Name: helical organization of blood coagulation factor viii on lipid nanotubes
Uploaded: 2014-06-03T13:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Helical Organization of Blood Coagulation Factor VIII on Lipid Nanotubes at JoVE.com

Dette arbeidet støttes av en nasjonal Scientist Development stipend fra American Heart Association: 10SDG3500034 og UTMB-NCB starte opp midler til SSM. Forfatterne erkjenner Cryo-EM og Scientific Computing fasilitetene på Sealy senter for strukturbiologi på UTMB ( <a href="http://www.scsb.utmb.edu">www.scsb.utmb.edu</a> ), samt legene. Steve Ludtke og Ed Egelman for hjelp med 2D og 3D spiralformede rekonstruksjonsalgoritmer.

En. Prøvepreparering <ol><li> Buffer utveksling human faktor VIII-BDD 14 og porcine FVIII-BDD 15 mot HBS-Ca-buffer (20 mM HEPES, 150 mM NaCl, 5 mM CaCl 2, pH = 7,4) og konsentrer til 1,2 mg / ml. Hold proteinløsningen ved -80 ° C. </li><li> Forbered lipid nanorør (LNT) ved å blande GalactosylCeramide (GC) og fosfatidylserin (PS) på 01:04 w / w forholdet i kloroform. Fordamp kloroformen under argon og oppløse lipidene i HBS-buffer til 1 mg / ml. Hold LNT løsning ved 4 ° C. </li...

<ol>
	<li>Henderson, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Realizing+the+potential+of+electron+cryo-microscopy.">Realizing the potential of electron cryo-microscopy.</a> Quarterly Reviews of Biophysics. 37, 3-13 (2004).</li><li>Fujiyoshi, Y., Unwin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electron+crystallography+of+proteins+in+membranes.">Electron crystallography of proteins in membranes.</a> Current opinion in structural biology. 18, 587-592 (2008).</li><li>Toole, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+cloning+of+a+cDNA+encoding+human+antihaemophilic+factor.">Molecular cloning of a cDNA encoding human antihaemophilic factor.</a> Nature. 312, 342-347 (1984).</li><li>Fay, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factor+VIII+structure+and+function.">Factor VIII structure and function.</a> International journal of hematology. 83, 103-108 (2006).</li><li>Stoilova-McPhie, S., Lynch, G. C., Ludtke, S. J., Pettitt, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Domain+organization+of+membrane-bound+factor+VIII.">Domain organization of membrane-bound factor VIII.</a> Biopolymers. , (2013).</li><li>Pipe, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemophilia:+new+protein+therapeutics.">Hemophilia: new protein therapeutics.</a> Hematology / the Education Program of the American Society of Hematology. American Society of Hematology. Education Program. 2010, 203-209 (2010).</li><li>Gatti, L., Mannucci, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+porcine+factor+VIII+in+the+management+of+seventeen+patients+with+factor+VIII+antibodies.">Use of porcine factor VIII in the management of seventeen patients with factor VIII antibodies.</a> Thrombosis and haemostasis. 51, 379-384 (1984).</li><li>Parmenter, C. D., Cane, M. C., Zhang, R., Stoilova-McPhie, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryo-electron+microscopy+of+coagulation+Factor+VIII+bound+to+lipid+nanotubes.">Cryo-electron microscopy of coagulation Factor VIII bound to lipid nanotubes.</a> Biochemical and biophysical research communications. 366, 288-293 (2008).</li><li>Parmenter, C. D., Stoilova-McPhie, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binding+of+recombinant+human+coagulation+factor+VIII+to+lipid+nanotubes.">Binding of recombinant human coagulation factor VIII to lipid nanotubes.</a> FEBS letters. 582, 1657-1660 (2008).</li><li>Wassermann, G. E., Olivera-Severo, D., Uberti, A. F., Carlini, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Helicobacter+pylori+urease+activates+blood+platelets+through+a+lipoxygenase-mediated+pathway.">Helicobacter pylori urease activates blood platelets through a lipoxygenase-mediated pathway.</a> Journal of cellular and molecular medicine. 14, 2025-2034 (2010).</li><li>Wilson-Kubalek, E. M., Chappie, J. S., Arthur, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Helical+crystallization+of+soluble+and+membrane+binding+proteins.">Helical crystallization of soluble and membrane binding proteins.</a> Methods in enzymology. 481, 45-62 (2010).</li><li>Egelman, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstruction+of+helical+filaments+and+tubes.">Reconstruction of helical filaments and tubes.</a> Methods in enzymology. 482, 167-183 (2010).</li><li>Lusher, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+introduction+of+recombinant+factor+VIII--a+clinician's+experience.">Development and introduction of recombinant factor VIII--a clinician's experience.</a> Haemophilia : the official journal of the World Federation of Hemophilia. 18, 483-486 (2012).</li><li>Thim, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+and+characterization+of+a+new+recombinant+factor+VIII+(N8).">Purification and characterization of a new recombinant factor VIII (N8).</a> Haemophilia : the official journal of the World Federation of Hemophilia. 16, 349-359 (2010).</li><li>Doering, C. B., Healey, J. F., Parker, E. T., Barrow, R. T., Lollar, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+level+expression+of+recombinant+porcine+coagulation+factor+VIII.">High level expression of recombinant porcine coagulation factor VIII.</a> The Journal of biological chemistry. 277, 38345-38349 (2002).</li><li>Tang, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EMAN2:+an+extensible+image+processing+suite+for+electron+microscopy.">EMAN2: an extensible image processing suite for electron microscopy.</a> Journal of structural biology. 157, 38-46 (2007).</li><li>Egelman, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+robust+algorithm+for+the+reconstruction+of+helical+filaments+using+single-particle+methods.">A robust algorithm for the reconstruction of helical filaments using single-particle methods.</a> Ultramicroscopy. 85, 225-234 (2000).</li><li>Egelman, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+iterative+helical+real+space+reconstruction+method:+surmounting+the+problems+posed+by+real+polymers.">The iterative helical real space reconstruction method: surmounting the problems posed by real polymers.</a> Journal of structural biology. 157, 83-94 (2007).</li><li>Mastronarde, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+electron+microscope+tomography+using+robust+prediction+of+specimen+movements.">Automated electron microscope tomography using robust prediction of specimen movements.</a> Journal of structural biology. 152, 36-51 (2005).</li><li>Stoilova-McPhie, S., Villoutreix, B. O., Mertens, K., Kemball-Cook, G., Holzenburg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3-Dimensional+structure+of+membrane-bound+coagulation+factor+VIII:+modeling+of+the+factor+VIII+heterodimer+within+a+3-dimensional+density+map+derived+by+electron+crystallography.">3-Dimensional structure of membrane-bound coagulation factor VIII: modeling of the factor VIII heterodimer within a 3-dimensional density map derived by electron crystallography.</a> Blood. 99, 1215-1223 (2002).</li><li>Goddard, T. D., Huang, C. C., Ferrin, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+density+maps+with+UCSF+Chimera.">Visualizing density maps with UCSF Chimera.</a> Journal of structural biology. 157, 281-287 (2007).</li></ol>

