Name: isolation of cancer stem cells from human prostate cancer samples
Uploaded: 2014-03-14T18:32:00
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इस काम हरीरी परिवार फाउंडेशन और टी जे Martell फाउंडेशन द्वारा समर्थित किया गया.

1. फसल काटने वाले और सर्जिकल नमूनों से मानव प्रोस्टेट कैंसर के ऊतकों के प्रसंस्करण <ol><li> Roswell पार्क मेमोरियल संस्थान (RPMI) 10% भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS) और 1% पेनिसिलिन / स्ट्रेप्टोमाइसिन के साथ पूरक 1640 संस्कृति के म?...

<ol>
	<li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hallmarks+of+cancer:+the+next+generation.">Hallmarks of cancer: the next generation.</a> Cell. 144, 646-674 (2011).</li><li>Magee, J. A., Piskounova, E., Morrison, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+stem+cells:+impact,+heterogeneity,+and+uncertainty.">Cancer stem cells: impact, heterogeneity, and uncertainty.</a> Cancer Cell. 21, 283-296 (2012).</li><li>Nguyen, L. V., Vanner, R., Dirks, P., Eaves, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+stem+cells:+an+evolving+concept.">Cancer stem cells: an evolving concept.</a> Nat. Rev. Cancer. 12, 133-143 (2012).</li><li>Valent, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+stem+cell+definitions+and+terminology:+the+devil+is+in+the+details.">Cancer stem cell definitions and terminology: the devil is in the details.</a> Nat. Rev. Cancer. 12, 767-775 (2012).</li><li>Visvader, J. E., Lindeman, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+stem+cells:+current+status+and+evolving+complexities.">Cancer stem cells: current status and evolving complexities.</a> Cell Stem Cell. 10, 717-728 (2012).</li><li>Lapidot, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cell+initiating+human+acute+myeloid+leukaemia+after+transplantation+into+SCID+mice.">A cell initiating human acute myeloid leukaemia after transplantation into SCID mice.</a> Nature. 367, 645-648 (1994).</li><li>Al-Hajj, M., Wicha, M. S., Benito-Hernandez, A., Morrison, S. J., Clarke, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+identification+of+tumorigenic+breast+cancer+cells.">Prospective identification of tumorigenic breast cancer cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100, 3983-3988 (2003).</li><li>Singh, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+human+brain+tumour+initiating+cells.">Identification of human brain tumour initiating cells.</a> Nature. 432, 396-401 (2004).</li><li>Collins, A. T., Berry, P. A., Hyde, C., Stower, M. J., Maitland, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+identification+of+tumorigenic+prostate+cancer+stem+cells.">Prospective identification of tumorigenic prostate cancer stem cells.</a> Cancer Res. 65, 10946-10951 (2005).</li><li>Domingo-Domenech, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+acquired+docetaxel+resistance+in+prostate+cancer+through+depletion+of+notch-+and+hedgehog-dependent+tumor-initiating+cells.">Suppression of acquired docetaxel resistance in prostate cancer through depletion of notch- and hedgehog-dependent tumor-initiating cells.</a> Cancer Cell. 22, 373-388 (2012).</li><li>Patrawala, L., Calhoun-Davis, T., Schneider-Broussard, R., Tang, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hierarchical+organization+of+prostate+cancer+cells+in+xenograft+tumors:+the+CD44+alpha2beta1++cell+population+is+enriched+in+tumor-initiating+cells.">Hierarchical organization of prostate cancer cells in xenograft tumors: the CD44+alpha2beta1+ cell population is enriched in tumor-initiating cells.</a> Cancer Res. 67, 6796-6805 (2007).</li><li>Qin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+PSA(-/lo)+prostate+cancer+cell+population+harbors+self-renewing+long-term+tumor-propagating+cells+that+resist+castration.">The PSA(-/lo) prostate cancer cell population harbors self-renewing long-term tumor-propagating cells that resist castration.</a> Cell Stem Cell. 10, 556-569 (2012).</li><li>Siegel, R., Naishadham, D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics,+2013.">Cancer statistics, 2013.</a> CA Cancer J. Clin. 63, 11-30 (2013).</li><li>Patrawala, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+purified+CD44++prostate+cancer+cells+from+xenograft+human+tumors+are+enriched+in+tumorigenic+and+metastatic+progenitor+cells.">Highly purified CD44+ prostate cancer cells from xenograft human tumors are enriched in tumorigenic and metastatic progenitor cells.</a> Oncogene. 25, 1696-1708 (2006).</li></ol>

इस प्रोटोकॉल ताजा मानव प्रोस्टेट कैंसर ऊतकों से सीएससी के अलगाव का वर्णन करता है. कई महत्वपूर्ण बातों को इस प्रोटोकॉल का सफल परिणाम को प्रभावित. व्यवहार्य प्रोस्टेट कैंसर कोशिकाओं की उच्च ...

