Name: visualization of g3bp stress granules dynamics in live primary cells
Uploaded: 2014-05-21T13:00:00
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Gli autori desiderano ringraziare la piattaforma Montpellier Rio Imaging (MRI) in cui sono state effettuate le acquisizioni. Ringraziano Isabel Cristina Lopez Mejia, Alexandra Metz, Irina Lassot, Solange Desagher, Fabien Loustalot, e Virginie Georget per il loro aiuto in diverse parti del protocollo. Questo lavoro è stato sostenuto dalla Fondation pour la Recherche Médicale (FRM) (Equipe FRM 2011-n ° DEQ20111223745).

Tutte le procedure sugli animali in questo protocollo sono in stretta aderenza con le linee guida della Direttiva del Consiglio della Comunità Europea del 24 novembre 1986 (86-609/EEC). Casa dei topi in gruppo, permettendo cibo e acqua ad libitum. Mantenerle in un ambiente controllato (22 ± 1 ° C, 55 ± 5% di umidità), con una 12 ore: 12 ore di luce: ciclo di buio (luce alle 07:00). 1 Culture di cellule murine primari:. Fibroblasti embrionali di topo (MEF) <ol><li> Autoclave p...

<ol>
	<li>Thomas, M. G., Loschi, M., Desbats, M. A., Boccaccio, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+granules:+The+good,+the+bad+and+the+ugly.">RNA granules: The good, the bad and the ugly.</a> Cellular Signalling. 23 (2), 324-334 (2011).</li><li>Kedersha, N., Anderson, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+granules:+sites+of+mRNA+triage+that+regulate+mRNA+stability+and+translatability.">Stress granules: sites of mRNA triage that regulate mRNA stability and translatability.</a> Biochemical Society transactions. 30 (6), 963-969 (2002).</li><li>Anderson, P., Kedersha, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+granules:+the+Tao+of+RNA+triage.">Stress granules: the Tao of RNA triage.</a> Trends in Biochemical Sciences. 33 (3), 141-150 (2008).</li><li>Gilks, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+granule+assembly+is+mediated+by+prion-like+aggregation+of+TIA-1.">Stress granule assembly is mediated by prion-like aggregation of TIA-1.</a> Molecular biology of the cell. 15 (12), 5383-5398 (2004).</li><li>Tourri&#232;re, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+RasGAP-associated+endoribonuclease+G3BP+assembles+stress+granules.">The RasGAP-associated endoribonuclease G3BP assembles stress granules.</a> The Journal of Cell Biology. 160 (6), 823-831 (2003).</li><li>Parker, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Ras-GTPase-activating+protein+SH3-domain-binding+protein.">A Ras-GTPase-activating protein SH3-domain-binding protein.</a> Molecular and Cellular Biology. 16 (6), 2561-2569 (1996).</li><li>Annibaldi, A., Dousse, A., Martin, S., Tazi, J., Widmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revisiting+G3BP1+as+a+RasGAP+binding+protein:+sensitization+of+tumor+cells+to+chemotherapy+by+the+RasGAP+317-326+sequence+does+not+involve+G3BP1.">Revisiting G3BP1 as a RasGAP binding protein: sensitization of tumor cells to chemotherapy by the RasGAP 317-326 sequence does not involve G3BP1.</a> PLOS ONE. 6 (12), (2011).</li><li>Kennedy, D., French, J., Guitard, E., Ru, K., Tocque, B., Mattick, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+G3BPs:+tissue+specific+expression,+chromosomal+localisation+and+rasGAP(120)+binding+studies.">Characterization of G3BPs: tissue specific expression, chromosomal localisation and rasGAP(120) binding studies.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 84 (1), 173-187 (2001).</li><li>Kobayashi, T., Winslow, S., Sunesson, L., Hellman, U., Larsson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PKC&#945;+Binds+G3BP2+and+Regulates+Stress+Granule+Formation+Following+Cellular+Stress.">PKC&#945; Binds G3BP2 and Regulates Stress Granule Formation Following Cellular Stress.</a> PLOS ONE. 7 (4), (2012).</li><li>Tourri&#232;re, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RasGAP-associated+endoribonuclease+G3Bp:+selective+RNA+degradation+and+phosphorylation-dependent+localization.">RasGAP-associated endoribonuclease G3Bp: selective RNA degradation and phosphorylation-dependent localization.</a> Molecular and Cellular Biology. 21 (22), 7747-7760 (2001).</li><li>Costa, M., Ochem, A., Staub, A., Falaschi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+DNA+helicase+VIII:+a+DNA+and+RNA+helicase+corresponding+to+the+G3BP+protein,+an+element+of+the+ras+transduction+pathway.">Human DNA helicase VIII: a DNA and RNA helicase corresponding to the G3BP protein, an element of the ras transduction pathway.