Name: imaging through the pupal case of drosophila melanogaster
Uploaded: 2014-01-23T15:15:00
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著者は、知的支援、物質的な支援、および株式のために明千葉を認識したい。コメントのジュリアDallmanに感謝します。

1。作業を飛ばす<ol><li>室温10で、標準的なコーンミール寒天·糖蜜·酵母媒体上のハエを維持する。 </li><li>十字架は、羽化の6時間以内で処女を分離します。希望の遺伝子型の男性に横切った後、変更は3〜4日ごとに新しいバイアルに飛ぶ。 </li></ol>注：これらの実験では、Gal4の線A9がウィングに導入遺伝子の発現を駆動するために使用した。フライ株はブルーミン?...

<ol>
	<li>Raff, J. W., Jeffers, K., Huang, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+roles+of+Fzy/Cdc20+and+Fzr/Cdh1+in+regulating+the+destruction+of+cyclin+B+in+space+and+time.">The roles of Fzy/Cdc20 and Fzr/Cdh1 in regulating the destruction of cyclin B in space and time.</a> J. Cell Biol. 157, 1139-1149 (2002).</li><li>Stramer, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+of+wound+inflammation+in+Drosophila+embryos+reveals+key+roles+for+small+GTPases+during+in+vivo+cell+migration.">Live imaging of wound inflammation in Drosophila embryos reveals key roles for small GTPases during in vivo cell migration.</a> J. Cell Biol. 168, 567-573 (2005).</li><li>Clark, I. B., Jarman, A. P., Finnegan, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+of+Drosophila+gonad+formation+reveals+roles+for+Six4+in+regulating+germline+and+somatic+cell+migration.">Live imaging of Drosophila gonad formation reveals roles for Six4 in regulating germline and somatic cell migration.</a> BMC Dev. Biol. 7, 52 (2007).</li><li>Fuger, P., Behrends, L. B., Mertel, S., Sigrist, S. J., Rasse, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+of+synapse+development+and+measuring+protein+dynamics+using+two-color+fluorescence+recovery+after+photo-bleaching+at+Drosophila+synapses.">Live imaging of synapse development and measuring protein dynamics using two-color fluorescence recovery after photo-bleaching at Drosophila synapses.</a> Nat. Protoc. 2, 3285-3298 (2007).</li><li>Siller, K. H., Serr, M., Steward, R., Hays, T. S., Doe, C. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+of+Drosophila+brain+neuroblasts+reveals+a+role+for+Lis1/dynactin+in+spindle+assembly+and+mitotic+checkpoint+control.">Live imaging of Drosophila brain neuroblasts reveals a role for Lis1/dynactin in spindle assembly and mitotic checkpoint control.</a> Mol. Biol. Cell. 16, 5127-5140 (2005).</li><li>Roy, S., Hsiung, F., Kornberg, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specificity+of+Drosophila+cytonemes+for+distinct+signaling+pathways.">Specificity of Drosophila cytonemes for distinct signaling pathways.</a> Science. 332, 354-358 (2011).</li><li>Gho, M., Bellaiche, Y., Schweisguth, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revisiting+the+Drosophila+microchaete+lineage:+a+novel+intrinsically+asymmetric+cell+division+generates+a+glial+cell.">Revisiting the Drosophila microchaete lineage: a novel intrinsically asymmetric cell division generates a glial cell.</a> Development. 126, 3573-3584 (1999).</li><li>Ninov, N., Martin-Blanco, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+of+epidermal+morphogenesis+during+the+development+of+the+adult+abdominal+epidermis+of+Drosophila.">Live imaging of epidermal morphogenesis during the development of the adult abdominal epidermis of Drosophila.</a> Nat. Protoc. 2, 3074-3080 (2007).</li><li>Edgar, B. A., Lehner, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+control+of+cell+cycle+regulators:+a+fly's+perspective.">Developmental control of cell cycle regulators: a fly's perspective.</a> Science. 274, 1646-1652 (1996).</li><li>Wirtz, R. A., Semey, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+kitchen:+equipment,+media+preparation,+and+supplies.">The Drosophila kitchen: equipment, media preparation, and supplies.</a> Drosophila Information Service. 58, 176-180 (1982).</li><li>Boulina, M., Samarajeewa, H., Baker, J. D., Kim, M. D., Chiba, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+of+multicolor-labeled+cells+in+Drosophila.">Live imaging of multicolor-labeled cells in Drosophila.</a> Development. 140, 1605-1613 (2013).</li><li>Bainbridge, S. P., Bownes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staging+the+metamorphosis+of+Drosophila+melanogaster.">Staging the metamorphosis of Drosophila melanogaster.</a> J. Embryol. Exp. Morphol. 66, 57-80 (1981).</li><li>Staudt, T., Lang, M. C., Medda, R., Engelhardt, J., Hell, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=2,2'-thiodiethanol:+a+new+water+soluble+mounting+medium+for+high+resolution+optical+microscopy.">2,2'-thiodiethanol: a new water soluble mounting medium for high resolution optical microscopy.</a> Microsc. Res. Tech. 70, 1-9 (2007).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nat. Methods. 9, 676-682 (2012).</li><li>Meyer, E. J., Ikmi, A., Gibson, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interkinetic+nuclear+migration+is+a+broadly+conserved+feature+of+cell+division+in+pseudostratified+epithelia.">Interkinetic nuclear migration is a broadly conserved feature of cell division in pseudostratified epithelia.</a> Curr. Biol. 21, 485-491 (2011).</li><li>Sauer, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitosis+in+the+neural+tube.">Mitosis in the neural tube.</a> J. Comp. Neurol. 62, 377-405 (1935).</li><li>Livet, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+strategies+for+combinatorial+expression+of+fluorescent+proteins+in+the+nervous+system.">Transgenic strategies for combinatorial expression of fluorescent proteins in the nervous system.</a> Nature. 450, 56-62 (2007).</li></ol>