I dette arbeidet er presentert en metode for å skille mellom to membranbundne organisasjoner av svært homologe proteiner human-og porcin faktor VIII selv montert på lipid nanorør i de forhold som var tilstede i den menneskelige kroppen. I den beskrevne fremgangsmåten, blir human-og porcin faktor VIII med hell arrangert i spiralform på lipid nanorør, som er det mest kritiske trinn. Den neste kritiske trinnet er å bevare prøven i tynn amorfe isen ved flash ...

Koagulasjonsfaktor VIII (FVIII) er et stort glykoprotein av 2332 aminosyrer organisert i seks domener: A1-A2-B-A3-C1-C2 tre. Ved aktivering av FVIII Trombin virker som kofaktor for faktor IXa i membranbundet Tenase kompleks. Binding av aktivert faktor VIII (FVIIIa) til FIXa i en membran-avhengig måte forbedrer FIXa proteolytisk effektivitet mer enn 10 fem ganger, noe som er kritisk for effektiv blodkoagulering 4.. Til tross for den viktige rollen FVIII spiller i koagulasjon og Tenase kompleks formasjon, er den funksjonell membran-bundet FVIII struktur ennå ikke er løst. For å løse dette, har enkelt lipidbllag nanorør (LNT) rik på fosfatidylserin (PS), i stand til å binde FVIII med høy affinitet 8, 9 og likner den aktiverte blodplater overflaten er utviklet 10. Fortløpende spiralformede organiseringen av FVIII bundet til LNT har vist seg å være effective for strukturbestemmelse av FVIII membran-bundet tilstand av Cryo-EM 5. Funksjon LNT er et ideelt system for å studere protein-protein-og protein-membran interaksjoner av helically organiserte membran-assosiert proteiner av Cryo-EM 11, 12. Cryo-EM har den fordel i forhold til tradisjonelle konstruksjonsmetoder som røntgen-krystallografi og NMR, som prøven blir bevart i det nærmest den fysiologiske miljø (buffer, membran, pH), uten tilsetningsstoffer og isotoper. I tilfelle av FVIII, studere membranbundet struktur med denne teknikk er enda mer fysiologisk relevant, da den LNT likne av størrelse, form og sammensetning av pseudopodia av de aktiverte blodplater, hvor de Tenase komplekser montere in vivo. Defekter og mangel av FVIII årsaken hemofili A, en alvorlig blødning lidelse som påvirker en i 5000 hanner av den menneskelige befolkning 4, 6. Den mest effective terapi for hemofili A er livslang behandling med rekombinant human FVIII (hFVIII). En betydelig komplikasjon av det rekombinante faktor VIII Hemophilia A terapi er utviklingen av inhibitoriske antistoffer mot human formen som påvirker omtrent 30% av hemofili A-pasienter 13. I dette tilfellet, er svin FVIII (pFVIII) konsentrat brukes, som svin FVIII skjermer med lav kryssreaksjon med hemmende antistoffer mot human FVIII og skjemaer funksjonelle komplekser med humant FIXa 7. Er viktig å etablere en membranbundet organisering av både svin og menneske FVIII skjemaer for å forstå den strukturelle grunnlaget for FVIII kofaktor funksjon og implikasjoner for blod hemostase. I denne studien, beskriver vi en kombinasjon av lipid nanoteknologi, Cryo-EM, og struktur analyse laget for å løse membranbundne organisering av to svært homologe FVIII former. De presenterte Cryo-EM data og 3D-strukturer for helically organisert porcine og menneskelig faktor VIII på negativt ladet LNT viser potensialet av den foreslåtte nanoteknologi som grunnlag for strukturbestemmelse av FVIII og membranbundne koagulasjonsfaktorer og komplekser i en fysiologisk membran miljø.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1009">
	<tbody>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:239px;">JEM2100 with LaB6&#160;</td>
			<td style="width:205px;">JEOL Ltd.</td>
			<td style="width:119px;">JEM-2100</td>
			<td style="width:447px;">operated at 200 kV</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:239px;">with TEMCON software</td>
			<td style="width:205px;">JEOL Ltd.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:447px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Gatan626 Cryo-holder</td>
			<td style="width:205px;">Gatan, Inc.</td>
			<td style="width:119px;">626.DH</td>
			<td style="width:447px;">cooled to -175 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">with temperature controler unit</td>
			<td style="width:205px;">Gatan, Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:447px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Gatan 4K x 4K CCD camera</td>
			<td style="width:205px;">Gatan, Inc.</td>
