Name: setting-up an in vitro model of rat blood-brain barrier (bbb): a focus on bbb impermeability and receptor-mediated transport
Uploaded: 2014-06-28T14:00:00
Duration: 16 min 26 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Setting-up an In Vitro Model of Rat Blood-brain Barrier BBB: A Focus on BBB Impermeability and Receptor-mediated Transport at JoVE.com

ومن المسلم به الدعم المالي لVECT-حورس من فون الفريدة Interministériel (مشروع FUI / MEDUL) وVECT-حورس والمختبر UMR7259 من الوكالة الوطنية دي لا بحوث (ANR، TIMPAD، VECtoBrain، VEC2Brain، ADHOC والمشاريع التعاونية PREVENTAD) . كما يقر المختبر UMR7259 الدعم المالي من CNRS وإيكس مرسيليا من جامعة.

1. إنتاج الجرذ النجمية لكل إعداد استخدام 10 فئران ويستار حديثي الولادة من كلا الجنسين. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التضحية الفئران عن طريق خفض الرؤوس مع زوج من مقص ونقلها على الفور في طبق بتري الجافة تحت غطاء تدفق الصفحي. إزالة أدمغة من الجمجمة دون المخيخ ونقلها على الفور في طبق بتري تحتوي العازلة تشريح الباردة: تستكمل HBSS مع 1٪ الأبقار مصل الزلال (مستوى منخفض من الذيفان الداخلي BSA)، البنسلين 100 وحدة / مل الستربتوميسين و100 ميكروغرام / مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خفض العقول في النصف، للفصل بين نصفي الكرة المخية (2) ونقلها إلى طبق بيتري نظيفة مع العازلة تشريح على الجليد. قطع العصب البصري وإزالة السحايا تحت stereomicroscope. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل قطعة القشرية على نطاق واسع في 50 مل من العازلة تشريح الباردة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع قطعة القشرية من 3 العقول في أنبوب 15 مل الصقر وفصل من قبل pipetting صعودا وهبوطا انقلابلو مرات مع 10 مل ماصة المتاح مجهزة مع طرف زرقاء في 6 مل من التربسين 0.05٪ - EDTA 0.02٪ لمدة 5 دقائق عند 37 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 24 مل من DMEM تستكمل مع FBS 10٪ والمضادات الحيوية التالية، البنسلين 100 وحدة / مل الستربتوميسين و100 ميكروغرام / مل، وسائل الاعلام اسمه وسائل الاعلام الخلية الدبقية (GCM)، وأجهزة الطرد المركزي في 300 x ج لمدة 5 دقائق على RT. وقد تم اختيار دفعات FBS والتحقق من صحتها لنمو وبقاء cutures نجمية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> resuspend الكرية تحتوي على خلايا فصلها في 10 مل GCM وصفيحة إلى 75 سم 2 T-قارورة (T75). تغيير المتوسطة في اليوم التالي لإزالة الحطام الخلية والحمض النووي. استبدال سائل الإعلام والثقافة مرتين في الأسبوع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 1 اسبوع من الانتشار، ويهز بلطف الخلايا الدبقية مع شاكر المداري في 60 دورة في الدقيقة خلال 24 ساعة عند 37 درجة مئوية في GCM. إذا لا يمكن أن توضع T75 في حاضنة مع 5٪ CO 2/95٪ الهواء عند 37 درجة مئوية جو مرطب، تكملة وسائل الإعلام مع 5 ملي HEPES. غسل الخلايا مرتين لصemove خلايا دبقية غير ملتصقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد ثلاثة أسابيع من البذر، وغسل الخلايا مرتين مع DPBS دون الكالسيوم والمغنيسيوم. إضافة 3 مل من التربسين 0.05٪ الحارة-EDTA 0.02٪، واحتضان عند 37 درجة مئوية والانتظار حتى يتم فرقت طبقة الخلايا (عادة 5 دقائق). تمنع النشاط التربسين وذلك بإضافة 10 مل من GCM، ونقل تعليق خلية في 15 مل فالكون أنبوب وأجهزة الطرد المركزي في 120 x ج لمدة 8 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> resuspend الكرية نجمية في 90٪ FBS - 10٪ DMSO، نقلها إلى cryovials (2 × 10 6 خلايا في cryovial) وتخزينها في النيتروجين السائل. </li></ol> 2. عزل الدماغ الجرذ Microvessels تمت الموافقة على إجراءاتنا التجريبية من قبل لجنة الأخلاقيات من كلية الطب في مرسيليا وتتفق مع اللوائح الوطنية والأوروبية (توجيه الاتحاد الأوروبي رقم 86/609). تم بذل كل الجهود لتقليل معاناة الحيوانات وتقليل عدد الحيوانات المستخدمة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لكل إعداد واحد لexperimenteص، استخدام 3 فئران ويستار خمسة أسابيع من العمر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يوم الاثنين من الأسبوع الأول، وإعداد 2 قوارير T75 بواسطة طلاء مع نوع الكولاجين الرابع وفبرونيكتين، سواء على 1 ميكروغرام / سم 2 في الماء المعقم ثقافة (10 مل لكل T75). تسمح التمسك عند 37 درجة مئوية حتى microvessel البذر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صباح يوم الأربعاء من الأسبوع الأول، الموت ببطء الفئران تحت تدفق متزايد من CO 2 للحث على النعاس، وفقدان الموقف والتنفس انقطاع، ثم تليها خلع عنق الرحم. رش رؤساء مع الايثانول 70٪. قطع الرؤوس مع زوج من مقص ونقلها إلى طبق بتري الجافة تحت غطاء تدفق الصفحي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة أدمغة من الجمجمة دون المخيخ والأعصاب البصرية، ثم نقلها إلى طبق بيتري المبردة على الجليد ومليئة العازلة تشريح الباردة (HBSS تستكمل مع 1٪ BSA، البنسلين 100 وحدة / مل الستربتوميسين و100 ميكروغرام / مل) . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خفض العقول في نصف لفصل نصفي الكرة المخية والدماغ المتوسط ​​2 منفصلة عن لebrain. نقل forebrains في طبق بتري نظيفة على الجليد مع العازلة تشريح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يستغرق بضعة نصفي الكرة الأرضية في طبق بتري جديدة مع العازلة تشريح البارد لإزالة بعناية السحايا من forebrains تحت stereomicroscope مع N ° 5 ملقط المنحني. ثم، وتنظيف المناطق الداخلية من الدماغ لإزالة حاف المايلين والحصول على قذيفة من القشرة. وينبغي لهذه الخطوات لا تأخذ أكثر من 2 ساعة للحفاظ على الأنسجة وبقاء الخلية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فصل القشرة من 3 إلى 6 أدمغة مل من العازلة تشريح الباردة في 7 مل الخالط Dounce بنسبة 10 صعودا وهبوطا السكتات الدماغية مع كل من المطاحن 2 من التصاريح مختلفة، 71 ميكرومتر تليها 20 ميكرون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقسيم التعليق للحصول على ما يعادل 1 القشرة في 1 مل من 50 مل فالكون أنبوب وأجهزة الطرد المركزي في 1000 x ج لمدة 5 دقائق على RT. تجاهل طاف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هضم تعليق من القشرة 1 مع 1 مل من محلول