Name: isolation of cancer stem cells from human prostate cancer samples
Uploaded: 2014-03-14T18:32:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי קרן משפחת חרירי וקרן TJ מארטל.

1. איסוף ועיבוד של רקמה האנושית של סרטן הערמונית מדגימות כירורגית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן שני 50 מיליליטר צינורות חרוטי קלקר המכילים 15 מיליליטר של Roswell Park Memorial Institute (RPMI) מדיום 1640 תרבות בתוספת 10% בסרום שור העובר (FBS) ו -1% פניצילין / סטרפטומיצין...

<ol>
	<li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hallmarks+of+cancer:+the+next+generation.">Hallmarks of cancer: the next generation.</a> Cell. 144, 646-674 (2011).</li><li>Magee, J. A., Piskounova, E., Morrison, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+stem+cells:+impact,+heterogeneity,+and+uncertainty.">Cancer stem cells: impact, heterogeneity, and uncertainty.</a> Cancer Cell. 21, 283-296 (2012).</li><li>Nguyen, L. V., Vanner, R., Dirks, P., Eaves, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+stem+cells:+an+evolving+concept.">Cancer stem cells: an evolving concept.</a> Nat. Rev. Cancer. 12, 133-143 (2012).</li><li>Valent, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+stem+cell+definitions+and+terminology:+the+devil+is+in+the+details.">Cancer stem cell definitions and terminology: the devil is in the details.</a> Nat. Rev. Cancer. 12, 767-775 (2012).</li><li>Visvader, J. E., Lindeman, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+stem+cells:+current+status+and+evolving+complexities.">Cancer stem cells: current status and evolving complexities.</a> Cell Stem Cell. 10, 717-728 (2012).</li><li>Lapidot, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cell+initiating+human+acute+myeloid+leukaemia+after+transplantation+into+SCID+mice.">A cell initiating human acute myeloid leukaemia after transplantation into SCID mice.</a> Nature. 367, 645-648 (1994).</li><li>Al-Hajj, M., Wicha, M. S., Benito-Hernandez, A., Morrison, S. J., Clarke, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+identification+of+tumorigenic+breast+cancer+cells.">Prospective identification of tumorigenic breast cancer cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100, 3983-3988 (2003).</li><li>Singh, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+human+brain+tumour+initiating+cells.">Identification of human brain tumour initiating cells.</a> Nature. 432, 396-401 (2004).</li><li>Collins, A. T., Berry, P. A., Hyde, C., Stower, M. J., Maitland, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+identification+of+tumorigenic+prostate+cancer+stem+cells.">Prospective identification of tumorigenic prostate cancer stem cells.</a> Cancer Res. 65, 10946-10951 (2005).</li><li>Domingo-Domenech, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+acquired+docetaxel+resistance+in+prostate+cancer+through+depletion+of+notch-+and+hedgehog-dependent+tumor-initiating+cells.">Suppression of acquired docetaxel resistance in prostate cancer through depletion of notch- and hedgehog-dependent tumor-initiating cells.</a> Cancer Cell. 22, 373-388 (2012).</li><li>Patrawala, L., Calhoun-Davis, T., Schneider-Broussard, R., Tang, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hierarchical+organization+of+prostate+cancer+cells+in+xenograft+tumors:+the+CD44+alpha2beta1++cell+population+is+enriched+in+tumor-initiating+cells.">Hierarchical organization of prostate cancer cells in xenograft tumors: the CD44+alpha2beta1+ cell population is enriched in tumor-initiating cells.</a> Cancer Res. 67, 6796-6805 (2007).</li><li>Qin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+PSA(-/lo)+prostate+cancer+cell+population+harbors+self-renewing+long-term+tumor-propagating+cells+that+resist+castration.">The PSA(-/lo) prostate cancer cell population harbors self-renewing long-term tumor-propagating cells that resist castration.</a> Cell Stem Cell. 10, 556-569 (2012).</li><li>Siegel, R., Naishadham, D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics,+2013.">Cancer statistics, 2013.</a> CA Cancer J. Clin. 63, 11-30 (2013).</li><li>Patrawala, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+purified+CD44++prostate+cancer+cells+from+xenograft+human+tumors+are+enriched+in+tumorigenic+and+metastatic+progenitor+cells.">Highly purified CD44+ prostate cancer cells from xenograft human tumors are enriched in tumorigenic and metastatic progenitor cells.</a> Oncogene. 25, 1696-1708 (2006).</li></ol>

פרוטוקול זה מתאר את בידודו של CSCs מרקמות סרטן ערמונית אנושית טריות. כמה שיקולים חשובים להשפיע על התוצאות המוצלחות של פרוטוקול זה. ההתאוששות של מספרים גבוהים של תאי סרטן ערמונית קיימא תלויה בהערכה זהירה ברוטו של דגימות כירורגית. מ?...

