Name: fibs-enabled noninvasive metabolic profiling
Uploaded: 2014-02-03T15:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about FIBS-enabled Noninvasive Metabolic Profiling at JoVE.com

Vi takker professor Wolf Frommer (Carnegie Institution for Science, Stanford University) for vennlig å gi oss med glukose FRET plasmid og Dr. Uwe Ludewig (Hohenheim University) for vennlig forsyne glutamin FRET konstruere i pUTKan anlegget uttrykk vektor. AB er finansiert av BBSRC Målrettet Prioriterte Studentships program. Både CK og KP støttes av RCUK Fellowships i Biopreparater Processing. CK ønsker også å takke Lonza Biologics for sin økonomiske støtte. Senter for Syntetisk biologi og innovasjon er sjenerøst støttet av EPSRC.

En. Cell Linje Revival og vedlikehold <ol><li> Gjenopplive CHO-celler i 9 ml CD-CHO-medium supplert med 8 mM L-glutamin og 10 ml / l hypoxantin 100x / tymidin-supplement (fullstendige dyrkningsmedium). </li><li> Sentrifuger ved 100 x g i 5 min. </li><li> Resuspender cellene i 10 ml friskt komplett vekstmedium. </li><li> Fjern en 1 ml prøve og bestemme levedyktig cellekonsentrasjon ved lysmikroskopi ved hjelp av trypanblått-fargestoffeksklusjonsmetoden i et hemocytometer. </li><li> Initiere en kultur ved en seeding t...

