Name: assessing cell cycle progression of neural stem and progenitor cells in the mouse developing brain after genotoxic stress
Uploaded: 2014-05-07T13:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing Cell Cycle Progression of Neural Stem and Progenitor Cells in the Mouse Developing Brain after Genotoxic Stress at JoVE.com

تلقت البحوث التي تؤدي إلى هذه النتائج على تمويل من البرنامج الإطاري السابع للاتحاد الأوروبي (FP7/2007-2013) بموجب اتفاقية منحة رقم 323267، من كهرباء فرنسا (EDF) وL&#39;من الوكالة الوطنية دي لا بحوث - سانتيه-للبيئة وآخرون سانتي-العناء (ANR-SEST، Neurorad).

1. الإجراءات الحيوان وقد تم تصميم هذا البروتوكول وفقا لتوجيهات مجلس الجماعات الأوروبية من 24 نوفمبر 1986 (86/609/EEC) وتمت الموافقة من قبل لجنة مؤسسية لدينا على الرفق بالحيوان (CETEA-CEA DSV جيش الدفاع الإسرائيلي). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li styl...

<ol>
	<li>Rakic, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specification+of+cerebral+cortical+areas.">Specification of cerebral cortical areas.</a> Science. 241, 170-176 (1988).</li><li>Sauer, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitosis+in+he+neural+tube.">Mitosis in he neural tube.</a> J Comp Neurol. , 377-399 (1935).</li><li>Taverna, E., Huttner, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+progenitor+nuclei+IN+motion.">Neural progenitor nuclei IN motion.</a> Neuron. 67, 906-914 (2010).</li><li>Committee, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+vertebrate+central+nervous+system:+revised+terminology.">Embryonic vertebrate central nervous system: revised terminology.</a> Anat Rec. 166, 257-261 (1970).</li><li>Bystron, I., Blakemore, C., Rakic, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+human+cerebral+cortex:+Boulder+Committee+revisited.">Development of the human cerebral cortex: Boulder Committee revisited.</a> Nature Reviews. Neuroscience. 9, 110-122 (2008).</li><li>Miyata, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+production+of+surface-dividing+and+non-surface-dividing+cortical+progenitor+cells.">Asymmetric production of surface-dividing and non-surface-dividing cortical progenitor cells.</a> Development. 131, 3133-3145 (2004).</li><li>Haubensak, W., Attardo, A., Denk, W., Huttner, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurons+arise+in+the+basal+neuroepithelium+of+the+early+mammalian+telencephalon:+a+major+site+of+neurogenesis.">Neurons arise in the basal neuroepithelium of the early mammalian telencephalon: a major site of neurogenesis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 3196-3201 (2004).</li><li>Noctor, S. C., Martinez-Cerdeno, V., Ivic, L., Kriegstein, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortical+neurons+arise+in+symmetric+and+asymmetric+division+zones+and+migrate+through+specific+phases.">Cortical neurons arise in symmetric and asymmetric division zones and migrate through specific phases.</a> Nat Neurosci. 7, 136-144 (2004).</li><li>Merot, Y., Retaux, S., Heng, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+projection+neuron+production+and+maturation+in+the+developing+cerebral+cortex.">Molecular mechanisms of projection neuron production and maturation in the developing cerebral cortex.</a> Seminars in Cell &amp; Developmental Biology. 20, 726-734 (2009).</li><li>Kriegstein, A. R., Noctor, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+neuronal+migration+in+the+embryonic+cortex.">Patterns of neuronal migration in the embryonic cortex.</a> Trends Neurosci. 27, 392-399 (2004).</li><li>Salomoni, P., Calegari, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+cycle+control+of+mammalian+neural+stem+cells:+putting+a+speed+limit+on+G1.">Cell cycle control of mammalian neural stem cells: putting a speed limit on G1.</a> Trends Cell Biol. 20, 233-243 (2010).</li><li>Calegari, F., Haubensak, W., Haffner, C., Huttner, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+lengthening+of+the+cell+cycle+in+the+neurogenic+subpopulation+of+neural+progenitor+cells+during+mouse+brain+development.">Selective lengthening of the cell cycle in the neurogenic subpopulation of neural progenitor cells during mouse brain development.</a> J Neurosci. 25, 6533-6538 (2005).</li><li>Andres-Mach, M., Rola, R., Fike, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiation+effects+on+neural+precursor+cells+in+the+dentate+gyrus.">Radiation effects on neural precursor cells in the dentate gyrus.</a> Cell Tissue Res. 331, 251-262 (2008).</li><li>Semont, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+p53+and+Fas/CD95+in+murine+neural+progenitor+cell+response+to+ionizing+irradiation.">Involvement of p53 and Fas/CD95 in murine neural progenitor cell response to ionizing irradiation.</a> Oncogene. 23, 8497-8508 (2004).</li><li>Nowak, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiation-induced+H2AX+phosphorylation+and+neural+precursor+apoptosis+in+the+developing+brain+of+mice.">Radiation-induced H2AX phosphorylation and neural precursor apoptosis in the developing brain of mice.</a> Radiat Res. 165, 155-164 (2006).