Name: cytotoxic efficacy of photodynamic therapy in osteosarcoma cells in vitro
Uploaded: 2014-03-18T14:30:00
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저자는 친절하게 자신의 도움말 및 기술 전문 지식에 대한 수산나 Gräfe과 아르노 WIEHE 특별 감사와 함께, 리포좀 mTHPC 제형으로 우리를 제공 biolitec 연구 GmbH의 (예나, 독일) 감사의 말씀을 전합니다. 우리는 또한 결과의 많은 부분을 생성 및 출판 (11)에 대해 coresponsible했다 케르 스틴 Reidy을, 감사의 말씀을 전합니다. 이 작품은 Schweizerischer Verein에 Balgrist, 취리히 대학, Krebsliga 취리히뿐만 아니라 월터 L.와 요한 울프 재단, 취리히, 스위스에서 부여 및 EuroNanoMed ERA-NET / SNF 스위스에서 부여로에서 교부금에 의해 지원되었다 국립 과학 재단 (National Science Foundation) 31NM30-1분의 131,004. 이 작품은 또한 HSM Kanton 취리히의 근골격계 종양학 (고도로 전문화 된 의학) 프로그램에 의해 지원되었다.

1. 각각의 로우 mTHPC의 통풍과 높은 전이성 HOS와 143B OS 세포주의 비교 <ol><li> DMEM, 햄 F12 및 비율 4.5:4.5:1에서 열 불 활성화 된 태아 혈청을 포함하는 세포 배양 매체를 준비합니다. 주 : PS mTHPC의 리포솜 제형은 1.5 ㎎ / ㎖ mTHPC의 최종 농도로 물에 용해시켰다. </li><li> 플레이트 0.2 × 10 6 HOS와 143B 세포 / 잘 6 - 웰 플레이트 (각 조건에서 삼중)과 세포가 하룻밤을 준수 할 수 있?...

<ol>
	<li>Juarranz, A., Jaen, P., Sanz-Rodriguez, F., Cuevas, J., Gonzalez, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+therapy+of+cancer.+Basic+principles+and+applications.">Photodynamic therapy of cancer. Basic principles and applications.</a> Clin. Transl. Oncol. 10, 148-154 (2008).</li><li>Agostinis, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+therapy+of+cancer:+an+update.">Photodynamic therapy of cancer: an update.</a> CA Cancer. 61, 250-281 (2011).</li><li>D'Adamo, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Appraising+the+current+role+of+chemotherapy+for+the+treatment+of+sarcoma.">Appraising the current role of chemotherapy for the treatment of sarcoma.</a> Semin. Oncol. 38 Suppl 3, 19-29 (2011).</li><li>Allison, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+meta-analysis+of+osteosarcoma+outcomes+in+the+modern+medical+era.">A meta-analysis of osteosarcoma outcomes in the modern medical era.</a> Sarcoma. , (2012).</li><li>Anninga, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemotherapeutic+adjuvant+treatment+for+osteosarcoma:+where+do+we+stand.">Chemotherapeutic adjuvant treatment for osteosarcoma: where do we stand.</a> Eur. J. Cancer. 47, 2431-2445 (2011).</li><li>Bacci, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pattern+of+relapse+in+patients+with+osteosarcoma+of+the+extremities+treated+with+neoadjuvant+chemotherapy.">Pattern of relapse in patients with osteosarcoma of the extremities treated with neoadjuvant chemotherapy.</a> Eur. J. Cancer. 37, 32-38 (2001).</li><li>Briccoli, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resection+of+recurrent+pulmonary+metastases+in+patients+with+osteosarcoma.">Resection of recurrent pulmonary metastases in patients with osteosarcoma.</a> Cancer. 104, 1721-1725 (2005).</li><li>Milla Sanabria, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+and+indirect+photodynamic+therapy+effects+on+the+cellular+and+molecular+components+of+the+tumor+microenvironment.">Direct and indirect photodynamic therapy effects on the cellular and molecular components of the tumor microenvironment.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1835, 36-45 (2013).</li><li>Mitra, S., Foster, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photophysical+parameters,+photosensitizer+retention+and+tissue+optical+properties+completely+account+for+the+higher+photodynamic+efficacy+of+meso-tetra-hydroxyphenyl-chlorin+vs+Photofrin.">Photophysical parameters, photosensitizer retention and tissue optical properties completely account for the higher photodynamic efficacy of meso-tetra-hydroxyphenyl-chlorin vs Photofrin.</a> Photochem. Photobiol. 81, 849-859 (2005).</li><li>Ma, L., Moan, J., Berg, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+new+photosensitizer,+meso-tetra-hydroxyphenyl-chlorin,+for+use+in+photodynamic+therapy:+a+comparison+of+its+photobiological+properties+with+those+of+two+other+photosensitizers.">Evaluation of a new photosensitizer, meso-tetra-hydroxyphenyl-chlorin, for use in photodynamic therapy: a comparison of its photobiological properties with those of two other photosensitizers.</a> Int. J. Cancer. 57, 883-888 (1994).</li><li>Reidy, K., Campanile, C., Muff, R., Born, W., Fuchs, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mTHPC-mediated+photodynamic+therapy+is+effective+in+the+metastatic+human+143B+osteosarcoma+cells.">mTHPC-mediated photodynamic therapy is effective in the metastatic human 143B osteosarcoma cells.</a> Photochem. Photobiol. 88, 721-727 (2012).</li><li>Triesscheijn, M., Ruevekamp, M., Aalders, M., Baas, P., Stewart, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+sensitivity+of+microvascular+endothelial+cells,+fibroblasts+and+tumor+cells+after+in+vitro+photodynamic+therapy+with+meso-tetra-hydroxyphenyl-chlorin.">Comparative sensitivity of microvascular endothelial cells, fibroblasts and tumor cells after in vitro photodynamic therapy with meso-tetra-hydroxyphenyl-chlorin.</a> Photochem. Photobiol. 80, 236-241 (2004).</li><li>Triesscheijn, M., Baas, P., Schellens, J. H., Stewart, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+therapy+in+oncology.">Photodynamic therapy in oncology.</a> Oncologist. 11, 1034-1044 (2006).</li><li>Burch, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+canine+osseous+tumors+with+photodynamic+therapy:+a+pilot+study.">Treatment of canine osseous tumors with photodynamic therapy: a pilot study.</a> Clin. Orthop. Relat. Res. 467, 1028-1034 (2009).</li></ol>

