Name: visualization of g3bp stress granules dynamics in live primary cells
Uploaded: 2014-05-21T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualization of G3BP Stress Granules Dynamics in Live Primary Cells at JoVE.com

Forfatterne ønsker å erkjenne Montpellier Rio Imaging (MRI) plattform hvor oppkjøpene ble utført. De takker Isabel Cristina Lopez Mejia, Alexandra Metz, Irina Lassot, Solange Desagher, Fabien LOUSTALOT, og Virginie Georget for deres hjelp i ulike deler av protokollen. Dette arbeidet ble støttet av Fondation pour la Recherche MEDICALE (FRM) (Equipe FRM 2011-n ° DEQ20111223745).

Alle dyre prosedyrer i denne protokollen er i streng overholdelse med retningslinjene fra EU Rådsdirektiv av 24 november 1986 (86-609/EEC). Hus musene i gruppen, slik at mat og vann ad libitum. Holde dem i et kontrollert miljø (22 ± 1 ° C, 55 ± 5% luftfuktighet) med en 12 timer: 12 timer lys: mørke syklus (lyset på 7:00). En kultur av Murint primære celler:. Mus embryonale fibroblaster (MEFs) <ol><li> Autoklav tynne tang, samt buede tang og dissekere saks. Lagres i en ster...

