Name: dnbs/tnbs colitis models: providing insights into inflammatory bowel disease and effects of dietary fat
Uploaded: 2014-02-27T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about DNBS/TNBS Colitis Models: Providing Insights Into Inflammatory Bowel Disease and Effects of Dietary Fat at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af driftstilskud til KJ fra naturvidenskab og teknik Forskningsråd Canada (NSERC) og Crohns og Colitis Foundation of Canada (CCFC). VM er understøttet af en CFRI Fellowship og GB en kandidat studentship fra den canadiske Institutes for Health Research (CIHR). BAV er en Børn med tarm-og leversygdomme Foundation (CHILD) formand for Pediatric IBD Forskning og Canada Research Chair i Pediatric Gastroenterology og KJ er en ledende kliniker Scientist støttet af barnet og Børne-og Familie Research Institute (CFRI) Lægens Forskere Award Program , University of British Columbia.

Procedurer, der involverer dyr fag følger dyrepleje retningslinjer, der er skitseret af Institutional Animal Care og brug Udvalg (IACUC) ved University of British Columbia. Procedurerne i denne protokol vil blive beskrevet for både rotter og mus, mens de repræsentative resultater vil blive præsenteret fra Sprague-Dawley rotter. 1.. Fremstilling af DNBS og intrarektal administration <ol><li> Til rektal instillation af DNBS i rotter forberede frisk 15-30 mg D...

<ol>
	<li>Per&#353;e, M., Cerar, A., Biotechnol, J. .. . B. i. o. m. e. d. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Dextran sodium sulphate colitis mouse model: traps and tricks. , (2012).</li><li>Ghia, J. E., Blennerhassett, P., Deng, Y., Verdu, E., Khan, W., Collins, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactivation+of+inflammatory+bowel+disease+in+a+mouse+model+of+depression.">Reactivation of inflammatory bowel disease in a mouse model of depression.</a> Gastroenterology. 136 (7), 2280-2288 (2009).</li><li>Reber, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+and+animal+models+of+inflammatory+bowel+disease-an+update+on+the+role+of+the+hypothalamo-pituitary-adrenal+axis.">Stress and animal models of inflammatory bowel disease-an update on the role of the hypothalamo-pituitary-adrenal axis.</a> Psychoneuroendocrinology. 37 (1), 1-19 (2012).</li><li>Qiu, B., Vallance, B., Blennerhassett, P., Collins, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+CD4++lymphocytes+in+the+susceptibility+of+mice+to+stress-induced+reactivation+of+experimental+colitis.">The role of CD4+ lymphocytes in the susceptibility of mice to stress-induced reactivation of experimental colitis.</a> Nat. Med. 5 (10), 1178-1182 (1999).</li><li>Boyer, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myenteric+plexus+injury+and+apoptosis+in+experimental+colitis.">Myenteric plexus injury and apoptosis in experimental colitis.</a> Auto. Neurosci. Basic Clin. 117 (1), 41-53 (2005).</li><li>Saunders, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noradrenergic+and+cholinergic+neural+pathways+mediate+stress-induced+reactivation+of+colitis+in+the+rat.">Noradrenergic and cholinergic neural pathways mediate stress-induced reactivation of colitis in the rat.</a> Auto. Neurosci. Basic Clin. 124 (1-2), 56-68 (2006).</li><li>Cuzzocrea, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calpain+inhibitor+I+reduces+colon+injury+caused+by+dinitrobenzene+sulphonic+acid+in+the+rat.">Calpain inhibitor I reduces colon injury caused by dinitrobenzene sulphonic acid in the rat.</a> Gut. 48 (4), 478-488 (2001).</li><li>Cuzzocrea, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melatonin+reduces+dinitrobenzene+sulfonic+acid-induced+colitis.">Melatonin reduces dinitrobenzene sulfonic acid-induced colitis.</a> J. Pineal Res. 30 (1), 1-12 (2001).</li><li>Innis, S., Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+lipids+in+early+development+and+intestinal+inflammatory+disease.">Dietary lipids in early development and intestinal inflammatory disease.</a> Nutr. Rev. 65, S188-S193 (2007).</li><li>Innis, S. M., de La Presa Owens, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+fatty+acid+composition+in+pregnancy+alters+neurite+membrane+fatty+acids+and+dopamine+in+newborn+rat+brain.">Dietary fatty acid composition in pregnancy alters neurite membrane fatty acids and dopamine in newborn rat brain.</a> J. Nutr. 131 (1), 118-122 (2001).</li><li>Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mundra+H.,Innis+S.M.+Intestinal+responsiveness+to+experimental+colitis+in+young+rats+is+altered+by+maternal+diet.">Mundra H.,Innis S.M. Intestinal responsiveness to experimental colitis in young rats is altered by maternal diet.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 289, 13-20 (2005).</li><li>Sanovic, S., Lamb, D. P., Blennerhassett, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Damage+to+the+enteric+nervous+system+in+experimentalcolitis.">Damage to the enteric nervous system in experimentalcolitis.</a> Am. J. Pathol. 155 (4), 1051-107 (1999).</li><li>Vilaseca, J., Salas, A., Guarner, F., Rodriguez, R., Martinez, M., Malagelada, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+fish+oil+reduces+progression+of+chronic+inflammatory+lesions+in+a+rat+model+of+granulomatous+colitis.">Dietary fish oil reduces progression of chronic inflammatory lesions in a rat model of granulomatous colitis.</a> Gut. 31, 539-544 (1990).</li><li>Andoh, A., Tsujikawa, T., Ishizuka, I., Araki, Y., Sasaki, M., Koyama, S., Fujiyama, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=N-3+fatty+acid-rich+diet+prevents+early+response+of+interleukin-6+elevation+in+trinitrobenzene+sulfonic+acid-induced+enteritis.">N-3 fatty acid-rich diet prevents early response of interleukin-6 elevation in trinitrobenzene sulfonic acid-induced enteritis.</a> Int. J. Mol. Med. 12, 721-725 (2003).</li><li>Barros, K. V., Xavier, R. A., Abreu, G. G., Martinez, C. A., Ribeiro, M. L., Gambero, A., Carvalho, P. O., Nascimento, C. M., Silveira, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soybean+and+fish+oil+mixture+increases+IL-10,+protects+against+DNA+damage+and+decreases+colonic+inflammation+in+rats+with+dextran+sulfate+sodium+(DSS)+colitis.">Soybean and fish oil mixture increases IL-10, protects against DNA damage and decreases colonic inflammation in rats with dextran sulfate sodium (DSS) colitis.</a> Lipids Health Dis. 9, 68 (2010).</li><li>Hekmatdoost, A., Wu, X., Morampudi, V., Innis, S. M., Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+oils+modify+the+host+immune+response+and+colonic+tissue+damage+following+Citrobacter+rodentium+infection+in+mice.">Dietary oils modify the host immune response and colonic tissue damage following Citrobacter rodentium infection in mice.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 304 (10), 917-928 (2013).</li><li>Innis, S. M., Dai, C., Wu, X., Buchan, A. M., Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perinatal+lipid+nutrition+alters+early+intestinal+development+and+programs+the+response+to+experimental+colitis+in+young+adult+rats.">Perinatal lipid nutrition alters early intestinal development and programs the response to experimental colitis in young adult rats.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 299 (6), 1376-1385 (1152).</li></ol>