</a> Nucleic acids research. 27 (3), 817-821 (1999).</li><li>Solomon, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+structural+features+of+caprin-1+mediate+its+interaction+with+G3BP-1+and+its+induction+of+phosphorylation+of+eukaryotic+translation+initiation+factor+2alpha,+entry+to+cytoplasmic+stress+granules,+and+selective+interaction+with+a+subset+of+mRNAs.">Distinct structural features of caprin-1 mediate its interaction with G3BP-1 and its induction of phosphorylation of eukaryotic translation initiation factor 2alpha, entry to cytoplasmic stress granules, and selective interaction with a subset of mRNAs.</a> Molecular and Cellular Biology. 27 (6), 2324-2342 (2007).</li><li>Soncini, C., Berdo, I., Draetta, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ras-GAP+SH3+domain+binding+protein+(G3BP)+is+a+modulator+of+USP10,+a+novel+human+ubiquitin+specific+protease.">Ras-GAP SH3 domain binding protein (G3BP) is a modulator of USP10, a novel human ubiquitin specific protease.</a> Oncogene. 20 (29), 3869-3879 (2001).</li><li>Zekri, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+fetal+growth+and+neonatal+survival+by+the+RasGAP-associated+endoribonuclease+G3BP.">Control of fetal growth and neonatal survival by the RasGAP-associated endoribonuclease G3BP.</a> Molecular and Cellular Biology. 25 (19), 8703-8716 (2005).</li><li>Martin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficiency+of+G3BP1,+the+stress+granules+assembly+factor,+results+in+abnormal+synaptic+plasticity+and+calcium+homeostasis+in+neurons.">Deficiency of G3BP1, the stress granules assembly factor, results in abnormal synaptic plasticity and calcium homeostasis in neurons.</a> Journal of neurochemistry. , (2013).</li><li>Mazroui, R., Huot, M. -. E., Tremblay, S., Filion, C., Labelle, Y., Khandjian, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trapping+of+messenger+RNA+by+Fragile+X+Mental+Retardation+protein+into+cytoplasmic+granules+induces+translation+repression.">Trapping of messenger RNA by Fragile X Mental Retardation protein into cytoplasmic granules induces translation repression.</a> Human molecular genetics. 11 (24), 3007-3017 (2002).</li><li>Colombrita, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TDP-43+is+recruited+to+stress+granules+in+conditions+of+oxidative+insult.">TDP-43 is recruited to stress granules in conditions of oxidative insult.</a> Journal of neurochemistry. 111 (4), 1051-1061 (2009).</li><li>Thomas, M. G., Tosar, L. J. M., Desbats, M. A., Leishman, C. C., Boccaccio, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammalian+Staufen+1+is+recruited+to+stress+granules+and+impairs+their+assembly.">Mammalian Staufen 1 is recruited to stress granules and impairs their assembly.</a> Journal of Cell Science. 122 (4), 563-573 (2009).</li><li>Chen, Y., Stevens, B., Chang, J., Milbrandt, J., Barres, B. A., Hell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NS21:+re-defined+and+modified+supplement+B27+for+neuronal+cultures.">NS21: re-defined and modified supplement B27 for neuronal cultures.</a> Journal of neuroscience. 171 (2), 239-247 (2008).</li><li>Xia, Z., Dudek, H., Miranti, C. K., Greenberg, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+Influx+via+the+NMDA+Receptor+Induces+Immediate+Early+Gene+Transcription+by+a+MAP+Kinase/ERK-Dependent+Mechanism.">Calcium Influx via the NMDA Receptor Induces Immediate Early Gene Transcription by a MAP Kinase/ERK-Dependent Mechanism.</a> The Journal of Neuroscience. 16 (17), 5425-5436 (1996).</li><li>Dudek, H., Ghosh, A., Greenberg, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+phosphate+transfection+of+DNA+into+neurons+in+primary+culture.">Calcium phosphate transfection of DNA into neurons in primary culture.</a> Current protocols in neuroscience. 3, (2001).</li><li>Reineke, L. C., Dougherty, J. D., Pierre, P., Lloyd, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large+G3BP-induced+granules+trigger+eIF2&#945;+phosphorylation.">Large G3BP-induced granules trigger eIF2&#945; phosphorylation.</a> Molecular biology of the cell. 23 (18), (2012).</li><li>Kedersha, N., Tisdale, S., Hickman, T., Anderson, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+and+quantitative+imaging+of+mammalian+stress+granules+and+processing+bodies.">Real-time and quantitative imaging of mammalian stress granules and processing bodies.</a> Methods in enzymology. 448, 521-552 (2008).</li></ol>