<ol>
	<li>Moser, I., Jobst, G., Urban, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biosensor+arrays+for+simultaneous+measurement+of+glucose,+lactate,+glutamate,+and+glutamine.">Biosensor arrays for simultaneous measurement of glucose, lactate, glutamate, and glutamine.</a> Biosens. Bioelectron. 17 (4), 297-302 (2002).</li><li>Billingsley, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+nano-optodes+for+glucose+detection.">Fluorescent nano-optodes for glucose detection.</a> Anal. Chem. 82 (9), 3707-3713 (2010).</li><li>Dattelbaum, J. D., Lakowicz, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+Determination+of+Glutamine+Using+a+Genetically+Engineered+Protein.">Optical Determination of Glutamine Using a Genetically Engineered Protein.</a> Anal. Biochem. 291 (1), 88-95 (2001).</li><li>Kfouri, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+a+miniaturized+wireless+fluorescence-based+diagnostic+imaging+system.">Toward a miniaturized wireless fluorescence-based diagnostic imaging system.</a> IEEE J. Sel. Top. Quantum Electron. 14 (1), 226-234 (2008).</li><li>Dittrich, P. S., Manz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-molecule+fluorescence+detection+in+microfluidic+channels&#8212;the+Holy+Grail+in+muTAS.">Single-molecule fluorescence detection in microfluidic channels&#8212;the Holy Grail in muTAS.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 382 (8), 1771-1782 (2005).</li><li>Hou, B. H., Codamo, J., Pilbrough, W., Hughes, B., Gray, P. P., Munro, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+sensors+for+monitoring+dynamic+changes+of+intracellular+metabolite+levels+in+mammalian+cells.">Optical sensors for monitoring dynamic changes of intracellular metabolite levels in mammalian cells.</a> Nat. Protoc. 6 (7), 1818-1833 (2011).</li><li>Bermejo, C., Haerizadeh, F., Takanaga, H., Chermak, D., Frommer, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+analysis+of+cytosolic+glucose+and+ATP+levels+in+yeast+using+optical+sensors.">Dynamic analysis of cytosolic glucose and ATP levels in yeast using optical sensors.</a> Biochem. J. 432, 399-406 (2010).</li><li>Yang, H. Y., Bogner, M., Stierhof, Y. D., Ludewig, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=H(+)-independent+glutamine+transport+in+plant+root+tips.">H(+)-independent glutamine transport in plant root tips.</a> Plos One. 5, (2010).</li><li>Fehr, M., Takanaga, H., Ehrhardt, D. W., Frommer, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+high-cavacity+bidirectional+glucose+transport+across+the+endoplasmic+reticulum+membrane+by+genetically+encoded+fluorescence+resonance+energy+transfer+nanosensors.">Evidence for high-cavacity bidirectional glucose transport across the endoplasmic reticulum membrane by genetically encoded fluorescence resonance energy transfer nanosensors.</a> Mol. Cell. Biol. 25 (24), 11102-11112 (2005).</li><li>Ai, H. W., Hazelwood, K. L., Davidson, M. W., Campbell, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+protein+FRET+pairs+for+ratiometric+imaging+of+dual+biosensors.">Fluorescent protein FRET pairs for ratiometric imaging of dual biosensors.</a> Nat. Methods. 5 (5), 401-403 (2008).</li><li>Ouyang, M. X., Sun, J., Chien, S., Wang, Y. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+hierarchical+relationship+of+Src+and+Rac+at+subcellular+locations+with+FRET+biosensors.">Determination of hierarchical relationship of Src and Rac at subcellular locations with FRET biosensors.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105 (38), 14353-14358 (2008).</li><li>Han, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cultivation+of+recombinant+Chinese+hamster+ovary+cells+grown+as+suspended+aggregates+in+stirred+vessels.">Cultivation of recombinant Chinese hamster ovary cells grown as suspended aggregates in stirred vessels.</a> J. Biosci. Bioeng. 102 (5), 430-435 (2006).</li><li>Deuschle, K., Okumoto, S., Fehr, M., Looger, L. L., Kozhukh, L., Frommer, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Construction+and+optimization+of+a+family+of+genetically+encoded+metabolite+sensors+by+semirational+protein+engineering.">Construction and optimization of a family of genetically encoded metabolite sensors by semirational protein engineering.</a> Protein Sci. 14 (9), 2304-2314 (2005).</li><li>Wong, D. C. F., Wong, N. S. C., Goh, J. S. Y., May, L. M., Yap, M. G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profiling+of+N-Glycosylation+gene+expression+in+CHO+cell+Fed-batch+cultures.">Profiling of N-Glycosylation gene expression in CHO cell Fed-batch cultures.</a> Biotechnol. Bioeng. 107 (2), 516-528 (2010).</li><li>Behjousiar, A., Kontoravdi, C., Polizzi, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Situ+Monitoring+of+Intracellular+Glucose+and+Glutamine+in+CHO+Cell+Culture.">In Situ Monitoring of Intracellular Glucose and Glutamine in CHO Cell Culture.</a> PLoS One. 7, (2012).</li><li>Dwyer, M. A., Hellinga, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Periplasmic+binding+proteins:+a+versatile+superfamily+for+protein+engineering.">Periplasmic binding proteins: a versatile superfamily for protein engineering.</a> Curr. Opin. Struct. Biol. 14 (4), 495-504 (2004).</li></ol>

De FIBS aktivere in vivo og in situ kvantifisering av viktige molekyler, i dette tilfelle vekstbegrensende næringssalter, fjerne usikkerheter som skyldes quenching og utvinningsmetoder. Resultatene tyder på at det er en god korrelasjon mellom FIBS signal og de intracellulære konsentrasjoner i området fra 1 til 5 mM for glukose og 0,3 til 2 mM for glutamin. I batch CHO cellekultur, er disse konsentrasjonene oppstått i den eksponentielle, stasjonære, og tidlig nedgang faser. Den eksponensielle og s...