<ol>
	<li>Thomas, M. G., Loschi, M., Desbats, M. A., Boccaccio, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+granules:+The+good,+the+bad+and+the+ugly.">RNA granules: The good, the bad and the ugly.</a> Cellular Signalling. 23 (2), 324-334 (2011).</li><li>Kedersha, N., Anderson, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+granules:+sites+of+mRNA+triage+that+regulate+mRNA+stability+and+translatability.">Stress granules: sites of mRNA triage that regulate mRNA stability and translatability.</a> Biochemical Society transactions. 30 (6), 963-969 (2002).</li><li>Anderson, P., Kedersha, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+granules:+the+Tao+of+RNA+triage.">Stress granules: the Tao of RNA triage.</a> Trends in Biochemical Sciences. 33 (3), 141-150 (2008).</li><li>Gilks, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+granule+assembly+is+mediated+by+prion-like+aggregation+of+TIA-1.">Stress granule assembly is mediated by prion-like aggregation of TIA-1.</a> Molecular biology of the cell. 15 (12), 5383-5398 (2004).</li><li>Tourri&#232;re, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+RasGAP-associated+endoribonuclease+G3BP+assembles+stress+granules.">The RasGAP-associated endoribonuclease G3BP assembles stress granules.</a> The Journal of Cell Biology. 160 (6), 823-831 (2003).</li><li>Parker, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Ras-GTPase-activating+protein+SH3-domain-binding+protein.">A Ras-GTPase-activating protein SH3-domain-binding protein.</a> Molecular and Cellular Biology. 16 (6), 2561-2569 (1996).</li><li>Annibaldi, A., Dousse, A., Martin, S., Tazi, J., Widmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revisiting+G3BP1+as+a+RasGAP+binding+protein:+sensitization+of+tumor+cells+to+chemotherapy+by+the+RasGAP+317-326+sequence+does+not+involve+G3BP1.">Revisiting G3BP1 as a RasGAP binding protein: sensitization of tumor cells to chemotherapy by the RasGAP 317-326 sequence does not involve G3BP1.</a> PLOS ONE. 6 (12), (2011).</li><li>Kennedy, D., French, J., Guitard, E., Ru, K., Tocque, B., Mattick, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+G3BPs:+tissue+specific+expression,+chromosomal+localisation+and+rasGAP(120)+binding+studies.">Characterization of G3BPs: tissue specific expression, chromosomal localisation and rasGAP(120) binding studies.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 84 (1), 173-187 (2001).</li><li>Kobayashi, T., Winslow, S., Sunesson, L., Hellman, U., Larsson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PKC&#945;+Binds+G3BP2+and+Regulates+Stress+Granule+Formation+Following+Cellular+Stress.">PKC&#945; Binds G3BP2 and Regulates Stress Granule Formation Following Cellular Stress.</a> PLOS ONE. 7 (4), (2012).</li><li>Tourri&#232;re, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RasGAP-associated+endoribonuclease+G3Bp:+selective+RNA+degradation+and+phosphorylation-dependent+localization.">RasGAP-associated endoribonuclease G3Bp: selective RNA degradation and phosphorylation-dependent localization.</a> Molecular and Cellular Biology. 21 (22), 7747-7760 (2001).</li><li>Costa, M., Ochem, A., Staub, A., Falaschi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+DNA+helicase+VIII:+a+DNA+and+RNA+helicase+corresponding+to+the+G3BP+protein,+an+element+of+the+ras+transduction+pathway.">Human DNA helicase VIII: a DNA and RNA helicase corresponding to the G3BP protein, an element of the ras transduction pathway.</a> Nucleic acids research. 27 (3), 817-821 (1999).</li><li>Solomon, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+structural+features+of+caprin-1+mediate+its+interaction+with+G3BP-1+and+its+induction+of+phosphorylation+of+eukaryotic+translation+initiation+factor+2alpha,+entry+to+cytoplasmic+stress+granules,+and+selective+interaction+with+a+subset+of+mRNAs.">Distinct structural features of caprin-1 mediate its interaction with G3BP-1 and its induction of phosphorylation of eukaryotic translation initiation factor 2alpha, entry to cytoplasmic stress granules, and selective interaction with a subset of mRNAs.</a> Molecular and Cellular Biology. 27 (6), 2324-2342 (2007).</li><li>Soncini, C., Berdo, I., Draetta, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ras-GAP+SH3+domain+binding+protein+(G3BP)+is+a+modulator+of+USP10,+a+novel+human+ubiquitin+specific+protease.">Ras-GAP SH3 domain binding protein (G3BP) is a modulator of USP10, a novel human ubiquitin specific protease.</a> Oncogene. 20 (29), 3869-3879 (2001).</li><li>Zekri, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+fetal+growth+and+neonatal+survival+by+the+RasGAP-associated+endoribonuclease+G3BP.">Control of fetal growth and neonatal survival by the RasGAP-associated endoribonuclease G3BP.</a> Molecular and Cellular Biology. 25 (19), 8703-8716 (2005).</li><li>Martin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficiency+of+G3BP1,+the+stress+granules+assembly+factor,+results+in+abnormal+synaptic+plasticity+and+calcium+homeostasis+in+neurons.">Deficiency of G3BP1, the stress granules assembly factor, results in abnormal synaptic plasticity and calcium homeostasis in neurons.</a> Journal of neurochemistry. , (2013).</li><li>Mazroui, R., Huot, M. -. E., Tremblay, S., Filion, C., Labelle, Y., Khandjian, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trapping+of+messenger+RNA+by+Fragile+X+Mental+Retardation+protein+into+cytoplasmic+granules+induces+translation+repression.">Trapping of messenger RNA by Fragile X Mental Retardation protein into cytoplasmic granules induces translation repression.</a> Human molecular genetics. 11 (24), 3007-3017 (2002).</li><li>Colombrita, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TDP-43+is+recruited+to+stress+granules+in+conditions+of+oxidative+insult.">TDP-43 is recruited to stress granules in conditions of oxidative insult.</a> Journal of neurochemistry. 111 (4), 1051-1061 (2009).</li><li>Thomas, M. G., Tosar, L. J. M., Desbats, M. A., Leishman, C. C., Boccaccio, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammalian+Staufen+1+is+recruited+to+stress+granules+and+impairs+their+assembly.">Mammalian Staufen 1 is recruited to stress granules and impairs their assembly.</a> Journal of Cell Science. 122 (4), 563-573 (2009).</li><li>Chen, Y., Stevens, B., Chang, J., Milbrandt, J., Barres, B. A., Hell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NS21:+re-defined+and+modified+supplement+B27+for+neuronal+cultures.">NS21: re-defined and modified supplement B27 for neuronal cultures.</a> Journal of neuroscience. 171 (2), 239-247 (2008).</li><li>Xia, Z., Dudek, H., Miranti, C. K., Greenberg, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+Influx+via+the+NMDA+Receptor+Induces+Immediate+Early+Gene+Transcription+by+a+MAP+Kinase/ERK-Dependent+Mechanism.">Calcium Influx via the NMDA Receptor Induces Immediate Early Gene Transcription by a MAP Kinase/ERK-Dependent Mechanism.</a> The Journal of Neuroscience. 16 (17), 5425-5436 (1996).</li><li>Dudek, H., Ghosh, A., Greenberg, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+phosphate+transfection+of+DNA+into+neurons+in+primary+culture.">Calcium phosphate transfection of DNA into neurons in primary culture.</a> Current protocols in neuroscience. 3, (2001).</li><li>Reineke, L. C., Dougherty, J. D., Pierre, P., Lloyd, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large+G3BP-induced+granules+trigger+eIF2&#945;+phosphorylation.">Large G3BP-induced granules trigger eIF2&#945; phosphorylation.</a> Molecular biology of the cell. 23 (18), (2012).</li><li>Kedersha, N., Tisdale, S., Hickman, T., Anderson, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+and+quantitative+imaging+of+mammalian+stress+granules+and+processing+bodies.">Real-time and quantitative imaging of mammalian stress granules and processing bodies.</a> Methods in enzymology. 448, 521-552 (2008).</li></ol>