Intratumoral विविधता कैंसर 1 की एक बानगी माना जाता है. दरअसल, intratumoral विविधता के कई तंत्र आनुवंशिक उत्परिवर्तन और microenvironment के साथ बातचीत सहित वर्णित किया गया है. इसके अलावा, कुछ तरह के कैंसर धारावाहिक प्रत्यारोपण assays 2-5 में ट्यूमर की शुरुआत क्षमता और आत्म नवीकरण के गुणों को दर्शाती है कि कैंसर स्टेम कोशिकाओं (सीएससी) के एक subpopulation साथ एक सेलुलर पदानुक्रम हो सकती है. प्रारंभ में हिमेटोलोजिकल 6, स्तन 7, और 8 मस्तिष्क दुर्दमताओं में वर्णित, सीएससी भी प्रोस्टेट कैंसर 9-12 के साथ ही अन्य प्रकार के ट्यूमर 2-5 में अध्ययन किया गया है. सीएससी आम तौर पर एक विषम जनसंख्या 2-5 भीतर एक सेलुलर अंश माना जाता है. इसलिए, सीएससी के कार्यात्मक और आणविक लक्षण वर्णन थोक आबादी से उनके संवर्धन पर प्रासंगिक है. तदनुसार, पिछले दो दशकों के दौरान कई मिलेसीएससी संवर्धन के hodologies आमतौर पर फ्लो द्वारा लेबल आबादी की जुदाई शामिल है जो तैयार किया गया है. इसके अलावा, सीएससी के अध्ययन में एक महत्वपूर्ण विचार मानव ऊतकों के पदानुक्रम संगठन ऐसी संस्कृति या immunodeficient चूहों में धारावाहिक passaging के रूप में प्रयोगात्मक जोड़तोड़ से बाधित हो सकता है. नतीजतन, मानव ऊतकों से सीएससी के प्रत्यक्ष अलगाव सीएससी क्षेत्र में एक महत्वपूर्ण पद्धति के रूप में उभरा है. प्रोस्टेट कैंसर के कैंसर रुग्णता और संयुक्त राज्य अमेरिका में और दुनिया में 13 के आसपास मृत्यु दर का एक प्रमुख कारण है. इसलिए, प्रोस्टेट सीएससी के अलगाव और जैविक लक्षण वर्णन महत्वपूर्ण ब्याज की है. प्रोस्टेट सीएससी पहले सेल लाइनों, रोगी व्युत्पन्न xenografts, और कम बीतने रोगी व्युत्पन्न निलंबन संस्कृतियों 9,10,12,14 से समृद्ध किया गया है. हमने हाल ही में सीधे मानव शल्य एस से प्रोस्टेट सीएससी के अलगाव की सूचनाउनके HLAI नकारात्मक कोशिका की सतह phenotype 10 से पुण्य amples. यहाँ विस्तार से इन कोशिकाओं के अलगाव के लिए लागू की प्रक्रियाओं हम. प्रोस्टेट ट्यूमर शल्य नमूनों से काटा और सेल निलंबन में बना रहे हैं. कोशिकाओं तो HLAI के खिलाफ एंटीबॉडी के साथ ही stromal और व्यवहार्यता मार्कर का उपयोग दाग रहे हैं, और सीएससी प्रतिदीप्ति सक्रिय सेल छँटाई (FACS) द्वारा अलग कर रहे हैं. पृथक सीएससी तो व्यवहार्य कोशिकाओं की आवश्यकता होती है assays के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="779">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">RPMI</td>
			<td style="width:195px;">Gibco Life Technologies</td>
			<td style="width:187px;">11875-093</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">Fetal bovine serum</td>
			<td style="width:195px;">Gibco Life Technologies</td>
			<td style="width:187px;">10437-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">Penicillin Streptomycin</td>
			<td style="width:195px;">Gibco Life Technologies</td>
			<td style="width:187px;">15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">PBS</td>
			<td style="width:195px;">Corning cell gro</td>
			<td style="width:187px;">21-031-CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">60 mm-15 mm cell culture dish</td>
			<td style="width:195px;">Corning</td>
			<td style="width:187px;">3295</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">35 &#181;m Cell Strainer</td>
			<td style="width:195px;">BD Falcon</td>
			<td style="width:187px;">352340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">50 ml conial tube</td>
			<td style="width:195px;">Crystalgen</td>
			<td style="width:187px;">23-2263</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">15 ml conical tune</td>
			<td style="width:195px;">Crystalgen</td>
			<td style="width:187px;">23-2265</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">Red blood cell lysing buffer</td>
			<td style="width:195px;">Sigma</td>
			<td style="width:187px;">R7757</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">HLA class I (W6/32) PE antibody</td>
			<td style="width:195px;">Abcam</td>
			<td style="width:187px;">ab43545</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">CD31 FITC antibody</td>
			<td style="width:195px;">ebioscience</td>
			<td style="width:187px;">11-0319-42</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">CD45 FITC antibody</td>
			<td style="width:195px;">Abcam</td>
			<td style="width:187px;">ab27287</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">IgG2a&#954; PE antibody</td>
			<td style="width:195px;">BD Pharminogen</td>
			<td style="width:187px;">555574</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">IgG1&#954; FITC antibody</td>
			<td style="width:195px;">BD Pharminogen</td>
			<td style="width:187px;">551954</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">DAPI</td>
			<td style="width:195px;">Invitrogen&#160;</td>
			<td style="width:187px;">d3571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:232px;">12 x 75 mm polystyrene tubes with cell strainer cap</td>
			<td style="width:195px;">BD Falcon&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;</td>
			<td style="width:187px;">352235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">Vortex Mixer</td>
			<td style="width:195px;">Crystalgen</td>
			<td style="width:187px;">CG-BV1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">10% Neutral Buffer Formalin</td>
			<td style="width:195px;">Fisher</td>
			<td style="width:187px;">RBBP-0480</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of cancer stem cells from human prostate cancer samples