Metabolitt overvåking har ulike programmer i bioprocessing, inkludert prosessutvikling, media og fôr design, og metabolske engineering. Forskjellige metoder er tilgjengelige for konsentrasjonsmålinger ved bruk av en enzymatisk, kjemisk 2 eller bindingsanalyser 3. Et interessant alternativ er bruk av fluorescerende, protein-basert in vivo biologiske sensorer som journalister av den intracellulære konsentrasjonen av viktige metabolitter. I ultra-lavt volum assays, er fluorescens et passende verktøy som miniatyrisering faktisk forbedrer signal-til-støy-forhold 4,5 og protein-baserte sensorer kan være genetisk kodet betyr at ingen eksogene reagenser som er nødvendige for metabolitt-analyse. Förster Resonance Energy Transfer (FRET) biosensorer består av to selvlysende proteiner forbundet med en ligandbindende domene. FRET er en nonradiative overføring av energi fra en foto-glade giver til et mottaker fluorescerende molekyl belig<html> ed i umiddelbar nærhet (&lt;100). Ligand spalting eller binding fører til en konformasjonsendring i sensoren, som i sin tur induserer en forandring i nærhet av fluoroforer, som fører til en endring i FRET effektivitet målt ved endringen i emisjonsspektrum. FRET integrerte biologiske sensorer (fibs) blir konstitutivt produsert i cellelinjen, og deres spektrale egenskaper endres avhengig av konsentrasjonen av metabolitten i cellen. FIBS har rask responstid som gjør dem ideelle for å ta målinger for dynamiske modeller seks. Tidligere søknader omfatte overvåking enkelt 7-9 og flere 10 metabolitter og gi data om tid og rom fordeling 11. FIBS kan lages i to konfigurasjoner: Apo-Max, hvor ligandbinding forstyrrer nærhet av fluoroforene senke energioverføring og Apo-Min, hvor ligandbinding bringer de to fluoroforene i nærmere kontakt (figur 1). _content &quot;&gt; I dette arbeidet er en protokoll presenteres for bygging av kinesisk hamster eggstokk (CHO) cellelinjer som konstitutivt uttrykker en FIBS for en metabolitt, glukose eller glutamin. En metode er etablert for kalibrering av sensoren in vivo for å muliggjøre fremtidige kvantitative målinger av intracellulært metabolitt konsentrasjon, som vist i figur 2.. Basert på dette, den intracellulære konsentrasjon av glukose eller glutamin kan bestemmes i fed-batch-CHO-cellekulturer, i hvilken de to næringsstoffer ble tilsatt i høye konsentrasjoner i-prosess. Resultatene viser at ved bruk av det fluorescerende signalet fra FIBS og den tidligere konstruert kalibreringskurve, er det mulig nøyaktig forutsigelse av den intracellulære konsentrasjon, som bekreftet ved en uavhengig enzymatisk assay. Denne fremgangsmåte gir betydelige fordeler i forhold til nåværende analytiske teknologi, fordi den er ikke-invasiv og lave kostnader og raskt, noe som gir et sanntidssignal av FIBS som kan være maskall overvåkes gjennom hele kulturen.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="936">
	<colgroup>
		<col />
		<col span="2" />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:239px;">CHO-S Cells</td>
			<td style="width:120px;">Life Tecnologies</td>
			<td style="width:120px;">11619-012</td>
			<td style="width:459px;">Cell line will vary depending on the goals of the study</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:239px;">pCDNA4/TO vector&#160;</td>
			<td style="width:120px;">Life Tecnologies</td>
			<td style="width:120px;"></td>
			<td style="width:459px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:239px;">TransIT-PRO Transfection Reagent</td>
			<td style="width:120px;">Mirus Bio</td>
			<td style="width:120px;">MIR 5700</td>
			<td style="width:459px;">Transfections can be accomplished using any method suitable for the cell line under study</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:239px;">Zeocin</td>
			<td style="width:120px;">Invivogen</td>
			<td style="width:120px;"></td>
			<td style="width:459px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:239px;">CD-CHO medium</td>
			<td style="width:120px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:120px;">10743-011</td>
			<td style="width:459px;">Cell growth medium is dependent upon the cells under study</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:239px;">100X HT Supplement</td>
			<td style="width:120px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:120px;">11067-030</td>
			<td style="width:459px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:239px;">L-Glutamine 200 mM (100X), Liquid</td>
			<td style="width:120px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:120px;">25030032</td>
			<td style="width:459px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:239px;">InfinitePRO 200 plate reader</td>
			<td style="width:120px;">Tecan</td>
			<td style="width:120px;">FLx800TBI</td>
			<td style="width:459px;">Any 96-well fluorescence plate reader that can access the required wavelengths can be substituted</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="190" rowspan="6" style="height:190px;width:239px;">Filters for plate reader</td>
			<td rowspan="6" style="width:120px;">Tecan</td>
			<td align="right" style="width:120px;">30000463</td>
			<td rowspan="6" style="width:459px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:120px;">(520NM BW 10NM)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="right" height="21" style="height:21px;width:120px;">30022786</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:120px;">(430NM BW 35NM)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="right" height="21" style="height:21px;width:120px;">30022787</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:120px;">(465NM BW 35NM)</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:239px;">Maxiprep Plasmid Purification Kit</td>
			<td style="width:120px;">Qiagen</td>
			<td style="width:120px;">12163</td>
			<td style="width:459px;">Any suitable kit can be substituted</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:239px;">Amplex Red glucose/glucose oxidase assay kit</td>
			<td style="width:120px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:120px;">A22189</td>
			<td style="width:459px;">Any suitable kit can be substituted</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:239px;">EnzyChrom&#160; Glutamine Assay Kit</td>
			<td style="width:120px;">BioAssay systems</td>
			<td style="width:120px;">EOAC-100</td>
			<td style="width:459px;">Any suitable kit can be substituted</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:239px;">Improved Neubauer haemocytometer</td>
			<td style="width:120px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:120px;">MNK-420-010N</td>
			<td style="width:459px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:239px;">Incubator&#160;</td>
			<td style="width:120px;">Nuaire</td>
			<td style="width:120px;">NU-5510E</td>
			<td style="width:459px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fibs-enabled noninvasive metabolic profiling