De mest kritiske trinn i protokollen bekymring transfeksjon og mer spesielt for intervall oppkjøp, som må overvåkes nøye for å senke ned cytotoksisitet. Dyrkning av primærceller er ikke en vanskelig del, så lenge sterile betingelser blir opprettholdt og forsiktighet er tatt for å forhindre skader under disseksjon og celle dissosiasjon trinn. MEFs kan holdes frossen på tidlige passasjer. Neuron transfeksjon med kalsiumfosfat har vist seg å fungere godt, og 21 denne protok...

Stress granuler (SGS) er ikke-cytoplasmisk membran foci dannet som en cellulær beskyttende respons til miljøproblemer, for eksempel høy temperatur, oksidativt stress, hypoksi, osmotisk sjokk, UV-bestråling, glukosemangel, eller virusinfeksjon 1.. De kan induseres kjemisk ved behandling med forbindelser som natrium-arsenitt, som utløser oksidativt stress. SGS akkumulere stoppet oversettelse arrestert messenger ribonucleoprotein (mRNPs) komplekser 2, avsette mRNA fra translasjonsforskning maskiner, og deres sammenstilling kan utløses ved fosforylering av eIF2α (eukaryote initiering faktor 2 α). SGS er dynamiske strukturer som utveksler komponenter med polysomes og andre granulater som P-kropper. De utgjør en &quot;triage senter&quot; der mRNA er sortert og behandlet for enten oversettelse, gjenopptak, degradering eller emballasjen til stabile ikke-polysomal mRNPs tre. Monteringen av SGS er rask but er det en gradvis prosess med innledende mange små aggregater som vokser sammen til større granuler. Bruken av kjemiske inhibitorer som forstyrrer eller stabiliserer mikrotubuli viser at mikrotubuli-nettverket er nødvendig for SG dynamikk inkludert montering, koalesens og demonteringsprosessen. Den dynamiske montering av SGS blir også fremmet av aggregering av spesifikke RNA-bindende proteiner (RNA-BP) som TIA-1 (T-celle indre antigen-1), og TIAR (TIA-1-relatert protein), som er i stand til å dimerize og fremme polysome demontering og ruting av mRNA i SGS fire. G3BP (RasGAP SH3 domene bindende protein) er et slikt RNA-BP som lokaliserer til SGS når cellene er stresset med arsenite eller høy temperatur, og overekspresjon av defosforyleres G3BP kan indusere SGS montering fem. G3BP er en evolusjonært konservert RNA-BP som i utgangspunktet var preget gjennom sin interaksjon med en Ras-GTPase aktivere protein (RasGAP p120 6); men dette samspillet ble nylig revisited 7. Den G3BP familien omfatter to medlemmer i pattedyr, G3BP1 (referert til som G3BP) og G3BP2 åtte. Begge proteiner colocalize i SGS, når cellene utsettes for stress 9.. G3BPs utgjør en N-terminal NTF2 domene foreslo å påvirke deres lokalisering og oligomerization, fulgt av Proline rik (PxxP) motivene, deretter C-terminal motiver forbundet med RNA bindende: den kanoniske RNA-Recognition Motif (RRM) med konserverte RNP1 og RNP2 motiver , etterfulgt av en arginin-glycin-rike (RGG) boksen. Interessant, analyse av forskjellige deler av proteinet ved å bygge forskjellige domener smeltet til EGFP viste at NTF2-lignende domene og den RNA-bindende domene var mest effektivt rekruttert til SGS, antyder betydningen av egenskapene til dimerisering, og RNA-binding i montering av SGS. Diverse modeller har avdekket ulike funksjoner G3BP proteiner in vitro 10-13.Forstyrrelse av G3BP i mus har vist betydningen av dette protein i utviklingsmessige vekst og overlevelse 14, så vel som en viktig rolle for G3BP i sentralnervesystemet (CNS), karakterisert ved ataksi og defekter i romlig arbeidsminnet 15.. G3BP mangel fører til endret neuronal plastisitet og kalsium homeostase, etablere en direkte kobling mellom SG dannelse og nevrodegenerative sykdommer 15. Det er derfor viktig å være i stand til å studere dynamikken i SGS i primære celler som nerveceller. Denne protokollen er en enkel måte å observere montering av G3BP1 holdige SGS i primære celler under arsenite behandling. Den kan brukes til å studere SG-sammenstilling i henhold til forskjellige forhold, som for eksempel forskjellige typer stress. Den kan også tilpasses andre granuler eller andre bestanddeler i SGS. Faktisk, fokuserer denne protokollen på G3BP1, men det finnes andre stress granulater markører som TIA-1 / R, TTP (tristetraprolin) 2,FMRP (Fragile X Mental retardasjon syndrom protein) 16, TDP-43 (transactive respons DNA bindende protein 43) 17 eller Staufen 18. Spesielt proteiner som TIA-1 / R er, som G3BP, nuklerer RNA bindende proteiner som kan indusere SGS forsamlingen når overexpressed, selv om de ulike dannet SGS kan variere i funksjon, regulering og tilhørende transkripsjoner. Transfeksjon av fluoroforen-merket versjon av noen av disse viktige komponenter eller nukleatorer i SGS kan utføres for å image bestemt SGS montering og dynamikk.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:881px;" width="881">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:153px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:312px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;"></td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">DMEM/F12</td>