</li><li>Gatz, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Requirement+for+DNA+ligase+IV+during+embryonic+neuronal+development.">Requirement for DNA ligase IV during embryonic neuronal development.</a> J Neurosci. 31, 10088-10100 (2011).</li><li>Denekamp, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+kinetics+and+radiation+biology.">Cell kinetics and radiation biology.</a> International Journal of Radiation Biology and Related Studies in Physics, Chemistry, and Medicine. 49, 357-380 (1986).</li><li>Hartwell, L. H., Weinert, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Checkpoints:+controls+that+ensure+the+order+of+cell+cycle+events.">Checkpoints: controls that ensure the order of cell cycle events.</a> Science. 246, 629-634 (1989).</li><li>Weinert, T. A., Hartwell, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+RAD9+of+Saccharomyces+cerevisiae+and+evidence+that+its+function+acts+posttranslationally+in+cell+cycle+arrest+after+DNA+damage.">Characterization of RAD9 of Saccharomyces cerevisiae and evidence that its function acts posttranslationally in cell cycle arrest after DNA damage.</a> Mol Cell Biol. 10, 6554-6564 (1990).</li><li>Tolmach, L. J., Jones, R. W., Busse, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+action+of+caffeine+on+X-irradiated+HeLa+cells.+I.+Delayed+inhibition+of+DNA+synthesis.">The action of caffeine on X-irradiated HeLa cells. I. Delayed inhibition of DNA synthesis.</a> Radiat Res. 71, 653-665 (1977).</li><li>Painter, R. B., Young, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiosensitivity+in+ataxia-telangiectasia:+a+new+explanation.">Radiosensitivity in ataxia-telangiectasia: a new explanation.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 77, 7315-7317 (1980).</li><li>Etienne, O., Roque, T., Haton, C., Boussin, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variation+of+radiation-sensitivity+of+neural+stem+and+progenitor+cell+populations+within+the+developing+mouse+brain.">Variation of radiation-sensitivity of neural stem and progenitor cell populations within the developing mouse brain.</a> Int J Radiat Biol. 88, 694-702 (2012).</li><li>Roque, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lack+of+a+p21waf1/cip+-dependent+G1/S+checkpoint+in+neural+stem+and+progenitor+cells+after+DNA+damage+in+vivo.">Lack of a p21waf1/cip -dependent G1/S checkpoint in neural stem and progenitor cells after DNA damage in vivo.</a> Stem Cells. 30, 537-547 (2012).</li><li>Rousseau, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+importance+of+homologous+recombination+DNA+repair+for+mouse+neural+stem+and+progenitor+cells.">In vivo importance of homologous recombination DNA repair for mouse neural stem and progenitor cells.</a> PLoS One. 7, 12 (2012).</li><li>Bradford, J. A., Clarke, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual-pulse+labeling+using+5-ethynyl-2'-deoxyuridine+(EdU)+and+5-bromo-2'-deoxyuridine+(BrdU)+in+flow+cytometry.">Dual-pulse labeling using 5-ethynyl-2'-deoxyuridine (EdU) and 5-bromo-2'-deoxyuridine (BrdU) in flow cytometry.</a> Curr Protoc Cytom. , (2011).</li><li>Deckbar, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+limitations+of+the+G1-S+checkpoint.">The limitations of the G1-S checkpoint.</a> Cancer Res. 70, 4412-4421 (2010).</li><li>Manual, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Click-iT+EdU+Imaging+Kit.">Click-iT EdU Imaging Kit.</a> , (2011).</li><li>Weidtkamp-Peters, S., Rahn, H. P., Cardoso, M. C., Hemmerich, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replication+of+centromeric+heterochromatin+in+mouse+fibroblasts+takes+place+in+early,+middle,+and+late+S+phase.">Replication of centromeric heterochromatin in mouse fibroblasts takes place in early, middle, and late S phase.</a> Histochem Cell Biol. 125, 91-102 (2006).</li><li>Wu, R., Terry, A. V., Singh, P. B., Gilbert, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+subnuclear+localization+and+replication+timing+of+histone+H3+lysine+9+methylation+states.">Differential subnuclear localization and replication timing of histone H3 lysine 9 methylation states.</a> Mol Biol Cell. 16, 2872-2881 (2005).</li><li>Wu, R., Singh, P. B., Gilbert, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uncoupling+global+and+fine-tuning+replication+timing+determinants+for+mouse+pericentric+heterochromatin.">Uncoupling global and fine-tuning replication timing determinants for mouse pericentric heterochromatin.</a> J Cell Biol. 174, 185-194 (2006).</li><li>Takahashi, T., Nowakowski, R. S., Caviness Jr, V. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cell+cycle+of+the+pseudostratified+ventricular+epithelium+of+the+embryonic+murine+cerebral+wall.">The cell cycle of the pseudostratified ventricular epithelium of the embryonic murine cerebral wall.</a> J Neurosci. 15, 6046-6057 (1995).</li><li>Tuttle, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunofluorescent+detection+of+two+thymidine+analogues+(CldU+and+IdU)+in+primary+tissue.">Immunofluorescent detection of two thymidine analogues (CldU and IdU) in primary tissue.</a> J Vis Exp. , (2010).</li></ol>