الأنزيمية التي تحتوي على مزيج من collagenases / dispase (60 ميكروغرام / مل R11؛ 0.3 U / مل)، الدناز النوع الأول (35 ميكروغرام / مل - 20 K وحدة / مل) والجنتاميسين (50 ميكروغرام / مل) في شاكر لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلط 1 مل من 1 هضم القشرة مع 10 مل من 25٪ BSA / HBSS 1X ومنفصلة بواسطة الطرد المركزي كثافة تعتمد على 3،600 x ج لمدة 15 دقيقة في RT. نقل بعناية القرص العلوي (المايلين والدماغ حمة) وطاف في أنبوب 50 مل نظيفة فالكون وتكرار الطرد المركزي. الحفاظ على بيليه الناتجة تحتوي على microvessels الدماغ في 4 درجات مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجاهل بعناية القرص العلوي وطاف. في resuspend كل من الكريات الناتجة تحتوي على microvessels الدماغ مع 1 مل من البرد HBSS 1X ونقل إلى أنبوب 50 مل نظيفة فالكون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل microvessels بإضافة 20 مل من البرد HBSS 1X وأجهزة الطرد المركزي في 1000 x ج لمدة 5 دقائق. تجاهل طاف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مزيد من هضم microvessels من 1 القشرة مع 1 مل من نفس الحل الأنزيمية كما هو موضح في الخطوة 2.9 خلال 1 ساعة عند 37 درجة مئوية في ركلات الترجيحالعكر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم، مزج microvessels هضمها من كل من 3 قشرات في أنبوب واحد وكذلك فصل إلى قسمين 50 مل أنابيب فالكون للحصول على microvessels المستخرجة من تعادل واحد ونصف (1.5) القشرة في الأنبوب. إضافة 30 مل من العازلة تشريح الباردة وأجهزة الطرد المركزي في 1000 x ج لمدة 5 دقائق على RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> resuspend الكرية microvessel في 10 مل من DMEM/F12 تستكمل مع 20٪ الصفيحات البقري البلازما المستمدة الفقراء في الدم، الخلايا الليفية الأساسية عامل النمو (bFGF، 2 نانوغرام / مل)، الهيبارين (100 ميكروغرام / مل)، جنتاميسين (50 ميكروغرام / مل) وHEPES (2.5 ملم)، واسمه وسائل الاعلام الخلايا البطانية (ECM) تستكمل مع بوروميسين في 4 ميكروغرام / مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اتخاذ المغلفة 2 قوارير T75 من الحاضنة، نضح تتجاوز طلاء وطبق على microvessels من كل أنبوب في واحدة قارورة T75 (microvessels المستخرجة من القشرة 1.5 في قارورة T75). </li></ol> 3. تنقية وانتشار المكتب الإقليمي Primocultures <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنقية: من الأربعاء إلى الجمعة، إضافة puromفايز في 4 ميكروغرام / مل إلى وسائل الإعلام والثقافة. تغيير متوسطة يوم الخميس. يوم الجمعة، وغسل الخلايا وإضافة بوروميسين في 2 ميكروغرام / مل حتى يوم الاثنين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الانتشار: يوم الاثنين من الأسبوع الثاني، وغسل الخلايا وإضافة الأنسولين، ترانسفيرين والصوديوم زيلونيت تكملة لوسائل الإعلام والثقافة حتى الثقافات تصل إلى 90٪ التقاء يوم الأربعاء من الأسبوع الثاني. </li></ol> 4 التمايز: إعداد نموذج في المختبر BBB <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يوم الاثنين من الأسبوع الثاني، وإعداد مرشحات (البولي ايثلين و12 بئرا، المسام حجم 1.0 ميكرون) من خلال طلاء مع مزيج من نوع الكولاجين الرابع وفبرونيكتين سواء في 0.5μg/cm 2 في الماء المعقم ثقافة (500 ميكرولتر من المزيج في المقصورة العلوية و 1.5 مل من الماء المعقم الثقافة في الطبقة السفلى من المقصورة). تسمح التمسك عند 37 درجة مئوية حتى المكتب الإقليمي البذر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يوم الاثنين من الأسبوع الثاني، وذلك قبل خمسة أيام من إنشاء الثقافة المشتركة، ذوبان الجليد في الخلايا النجمية من cryovials عند 37 درجة مئوية ونقلفي فالكون 15 مل مع 10 مل GCM. الطرد المركزي تعليق في 120 x ج لمدة 8 دقائق في RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> resuspend الكرية نجمية في GCM وصفيحة في كثافة 30 × 10 3 خلية لكل سم 2 في لوحات 12 أيضا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأربعاء من الأسبوع الثاني، قبل تفكك المكتب الإقليمي مع التربسين، ويغسل مرتين مرشح قبل المغلفة مع DMEM/F12 المتوسط. قبل ملء الغرف مع ECM: 1.5 مل في أسفل المقصورة و 0.5 مل في المقصورة العليا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يوم الأربعاء من الأسبوع الثاني، ويغسل مرتين مع المكتب الإقليمي DPBS دون الكالسيوم والمغنيسيوم. إضافة 4 مل من التربسين الدافئ 0.05٪ - EDTA حل 0،02٪ عند 37 درجة مئوية في قارورة T75 خلال 30 ثانية بالضبط. ثم إزالة 3.5 مل من محلول التربسين ومراقبة تحت المجهر. عندما تبدأ طبقة الخلايا لفصل من المصفوفة، ومساعدتهم من خلال استغلال بلطف حافة القارورة T75 حتى جميع الخلايا العائمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 9 مل من ECM في T75 القارورة ونقل في أنبوب 15 مل الصقر. فصل بلطف جدا الخليةتعليق من قبل pipetting صعودا وهبوطا 4 مرات مع ماصة 10 مل مزودة غيض الأصفر (تجنب إنتاج فقاعات في الحل). عد الخلايا في التعليق (حوالي 3 × 10 6 cells/T75) وطبق على الفور على مرشحات قبل المغلفة والمعبأة سلفا في مناطق ذات كثافة عالية (160 × 10 3 خلية / تصفية بالتالي ما يقرب من 18 filters/T75) (الشكل 8 ). في اليوم التالي (الخميس) مرتين تغيير وسيلة من المقصورة العلوية لإزالة الحطام الخلية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الخميس الأسبوع الثاني، وقبل يوم من إنشاء الثقافة المشتركة، تحل محل وسائل الإعلام الثقافة نجمية بنسبة 1.5 مل من وسائل الإعلام التمايز (ECM مع الهيدروكورتيزون في 500 نانومتر) التي يمكن أن تستكمل مع 1/3 المتوسط ​​مكيفة من المقصورة القاعدية من السابق شارك في الثقافة (3 أيام من الاتصال بين الخلايا البطانية والخلايا النجمية). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويعرف الجمعة من الاسبوع الثاني كما في اليوم 0 من التمايز؛ استبدال سائل الإعلام والثقافة من كونتا الفلاترining في المكتب الإقليمي مع وسائل الإعلام التمايز. نقل المكتب الإقليمي الفلاتر في الآبار التي تحتوي على الخلايا النجمية. في ظل هذه الظروف، في المختبر نماذج التفريق والتعبير عن البروتينات المرتبطة مفترق خلال 3 أيام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نماذج حفاظ على التمايز الأمثل خلال 3 أيام أخرى، وبين الاثنين والاربعاء من الاسبوع الثالث. </li></ol>