、指標を可視化し、分裂細胞の特徴を定量化するために、His2AvGFP発現している細胞の共焦点解析により、ショウジョウバエの生活蛹の翼で有糸分裂を観察するための簡単な準備の開発を必要とした。このメソッドは、蛹の翅における細胞周期は、彼らが有糸分裂に入る上皮の頂端面への核の移行に多列上皮で細胞周期に強い類似性を有することを文書化するために使用された。終期に...

<html>酢のフライ、 キイロショウジョウバエは 、生物学の多くの側面を研究するための十分に確立されたモデルである。 ショウジョウバエの研究は表情、ノックダウン突然変異を含む遺伝子操作の洗練されたフォームを可能にする遺伝的な実験の豊かな歴史を持っています。蛍光タンパク質標識の出現により、このレパートリーは動物生体内の細胞およびタンパク質の研究を含むように拡大している。ハエ胚は、 生体内で 1-3 の深い、高分解能イメージングを可能に小さく、光学的に透明であるように、このような研究のための優れたシステムです。ハエの発達の他の段階はanaesthetization 4、切開および短期培養5,6、又は7,8イメージングのためのクチクラにおけるウィンドウの作成 ​​を必要とする、より少なく扱いやすいことが証明されている。これらの操作は、通常、長期的には、動物の発達を損なうか、短時間に画像を制限する方法で動物に影響を与える。 ほとんどの胚細胞サイクルが切り捨てられているので、細胞周期調節因子に似ている遺伝子における新規の変異を研究するENT &quot;&gt;、それが細胞周期のタイミングと忠実度を研究するための適切な準備を見つけることが不可欠であった（SMまたはS-G2-M）と研究対象の変異体は後の段階までの欠陥を示していない、それは蛹組織における細胞周期を観察することが重要だった。蛹の上皮細胞は、この段階でのより一般的なG1-S-G2-M細胞周期や蛹を持っている筋肉の動き9できない。操作のための最初の出発点はHistone2AV-GFPを発現する完全な全体蛹が含まれていました。蛹ケースの見かけの不透明度にもかかわらず、この完全な準備がin vivoイメージングの長期のための優秀なことが証明された。この手法は単純である学部の研究者が日常的にショウジョウバエの細胞と発生生物学の側面を研究するためにそれを使用して、まだ解決は、マイクロメートルスケールの特徴の識別を可能にするために十分な罰金であることを十分に。この方法では、時間、分、秒を超える事象の観察は、単に時系列パラメータを調整することによって可能である。青色、緑色、黄色、橙色、および赤色蛍光タンパク質、又はこれらの組み合わせを用いて動画を、なされている。重要なことに、もし注意があっても、長期的画像化は、動物の発症または生存率には影響がなく、レーザ強度​​を最小化するために取られる。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Fly stuff fly pad</td>
			<td style="width:71px;">Genesee scientific</td>
			<td style="width:119px;">59-114</td>
			<td style="width:167px;">for fly anesthetization</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">CO2 gas</td>
			<td style="width:71px;">Airgas south</td>
			<td style="width:119px;">CD50</td>
			<td>For fly anesthetization</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Regulator</td>
			<td style="width:71px;">Airgas south</td>
			<td style="width:119px;"> </td>
			<td>CO2 regulator</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Fly vials</td>
			<td style="width:71px;">Genesee scientific</td>
			<td>32-113RLBF</td>
			<td>Fly culture</td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:216px;">Drosophila lines:A9-Gal4 (Bl#8761), His2Av-GFP (Bl#5941), Sco/CyO HsCre (Bl#1092), UAS-ChRFP-Tub (Bl#25773)</td>
			<td style="width:71px;">Bloomington Stock center</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Glass bottom dishes #1 1/2</td>
			<td style="width:71px;">WillCo Wells BV</td>
			<td style="width:119px;"> </td>
			<td>For microscopy</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Thiodiethylene Glycol</td>
			<td style="width:71px;">Fluka</td>
			<td align="right" style="width:119px;">88559</td>
			<td>mountant</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Modeling clay</td>
			<td style="width:71px;">art supply store</td>
			<td style="width:119px;"> </td>
			<td>Support to position pupae against</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Paintbrushes</td>
			<td style="width:71px;">art supply store</td>
			<td style="width:119px;"> </td>
			<td>To manipulate flies</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Fine Forceps, Inox #5</td>
			<td style="width:71px;">Fine science tools</td>
			<td style="width:119px;">11252-20</td>
			<td>Dumont #5</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">computer</td>
			<td style="width:71px;">any</td>
			<td style="width:119px;"> </td>
			<td>8 Gb RAM for image/movie analysis</td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:216px;">Fiji software</td>
			<td style="width:71px;"> </td>
			<td style="width:119px;">Free ware http://fiji.sc/Fiji</td>
			<td>Image analysis software</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Confocal microscope</td>
			<td style="width:71px;"> </td>
			<td style="width:119px;"> </td>
			<td>Any fast scanning confocal should be sufficient</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">20x dry, and 40x or 63x oil immersion lenses</td>
			<td style="width:71px;">any</td>
			<td style="width:119px;"> </td>
			<td>For imaging tissue, cellular and subcellular features</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Immersion oil (non fluorescent)</td>
			<td style="width:71px;"> </td>
			<td style="width:119px;"> </td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Stereo microscope</td>
			<td style="width:71px;">any</td>
			<td style="width:119px;"> </td>
			<td>For fly manipulation</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