			<td style="width:119px;">US4000</td>
			<td style="width:447px;">4096 x 4096 pixel at 15 microns/pixel physical resolution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Solarus Model 950 plasma cleaner</td>
			<td style="width:205px;">Gatan, Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:447px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Vitrobot Mark IV</td>
			<td style="width:205px;">FEI</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:447px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;"></td>
			<td style="width:205px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:447px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Materials</td>
			<td style="width:205px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:447px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:239px;">Carbon coated 300 mesh 3mm copper grid</td>
			<td style="width:205px;">Ted Pella</td>
			<td style="width:119px;">01821</td>
			<td style="width:447px;">plasma cleaned for 10 s on high power</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:239px;">Quantifoil R2/2 300 mesh</td>
			<td style="width:205px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td style="width:119px;">Q225-CR2</td>
			<td style="width:447px;">Carbon coated 300 mesh Cu grids with 2 mm in diameters holes&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Uranyl acetate dihydrate</td>
			<td style="width:205px;">Ted Pella</td>
			<td style="width:119px;">19481</td>
			<td style="width:447px;">1% solution, filtered</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:239px;">Galactosyl ceramide</td>
			<td style="width:205px;">Avanti Polar Lipids Inc.&#160;</td>
			<td style="width:119px;">860546</td>
			<td style="width:447px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:239px;">Dioleoyl-sn-glycero-phospho-L-serine</td>
			<td style="width:205px;">Avanti Polar Lipids Inc.&#160;</td>
			<td style="width:119px;">840035</td>
			<td style="width:447px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;"></td>
			<td style="width:205px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:447px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Software</td>
			<td style="width:205px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:447px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:239px;">EM software Digital Micrograph</td>
			<td style="width:205px;">Gatan, Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:447px;"><a href="http://www.gatan.com/DM/">http://www.gatan.com/DM/</a></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;">EM software EMAN</td>
			<td style="width:205px;">free download</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:447px;"><a href="http://blake.bcm.edu/emanwiki/EMAN/">http://blake.bcm.edu/emanwiki/EMAN/&#160;</a></td>
		</tr>
		<tr height="31">
			<td height="31" style="height:31px;">EM software Spider</td>
			<td style="width:205px;">free download</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:447px;"><a href="http://spider.wadsworth.org/spider_doc/spider/docs/spider.html">http://spider.wadsworth.org/spider_doc/spider/docs/spider.html</a></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;">EM software IHRSR</td>
			<td style="width:205px;">free download</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:447px;">Programs available from Edward H. Egelman http://people.virginia.edu/~ehe2n/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">EM software (IMOD)</td>
			<td style="width:205px;">free download</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:447px;"><a href="http://bio3d.colorado.edu/imod/">http://bio3d.colorado.edu/imod/&#160;</a></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">EM software (SerialEM)</td>
			<td style="width:205px;">free download</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:447px;"><a href="ftp://bio3d.colorado.edu/pub/SerialEM/">ftp://bio3d.colorado.edu/pub/SerialEM/</a></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">UCSF-Chimera</td>
			<td style="width:205px;">free download</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:447px;"><a href="http://www.cgl.ucsf.edu/chimera/download.html">http://www.cgl.ucsf.edu/chimera/download.html</a></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