ההטרוגניות intratumoral נחשבת לסימן היכר של סרטן 1. ואכן, מספר מנגנונים של הטרוגניות intratumoral תוארו, כולל מוטציה ואינטראקציות עם microenvironment גנטיים. בנוסף, סוגים מסוימים של סרטן עשויים להכיל היררכיה סלולרית עם subpopulation של תאי גזע סרטני (CSCs) המציג את המאפיינים של יכולת ייזום גידול והתחדשות עצמית במבחני השתלה סידוריים 2-5. תאר בתחילה בהמטולוגיות 6, 7 שד, ומוח 8 ממאירות, CSCs נחקר גם בסרטן ערמונית 9-12, כמו גם סוגי גידולים אחרים 2-5. CSCs נחשב בדרך כלל חלק קטן הסלולר בתוך אוכלוסייה הטרוגנית 2-5. לכן, האפיון הפונקציונלי ומולקולרי של CSCs מותנה ההעשרה שלהם מאוכלוסיות בתפזורת. בהתאם לכך, בשני העשורים האחרונים כמה נפגשוhodologies העשרת CSC כבר המציא אשר בדרך כלל כרוך בהפרדה בין אוכלוסיות שכותרתו על ידי cytometry זרימה. בנוסף, שיקול משמעותי במחקר של CSCs הוא שהארגון ההיררכי של רקמות אנושיות עשוי להיות מופר על ידי מניפולציות ניסוייות כגון passaging הסידורי בעכברים עם מערכת חיסון חלש או תרבות. כתוצאה מכך, הבידוד הישיר של CSCs מרקמות אנושיות התפתחה המתודולוגיה חשובה בתחום CSC. סרטן הערמונית הוא סיבה מובילה לתחלואה בסרטן והתמותה בארצות הברית וברחבי העולם 13. לכן, הבידוד והאפיון ביולוגי של CSCs הערמונית הוא עניין משמעותי. CSCs ערמונית בעבר כבר מועשר משורות תאים, xenografts מטופל נגזר, ותרבויות השעיה מטופל נובע מעבר נמוך 9,10,12,14. לאחרונה דיווחו על הבידוד של CSCs ערמונית ישירות מים כירורגית אדםamples מכוח פנוטיפ תא שטח HLAI השלילי 10. כאן אנו מפרטים את הנהלים המיושמים לבידוד של תאים אלה. גידולי ערמונית נקצרים מן הדגימות כירורגית וגרמו להשעיות תא. לאחר מכן תאים הם מוכתמים באמצעות נוגדנים נגד HLAI כמו גם סמני סטרומה וכדאיויות, וCSCs מבודדים על ידי מיון תא הקרינה מופעלת (FACS). CSCs הבודד לאחר מכן ניתן להשתמש עבור מבחני הדורשים תאי קיימא.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="779">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">RPMI</td>
			<td style="width:195px;">Gibco Life Technologies</td>
			<td style="width:187px;">11875-093</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">Fetal bovine serum</td>
			<td style="width:195px;">Gibco Life Technologies</td>
			<td style="width:187px;">10437-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">Penicillin Streptomycin</td>
			<td style="width:195px;">Gibco Life Technologies</td>
			<td style="width:187px;">15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">PBS</td>
			<td style="width:195px;">Corning cell gro</td>
			<td style="width:187px;">21-031-CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">60 mm-15 mm cell culture dish</td>
			<td style="width:195px;">Corning</td>
			<td style="width:187px;">3295</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">35 &#181;m Cell Strainer</td>
			<td style="width:195px;">BD Falcon</td>
			<td style="width:187px;">352340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">50 ml conial tube</td>
			<td style="width:195px;">Crystalgen</td>
			<td style="width:187px;">23-2263</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">15 ml conical tune</td>
			<td style="width:195px;">Crystalgen</td>
			<td style="width:187px;">23-2265</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">Red blood cell lysing buffer</td>
			<td style="width:195px;">Sigma</td>
			<td style="width:187px;">R7757</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">HLA class I (W6/32) PE antibody</td>
			<td style="width:195px;">Abcam</td>
			<td style="width:187px;">ab43545</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">CD31 FITC antibody</td>
			<td style="width:195px;">ebioscience</td>
			<td style="width:187px;">11-0319-42</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">CD45 FITC antibody</td>
			<td style="width:195px;">Abcam</td>
			<td style="width:187px;">ab27287</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">IgG2a&#954; PE antibody</td>
			<td style="width:195px;">BD Pharminogen</td>
			<td style="width:187px;">555574</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">IgG1&#954; FITC antibody</td>
			<td style="width:195px;">BD Pharminogen</td>
			<td style="width:187px;">551954</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">DAPI</td>
			<td style="width:195px;">Invitrogen&#160;</td>
			<td style="width:187px;">d3571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:232px;">12 x 75 mm polystyrene tubes with cell strainer cap</td>
			<td style="width:195px;">BD Falcon&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;</td>
			<td style="width:187px;">352235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">Vortex Mixer</td>
			<td style="width:195px;">Crystalgen</td>
			<td style="width:187px;">CG-BV1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">10% Neutral Buffer Formalin</td>
			<td style="width:195px;">Fisher</td>
			<td style="width:187px;">RBBP-0480</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of cancer stem cells from human prostate cancer samples