التصميم التجريبي وصفها هنا على أساس إدماج EDU 1.5 ساعة قبل التشعيع وإدماج BrdU مباشرة بعد التشعيع يسمح التظاهرة التي NSPCs قادرون على تفعيل S ونقاط التفتيش G2 / M ولكن لا حاجز G1 / S خلال شارع في ساعة 1 بعد الإجهاد سمية جينية في الدماغ الماوس الجنين. أجرينا التجارب الأخرى الت...

أثناء نمو المخ الجنينية، يتم إنشاء الخلايا العصبية الإسقاط من قشرة الدماغ في منطقة البطين، وهي تتألف من ظهارة مطبقة كاذبة أنواع مختلفة من الخلايا الجذعية العصبية والسلف (NSPC) أن خطوط البطينين الوحشي. بين NSPC، والخلايا الدبقية شعاعي (RGC)، والتي تكون بمثابة الخلايا الجذعية العصبية، والخضوع الهجرة النووية interkinetic (الحركة الوطنية العراقية): أنها تؤدي الانقسام على سطح البطين وS-المرحلة في حد القاعدية من منطقة البطين (VZ) 1، 2،3. يمكن يتقاسمونها إما بشكل متناظر لتوليد اثنين RGC أو غير متماثلة لتوليد RGC واحد والخلايا العصبية واحد أو خلية متوسطة السلف (IPC) 4، 5. IPC الهجرة إلى طبقة الفوقية المتكاثرة تسمى منطقة subventricular (SVZ)، حيث بعد تقسيم متماثل مشاركة واحدة أنها تولد اثنين من الخلايا العصبية الإسقاط غير ناضجة 6-8. خلافا للRGC، IPC لا تخضع الحركة الوطنية العراقية (مراجعة في 9). الخلايا العصبية ولدت حديثا migrأكلت شعاعيا على طول الألياف شعاعي من خلال منطقة وسطى (IZ) للوصول إلى وجهتهم النهائية في لوحة القشرية (CP) 10، 8. توقيت مثالي من كل هذه الأحداث أمر ضروري لتطوير القشرية الصحيح. على سبيل المثال يتم التحكم في التحول من الانتشار إلى التفريق بين السكان السلف العصبية قبل مدة المرحلة G1 11، 12. إطالة المرحلة G1 يرتبط بالتالي مع تمايز الخلايا. الإجهاد السمية، مثل الإشعاع المؤين، نمو الدماغ يضعف بشدة (إعادة النظر في 13). نحن وآخرون أظهرت أن NSPC عرضة للغاية لالإشعاع الناجم عن موت الخلايا المبرمج 14، 15،16. الإشعاعات المؤينة لحث على الحمض النووي المزدوج فواصل حبلا التي هي أشد ضررا على الخلايا المتكاثرة. أحد المكونات الأساسية لاستجابة الحمض النووي من التلف (DDR) في الخلايا ركوب الدراجات هو تفعيل نقاط التفتيش في دورة الخلية G1 / S أو G2 / M التحولات أو أثناء Sالمرحلة (نقطة تفتيش داخل S) 17-21. انهم منع تطور دورة الخلية لتوفير الوقت لإصلاح التلف في الحمض النووي أو التخلص من الخلايا التالفة أيضا. بالتالي، موت الخلايا وكذلك تأخير تقدم دورة الخلية قد يغير نمو الدماغ ردا على التعرض للإشعاعات المؤينة 22-24. ولذا كان من المثير للاهتمام أن وضع طريقة لتقييم تفعيل نقاط التفتيش دورة الخلية في NSPC في مخ الفأر الجنينية المشع. ويتبع تطور دورة الخلية بشكل روتيني باستخدام إدماج التناظرية ثيميدين، 5-برومو-2&#39;-deoxyUridine (BrdU). أدرج BrdU خلال المرحلة S من دورة الخلية، عندما يتم تكرار الحمض النووي. استخدام الأجسام المضادة ضد BrdU يسمح بعد ذلك للكشف عن الخلايا التي كانت في المرحلة S خلال نبض BrdU. يتم الكشف عن التناظرية ثيميدين الرواية، 5-إيثينيل-2&#39;-deoxyUridine (EDU) من قبل أزيد الفلورسنت. الطرق المختلفة للكشف عن وباء EDU<html> RDU لا تتفاعل عبر 25، وتمكن من الكشف في وقت واحد من كل من النظير ثيميدين، وهو أمر مفيد لدراسة تقدم دورة الخلية. وعادة ما تكون الخلايا الأولى مع نابض EDU ثم نابض مع BrdU، حيث الفترة الزمنية بين كل من المعلومات المدرجة تستمر بضع ساعات 25 و 26. إضافة BrdU في وسائل الإعلام الثقافة التي تحتوي على EDU النتائج في تفضيلي إدماج BrdU في الحمض النووي مع استبعاد كل من ايدو، بينما في وقت واحد بالإضافة EDU 25 مع BrdU متساوي المولية أو نصف متساوي المولية لنتائج سائل الإعلام إلا في BrdU التأسيس 27. هذا يبسط بروتوكول وضع العلامات المزدوجة من خلال القضاء على خطوات غسل التي تكون مطلوبة عادة لإزالة التسمية الأولى من وسائل الإعلام الثقافة قبل إضافة التسمية الثانية. وهذا هو أيضا من اهتمام خاص لفي الجسم الحي الدراسة، حيث الخطوات الغسيل ليست ممكنة، لتحديد التوقيت الدقيق لدخول مرحلة S أو الخروج من سكان الخلية. ر &quot;&gt; في الآونة الأخيرة، وقد تم تطوير وسيلة لوضع العلامات المزدوجة نبض في الدماغ الجنينية الماوس باستخدام EDU وBrdU 23، 24،22 لتحليل تطور دورة الخلية والحركة الوطنية العراقية من NSPC في الرحم بعد التشعيع. وعلاوة على ذلك فقد ثبت أنه، خلال المرحلة S، خلايا فأر تكرار أول المناطق كروماتين حقيقي ثم المغاير pericentric 28،29،30. ومن المثير للاهتمام، المغاير pericentric من الكروموسومات مختلفة تتجمع في نواة لتشكيل بؤر interphasic heterochromatic المعروف أيضا باسم chromocenters وكشفها بسهولة عن طريق تلطيخ دابي كما بؤر مشرق. لذلك، والفرق EDU وBrdU stainings من كروماتين حقيقي وchromocenters ساعدتنا على تحليل أكثر تحديدا المرحلة S تطور NSPC. يسمح هذا الأسلوب المظاهرة من النقص الواضح في نقطة تفتيش G1 / S في دعم البلاغات الوطنية 22-24، والذي يثير الدهشة تماما منذ يفترض هذا الحاجز أن تكون حاسمة للاستقرار الجينوم. عدة إكسبوقد استخدمت تصاميم erimental يعتمد على تركيبات مختلفة من ايدو BrdU والبقول لتحليل تقدم دورة الخلية في الدماغ الانتهائي بطني وظهري. هنا، نعطي مثالا على بروتوكولات السماح دراسة الحمض النووي من التلف الحاد في NSPC ضمن أول 4 ساعة التالية في الرحم تشعيع الأجنة E14.5 الماوس.