Den DNBS model beskrives i denne protokol er en værdifuld, billig og reproducerbar colitis model, der kan anvendes til at undersøge forskellige aspekter af IBD. Når det administreres intrarektalt til rotter eller mus, DNBS inducerer en betydelig grad af inflammation og vævsskade i tyktarmen, der ligner menneskets Crohns sygdom i form af dens forskellige histologiske funktioner, herunder transmural infiltration af polymorfonukleære celler og fremherskende NF-KB-afhængige Th1 aktivering. ...

Inflammatorisk tarmsygdom (IBD) er kendetegnet ved kronisk tilbagevendende betændelse i mave-tarm (GI) kanal, hvilket resulterer i symptomer på diarre, vægttab og mavesmerter. Colitis ulcerosa (UC) og Crohns sygdom (CD) er de to vigtigste former for IBD og kan skelnes ved placeringen af ​​betændelse i mave-tarmkanalen. I UC patienter, betændelse involverer typisk rektum og strækker contiguously op tyktarmen til en variabel grad påvirker kun den overfladiske slimhinde. I modsætning hertil kan CD påvirke nogen del af mavetarmkanalen, men det overvejende påvirker ileum og coecum. CD ofte manifesterer sig som transmural inflammation ofte forbundet med granulomer og fører til stricturing (fibrostenotic) og / eller penetrerende (fistulizing) sygdom. Selvom ætiologien af ​​IBD fortsat undvigende, det er godt accepteret, at IBD er multifaktoriel, der involverer samspillet mellem værter immunsystemet, genetiske modtagelighed og ansvarses på miljømæssige og mikrobielle faktorer. Til dato har forskellige modeller af IBD er blevet foreslået, at vise forskellige kliniske, histologiske og immunreaktioner karakteristiske for UC og CD. De mest almindeligt anvendte modeller omfatter genetisk modificerede mus (IL-2, IL-10, SAMP / YIT), infektion induceret modeller (Citrobacter rodentium, Salmonella typhimurium), adoptivforældre modeller overførsel (CD45 + RB Høj, CD62L + celle transfer i SCID mus) og kemisk induceret colitis modeller (dextrannatriumsulfat (DSS), trinitrobenzensulfonsyre sulfonsyre (TNBS), og dinitrobenzen sulfonsyre (DNBS)). På grund af deres lave omkostninger og hurtigt indsættende sygdom, er kemiske modeller betragtes uvurderlig til studiet af forskellige aspekter af IBD. Hver af de kemiske colitis listen over modeller har fordele samt begrænsninger i nogle aspekter af deres kliniske, immunologiske og histopatologiske relevans for IBD. DSS er en af ​​de mest almindelige kemiske metoder, der anvendes til at inducere colitis i gnavere 1. Administration af 3-10% DSS (MW: 42 kDa) i 7-10 dage i drikkevand af mus kan fremkalde symptomer og tegn på colitis, herunder vægttab, diarré med blod, colonforkortning, slimhinde sårdannelse og neutrofil infiltration. Denne model er især nyttig for drug screening undersøgelser, samt at udforske de mekanismer epitelial regenerering, virkningen af ​​medfødte immunitet på slimhinden homeostase, og den rolle, inflammation i forbindelse med fremme tarm dysplasi og adenokarcinom udvikling. Der er dog nogle ulemper til DSS modellen, herunder variation i koncentrationen af ​​DSS er nødvendig for at fremkalde colitis i forskellige dyrefaciliteter samt inkonsekvent vandoptagelse af mus og derfor inkonsekvent eksponering for DSS, hvilket resulterer i variation i den grad, omfang og fordeling af mucosal skade og ulceration i tyktarmen. Alle disse funktioner fører til heterogenitet af resultater og begrænse muligheden for at sammenligne resultater på tværs af studierne frabout forskellige forskergrupper. Et alternativ til DSS model er hapten-induceret DNBS eller TNBS modeller af colitis. Denne model anvender rektal instillation af slimhinde sensibiliserende agenter DNBS eller TNBS, fortyndet i varierende koncentrationer af ethanol. Administrationen af ​​ethanol er en forudsætning for at bryde colon slimhindebarrieren at tillade indtrængning af DNBS eller TNBS i lamina propria. DNBS / TNBS vil derefter haptenize de lokaliserede colon-og tarm mikrobielle proteiner til at blive immunogen, der udløser værten medfødte og adaptive immunrespons. I almindelighed er denne model er forbundet med svær og til tider blodig diarré, vægttab og tarmvæggen fortykkelse imidlertid symptomer varierer afhængigt af typen gnaver anvendes, såvel som timing, dosering og graden af ​​eksponering for DNBS eller TNBS anvendes i undersøgelsen. Vigtige forskelle mellem rotter og mus bør