I den æra av beregningsorientert biologi, nye high throughput eksperimentelle systemer er nødvendig for å fylle og avgrense modeller slik at de kan testes ut for prediktive formål. Ideelt slike systemer ville være lite volum, noe som utelukker sampling og destruktive analyse når tidsforløpet av data som skal innhentes. Det som trengs er en in situ overvåking verktøy som kan rapportere nødvendig informasjon i sanntid og ikke-invasivt. Et interessant alternativ er bruk av fluorescerende, protein-basert in vivo biologiske sensorer som journalister av intracellulære konsentrasjoner. En spesiell klasse av in vivo biosensorer som har funnet programmer i metabolitt kvantifisering er basert på Förster Resonance Energy Transfer (FRET) mellom to fluorescerende proteiner forbundet med en ligandbindende domene. FRET integrerte biologiske sensorer (fibs) er konstitutivt produsert innenfor cellelinjen, de har rask responstid og deres spektrale chaegenskaper endres basert på konsentrasjonen av metabolitten i cellen. I dette papir, er metoden for å konstruere kinesisk hamsterovarie (CHO) cellelinjer som konstitutivt uttrykker et FIBS for glukose og glutamin, og kalibrering av FIBS in vivo i batch cellekultur for å muliggjøre fremtidig kvantifisering av intracellulær konsentrasjon metabolitt beskrevet. Data fra fødesats-CHO-cellekulturer viser at FIBS var i stand til i hvert tilfelle for å detektere den resulterende forandring i den intracellulære konsentrasjon. Ved hjelp av det fluorescerende signalet fra FIBS og den tidligere konstruert kalibreringskurve, ble den intracellulære konsentrasjon nøyaktig bestemt som bekreftet ved en uavhengig enzymatisk assay.

En oversikt over metodikken er presentert i Figur 2. I det arbeidet som presenteres heri, ble CHO-celler transfektert med vektor FIBS og stabile cellelinjer ble valgt i et antibiotikum trykk på 400 pg / ml zeocin. To separate stabile cellelinjer som konstitutivt uttrykker glukose og glutamin sensorer Det ble derfor laget. Figur 1 viser konfigurasjoner av de to biosensorer brukt i denne studien. Glukosesensoren er basert på Apo-Max-prinsippet og den tilsvarende plasmid er pRSET-FLIPglu...

Watch this Scientific Journal Video about FIBS-enabled Noninvasive Metabolic Profiling at JoVE.com

FIBS-enabled Noninvasive Metabolic Profiling

En beskrivelse av hvordan man skal kalibrere Förster Resonance Energy Transfer integrerte biologiske sensorer (fibs) for in situ metabolske profilering er presentert. De FIBS kan brukes til å måle intracellulære nivåer av metabolitter invasivt hjelpe til med utviklingen av metabolske modeller og høy gjennomstrømning screening bioteknologi forhold.