I passaggi più critici del protocollo riguardano la trasfezione e più in particolare le acquisizioni lasso di tempo, che devono essere attentamente monitorati al fine di abbassare la citotossicità. Coltura di cellule primarie non è una parte difficile, finché le condizioni sterili sono mantenute e cautela è presa per evitare danni durante le fasi di dissezione e dissociazione cellulare. MEF può essere mantenuto congelato alle brevi passaggi. Neuron trasfezione con fosfato di calcio ha...

Granuli di stress (SGS) sono non-membranosa foci citoplasmatica formata come una risposta protettiva cellulare a stress ambientali, come la temperatura elevata, stress ossidativo, ipossia, shock osmotico, irradiazione UV, deprivazione di glucosio, o infezione virale 1. Essi possono essere indotti chimicamente mediante trattamento con composti come arsenito di sodio, che innesca lo stress ossidativo. SG accumulano in fase di stallo traduzione arrestato messaggero ribonucleoproteina (mRNPs) Complessi 2, sequestrando mRNA dal macchinario traslazionale, e il loro montaggio può essere attivato dalla fosforilazione di eIF2α (fattore di iniziazione eucariotica 2 α). SG sono strutture dinamiche che scambiano i componenti con le polisomi e altri granuli come il P-corpi. Essi costituiscono un &quot;centro di smistamento&quot;, dove mRNA sono ordinati ed elaborati sia per la traduzione, reinitiation, il degrado o l&#39;imballaggio in stabili mRNPs non polisomi 3. L&#39;assemblea di SGS è veloce but è un processo graduale, con iniziali numerosi piccoli aggregati che si coagulano in granuli più grandi. L&#39;uso di inibitori chimici che interrompono o stabilizzano i microtubuli mostra che è necessaria rete di microtubuli per dinamiche SG comprendenti processi di assemblaggio, di coalescenza e smontaggio. L&#39;assembly dinamico di SGS è anche favorito dalla aggregazione di specifici RNA-binding proteins (RNA-BP) come TIA-1 (T-cellulare interna antigene-1) e TIAR (proteina TIA-1-correlati), che sono in grado di dimerize e promuovere polisoma smontaggio e l&#39;instradamento di mRNA in SG 4. G3BP (RasGAP SH3 dominio di binding protein) è tale un RNA-BP che localizza a SGS quando le cellule sono stressati con arsenito o ad alta temperatura e sovraespressione di G3BP defosforilato può indurre SG gruppo 5. G3BP è evolutivamente conservata RNA-BP che è stato inizialmente caratterizzato attraverso la sua interazione con una proteina attivazione Ras-GTPasi (RasGAP p120 6); ma questa interazione è stato recentemente rivisitato 7. La famiglia G3BP comprende due membri nei mammiferi, G3BP1 (denominato G3BP) e G3BP2 8. Entrambe le proteine ​​colocalize in SGS, quando le cellule sono sottoposte a stress 9. G3BPs comprendono un dominio NTF2 N-terminale suggerito di influenzare la loro localizzazione e oligomerizzazione, seguiti da prolina ricchi (PxxP) motivi, quindi motivi C-terminale associato con RNA vincolante: il canonico RNA-Riconoscimento Motif (RRM) con RNP1 e RNP2 motivi conservati , seguita da un ricco casella arginina-glicina (RGG). È interessante notare che l&#39;analisi delle diverse parti della proteina creando diversi domini fuse ad EGFP dimostrato che il dominio NTF2-simili e il dominio legante l&#39;RNA erano i più efficientemente assunto per SGS, suggerendo l&#39;importanza delle proprietà di dimerizzazione e RNA vincolante l&#39;assemblea di SGS. Diversi modelli hanno rivelato diverse funzioni delle proteine ​​G3BP in vitro 10-13.Interruzione del G3BP nei topi hanno dimostrato l&#39;importanza di questa proteina in crescita dello sviluppo e sopravvivenza 14, così come un ruolo importante per G3BP nel Sistema Nervoso Centrale (SNC), caratterizzata da atassia e difetti nella memoria di lavoro spaziale 15. Carenza G3BP porta ad alterata plasticità neuronale e calcio omeostasi, stabilendo un collegamento diretto tra la formazione di SG e le malattie neurodegenerative 15. È quindi importante poter studiare la dinamica dello SGS in cellule primarie come neuroni. Questo protocollo fornisce un modo semplice per osservare l&#39;assemblaggio di-G3BP1 contenente