bemærkes, med fordelene ved lavere omkostninger for køb og bord, samt Lower kropsmasse for faldende omkostninger pr dyr behandling in vivo. Dette skal ses i forhold til en hurtigere og mere alvorligt forløb af colitis hos mus, hvor de mere skrøbelige og responsive dyr hurtigt kan nå frem til en human endpoint. Den tarmbetændelse første resultater fra ethanol-induceret ødelæggelse af intestinale epitelceller, hvilket fører til øget epitel permeabilitet, mikrobiel indtrængen i slimhinden haptenization af værtsproteiner, alt dette resulterer i infiltrering af neutrofiler, makrofager og Th1 T-lymfocytter i den beskadigede slimhinde. I forhold til DNBS er TNBS betragtes som et farligt kemikalie grundet dens meget oxidative egenskaber, der kan udgøre en risiko for eksplosion ved kontakt med baser, såsom natrium-og kaliumhydroxid. Derfor DNBS er i øjeblikket betragtes som en foretrukken valg af kemikalie løbet TNBS at fremkalde colitis. Hos gnavere DNBS colitis betragtes som en af ​​de mest bekvemme metoder til at studere følgenfløj IBD forbundet modifikatorer på sygdom: <ol><li> Depression og genaktivering af colitis: Det har vist sig, at stress, angst og depression i IBD patienter ofte er forbundet med sygdommen tilbagefald. DNBS colitis er en egnet model til at undersøge den rolle, depression og dens konsekvenser for reaktivering af colitis hos mus. Metoden involverer typisk indledende induktion af colitis ved DNBS efterfulgt af opløsningen af ​​colitis ved at lade musene i 6-8 uger. Musene indgives derefter med depression forårsager, såsom reserpin eller olfaktoriske bulbectomy at fremkalde depression efterfulgt af at teste dem for reaktivering af colitis gennem udfordring med en subcolitic dosis DNBS 2. </li><li> Stress og reaktivering af colitis: Stress er en anden almindelig miljømæssig faktor, som har været knyttet til IBD patogenese. Der er en voksende mængde af beviser, der tyder på en stærk sammenhæng mellem kronisk stress og symptomer på UC og CD i gnavers samt i mennesker og ikke-menneskelige primater 3. DNBS colitis er en god model til at studere stress-associeret reaktivering af colitis hos både mus og rotter. Fremgangsmåden anvendes sædvanligvis på en lignende måde som nævnt ovenfor for depression, undtagen i stedet for depression dyrene udsat for stressfaktorer såsom sonisk og tilbageholdenhed stress 4. </li><li> Neurogen inflammation: En række undersøgelser har beskrevet enten forbigående eller permanente ændringer i den enteriske nervesystem (ENS) struktur og funktion, som det ses i vævsprøver fra dyremodeller og fra patienter med IBD. DNBS er en god model til at udforske virkningerne af betændelse på ENS 5. og at studere både noradrenerge og kolinerge nervebaner 6. </li><li> Skade-reparation mekanismer: Under IBD patogenese, værtsafledte skade mediatorer, såsom reaktive oxygenarter (ROS), nitrogenoxid (NO), intercellulært adhæsionsmolekyle 3 (ICAM-3) og P-selectin har alle vist sig at plægge en rolle i tarmen epithelial forstyrrelser. DNBS er en fremragende model til at studere skader forårsaget af op-regulering af disse mediatorer samt reparation mekanismer, der er reguleret ved hjælp af selektive stoffer eller inhibitorer 7,8. </li><li> Transmural inflammation: Ud over de ovennævnte anvendelser af DNBS modellen kan også anvendes til at studere transmural inflammation af tarmen, en klassisk træk fundet i patienter med CD. Begge DNBS og TNBS-induceret colitis er forbundet med betydelig infiltration af lymfocytter i tyktarmens slimhinde gør disse modeller særlig nyttigt at undersøge T-celle-afhængige immunmekanismer. </li></ol> I sammenligning med DSS model, fordelene ved DNBS og TNBS-induceret colitis omfatte billige, hurtige udvikling af colitis (normalt kræver 1-3 dage for at vise reproducerbar ulceration og inflammation) og konsekvent karkassens den distale colon. Men ulemperne er et krav om enhøjere niveau af teknisk ekspertise, optimering af DNBS / TNBS dosis og behovet for anæstesi til rektal administration. I denne metodologiske dokument undersøgte vi virkningerne af varierende koncentrationer af n-6 og n-3 polyumættede fedtsyrer på ændring tyktarmens slimhinde-respons på DNBS-induceret colitis i rotter under anvendelse af vegetabilske olier tidselolie (SO) og canolaolie (CO) og fiskeolie (FO). Det er blevet påvist, at n-6 og n-3 fedtsyrer er vigtige mediatorer