			<td style="width:153px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">21331</td>
			<td>Pre-warm at 37 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Sodium Pyruvate</td>
			<td style="width:153px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">11360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Non essential amino acids</td>
			<td style="width:153px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">11140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">L-Glutamine</td>
			<td style="width:153px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">25030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Trypsin</td>
			<td style="width:153px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">15096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Glass bottom B-35</td>
			<td style="width:153px;">Greiner</td>
			<td style="width:119px;">627860/627861</td>
			<td>Treated or not (treated: increases attachment of adherent cells)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Poly-L-lysine</td>
			<td style="width:153px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P2636</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">DMEM</td>
			<td style="width:153px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">31966</td>
			<td>Pre-warm at 37 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">HeBS</td>
			<td style="width:153px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">51558</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Neurobasal</td>
			<td style="width:153px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">21103</td>
			<td>Pre-warm at 37 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">2-mercaptoethanol</td>
			<td style="width:153px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">31350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Forceps</td>
			<td style="width:153px;">Biotek</td>
			<td style="width:119px;">DU-110-A</td>
			<td>Very thin, tips 0,1 mm (useful to remove meninges)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Curved forceps</td>
			<td style="width:153px;">Biotek</td>
			<td style="width:119px;">P-110-BUF</td>
			<td>Very thin, tips 0,1 mm&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Small scissors</td>
			<td style="width:153px;">Biotek</td>
			<td style="width:119px;">CM-85-BS</td>
			<td>Can be useful to remove hippocampi</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyplus transfection JetPEI reagent&#160;</td>
			<td style="width:153px;">Ozyme</td>
			<td style="width:119px;">101-10</td>
			<td>MEFs transfection, follow the forward protocol</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Inverted laser scanning confocal microscope</td>
			<td style="width:153px;">Leica&#160;</td>
			<td style="width:119px;">SP5</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

visualization of g3bp stress granules dynamics in live primary cells

SGS kan visualiseres i cellene ved farging av bestemte proteinkomponenter eller polyA + mRNA. SGS er svært dynamisk og studiet av deres montering og skjebne er viktig å forstå den cellulære respons på stress. Den mangel på viktige faktorer i SGS som G3BP (RasGAP SH3 domene Binding Protein) fører til utviklingsskader hos mus og endringer i sentralnervesystemet. Å studere dynamikken i SGS i celler fra en organisme, en kan kultur primære celler og følg lokalisering av en transfektert merket komponent i SGS. Vi beskriver time-lapse eksperiment for å observere G3BP1 holdig SGS i mus embryonale fibroblaster (MEFs). Denne teknikken kan også brukes til å studere G3BP holdige SGS i levende neuroner, noe som er viktig da det er nylig vist at disse SGS dannes ved angrep av neurodegenerative sykdommer som Alzheimers sykdom. Denne fremgangsmåten kan tilpasses til en hvilken som helst annen cellulær kropp og granule proteinkomponent, og utførtmed transgene dyr, slik at den direkte studium av granulater dynamikk for eksempel i fravær av en spesifikk faktor av disse granuler.