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="727">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:228px;">EdU</td>
			<td style="width:212px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:125px;">A10044</td>
			<td style="width:163px;">1 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;width:228px;">BrdU</td>
			<td style="width:212px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:125px;">B5002</td>
			<td style="width:163px;">5 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:228px;">IBL 637</td>
			<td style="width:212px;">CIS BIO International</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;width:228px;">Tissu Tek VIP</td>
			<td style="width:212px;">Leica</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:228px;">Microtome</td>
			<td style="width:212px;">Leica</td>
			<td style="width:125px;">RM 2125 RT</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:228px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:212px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td align="right" style="width:125px;">93443</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:228px;">Click-iT EdU Alexa 488 imaging kit</td>
			<td style="width:212px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:125px;">C10083</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="47">
			<td height="47" style="height:47px;width:228px;">Anti-BrdU</td>
			<td style="width:212px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:125px;">RPN202</td>
			<td style="width:163px;">1/300</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:228px;">Goat anti mouse-Alex594</td>
			<td style="width:212px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:125px;">A11001</td>
			<td style="width:163px;">1/400</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:228px;">Fluoromount</td>
			<td style="width:212px;">SouthernBiotech</td>
			<td style="width:125px;">0100-01</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="30">
			<td height="30" style="height:30px;width:228px;">Polysine slide</td>
			<td style="width:212px;">Thermo scientific</td>
			<td style="width:125px;">J2800AMNZ</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:228px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:212px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:125px;">P6148</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:228px;">PBS</td>
			<td style="width:212px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:125px;">20012-068</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;width:228px;">DAPI</td>
			<td style="width:212px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:125px;">D9542</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;width:228px;">Microscope BX51</td>
			<td style="width:212px;">Olympus</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="30">
			<td height="30" style="height:30px;width:228px;">Confocal microscope SPE</td>
			<td style="width:212px;">Leica</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:228px;">Prism software</td>
			<td style="width:212px;">Graphpad</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:163px;">Version 5.0c</td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:228px;">Photoshop software</td>
			<td style="width:212px;">Adobe</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing cell cycle progression of neural stem and progenitor cells in the mouse developing brain after genotoxic stress