af tarm inflammatorisk sygdom gennem deres rolle som acyldele af cellemembran phosopholipids 9. I modsætning til den proinflammatoriske potentiale af n-6 fedtsyrer, n-3 fedtsyrer på tilstrækkeligt højt indtag er potentielt kraftige antiinflammatoriske midler. De anti-inflammatoriske virkninger af n-3-fedtsyrer er medieret direkte gennem udskiftning af arachidonsyre som et eicosanoid substrat inhibering arachidonsyremetabolisme og indirekte gennem ændring af proinflammatory genekspression og celle signalering. N-3 fedtsyrer, giver også anledning til resolvins, en familie af anti-inflammatoriske mediatorer. Højt indtag af n-3-fedtsyrer er forbundet med et fald i produktionen af ​​proinflammatoriske eikosanoider, cytokiner, kemokiner, reaktive ilt arter og ekspression af adhæsionsmolekyler. I dette studie blev rotter fodret ad libitum kost identiske i alle næringsstoffer, undtagen fedtsyrer, med en procent energi fra fedt, 20% SO, 20% CO, eller 18% fiskeolie plus 2% tidselolie (FO) 10-11 . Som en procentdel af den daglige energi, SO diæten 15% linolsyre (LA), med &lt;0,06% α-linolensyre (ALA) og ingen eicosapentaensyre (EPA) eller docosahexaensyre (DHA), CO kost havde 4,2 % LA og 1,9% ALA uden EPA og DHA, og FO kost forudsat 1,4% EPA, 4,9% DHA, 0,32% LA, og 0,12% ALA. Tre uger efter indledningen af ​​lipid kost, blev musene administreret intrarektale DNBS eller 50% ethanol og aflivet 5 dage senere. Den inflammatory respons blev vurderet ved vurdering af vægttab, histologiske skader scoringer og væv myeloperoxidaseaktivitet.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="627">
	<colgroup>
		<col />
		<col /> 
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">1 mL syringe</td>
			<td style="width:121px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">309659</td>
			<td style="width:167px;"> </td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">19 gauge needle</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>305187</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyethylene tubing PE-50</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>427517</td>
			<td>for intra-rectal administration in mice</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyethylene tubing PE-90</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>427519</td>
			<td>for intra-rectal administration in rat</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DNBS</td>
			<td>MP Bio</td>
			<td>150959</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">tear gel</td>
			<td>Novartis</td>
			<td>63601662596</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10% Formalin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>5F93-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">warming pad</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>TPZ-0510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethanol</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>A-962.4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">hexadecyltrimethyl-ammonium bromide</td>
			<td style="width:121px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>H5882</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Potassium phosphate buffer solution</td>
			<td style="width:121px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>79628-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">O-dianisidine dihydrochloride</td>
			<td style="width:121px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>D3252</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">30% H2O2</td>
			<td style="width:121px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>31642</td>
			<td>hydrogen peroxide</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Spectrophotometer</td>
			<td>BIORAD</td>
			<td>Benchmarker Plus</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Light Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axio Image.Z1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">Data analysis software program </td>
			<td>GraphPad Software</td>
			<td style="width:119px;"> GraphPad Prism Software Version 4.00 </td>
			<td><a href="http://www.graphpad.com/">San Diego California USA, www.graphpad.com</a></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dnbs/tnbs colitis models: providing insights into inflammatory bowel disease and effects of dietary fat