Michel Khrestchatisky is director of the UMR7259 laboratory, co-founder and scientific counsel of VECT-HORUS biotechnology company.

وضعت العديد من الأدوية لعلاج الجهاز العصبي المركزي (CNS) اضطرابات غير قادرين على الوصول إلى لحمة الدماغ في تركيزات ذات الصلة علاجيا. ويحمي الدماغ BBB النسيج العصبي من تذبذب تكوين البلازما، من العوامل الممرضة، ويحافظ على التوازن من لحمة الدماغ عن طريق تقييد تدفق غير محددة من الأيونات، والببتيدات والبروتينات وحتى الخلايا داخل وخارج الدماغ 1. وبفعل الخصائص BBB والتي تحتفظ بها القرب الحميم وعبر الحديث بين الطبقة المتخصصة microvessel الدماغ الخلايا البطانية والعناصر المجاورة من حدة العصبية الدبقية والأوعية الدموية (NGVU) مثل الخلايا العصبية والخلايا الدبقية (على نحو أدق نجمية نهاية أقدام)، وpericytes مغمد في الغشاء القاعدي الذي يتألف أساسا من نوع الكولاجين الرابع، فبرونيكتين، laminin والبروتيوغليكان 2،3. Pericytes تغطية حوالي 22 - 32٪ من البطانة على المستوى الشعري وتضطلع بدور هامدور في تنظيم انتشار البطانة، الأوعية الدموية والعمليات الالتهابية. الخلايا البطانية تشكيل ورقة المستمر الذي يغطي السطح الداخلي للالشعيرات الدموية. مترابطة من قبل TJS، والتي تشكل بنية تشبه الحزام في المنطقة القمية والتي تسهم في الاستقطاب الخلية. الخلايا النجمية تنظيم خصائص BBB ومصادر من العوامل التنظيمية الهامة مثل TGF-β، GDNF، bFGF وIL-6. الخلايا النجمية نقص في GFAP مع وظيفة غير مكتملة ليست قادرة على تنظيم خصائص BBB 4. الخلايا العصبية لا يشاركون مباشرة هيكليا في تشكيل BBB ولكن أيضا تنظيم جوانب هامة من البروتين التعبير وظائف BBB 5. من أجل مواصلة دراسة بنية، علم وظائف الأعضاء وعلم الأمراض من BBB، وقد وضعت في المختبر نماذج من BBB كأدوات للبحث. وقد تم استخراج الخلايا البطانية الدماغ من الأنواع المختلفة لتنفيذ نماذج في المختبر BBB مقرهاعلى انخفاض مرور الثقافات الأولية من الأبقار 6،7، 8،9 الخنازير، الفئران 10،11،12، والماوس 13 وأيضا الإنسان 14،15. ومن المعروف أن هذه النماذج لمحاكاة في الجسم الحي BBB، ولا سيما عندما شارك في تربيتها مع الخلايا الدبقية من الفئران أو الفئران و / أو pericytes 16،12، و / أو السلف المستمدة من الخلايا النجمية العصبية 17 و / أو الخلايا العصبية 18. غالبا ما تنتج نماذج &quot;في مختبر&quot; من القوارض لأنها تسمح في المختبر / في التجارب المجراة ومقارنات و / أو دراسة الخلايا البطانية الدماغ المنتجة من النماذج المعدلة وراثيا 19. وضعت حديثا في نماذج BBB المختبر كما تم تصميمها للمساعدة في التنبؤ امتصاص الدماغ من المرشحين المحتملين للمخدرات CNS قبل في الجسم الحي اختبار 15،20،21،3،6،22،11،23. وعادة ما تستخدم في المختبر نماذج BBB للمقارنة نقل المخدرات مع: ط) المعروف تغلغل في الجهاز العصبي المركزي أو مع لترآه نفاذية عبر BBB وليس له آثار المركزية، والثاني) الظاهر بي من نفس العقاقير قياس في النماذج الحيوانية من نفس النوع. الأدوية التي تمر بسهولة BBB هي في معظمها محبة للدهون وعبور أغشية الخلايا البطانية الدماغ عن طريق بوساطة الدهون نشرها مجانا (الكافيين، كاربامازيبين، الخ). المخدرات تنقل سلبا مثل الديجوكسين، فيراباميل أو السيكلوسبورين A تنبثق بنشاط الدماغ البطانية نقل هروب رأس المال مثل P-GP. ومع ذلك، فإن العديد من الجزيئات العلاجية المطورة حديثا هي المستحضرات الصيدلانية البيولوجية، مثل البروتينات المؤتلف، الرناوات siRNAs أو الاجسام المضادة. معظمهم لا عبور BBB بسبب: أ) عدم وجود نقل معينة، والثاني) طبقة معبأة بإحكام من الخلايا البطانية التي تمنع الجزيئات عالية الوزن الجزيئي من تمر مرور paracellular. مع هذه الحدود، وقد تم تنفيذ استراتيجيات &quot;حصان طروادة&quot; باستخدام ناقلات (الأجسام المضادة، الببتيدات) ضد مستقبلات المعروفة في BBB، والمشاركة طن مستقبلات بوساطة النقل أو transcytosis (RMT)، مثل ترانسفيرين (TF) مستقبلات (TFR)، ومستقبلات الأنسولين (IR)، أو أعضاء من مستقبلات LDL (LDLR) المتعلقة بالأسرة مستقبلات (LDLR، LRP1). تم العثور على هذه المستقبلات على الشعيرات الدموية في الدماغ ومعزولة في BBB في الجسم الحي 24،25. ملامح النسخي لهذه المستقبلات، ولا سيما تلك الأسرة LDLR، تم تحليل ومقارنة بين الخلايا البطانية الدماغ والخلايا البطانية الدماغ شارك في تربيتها مع الخلايا النجمية أو في الشعيرات الدموية في الدماغ مباشرة بعد استخراجها من الدماغ 26. Pardridge 24 فتح المجال مع الأجسام المضادة OX-26 ضد مستقبلات ترانسفيرين (TFR)، تليها أجسام مضادة ضد مستقبلات الانسولين والانسولين مستقبلات عامل النمو 27،28. مع هذه النواقل مقرها الأجسام المضادة، وقد وضعت تقنيات ArmaGen لBBB الجزيئية طروادة الحصان منصة تكنولوجيا لتوصيل الأدوية، بما في ذلك البروتينات، عبر BBB 29. الالأدب غنية في التعبير LRP1 بيانات تظهر في الخلايا البطانية الدماغ ودورها بوصفها قوية التقامي / زبال مستقبلات. اقترح تحليل لطخة غربية أن يتم التعبير عن LRP1 في الكسور المخصب في الشعيرات الدموية في الدماغ والمخ في الفئران الخلايا البطانية الشعرية 30. شركات مثل Angiochem الهدف LRP1 مع ناقلات الببتيد المستمدة من أبروتينين التي تعزز كفاءة تدفق المخدرات عبر BBB 31. ومع ذلك، وتشارك أيضا في LRP1 النقل النشط من Aβ وهروب رأس المال في / تصريح من الدماغ لحمة الدم 