG contenant G3BP1 en fibroblastes embryonnaires de souris (MEF). Cette technique peut également être utilisée pour étudier GV contenant de G3BP dans les neurones vivants, ce qui est crucial car il a été montré récemment que ces SG sont formées à l&#39;apparition de maladies neurodégénératives comme la maladie d&#39;Alzheimer. Cette approche peut être adaptée à tout autre composant du corps cellulaire et des protéines de granules, et réaliséeavec des animaux transgéniques, ce qui permet l&#39;étude en temps réel de la dynamique des granules, par exemple en l&#39;absence d&#39;un facteur spécifique de ces granules.

Stress formation de granule est important dans la réponse des cellules à un stress, ce qui permet une adaptation de traduction cellulaire avec point mort, jusqu&#39;à ce que l&#39;effort a disparu, associée à la prévention de l&#39;apoptose. Ce dosage permet d&#39;étudier les SG dans les cellules primaires, en suivant la localisation de composants clés de protéines SGS (Figure 1). G3BP, un facteur clé de l&#39;ensemble SG, est présent plutôt diffuse dans le cytoplasme des MEF en culture ou d...

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Visualization of G3BP Stress Granules Dynamics in Live Primary Cells

Visualisation de G3BP stress Granules dynamique dans les cellules primaires en direct

granules de stress (SG) sont des granules d&#39;ARN cytoplasmiques contenant des particules bloquées ribonucléoprotéiques (RNP), et important dans la réponse cellulaire à différents stress. Dynamique de SG peuvent être suivies dans les cellules vivantes en visualisant la localisation d&#39;un composant marqué de SG dans des cellules primaires transfectées après le stress.

SGs can be visualized in cells by immunostaining of specific protein components or polyA+ mRNAs. SGs are highly dynamic and the study of their assembly ...

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Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex ...

Methods to Classify Cytoplasmic Foci as Mammalian Stress Granules

Méthodes pour classer les foyers cytoplasmiques sous forme de granulés de stress mammalien

Cells are often challenged by sudden environmental changes. Stress Granules (SGs), cytoplasmic ribonucleoprotein complexes that form in cells exposed to ...

Application of High-speed Super-resolution SPEED Microscopy in Live Primary Cilium

Application de la microscopie vitesse haut débit Super-résolution en direct cil primaire

The primary cilium is a microtubule-based protrusion on the surface of many eukaryotic cells and contains a unique complement of proteins that function ...

Examination of Mitotic and Meiotic Fission Yeast Nuclear Dynamics by Fluorescence Live-cell Microscopy

Examen de la dynamique nucléaire de levure de fission mitotique et méiotique par fluorescence Microscopie à cellules vivantes

Live-cell imaging is a microscopy technique used to examine cell and protein dynamics in living cells. This imaging method is not toxic, generally does ...