SG in cellule primarie in trattamento arsenite. Può essere usato per studiare assembly SGs in condizioni diverse, ad esempio diversi tipi di stress. Può anche essere adattato ad altri granuli o altri costituenti del SGS. Infatti, questo protocollo si concentra sulla G3BP1, ma ci sono altri granuli di stress marcatori come TIA-1 / R, TTP (tristetraprolin) 2,FMRP (fragile X ritardo mentale Sindrome di proteine) 16, TDP-43 (DNA risposta transattivo binding protein 43) 17 o Staufen 18. In particolare, proteine ​​come TIA-1 / R sono, come G3BP, nucleazione RNA proteine ​​leganti che possono indurre assembly SGs quando overexpressed, anche se le varie SGs formate possono differire in funzione, regolazione e trascrizioni associati. Trasfezione versione fluoroforo-tag di una di queste componenti chiave o nucleatori di SG può essere eseguita per l&#39;immagine particolare assemblaggio e la dinamica SG.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:881px;" width="881">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:153px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:312px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;"></td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">DMEM/F12</td>
			<td style="width:153px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">21331</td>
			<td>Pre-warm at 37 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Sodium Pyruvate</td>
			<td style="width:153px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">11360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Non essential amino acids</td>
			<td style="width:153px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">11140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">L-Glutamine</td>
			<td style="width:153px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">25030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Trypsin</td>
			<td style="width:153px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">15096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Glass bottom B-35</td>
			<td style="width:153px;">Greiner</td>
			<td style="width:119px;">627860/627861</td>
			<td>Treated or not (treated: increases attachment of adherent cells)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Poly-L-lysine</td>
			<td style="width:153px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P2636</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">DMEM</td>
			<td style="width:153px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">31966</td>
			<td>Pre-warm at 37 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">HeBS</td>
			<td style="width:153px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">51558</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Neurobasal</td>
			<td style="width:153px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">21103</td>
			<td>Pre-warm at 37 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">2-mercaptoethanol</td>
			<td style="width:153px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">31350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Forceps</td>
			<td style="width:153px;">Biotek</td>
			<td style="width:119px;">DU-110-A</td>
			<td>Very thin, tips 0,1 mm (useful to remove meninges)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Curved forceps</td>
			<td style="width:153px;">Biotek</td>
			<td style="width:119px;">P-110-BUF</td>
			<td>Very thin, tips 0,1 mm&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Small scissors</td>
			<td style="width:153px;">Biotek</td>
			<td style="width:119px;">CM-85-BS</td>
			<td>Can be useful to remove hippocampi</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyplus transfection JetPEI reagent&#160;</td>
			<td style="width:153px;">Ozyme</td>
			<td style="width:119px;">101-10</td>
			<td>MEFs transfection, follow the forward protocol</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Inverted laser scanning confocal microscope</td>
			<td style="width:153px;">Leica&#160;</td>
			<td style="width:119px;">SP5</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