32. تنطوي هذه البيانات LRP1 في نقل ثنائي الاتجاه عبر BBB اعتمادا على بروابط لها. biOasis تطور التكنولوجيا تجاوز باستخدام melanotransferrin البروتين لنقل البيولوجية مثل الانزيمات الليزوزومية والأجسام المضادة عبر BBB-33 بينما VECT حورس تطور ناقلات الببتيد التي تستهدف LDLR 34. هناك بيانات تشير إلى أن الدوريات طويلة المدى وLDLR يمكن استخدامها لنقل فرقجزيئات erent مثل الانزيمات الليزوزومية 35،36 المجمعات أو جسيمات متناهية الصغر عبر BBB 37. لدينا مجال الاهتمام هو تسليم المخدرات الى الجهاز العصبي المركزي باستخدام جزيئات النواقل وvectorized-المرشحين المخدرات لعلاج أمراض الجهاز العصبي المركزي. على وجه الخصوص، تسليم المخدرات عبر BBB لابد من النظر في سياق neuroinflammation، وهي العملية التي قد تختلف في مداها، ولكن ربما كان هذا هو مشترك بين جميع الآفات والأمراض الجهاز العصبي المركزي، بما في ذلك التهاب الدماغ، والتصلب المتعدد، ومرض الزهايمر الخ Neuroinflammation ويرتبط مع التهاب BBB وربما مع تغييرات في وظائف الأعضاء ونفاذية BBB معتبرا أن paracellular والنقل العابر للخلايا يمكن تضخيمها في الحالات المرضية 38،39،40،41،42،43. على سبيل المثال، TNF-α، القرص، والسيتوكينات الأخرى تعدل الالتهاب، وأظهرت التجارب في المختبر مع نماذج BBB أنها يمكن أن يغير خصائص paracellular من اله البطانية أحادي الطبقة خلية 38،39،40 والتي TNF-α يؤدي أيضا إلى زيادة في النقل العابر للخلايا من LDL 41، 42 holotransferrin واللاكتوفيرين 43. كان هدفنا لتطوير وتميز على الوجه الأمثل، وتكرار للغاية مسانج الفئران BBB النموذج باستخدام المشترك الثقافات من الخلايا البطانية الدماغ الأولية والخلايا النجمية. كنا فئران ويستار القديمة 5 أسبوع وحديثي الولادة لإنتاج الخلايا البطانية الدماغ والإنتاج نجمية على التوالي. كان واحدا تحديا لوضع بروتوكول يسمح للإنتاج &quot;استنساخه الأسبوعية&quot; نماذج BBB. للوصول إلى هذا الهدف، تم تنفيذ كل خطوة من بروتوكول الإنتاج في أيام محددة من الأسبوع، بدءا من إنتاج microvessel المخ يوم الأربعاء من الأسبوع الأول. أجريت تشريح كل أسبوع تقريبا خلال السنوات ال 3 الماضية. لزيادة تحسين استنساخ الثقافات، تم إنشاء نظام لضمان الجودة. جميع reagenوالمشار إليه البحوث والمواد الكيميائية في قاعدة بيانات (تاريخ الدخول، الأوراق المالية، ومدة الصلاحية، وغيرها). وقد تميزت نموذج التالية عددا من المعايير، مثل المنظمة الخلايا البطانية والنقاء، طير، LY النفاذية، ردا على وكلاء الموالية للالتهابات، والتعبير النوعي والكمي للبروتينات TJ، وظائف من الناقلين هروب رأس المال مثل P-GP، ومستقبلات المشاركة في transcytosis عبر أحادي الطبقة الخلية البطانية مثل معدل الخصوبة الاجمالي أو LDLR.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="666">
	<tbody>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:189px;">Product</td>
			<td style="width:149px;">Company</td>
			<td style="width:153px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:175px;">Comments / expiration term</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:189px;">BSA fraction V low endotoxin</td>
			<td style="width:149px;">PAA</td>
			<td style="width:153px;">K45-011-500g</td>
			<td style="width:175px;">4 &#176;C&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;width:189px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td style="width:149px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">15140-122</td>
			<td style="width:175px;">&#160;- 20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:189px;">0,05% Trypsin-EDTA (1X)</td>
			<td style="width:149px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">25300-054</td>
			<td style="width:175px;">&#160;- 20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;width:189px;">DMEM High Glucose</td>
			<td style="width:149px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">61965-026</td>
			<td style="width:175px;">4 &#176;C&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="36">
			<td height="36" style="height:36px;width:189px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:149px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">10270-098</td>
			<td style="width:175px;">&#160;- 20 &#176;C / 1 year</td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:189px;">T75 flasks</td>
			<td style="width:149px;">Becton Dickinson Falcon</td>
			<td style="width:153px;">353135</td>
			<td style="width:175px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:189px;">HEPES buffer (1 M)</td>
			<td style="width:149px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">15630-056</td>
			<td style="width:175px;">4 &#176;C / 1 year</td>
		</tr>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:51px;width:189px;">Collagene type IV mouse (10 x 1 mg)</td>
			<td style="width:149px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:153px;">356233</td>