FIBS-aktivert Noninvasiv Metabolsk profilering

In the era of computational biology, new high throughput experimental systems are necessary in order to populate and refine models so that they can be ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

High Throughput MicroRNA Profiling: Optimized Multiplex qRT-PCR at Nanoliter Scale on the Fluidigm Dynamic ArrayTM IFCs

The broad involvement of miRNAs in critical processes underlying development, tissue homoeostasis and disease has led to a surging interest among the ...

In situ Compressive Loading and Correlative Noninvasive Imaging of the Bone-periodontal Ligament-tooth Fibrous Joint

In situ Compressive Loading and Correlative Noninvasive Imaging of the Bone-periodontal Ligament-tooth Fibrous Joint

In situ Trykk Lasting og korrelative Noninvasive Imaging av Bone-periodontal ligament-tann fibrøs Joint

This study demonstrates a novel biomechanics testing protocol. The advantage of this protocol includes the use of an in situ loading device coupled to a ...

Quantification and Size-profiling of Extracellular Vesicles Using Tunable Resistive Pulse Sensing

Kvantifisering og Size-profilering av Ekstracellulær Blemmer Bruke Tunable Resistive Pulse Sensing

Extracellular vesicles (EVs), including &#8216;microvesicles&#8217; and &#8216;exosomes&#8217;, are highly abundant in bodily fluids. Recent years have ...

Easy and Accurate Mechano-profiling on Micropost Arrays

Enkel og nøyaktig Mekano-profilering på Micropost Arrays

Cell culture substrates with integrated flexible microposts enable a user to study the mechanical interactions between cells and their immediate ...

Metabolic Glycoengineering of Sialic Acid Using N-acyl-modified Mannosamines

Metabolic Glycoengineering of Sialic Acid Using N-acyl-modified Mannosamines

Metabolsk Glycoengineering Sialic syre med N-acyl-endret Mannosamines

Sialic acid (Sia) is a highly important constituent of glycoconjugates, such as N- and O-glycans or glycolipids. Due to its position at the non-reducing ...

Metabolic Support of Excised, Living Brain Tissues During Magnetic Resonance Microscopy Acquisition

Metabolsk støtte forbrukeravgift, levende hjernen vev under magnetisk resonans mikroskopi oppkjøpet

This protocol describes the procedures necessary to support normal metabolic functions of acute brain slice preparations during the collection of magnetic ...

Calorespirometry: A Powerful, Noninvasive Approach to Investigate Cellular Energy Metabolism

Calorespirometry: En kraftig, Noninvasive tilnærming til undersøke Cellular energi metabolisme

Many cell lines used in basic biological and biomedical research maintain energy homeostasis through a combination of both aerobic and anaerobic ...

Nanosensors to Detect Protease Activity In Vivo for Noninvasive Diagnostics

Nanosensors to Detect Protease Activity In Vivo for Noninvasive Diagnostics

Nanosensors til å oppdage Protease aktivitet i Vivo Noninvasive diagnostikk

Proteases are multi-functional enzymes that specialize in the hydrolysis of peptide-bonds and control broad biological processes including homeostasis and ...

Measuring Global Cellular Matrix Metalloproteinase and Metabolic Activity in 3D Hydrogels

Måling av Global mobilnettet matrise Metalloproteinase og metabolsk aktivitet i 3D Hydrogels

Three-dimensional (3D) cell culture systems often more closely recapitulate in vivo cellular responses and functions than traditional two-dimensional (2D) ...

A Human 3D Extracellular Matrix-Adipocyte Culture Model for Studying Matrix-Cell Metabolic Crosstalk

A Human 3D ekstracellulære Matrix-Adipocyte kultur modell for å studere Matrix-Cell metabolsk crosstalk

The extracellular matrix (ECM) plays a central role in regulating tissue homeostasis, engaging in crosstalk with cells and regulating multiple aspects of ...