PDT에 응답하여 최적의 세포 독성을 달성하기 위해, 오른쪽 레이저 광 설정과 배양 시간을 선택하는 것이 중요하다. 여기에 설명 된 절차는 PS의 이해를 확인하고 체외에서 PDT 유도 된 세포 독성을 정량화하기 위해 일관되고 효율적입니다. PS mTHPC의 특정 흡수 파장을 사용하여, 셀룰러 PS 흡수는 직접적으로 측정 될 수 있고, PS는 세포 독성 활성 산소 종을 생성하기 위해 활성화 될 수있다. ...

골육종 (OS)의 예술 치료의 오늘의 상태는 기본 뼈 종양, 신 보조 항암 화학 요법 및 수술의 조합을 포함한다. 이 치료 요법은 화학 요법의 사용 전에 약 20 % 내지 국소 질환 환자의 생존율 증가를 밝혀, 현재까지 04 세 사이 60~70%. 그러나 지난 수십 년 동안, 현지 질환 OS 환자의 전체 생존 기간은 5 4 plateaued했다. 또한, 이러한 환자 30 ~ 40 %의 진단 후 3 년 이내에 재발 및 전이성 질환을 가진 환자는 20 ~ 30 % 4의 생존율, 6, 7을 계속합니다. 이들 환자의 결과를 개선하기 위해, 새로운 치료 전략을 개발해야한다. 광 역학 요법 (PDT), 오히려 신규 항암 치료는 photosensi의 여기를 위해 특정 파장의 광을 사용혈류로의 주입 후 종양 세포에 축적 tizer (PS). PS의 레이저 광을 여기에는 종양 세포 및 세포 죽음에서 세포 독성 반응을 유도하는 산소의 존재 하에서 산소 라디칼을 생성한다. PDT는 종양 경색으로 이어지는, 혈관 수축 및 종양 미세 혈관의 혈전 형성을 일으키는 원인이되고, 종양 내부 결과적으로 지역의 저산소증과 산소 결핍이 기본 메커니즘 외에 두 개의 추가 PDT는 생물 학적 과정이 감소 된 종양의 성장에 기여 유발. 마지막으로, PDT 부상 죽어가는 종양 세포는 로컬 면역 반응, PDT의 다소 독특한 기능을 트리거합니다. 이것은 보체 시스템 및 수지상 세포 8 항원 제시의 활성화를 수반한다. 따라서, 조건은 종양 특정 면역에 이르는, 림프 세포의 후속 활성화와 종양 항원의 프레 젠 테이션을위한 생성됩니다. 지금까지, PDT 연조직 종양 및 hyperpl 여러 종류의 치료를 위해 사용되었다아시아의, 같은 광선 각화증, 바렛 식도, 기관지 종양, 방광 암, 기저 세포 암, 머리와 목 암 2의 완화 치료로. 치료는 단지 적은 부작용과 로컬 대규모 괴사를 유도하는 것으로 알려져, 따라서 선택적으로 종양 조직을 근절 할 수있는 잠재력을 가지고있다. 이러한 장점에도 불구하고, PDT의 응용 프로그램은 화학 요법 약물의 투여보다 기술적으로 더 까다로운 남아있다. 최대 효능, PS 농도, 노광 시간 및 전체 광 에너지 전달을 달성하기 위해 최적화 될 필요가있다. 이는 생체 내 실험에서 수행 될 수 있지만, 인해 최적화 될 필요가 파라미터의 상대적 다수, 그것은 초기 시험 관내에서 최적 조건을 결정하는 것이 더 효율적이다. 후술하는 실험에서는, PS 5,10,15,20 - 테트라 키스 (메타 - 하이드 록시 페닐) CHL를 사용하여 PDT의 효능을 시험 관내 시험오린은 mTHPC (그림 1A)를 단축. mTHPC는 현재 두 경부암의 완화 치료를위한 병원에서 사용되는 의약품 Foscan있는 활성 물질이다. 그것은 낮은 농도에서 이미 대규모 세포의 손상을 유도하는 가장 유력한 PS 중 하나이며, 이는 조직 침투 (9, 10)의 측면에서 다른 PS 우수한 것으로 입증되었다. 의 광 흡수 스펙트럼 (그림 1B)는 각각 PS를 축적 조직 현지화 및 PDT 유도에 사용되는 두 개의 눈에 띄는 봉우리, 417 nm에서 한 652 nm에서 두 번째를 보여줍니다. 현재 mTHPC의 리포솜 제형은 개발 중입니다. 여기서, 우리는이 리포솜 제형의 흡수를 정량화하고,이 OS 인간 세포주에서 PDT를 수행하는 절차를 설명; 낮은 전이성 HOS 및 높은 전이성 143B 세포. 여기에 제시된 데이터 중 일부는 11 이전에보고 된 바있다. 일여기에 설명 된 전자의 방법은 PDT의 효과에 전이성 표현형의 효과를 공부하기 위해 수 있습니다. orthotopically 면역 결핍 SCID 마우스의 뒷다리에 주입 143B 세포는 intratibial을 전이 차 종양, 밀접하게 인간을 전이 질환을 흉내 낸 모델을 일으킬 수 있습니다. 따라서, 제안 된 시험 관내 실험은 최적 PDT 설정하기 생체 내 실험에 사용되는 평가할에게도 적합하다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="955">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:291px;">DMEM</td>