			<td style="width:175px;">&#160;- 20 &#176;C / 1 month</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:189px;">Fibronectin humain plasma (5 mg)</td>
			<td style="width:149px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:153px;">356008</td>
			<td style="width:175px;">&#160;- 20 &#176;C / 1 month</td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:189px;">Vannas Spring Scissors, straight (9 cm)</td>
			<td style="width:149px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:153px;">91500-09</td>
			<td style="width:175px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:189px;">Scissors, straight (9 cm)</td>
			<td style="width:149px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:153px;">14568-09</td>
			<td style="width:175px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:189px;">Forceps Dumont #5/45 (11 cm)</td>
			<td style="width:149px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:153px;">11251-35</td>
			<td style="width:175px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:189px;">Graefe Forceps, tip width 0,8 mm</td>
			<td style="width:149px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:153px;">11050-10</td>
			<td style="width:175px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:189px;">Graefe Forceps, curve tip width 0,8 mm</td>
			<td style="width:149px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:153px;">11051-10</td>
			<td style="width:175px;"></td>
		</tr>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:51px;width:189px;">Collagenases / Dispase mix (2 x 5 mg)</td>
			<td style="width:149px;">Roche Diagnostics</td>
			<td style="width:153px;">05 401 054 001</td>
			<td style="width:175px;">- 20 &#176;C / 3 months</td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:189px;">DNase I (100 mg / 569 KU / mg)</td>
			<td style="width:149px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">DN25-100 mg</td>
			<td style="width:175px;">&#160;- 20 &#176;C / 1 year</td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;width:189px;">Gentamicin (10 mg/mL)</td>
			<td style="width:149px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">15710-049</td>
			<td style="width:175px;">4 &#176;C / 1 year</td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;width:189px;">DMEM/F12</td>
			<td style="width:149px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">31331-028</td>
			<td style="width:175px;">4 &#176;C&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="49">
			<td height="49" style="height:49px;width:189px;">Bovine serum from platelet poor plasma (500 mL)</td>
			<td style="width:149px;">Clinisciences</td>
			<td style="width:153px;">BT-214-100</td>
			<td style="width:175px;">&#160;- 20 &#176;C / 1 year</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:189px;">bFGF (10 &#181;g)</td>
			<td style="width:149px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">13256-029</td>
			<td style="width:175px;">&#160;- 20 &#176;C / 6 months</td>
		</tr>
		<tr height="49">
			<td height="49" style="height:49px;width:189px;">Heparine Na salt from porcine mucosa Grade I</td>
			<td style="width:149px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">H3149-100KU</td>
			<td style="width:175px;">4 &#176;C / 1 year</td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;width:189px;">Puromycin</td>
			<td style="width:149px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">P8833-10 mg</td>
			<td style="width:175px;">&#160;- 20 &#176;C / 6 months</td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;width:189px;">ITSX</td>
			<td style="width:149px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">51500-056</td>
			<td style="width:175px;">4 &#176;C / 1 year</td>
		</tr>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:51px;width:189px;">Polyethylene hanging cell insert for 12-well plates</td>
			<td style="width:149px;">Millipore</td>
			<td style="width:153px;">PIRP15R48</td>
			<td style="width:175px;">Porosity: 1 &#181;m 
			Surface: 1,1 cm2</td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:189px;">Hydrocortisone</td>
			<td style="width:149px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">H0888-1 g</td>
			<td style="width:175px;">&#160;- 20 &#176;C / 1 year</td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;width:189px;">Mouse anti-CD31 / PECAM&#160;</td>
			<td style="width:149px;">Chemicon</td>
			<td style="width:153px;">MAB1393, clone TLD-3A12 (1 mg/mL)</td>
			<td style="width:175px;">1/200 - fixation PFA 4%</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:189px;">Rabbit anti-Von Willebrand</td>