Inflammatoriske tarmsygdomme (IBD), herunder Crohns sygdom og colitis ulcerosa, har længe været forbundet med en genetisk basis, og mere for nylig vært immunresponser på mikrobielle og miljømæssige midler. Dinitrobenzen sulfonsyre (DNBS)-induceret colitis gør det muligt at studere patogenesen af ​​IBD forbundne miljømæssige udløser såsom stress og kost, virkningerne af potentielle behandlingsformer, og de mekanismer, der ligger tarmbetændelse og mucosal skade. I dette papir, undersøgte vi virkningerne af kosten n-3 og n-6 fedtsyrer på colon mucosa-inflammatoriske respons på DNBS-induceret colitis i rotter. Alle rotter blev fodret identiske diæter med undtagelse af forskellige typer fedtsyrer [saflorolie (SO), canolaolie (CO) eller fiskeolie (FO)] i tre uger før eksponering for intrarektal DNBS. Kontrol rotter, der fik intrarektal ethanol fortsat tage på i vægt i løbet af de 5 dages undersøgelse, mens DNBS-behandlede rotter fodret lipid kostvaner alle loston med FO og CO fodrede rotter viser betydelige vægttab med 48 timer og rotter fodret SO ved 72 timer. Vægtøgning genoptaget efter 72 timer efter DNBS, og ved 5 dage efter DNBS, FO-gruppen havde en højere kropsvægt end SO eller CO-grupper. Colon sektioner samlet 5 dage efter DNBS-behandling viste fokal ulceration, krypt ødelæggelse, bæger cellereduktion og slimhinde infiltration af både akutte og kroniske inflammatoriske celler, der afveg i sværhedsgrad blandt kost grupper. Den så træt gruppe viste den mest alvorlige skader efterfulgt af CO, og FO fodret grupper, der viste den mildeste grad af vævsskade. Tilsvarende colon myeloperoxidase (MPO) aktivitet, en markør for neutrofil aktiviteten var signifikant højere i SO efterfulgt af CO fodrede rotter med FO fodret rotter har væsentligt lavere MPO-aktivitet. Disse resultater demonstrere brugen af ​​DNBS-induceret colitis, som skitseret i denne protokol, for at fastslå virkningen af ​​kosten i patogenesen af ​​IBD.