			<td style="width:251px;">PAA GmbH, Freiburg, Germany</td>
			<td style="width:127px;">E15-883</td>
			<td style="width:287px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:291px;">HAM F12</td>
			<td>PAA GmbH, Freiburg, Germany</td>
			<td style="width:127px;">E15-817</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:291px;">heat-inactivated fetal calf serum</td>
			<td>GIBCO, Basel, Switzerland</td>
			<td style="width:127px;">10500-064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="147">
			<td height="147" style="height:147px;width:291px;">mTHPC</td>
			<td style="width:251px;">biolitec research GmbH, Jena, Germany</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:287px;">As this liposomal formulation is originating from R &#38; D 
			no catalogue number is available at the moment. Stock: 1.5mg/ml; provided in a 9:1 mixture of dipalmitoylphosphatidylcholine (DPPC) and dipalmitoylphosphatidylglycerol (DPPG; &#62;99% purity)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Spectramax Gemini XS plate reader</td>
			<td style="width:251px;">Molecular Devices, Sunnyvale, CA</td>
			<td style="width:127px;">ID# 861</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:291px;">Microscope Zeiss Observer.Z1</td>
			<td style="width:251px;">Axio Observer, Axio Vision Release 4.6.3 SP1, Jena Germany</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:291px;">Ceralas PDT 652 nm Laser</td>
			<td style="width:251px;">Biolitec AG, Jena, Germany</td>
			<td style="width:127px;">LD652nm2W400u</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:291px;">Water-soluble tetrazolium (WST) reagent</td>
			<td style="width:251px;">Roche Diagnostics AG, Rotkreuz, Switzerland</td>
			<td style="width:127px;">1644807</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