מודל תאי גזע סרטני (CSC) כבר בקר במידה ניכרת במהלך שני העשורים האחרונים. במהלך תקופה זו CSCs זוהה ובודד ישירות מרקמות אנושיות ומופץ באופן סדרתי בעכברים עם מערכת חיסון חלש, בדרך כלל באמצעות תיוג נוגדן של אוכלוסיות של תאים וחלוקה על ידי cytometry זרימה. עם זאת, המאפיינים הקליניים הייחודיים של סרטן הערמונית באופן משמעותי מוגבלים על המחקר של CSCs ערמונית מדגימות גידול אנושיים טריות. לאחרונה דיווחו על הבידוד של CSCs ערמונית ישירות מרקמות אנושיות מכוח פנוטיפ (HLAI) שלילי כיתת HLA שלהם. תאי סרטן ערמונית נקצרים מן הדגימות כירורגית וניתקו באופן מכאני. השעיה תא שנוצרה ושכותרתו עם נוגדני HLAI וסטרומה מצומדות fluorescently. תת אוכלוסיות של תאי HLAI השליליים סוף סוף מבודדות באמצעות cytometer זרימה. המגבלה העיקרית של פרוטוקול זה היא הטבע בתדירות גבוהה המיקרוסקופי והמולטי שלסרטן ראשוני בדגימות ערמונית. יחד עם זאת, CSCs ערמונית חי המבודד מתאים לאפיון מולקולרי ואימות פונקציונלית על ידי השתלה בעכברים עם מערכת חיסון חלש.

<img alt="איור 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51332/51332fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51332/51332fig1.jpg" /> איור 1. קצירת גידול של סרטן ערמונית אדם וcytometry זרימת עלילה הממחישה אוכלוסיות ספציפיות מסרטן הערמונית אנושית. () גושי גידול נקצרים ליצור השעיה תא. תוכן גידו?...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples at JoVE.com

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

הבידוד של תאי גזע סרטני (CSCs) ישירות מרקמות אנושיות הוא הנדרש לאפיון הביולוגי שלהם. כתב יד זה מתאר מתודולוגיה לבידודה של CSCs ערמונית מרקמות אנושיות, תוך מתן טיפים על פתרון בעיות בצעדים קשים גם.

בידוד של תאי גזע סרטני מדגימות אדם סרטן הערמונית

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Evaluation of Nanoparticle Uptake in Tumors in Real Time Using Intravital Imaging

הערכה של ספיגת nanoparticle ב גידולים בזמן אמת באמצעות הדמיה Intravital

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle ...

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

בידוד, אפיון והשוואתי התמיינות של תאי גזע אנושיים שיניים זולות נגזרה שיניים קבועות על ידי שימוש בשתי שיטות שונות

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

תרבות מטופל נגזר סלולרי ובידוד של CD133<sup&gt; +</sup&gt; תאי גזע סרטני משוערים מלנומה

Despite improved treatments options for melanoma available today, patients with advanced malignant melanoma still have a poor prognosis for ...

Formation of Human Prostate Epithelium Using Tissue Recombination of Rodent Urogenital Sinus Mesenchyme and Human Stem Cells

היווצרות של האפיתל ערמונית אנושי באמצעות רקומבינציה של רקמות ואברי מין מכרסם mesenchyme סינוס ותאי גזע אנושיים

Progress in prostate cancer research is severely  limited by the availability of human-derived and hormone-na&iuml;ve model systems,  which limit our ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

מודל Murine orthotopic של אדם סרטן ערמונית גרורה

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

Isolation and Functional Characterization of Human Ventricular Cardiomyocytes from Fresh Surgical Samples

בידוד ואפיון פונקציונלי של אדם חדרית שריר לב מדוגמאות כירורגי טריות

Cardiomyocytes from diseased hearts are subjected to complex remodeling processes involving changes in cell structure, excitation contraction coupling and ...

Enrichment for Chemoresistant Ovarian Cancer Stem Cells from Human Cell Lines

העשרה לתאי גזע Chemoresistant סרטן השחלות משורות תאים אנושיות

Cancer stem cells (CSCs) are defined as a subset of slow cycling and undifferentiated cells that divide asymmetrically to generate highly proliferative, ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

לומד סרטן לבלב גזע מאפייני תא לפיתוח טיפול חדש אסטרטגיות

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Isolation and Propagation of Circulating Tumor Cells from a Mouse Cancer Model

בידוד וריבוי תאים סרטניים במחזור מסרטן מודל עכבר

Cancer metastasis is the foremost cause of cancer-associated deaths. Recent studies have shown that circulating tumor cells (CTCs) are important in cancer ...