تتولد الخلايا العصبية في القشرة الدماغية أثناء نمو المخ من أنواع مختلفة من الخلايا الجذعية العصبية والسلف (NSPC)، والتي تشكل ظهارة مطبقة كاذبة بطانة البطينات الجانبية من الدماغ الجنينية. الضغوط السمية، مثل الإشعاع المؤين، يكون لها آثار ضارة للغاية على الدماغ النامية فيما يتعلق حساسية عالية من NSPC. توضيح الآليات الخلوية والجزيئية تشارك يعتمد على توصيف استجابة الحمض النووي من التلف من هذه أنواع معينة من الخلايا، الأمر الذي يتطلب وسيلة دقيقة لتحديد NSPC التقدم من خلال دورة الخلية في الأنسجة التالفة. هنا يظهر أسلوب يستند على حقن داخل الصفاق المتعاقبة من ايدو وBrdU في الفئران الحوامل وكذلك الكشف عن هذه نظائرها ثيميدين اثنين في أقسام الاكليلية من الدماغ الجنينية. على حد سواء أدرجت ايدو وBrdU في الحمض النووي للخلايا تكرار خلال المرحلة S ويتم الكشف عنها من قبل اثنين من تقنيات مختلفة (أو أزيدالأجسام المضادة المحددة، على التوالي)، التي تسهل الكشف عنها في وقت واحد. EDU وBrdU تلطيخ ثم يتم تحديدها لكل نواة NSPC في وظيفة من المسافة التي تفصله عن الهامش البطين في المنطقة مستوى لل telencephalon الظهرية. وبالتالي هذه التقنية وضع العلامات مزدوج يسمح تمييز الخلايا التي تقدم من خلال دورة الخلية من تلك التي تم تنشيطها نقطة تفتيش دورة الخلية مما يؤدي إلى اعتقال دورة الخلية ردا على الحمض النووي من التلف. ويرد مثال على التجربة، التي تم حقن EDU قبل التشعيع وBrdU مباشرة بعد وتحليلات أجريت داخل ساعة 4 التالية التشعيع. يوفر هذا البروتوكول تحليلا دقيقا للاستجابة حادة من الحمض النووي من التلف NSPC في وظيفة من مرحلة من مراحل دورة الخلية التي كانت قد تعرضت للإشعاع. هذه الطريقة بسهولة القابلة للنقل لكثير من النظم الأخرى من أجل تحديد أثر علاج خاص على تقدم دورة الخلية في الأنسجة الحية.