			<td style="width:149px;">Chemicon</td>
			<td style="width:153px;">AB7356</td>
			<td style="width:175px;">1/200 - fixation PFA 4%</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:189px;">Mouse anti-Desmine</td>
			<td style="width:149px;">Chemicon</td>
			<td style="width:153px;">MAB3430</td>
			<td style="width:175px;">1/200 - fixation PFA 4%</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:189px;">Mouse anti-Vimentine</td>
			<td style="width:149px;">Invitrogen, Zymed</td>
			<td style="width:153px;">08-0052 clone V9, (58 &#181;g/mL)&#160;</td>
			<td style="width:175px;">1/50 - fixation PFA 4%</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:189px;">Mouse anti-Claudin-5</td>
			<td style="width:149px;">Invitrogen, Zymed</td>
			<td style="width:153px;">35-2500, (500 &#181;g/mL)</td>
			<td style="width:175px;">1/200 - fixation PFA 4%</td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:189px;">Rabbit anti-ZO-1</td>
			<td style="width:149px;">Invitrogen, Zymed</td>
			<td style="width:153px;">61-7300 (250 &#181;g/mL)</td>
			<td style="width:175px;">1/200 - fixation PFA 4%</td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:189px;">Rabbit anti-Occludine&#160;</td>
			<td style="width:149px;">Invitrogen, Zymed</td>
			<td style="width:153px;">71-1500 (250 &#181;g/mL)</td>
			<td style="width:175px;">1/200 - fixation PFA 4%</td>
		</tr>
		<tr height="72">
			<td height="72" style="height:72px;width:189px;">Alexa fluor 488, 594 conjugated secondary antibodies</td>
			<td style="width:149px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td style="width:175px;">1/800</td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:189px;">Lucifer yellow CH, dilithium salt</td>
			<td style="width:149px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">L0259</td>
			<td style="width:175px;">&#160;- 20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;width:189px;">TNF-a Human</td>
			<td style="width:149px;">PeproTech</td>
			<td style="width:153px;">300-01A</td>
			<td style="width:175px;">&#160;- 20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:189px;">Rat MCP-1 ELISA Kit</td>
			<td style="width:149px;">PeproTech</td>
			<td style="width:153px;">900-K59</td>
			<td style="width:175px;">4 &#176;C / - 20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="49">
			<td height="49" style="height:49px;width:189px;">Mouse anti-P-glycoprotein</td>
			<td style="width:149px;">Covance, Eurogentec</td>
			<td style="width:153px;">SIG-38710-1000, clone C219 (1mg/mL)</td>
			<td style="width:175px;">1/400 - fixation PFA 4% 
			1/200 (western blot)</td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:189px;">Rabbit anti-GLT-1</td>
			<td style="width:149px;">Abcam</td>
			<td style="width:153px;">ab41621</td>
			<td style="width:175px;">1/1000 (western blot)</td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:189px;">Rhodamine 123</td>
			<td style="width:149px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">83702</td>
			<td style="width:175px;">4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:189px;">Verapamil hydrochloride</td>
			<td style="width:149px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">V4629</td>
			<td style="width:175px;">4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:189px;">Cyclosporine A</td>
			<td style="width:149px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:153px;">30024</td>
			<td style="width:175px;">4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="122">
			<td height="122" style="height:123px;width:189px;">Monoclonal anti a2 Macroglobulin Receptor (CD91, LRP1) against b-chain of amino acid 4291-4344 within an EGF repeat</td>
			<td style="width:149px;">American Diagnostica</td>
			<td style="width:153px;">3501 (100 &#181;g/mL)</td>
			<td style="width:175px;">1/5 - fixation PFA 4%</td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;width:189px;">Mouse anti-LDLR</td>
			<td style="width:149px;">R&#38;D systems</td>
			<td style="width:153px;">AF2255 (200 &#181;g/mL)</td>
			<td style="width:175px;">1/50 - fixation PFA 4%</td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;width:189px;">Rat transferrin-Cy3</td>
			<td style="width:149px;">Gentaur</td>
			<td style="width:153px;">JOR160050</td>
			<td style="width:175px;">4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;width:189px;">DiILDL</td>
			<td style="width:149px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:153px;">L-3482</td>
			<td style="width:175px;">4 &#176;C</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