helical organization of blood coagulation factor viii on lipid nanotubes

<html> Cryo-elektronmikroskopi (Cryo-EM) 1 er en kraftig metode for å undersøke den funksjonelle struktur av proteiner og komplekser i en hydratisert tilstand og membranmiljø 2.. Koagulasjonsfaktor VIII (FVIII) 3 er et multi-domene blodplasma glykoprotein. Defekt eller mangel av FVIII er årsaken for hemofili type A - en alvorlig blødersykdom. Etter proteolytisk aktivering, FVIII bindes til serin protease faktor IXa på den negativt ladede blodplate-membran, som er avgjørende for normal blodpropper 4.. Til tross for den sentrale rollen FVIII spiller i koagulasjon, er strukturell informasjon for sin membran-bundet tilstand ufullstendig fem. Rekombinant faktor VIII-konsentrat er det mest effektivt medikament mot hemofili type A og kommersielt tilgjengelig FVIII kan uttrykkes som humane eller porcine, begge danner funksjonelle komplekser med human Faktor IXa 6,7. &quot;&gt; I denne studien presenterer vi en kombinasjon av Cryo-elektron mikroskopi (Cryo-EM), anvendt lipid nanoteknologi og struktur analyse for å løse membran-bundet struktur av to svært homologe FVIII former:. Mennesker og svin Metodikken er utviklet i vårt laboratorium til helisk organisere de to funksjonelle rekombinant FVIII former på negativt ladet lipid nanorør (LNT) er beskrevet. de representative resultater viser at vår tilnærming er tilstrekkelig følsom til å angi forskjeller i den spiralformede organisasjon mellom de to sterkt homologe i sekvens (86% sekvensidentitet ) proteiner. Detaljerte protokoller for den spiralformede organisasjon, Cryo-EM, og elektron-tomografi (ET) datainnsamling er gitt. den to-dimensjonale (2D), og tre-dimensjonale (3D) struktur-analyse anvendt for å oppnå de 3D rekonstruksjoner av human-og porcin FVIII-LNT er diskutert. som presenteres menneskelige og svin FVIII-LNT strukturer viser potensialet av den foreslåtte metoden for å beregnese den funksjonelle, membran-bundet organisering av koagulasjonsfaktor VIII med høy oppløsning.

Rekombinant human-og svin FVIII ble med hell arrangert i skruelinjeform på negativt ladede enkelt bilags LNT, likner den aktiverte blodplateoverflaten. Spiral organisering av human-og porcin faktor VIII-LNT var konsistent gjennom de innsamlede digitale mikrografer (figur 2). Kontrollen LNT og den menneskelige og svin FVIII-LNT spiralformede rør ble valgt og segmentert med e2helixboxer.py GUI og innledende datasett som er opprettet med e2workflow.py GUI, Single partikkel alternativ <st...