visualization of g3bp stress granules dynamics in live primary cells

SGs può essere visualizzato in cellule mediante immunocolorazione delle componenti proteici specifici o polyA + mRNA. SG sono altamente dinamico e lo studio del loro assemblaggio e il destino è importante per capire la risposta cellulare allo stress. Il deficit dei fattori chiave della SG come G3BP (RasGAP SH3 dominio Binding Protein) porta a difetti dello sviluppo in topi e alterazioni del Sistema Nervoso Centrale. Per studiare la dinamica di SG in cellule di un organismo, si può cellule primarie di cultura e seguire la localizzazione di un componente etichettato transfettate di SGS. Descriviamo esperimento di time-lapse per osservare-G3BP1 contenente SG in fibroblasti embrionali di topo (MEF). Questa tecnica può anche essere usato per studiare SGS-G3BP contenente neuroni in vivo, che è cruciale come è stato recentemente dimostrato che questi SGs si formano alla insorgenza di malattie neurodegenerative come il morbo di Alzheimer. Questo approccio può essere adattato a qualsiasi altro componente corpo cellulare e proteine ​​granuli, ed eseguitocon animali transgenici, permettendo lo studio vivo di granulati dinamiche per esempio in assenza di un fattore specifico di questi granuli.

Formazione stress granulo è importante nella risposta delle cellule allo stress, permettendo un adattamento cellulare con traduzione in stallo, finché lo stress ha autorizzato, associata alla prevenzione dell&#39;apoptosi. Permette questo test per studiare SGS in cellule primarie, seguendo la localizzazione delle principali componenti proteiche SGS (Figura 1). G3BP, un fattore chiave di montaggio SGS, è presente piuttosto diffusamente nel citoplasma di MEF coltivate o neuroni (Figura 2A A</st...

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Visualization of G3BP Stress Granules Dynamics in Live Primary Cells

Visualizzazione dei G3BP stress Granuli Dynamics in cellule primarie in diretta

Granuli di stress (SGS) sono granuli citoplasmatici RNA contenenti particelle in fase di stallo ribonucleoproteiche (RNP), e importante nella risposta cellulare alle varie sollecitazioni. Dinamica di SG possono essere seguite in cellule vive visualizzando la localizzazione di un componente taggato di SG in cellule primarie transfettate dopo stress.

SGs can be visualized in cells by immunostaining of specific protein components or polyA+ mRNAs. SGs are highly dynamic and the study of their assembly ...

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Examination of Mitotic and Meiotic Fission Yeast Nuclear Dynamics by Fluorescence Live-cell Microscopy

Esame della dinamica nucleare del lievito di fissione mitotico e meiotico da fluorescenza microscopia a celle vive

Live-cell imaging is a microscopy technique used to examine cell and protein dynamics in living cells. This imaging method is not toxic, generally does ...