setting-up an in vitro model of rat blood-brain barrier (bbb): a focus on bbb impermeability and receptor-mediated transport

حاجز الدم في الدماغ (BBB) ​​ينظم تحديدا تدفق الجزيئية والخلوية بين الدم والأنسجة العصبية. كان هدفنا لتطوير وتميز مسانج الفئران تكرار للغاية في نموذج المختبر من BBB باستخدام المشترك الثقافات من الفئران الخلايا البطانية الدماغ الأولية (المكتب الإقليمي) والخلايا النجمية لدراسة مستقبلات المشاركة في transcytosis عبر أحادي الطبقة الخلية البطانية. تم عزل الخلايا النجمية عن طريق تشريح الميكانيكية التالية الهضم التربسين وجمدت في وقت لاحق شارك في الثقافة. تم عزل المكتب الإقليمي من القشور الفئران القديمة 5 أسابيع. تم تنظيف أدمغة السحايا والمادة البيضاء، وفصلها ميكانيكيا التالية الهضم الأنزيمية. بعد ذلك، تم طرد جناسة الأنسجة في ألبومين المصل البقري لفصل أجزاء السفينة من النسيج العصبي. خضع شظايا سفينة الهضم الأنزيمية الثانية إلى الخلايا البطانية خالية من المصفوفة خارج الخلية الخاصة بهم. تم جمعة المتبقية الخلايا تلويث مثل pericytesurther القضاء عليه من خلال طلاء شظايا في microvessel التي تحتوي على بوروميسين المتوسط. كانوا ثم passaged على مرشحات لاشتراكهما في الثقافة مع الخلايا النجمية نمت على الجزء السفلي من الآبار. أعرب المكتب الإقليمي مستويات عالية من مفرق ضيق (TJ) البروتينات مثل occludin، claudin-5 وZO-1 مع توطين نموذجية في حدود الخلية. وصلت إلى المقاومة الكهربائية transendothelial (طير) من الدماغ الطبقات الوحيدة البطانية، مما يدل على ضيق TJS 300 أوم · 2 سم في المتوسط. كانت معاملات نفاذية البطانية (PE) لوسيفر الصفراء (لي) استنساخه للغاية بمتوسط ​​قدره 0.26 ± 0.11 × 10 -3 سم / دقيقة. أعرب الخلايا البطانية في الدماغ التي تنظم في الطبقات الوحيدة للهروب رأس المال نقل ف بروتين سكري (P-GP)، أظهر النقل الاستقطاب من رودامين 123، ويجند لP-GP، وأظهر النقل المحددة من ترانسفيرين-CY3 وDiILDL عبر أحادي الطبقة الخلية البطانية. في الختام، ونحن نقدم بروتوكول للإقامة في المختبرنموذج BBB التي هي تكرار للغاية نظرا لأساليب ضمان الجودة، والتي هي مناسبة للبحث في نقل BBB والمستقبلات.