Watch this Scientific Journal Video about Helical Organization of Blood Coagulation Factor VIII on Lipid Nanotubes at JoVE.com

Helical Organization of Blood Coagulation Factor VIII on Lipid Nanotubes

Helical Organisering av koagulasjonsfaktor VIII på Lipid Nanorør

Vi beskriver her en kombinasjon av Cryo-elektronmikroskopi, lipid nanoteknologi, og struktur-analyse anvendt for å løse membranbundet struktur av to sterkt homologe FVIII former: humane og porcine. Metodikken er utviklet i vårt laboratorium for å helically organisere de to funksjonelle rekombinante FVIII skjemaer på negativt ladet lipid nanorør (LNT) er beskrevet.

Cryo-electron microscopy (Cryo-EM)1 is a powerful approach to investigate the functional structure of proteins and complexes in a hydrated state and ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Simultaneous Synthesis of Single-walled Carbon Nanotubes and Graphene in a Magnetically-enhanced Arc Plasma

Samtidig Synthesis of Single-vegger karbon nanorør og Graphene i en Magnetisk forbedret Arc Plasma

Carbon nanostructures such as single-walled carbon nanotubes (SWCNT) and graphene attract a deluge of interest of scholars nowadays due to their very ...

Localization and Relative Quantification of Carbon Nanotubes in Cells with Multispectral Imaging Flow Cytometry

Lokalisering og Relativ Kvantifisering av karbonnanorør i Celler med Multispectral Imaging flowcytometrisystemer

Carbon-based nanomaterials, like carbon nanotubes (CNTs), belong to this type of nanoparticles which are very difficult to discriminate from carbon-rich ...

Improved Method for the Preparation of a Human Cell-based, Contact Model of the Blood-Brain Barrier

Forbedret fremgangsmåte for fremstilling av en human cellebasert kontakt Model of the Blood-Brain Barrier

The blood-brain barrier (BBB) comprises impermeable but adaptable brain capillaries which tightly control the brain environment. Failure of the BBB has ...

Electrospun Nanofiber Scaffolds with Gradations in Fiber Organization

Elektrospunnede nanofiber Stillas med graderinger i Fiber Organization

The goal of this protocol is to report a simple method for generating nanofiber scaffolds with gradations in fiber organization and test their possible ...

Polyelectrolyte Complex for Heparin Binding Domain Osteogenic Growth Factor Delivery

Polyelektrolytkompleks for Heparin Binding Domain osteogene Growth Factor Levering

During reconstructive bone surgeries, supraphysiological amounts of growth factors are empirically loaded onto scaffolds to promote successful bone ...

Engineering Molecular Recognition with Bio-mimetic Polymers on Single Walled Carbon Nanotubes

Engineering Molecular Recognition med Bio-mimetiske Polymers på enkelt Walled karbonnanorør

Semiconducting single-wall carbon nanotubes (SWNTs) are a class of optically active nanomaterial that fluoresce in the near infrared, coinciding with the ...

DNA Nanotubes as a Versatile Tool to Study Semiflexible Polymers

DNA nanorør som et allsidig verktøy for å studere Semiflexible polymerer

Mechanical properties of complex, polymer-based soft matter, such as cells or biopolymer networks, can be understood in neither the classical frame of ...

Synthesis of Multi-walled Carbon Nanotubes Modified with Silver Nanoparticles and Evaluation of Their Antibacterial Activities and Cytotoxic Properties

Syntese av Multi vegger Karbonnanorør endret med Silver nanopartikler og evaluering av sine antibakterielle aktiviteter og cytotoksiske egenskaper

In this study, multi-walled carbon nanotubes (MWCNTs) were treated with an aqueous sulfuric acid solution to form an oxygen-based functional group. Silver ...

Designing Porous Silicon Films as Carriers of Nerve Growth Factor

Utforme porøse Silicon filmer som bærere av Nerve vekst faktor

Despite the great potential of NGF for treating neurodegenerative diseases, its therapeutic administration represents a significant challenge as the ...

High Throughput Traction Force Microscopy Using PDMS Reveals Dose-Dependent Effects of Transforming Growth Factor-&#946; on the Epithelial-to-Mesenchymal Transition

High Throughput Traction Force Microscopy Using PDMS Reveals Dose-Dependent Effects of Transforming Growth Factor-ÃƒÅ½Ã‚Â² on the Epithelial-to-Mesenchymal Transition

Høy gjennomstrømming traction Force mikroskopi bruke PDMS avslører dose avhengige effekter av transformere vekstfaktor-β på epitel-til-mesenchymal overgang

Cellular contractility is essential in diverse aspects of biology, driving processes that range from motility and division, to tissue contraction and ...