imaging through the pupal case of drosophila melanogaster

細胞および発生生物学のモデルとしてショウジョウバエの長年の使用によりツールの配列が得られている。一緒に、これらの技術は、方法論的な様々な角度からの細胞と発生生物学の分析を可能にした。ライブイメージングは​​、細胞分裂または細胞運動性などの動的な細胞プロセスを観察するための新たな方法である。特徴付けられていない推定上の細胞周期タンパク質に変異を有する単離された、ライブイメージングを用いてその場で有糸分裂を観察することが必須となった。 ショウジョウバエで最もライブイメージング研究は、それらのサイズが小さく、光学的透明性の操作や観察にアクセス可能な胚の段階に焦点を当てている。それはギャップ相の一方または両方を欠くという点でしかし、これらの段階において細胞周期は珍しい。対照的に、 ショウジョウバエの蛹の翼の細胞は、典型的な細胞周期を有し、蛹開発の約20時間に及ぶ急速な有糸分裂の周期を経る。それは私には簡単ですdentifyとその場で有糸分裂をキャッチし、適切なステージの蛹を分離します。そのまま蛹をマウントする実験は、細胞や動物の生存能力への影響を最小限に抑えながら、数時間のために実行できるように、撮像中に扱いやすと耐久性の最適な組み合わせを提供した。この方法は、小さな、あるいはより小さな、染色体を飛ぶような特徴を観察することができます。顕微鏡の設定や隣接するセルや、チューブリンなどの蛍光標識されたタンパク質の膜動態を可視化するための準備の設置、許可された拡張機能の詳細を調整する。この方法は、すべてのテストされた蛍光タンパク質のために働くと時間スケールの様々な経由でサブミクロンスケールの特徴を捉えることができます。従来の共焦点顕微鏡で蛹の外側を20μmに限定しながら、 生体内での蛹の組織で、タンパク質や細胞動態を観察するためのこのアプローチは、これらの組織中の細胞および発生生物学の研究に一般的に有用である可能性がある。

このような現像ショウジョウバエの眼、又は現像脊椎動物の中枢神経系の心室層として多列上皮における細胞は、核の運動を起こす、細胞周期に合わせて、interkinetic核移行と呼ばれる。核が基底面またはその近くで、核は頂端面15,16に達したとき、細胞が有糸分裂を入力すると、DNAの複製が発生します。蛹の翼細胞は頭部外転後の最初の数時間の間に急速に分裂する単層上皮を...

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Imaging Through the Pupal Case of Drosophila melanogaster

本論文では、直接蛹殻を介して画像細胞挙動への高速走査型共焦点顕微鏡を使用する方法を示します。そのまま蛹ケースを残すことによって、このメソッドを直接学ぶことは困難であるショウジョウバエの発生段階で動的な細胞プロセスの観察と測定を可能にします。

の蛹ケースを画像化<em&gt;キイロショウジョウバエ</em

The longstanding use of Drosophila as a model for cell and developmental biology has yielded an array of tools. Together, these techniques have enabled ...

Research

JoVE Journal

Biology

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大人からOenocytesの解剖キイロショウジョウバエ</em

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