cytotoxic efficacy of photodynamic therapy in osteosarcoma cells in vitro

최근, 적은 전신 부작용과 암에 대한보다 효과적인 치료법을 찾는데 어려움이있어왔다. 따라서 광 역학 치료보다 종양 선택적 치료에 대한 새로운 접근 방식입니다. 산소의 존재 하에서 특정 파장의 빛을 활성화시에, 세포 독성 반응을 유도 한 산소 라디칼을 생성하고, 비 독성 감광제 (PS)을 이용한다 광 역학 치료 (PDT). FDA에 의해 거의 20 년 전 승인에도 불구하고, PDT가 요즘에만 암 종류 (피부, 방광) 및 nononcological 질환 (건선, 광선 각화증) 2 제한된 수를 치료하는 데 사용됩니다. PDT의 사용의 중요한 이점은 전신적인 부작용을 방지 지방 치료를 수행 할 수있는 능력이다. 또한, (신경 또는 혈관 주위 예) 민감한 부위에서의 종양의 치료를 허용한다. 여기서, intraoperatPDT의 필자의 응용 프로그램은 골육종 (OS)에서 기본 종양 위성을 대상으로 뼈의 종양이 외과 종양 절제술 후 조직을 둘러싼 종양에 남아 간주됩니다. 치료 재발의 수를 감소시 및 (수술후) 전이에 대한 위험을 감소시키는 것을 목표로한다. 본 연구에서 우리는 잘 확립 intratibial OS 마우스 모델에서 인간의 질병을 재현하기 위해 사용되는 널리 사용되는 OS 세포주의 효과적인 치료를위한 최적의 PDT 설정을 확립하는 체외 PDT 절차에서 제시한다. PS mTHPC의 흡수 분광 광도계 및 광독성는 WST-1 분석으로 살아남은 세포의 계산에 의해 평가 된 세포의 죽음을 유도하기 위해 652 nm에서 mTHPC의 레이저 광 자극으로 유발 된으로 조사 하였다. 기존 기술은 동물 모델에서 미래 연구를위한 최적의 PDT 설정을 정의 할 수있게. 그들은 PDT의 효과의 평가를위한 쉽고 빠른 도구입니다 <em&gt; 체외에서 생체 내에서 응용 프로그램 전.

여기에보고 된 기술로, 우리는 인간의 OS 세포에서 mTHPC 기반 PDT를 조사 하였다. 먼저, mTHPC의 시간 및 농도 의존적​​ 흡수는 낮은 전이성 HOS 및 고도로 전이성 143B OS 세포주에서 조사 하였다. mTHPC 흡수는 형광 분광 광도계 mTHPC의 형광 (Reidy 등. (11)로부터 허가를 재현 그림 2) 측정에 의해 평가 될 수있다. 그림 2A는 시간 의존적으로 mTHPC의 이해를 보여줍니다...

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Cytotoxic Efficacy of Photodynamic Therapy in Osteosarcoma Cells In Vitro

여기에보고 된 프로토콜은 수 광역 세포주의 치료 (PDT) 및 동물 모델에서 치료를 적용하기 전에 PDT 설정의 최적화의 효과의 평가.

골육종 세포의 광 역학 치료의 세포 독성 효능<em&gt; 체외</em

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