Watch this Scientific Journal Video about Setting-up an In Vitro Model of Rat Blood-brain Barrier BBB: A Focus on BBB Impermeability and Receptor-mediated Transport at JoVE.com

Setting-up an In Vitro Model of Rat Blood-brain Barrier BBB: A Focus on BBB Impermeability and Receptor-mediated Transport

وضع ما يصل إلى<em&gt; في المختبر</em&gt; نموذج من الفئران حاجز الدم في الدماغ (BBB): التركيز على BBB عدم النفاذ والنقل مستقبلات بوساطة

كان الهدف من هذه الدراسة للتحقق من صحة استنساخ لنموذج BBB في المختبر تنطوي على الفئران مسانج شارك في ثقافة من الخلايا البطانية والخلايا النجمية. أحادي الطبقة الخلية البطانية قدم عالية ومنخفضة النفاذية طير LY. التعبير عن البروتينات TJ محددة، تم تقييم الاستجابات الوظيفية للالتهاب وظائف النقل والمستقبلات.

The blood brain barrier (BBB) specifically regulates molecular and cellular flux between the blood and the nervous tissue. Our aim was to develop and ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Setting-up an In Vitro Model of Rat Blood-brain Barrier (BBB): A Focus on BBB Impermeability and Receptor-mediated Transport

MRI-guided Disruption of the Blood-brain Barrier using Transcranial Focused Ultrasound in a Rat Model

التصوير بالرنين المغناطيسي موجهة تعطيل حاجز الدم في الدماغ باستخدام الموجات فوق الصوتية المركزة عبر الجمجمة في نموذج الفئران

Focused ultrasound (FUS) disruption of the blood-brain barrier (BBB) is an increasingly investigated technique for circumventing the BBB1-5. The BBB is a ...

Rat Model of Blood-brain Barrier Disruption to Allow Targeted Neurovascular Therapeutics

للسماح المستهدفة نموذج الفئران من تعطيل حاجز الدم في الدماغ التداوي عائي عصبي

Endothelial cells with tight junctions along with the basement membrane and astrocyte end feet surround cerebral blood vessels to form the blood-brain ...

Stretch in Brain Microvascular Endothelial Cells (cEND) as an In Vitro Traumatic Brain Injury Model of the Blood Brain Barrier

Stretch in Brain Microvascular Endothelial Cells cEND as an In Vitro Traumatic Brain Injury Model of the Blood Brain Barrier

تمتد في الدماغ الخلايا البطانية الاوعية الدموية الدقيقة (cEND) بوصفه<em&gt; في المختبر</em&gt; صدمة إصابات الدماغ نموذج من حاجز الدم في الدماغ

Due to the high mortality incident brought about by traumatic brain injury (TBI), methods that would enable one to better understand the underlying ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

excitotoxic المواد تحفيز الدماغ باعتبارها Microslices<em&gt; في المختبر</em&gt; نموذج من السكتة الدماغية

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

Oxygen-Glucose Deprivation and Reoxygenation as an In Vitro Ischemia-Reperfusion Injury Model for Studying Blood-Brain Barrier Dysfunction

Oxygen-Glucose Deprivation and Reoxygenation as an In Vitro Ischemia-Reperfusion Injury Model for Studying Blood-Brain Barrier Dysfunction

الأوكسجين الجلوكوز الحرمان وعودة التأكسج باعتبارها<em&gt; في المختبر</em&gt; الإسكيمية-ضخه من الإصابات نموذج لدراسة الدم في الدماغ الحاجز الجنسي لدى الرجال

Ischemia-Reperfusion (IR) injury is known to contribute significantly to the morbidity and mortality associated with ischemic strokes. Ischemic ...

A Rat Carotid Balloon Injury Model to Test Anti-vascular Remodeling Therapeutics

بالون إصابة الفئران السباتي نموذج لاختبار التداوي إعادة عرض لمكافحة الأوعية الدموية

The rat carotid balloon injury is a well-established surgical model that has been used to study arterial remodeling and vascular cell proliferation. It is ...

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

الإجراءات في يحفز الزرق<em&gt; في فيفو</em&gt; نموذج الفأر وجبل لالجامع إعداد الشبكية

Glaucoma is a disease of the central nervous system affecting retinal ganglion cells (RGCs). RGC axons making up the optic nerve carry visual input to the ...

In Vitro Assays to Assess Blood-brain Barrier Mesh-like Vessel Formation and Disruption

In Vitro Assays to Assess Blood-brain Barrier Mesh-like Vessel Formation and Disruption

في مقايسات المختبر لتقييم الحاجز الدموي الدماغي تشبه تشكيل سفينة وتشوه

Blood-brain barrier (BBB) coverage plays a central role in the homeostasis of the central nervous system (CNS). The BBB is dynamically maintained by ...

Improved Method for the Establishment of an In Vitro Blood-Brain Barrier Model Based on Porcine Brain Endothelial Cells

Improved Method for the Establishment of an In Vitro Blood-Brain Barrier Model Based on Porcine Brain Endothelial Cells

تحسين أسلوب لإنشاء في المختبر حاجز الدم – المخ نموذج استناداً إلى خلايا المخ الخنزيري بطانية

The aim of this protocol presents an optimized procedure for the purification and cultivation of pBECs and to establish in vitro blood-brain barrier (BBB) ...

Endothelial Cell Transcytosis Assay as an In Vitro Model to Evaluate Inner Blood-Retinal Barrier Permeability

Endothelial Cell Transcytosis Assay as an In Vitro Model to Evaluate Inner Blood-Retinal Barrier Permeability

فحص نقل الخلايا البطانية كنموذج في المختبر لتقييم نفاذية الحاجز الدموي الشبكي الداخلي

Dysfunction of the blood-retinal barrier (BRB) contributes to the pathophysiology of several vascular eye diseases, often resulting in retinal edema and ...