في التجربة وصفها في الشكل 2، كانت تدار EDU 1.5 ساعة قبل التشعيع وبعد التشعيع BrdU. أربعة أنواع من الخلايا ثم تميزوا في شرائح القشرية التي أعدت في 1 أو 4 ساعات بعد التشعيع، وفقا لإدماج إما EDU أو BrdU، على حد سواء أو لا شيء (أرقام 2A و 2B). الأهم من ذلك، لا ED...

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Cell Cycle Progression of Neural Stem and Progenitor Cells in the Mouse Developing Brain after Genotoxic Stress at JoVE.com

Assessing Cell Cycle Progression of Neural Stem and Progenitor Cells in the Mouse Developing Brain after Genotoxic Stress

إدارة اثنين من النظير ثيميدين، ايدو وBrdU، في الفئران الحوامل يسمح للتحليل تطور دورة الخلية العصبية في والخلايا الاصلية في مخ الفأر الجنينية. وهذه الطريقة مفيدة لتحديد آثار الإجهاد السمية، بما في ذلك الإشعاعات المؤينة، أثناء نمو المخ.

تقييم التقدم دورة الخلية الجذعية العصبية من الخلايا والسلف في تطوير الدماغ ماوس بعد الإجهاد السمية الوراثية

Neurons of the cerebral cortex are generated during brain development from different types of neural stem and progenitor cells (NSPC), which form a ...

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Biology

Neuroscience

Cellular Processes

Cell Cycle and Division

SCIENTISTS IN ACTION

Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain

الوقت الفاصل بين التصوير حية من خلايا ذات صلة Clonally السلف العصبية في الدماغ المقدم اسماك الزرد النامية

Precise patterns of division, migration and differentiation of neural progenitor cells are crucial for proper brain development and function1,2. To ...

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

العصبية تشكيل مستعمرة الفحص الخلوي : إن الفحص تميز بحسن نية الخلايا الجذعية العصبية من الخلايا العصبية السلف

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

تعيش خلية التصوير الحسي للخلايا السليمة في الجهاز السلائف ذبابة الفاكهة شرانق

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

الفحص Neuroblast: والفحص للانشاء وإثراء خلايا متعلق بالخلايا العصبية السلف من التفريق العصبية الجذعية آله الخلية باستخدام التدفق الخلوي

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

العزلة والثقافة من الخلايا العصبية كريست من الأنبوبة العصبية الجنينية الفئران

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Live Imaging of Mitosis in the Developing Mouse Embryonic Cortex

التصوير حية من الانقسام في تطوير الجنينية الماوس اللحاء

Although of short duration, mitosis is a complex and dynamic multi-step process fundamental for development of organs including the brain. In the ...

Feeder-free Derivation of Neural Crest Progenitor Cells from Human Pluripotent Stem Cells

خالية من التغذية اشتقاق الخلايا العصبية كريست السلف من افرة القوة البشرية الخلايا الجذعية

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have great potential for studying human embryonic development, for modeling human diseases in the dish and as a ...

Cell Sorting of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Subventricular Zone and Live-imaging of their Cell Cycle Dynamics

فرز خلية العصبية الجذعية وخلايا السلف من الفأر Subventricular المنطقة الكبار وحية على التصوير من حيوية دورة الخلية الخاصة

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. ...

Live Imaging Followed by Single Cell Tracking to Monitor Cell Biology and the Lineage Progression of Multiple Neural Populations

يعيش تصوير متبوعاً بخلية واحدة تتبع لرصد خلية علم الأحياء وتطور نسب السكان العصبية متعددة

Understanding the mechanisms that control critical biological events of neural cell populations, such as proliferation, differentiation, or cell fate ...

Modelling Zika Virus Infection of the Developing Human Brain In Vitro Using Stem Cell Derived Cerebral Organoids

Modelling Zika Virus Infection of the Developing Human Brain In Vitro Using Stem Cell Derived Cerebral Organoids

نمذجة عدوى فيروس زكى من وضع الدماغ البشري في المختبر باستخدام الخلايا الجذعية المشتقة من أورجانويدس الدماغي

The recent emergence of Zika virus (ZIKV) in susceptible populations has led to an abrupt increase in microcephaly and other neurodevelopmental conditions ...