Stress granulatdannelsen er viktig i respons av celler til stress, som tillater en cellulær tilpasning med stanset translasjon, inntil belastningen er fjernet, forbundet til forhindring av apoptose. Denne analysen tillatelser til å studere SGS i primærceller, ved å følge lokalisering av viktige SG-proteinkomponenter (Figur 1). G3BP, en viktig faktor i SGS montering, er til stede i stedet diffusively i cytoplasma av dyrkede MEFs eller neuroner (figur 2A A og C), og ...

Watch this Scientific Journal Video about Visualization of G3BP Stress Granules Dynamics in Live Primary Cells at JoVE.com

Visualization of G3BP Stress Granules Dynamics in Live Primary Cells

Visualisering av G3BP Stress Granulat Dynamics i Levende primære celler

Stress granulater (SGS) er cytoplasmatiske RNA partikler som inneholder fastlåste ribonucleoprotein partikler (RNPs), og viktig i mobilnettet respons på ulike påkjenninger. Dynamikk i SGS kan følges i levende celler ved å visualisere lokalisering av en merket del av SGS i transfekterte primære celler etter stress.

SGs can be visualized in cells by immunostaining of specific protein components or polyA+ mRNAs. SGs are highly dynamic and the study of their assembly ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Rapid Technique for the Visualization of Live Immobilized Yeast Cells

We present here a simple, rapid, and extremely flexible technique for the immobilization and visualization of growing yeast cells by epifluorescence ...

Live Imaging of Dense-core Vesicles in Primary Cultured Hippocampal Neurons

Observing and characterizing dynamic cellular processes can yield important information about cellular activity that cannot be gained from static images.  ...

Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells

Isolering og Primær kultur Rat Nedsatt Cells

Primary hepatocyte culture is a valuable tool that has been extensively used in basic research of liver function, disease, pathophysiology, pharmacology ...

Visualization of Endoplasmic Reticulum Localized mRNAs in Mammalian Cells

Visualisering av endoplasmatisk retikulum Lokalisert mRNAs i pattedyrceller

In eukaryotes, most of the messenger RNAs (mRNAs) that encode secreted and membrane proteins are localized to the surface of the endoplasmic reticulum ...

Visualization of Endoplasmic Reticulum Subdomains in Cultured Cells

Visualisering av endoplasmatiske retikulum underdomener i dyrkede celler

The lipids and proteins in eukaryotic cells are continuously exchanged between cell compartments, although these retain their distinctive composition and ...

High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells

Høy oppløsning Time-lapse Imaging og automatisk analyse av mikrotubulidynamikk i levende menneske navleveneendotel Cells

The physiological process by which new vasculature forms from existing vasculature requires specific signaling events that trigger morphological changes ...

A Graphical User Interface for Software-assisted Tracking of Protein Concentration in Dynamic Cellular Protrusions

Et grafisk brukergrensesnitt for programvareassistert sporing av proteinkonsentrasjon i dynamiske cellulære protrusjoner

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex ...

Methods to Classify Cytoplasmic Foci as Mammalian Stress Granules

Metoder for klassifisering av cytoplasmisk foci som mammalstresskorn

Cells are often challenged by sudden environmental changes. Stress Granules (SGs), cytoplasmic ribonucleoprotein complexes that form in cells exposed to ...

Application of High-speed Super-resolution SPEED Microscopy in Live Primary Cilium

Anvendelse av høyhastighets super-oppløsning hastighet mikroskopi i Live primære Flimmerhår

The primary cilium is a microtubule-based protrusion on the surface of many eukaryotic cells and contains a unique complement of proteins that function ...

Examination of Mitotic and Meiotic Fission Yeast Nuclear Dynamics by Fluorescence Live-cell Microscopy

Undersøkelse av mitotisk og Meiotic fisjon gjær Nuclear Dynamics av fluorescens Live-Cell mikroskopi

Live-cell imaging is a microscopy technique used to examine cell and protein dynamics in living cells. This imaging method is not toxic, generally does ...