Udfordring af rotter (Sprague-Dawley) eller mus (C57BL / 6) med DNBS typisk resulterer i forbigående vægttab og diarré, undertiden med blod til stede i afføringen. Faktorer som genetik, kost og tarm mikrobiota kan dog ændre modtagelighed for DNBS induceret colitis. Derfor dyr indgår i forsøgene skal være fra den samme institution, enten afledt lokalt eller bestilles i fra et dyr leverandør. Alle dyr bør overvåges nøje for graden af ​​vægttab og symptomer på angst lidt i løbet af colitis. <p class=...

Watch this Scientific Journal Video about DNBS/TNBS Colitis Models: Providing Insights Into Inflammatory Bowel Disease and Effects of Dietary Fat at JoVE.com

DNBS/TNBS Colitis Models: Providing Insights Into Inflammatory Bowel Disease and Effects of Dietary Fat

DNBS / TNBS induceret colitis tilbyder et alternativ og billig metode til at studere Patobiologi af inflammatorisk tarmsygdom. Protokollen diskuteret i dette dokument skitserer den vellykkede anvendelse af DNBS at fremkalde colitis hos mus og rotter, og tillader en at grundigt studere værtsmedierede tarm reaktioner.

DNBS / TNBS Colitis modeller: giver indsigt i inflammatorisk tarmsygdom og Effekter af kosten fedt

Inflammatory Bowel Diseases (IBD), including Crohn&#39;s Disease and Ulcerative Colitis, have long been associated with a genetic basis, and more recently ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&beta; using a Whole Blood Stimulation Assay

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&#946; using a Whole Blood Stimulation Assay

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues ...

Segmentation and Measurement of Fat Volumes in Murine Obesity Models Using X-ray Computed Tomography

Segmentering og måling af tykke bind i murine Fedme-modeller vha. X-ray Computed Tomography

Obesity is associated with increased morbidity and mortality as well as reduced metrics in quality of life.1 Both environmental and genetic factors are ...

Gene-environment Interaction Models to Unmask Susceptibility Mechanisms in Parkinson's Disease

Gene-miljø Interaktion Modeller til unmask modtagelighed mekanismer i Parkinsons sygdom

Lipoxygenase (LOX) activity has been implicated in neurodegenerative disorders such as Alzheimer&#39;s disease, but its effects in Parkinson&#39;s disease ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

Ortotopisk Injektion af brystkræft celler i brystfedtpuden af ​​mus til at studere tumorvækst.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

Assessment of Viability of Human Fat Injection into Nude Mice with Micro-Computed Tomography

Vurdering af virksomhedens rentabilitet for Human Fat Injektion i nøgne mus med Micro-Computed Tomography

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft ...

Therapeutic Effectiveness of a Dietary Supplement for Management of Halitosis in Dogs

Terapeutisk Effektiviteten af ​​et kosttilskud for Forvaltning af halitosis i Hunde

Halitosis is a common complaint involving social and communicational problems in humans and also affects the pet-owner relationship. In this randomized ...

Surgical Models of Gastroesophageal Reflux with Mice

Kirurgiske modeller af gastroøsofageal refluks med Mus

Multiple surgical procedures have been reported to induce gastroesophageal reflux in animals. Herein, we report three surgical models with mice aiming to ...

Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease

Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease

Ex Vivo Intestinal Sacs at vurdere slimhinder permeabilitet i modeller af gastrointestinal sygdom

The epithelial barrier is the first innate defense of the gastrointestinal tract and selectively regulates transport from the lumen to the underlying ...

Transplantation Into the Mouse Ovarian Fat Pad

Transplantation Into the Mouse æggestokkene Fat Pad

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic ...

Analyzing Beneficial Effects of Nutritional Supplements on Intestinal Epithelial Barrier Functions During Experimental Colitis

Analyse Gavnlige virkninger af kosttilskud på Intestinal epitelbarriere funktioner under Eksperimentel Colitis

Inflammatory bowel diseases (IBD), including Crohn&#39;s disease and ulcerative colitis, are chronic relapsing disorders of the intestines. They cause ...