कैंसर स्टेम सेल (सीएससी) मॉडल काफी पिछले दो दशकों में दोबारा गौर किया गया है. इस समय के दौरान सीएससी की पहचान की और सीधे पृथक मानव ऊतकों से और क्रमानुसार आमतौर पर फ्लो द्वारा कोशिकाओं और विभाजन की subpopulations की एंटीबॉडी लेबलिंग के माध्यम से, immunodeficient चूहों में प्रचारित किया गया है. हालांकि, प्रोस्टेट कैंसर का अनूठा नैदानिक ​​सुविधाओं में काफी ताजा मानव ट्यूमर के नमूनों से प्रोस्टेट सीएससी का अध्ययन सीमित है. हमने हाल ही में उनकी एचएलए वर्ग मैं (HLAI) नकारात्मक phenotype के पुण्य से सीधे मानव ऊतकों से प्रोस्टेट सीएससी के अलगाव की सूचना दी. प्रोस्टेट कैंसर की कोशिकाओं शल्य नमूनों से काटा और यंत्रवत् अलग हैं. एक सेल निलंबन उत्पन्न और fluorescently संयुग्मित HLAI और stromal एंटीबॉडी के साथ लेबल है. HLAI नकारात्मक कोशिकाओं की subpopulations अंत में एक प्रवाह cytometer का उपयोग कर अलग कर रहे हैं. इस प्रोटोकॉल की प्रिंसिपल सीमा के अक्सर सूक्ष्म और Multifocal प्रकृति हैprostatectomy के नमूनों में प्राथमिक कैंसर. बहरहाल, अलग रहते हैं प्रोस्टेट सीएससी immunodeficient चूहों में प्रत्यारोपण द्वारा आणविक लक्षण वर्णन और कार्यात्मक सत्यापन के लिए उपयुक्त हैं.

<img alt="चित्रा 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51332/51332fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51332/51332fig1.jpg" /> चित्रा 1. मानव प्रोस्टेट कैंसर ट्यूमर कटाई और एक मानव प्रोस्टेट कैंसर से विशिष्ट जनसंख्या illustrating साजिश प्रवाह cytometry. (ए) ट्?...

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Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

सीधे मानव ऊतकों से कैंसर स्टेम कोशिकाओं (सीएससी) के अलगाव के उनके जैविक लक्षण वर्णन के लिए अपेक्षित है. भी मुश्किल कदम समस्या निवारण पर सुझाव प्रदान करते हुए यह पांडुलिपि, मानव ऊतकों से प्रोस्टेट सीएससी के अलगाव के लिए एक कार्यप्रणाली का वर्णन करता है.

मानव प्रोस्टेट कैंसर के नमूनों से कैंसर स्टेम कोशिकाओं के अलगाव

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Evaluation of Nanoparticle Uptake in Tumors in Real Time Using Intravital Imaging

रीयल टाइम में ट्यूमर में Nanoparticle तेज intravital इमेजिंग का प्रयोग का मूल्यांकन

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle ...

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

मानव दंत लुगदी स्टेम सेल के अलगाव विशेषता, और तुलनात्मक भेदभाव दो अलग अलग तरीकों का उपयोग करके स्थायी दांत से व्युत्पन्न

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

रोगी व्युत्पन्न सेल संस्कृति और CD133 का अलगाव<sup&gt; +</sup&gt; मेलेनोमा से ख्यात कैंसर स्टेम सेल

Despite improved treatments options for melanoma available today, patients with advanced malignant melanoma still have a poor prognosis for ...

Formation of Human Prostate Epithelium Using Tissue Recombination of Rodent Urogenital Sinus Mesenchyme and Human Stem Cells

कृंतक Urogenital साइनस mesenchyme और मानव स्टेम सेल के ऊतक पुनर्संयोजन का प्रयोग मानव प्रोस्टेट उपकला का गठन

Progress in prostate cancer research is severely  limited by the availability of human-derived and hormone-na&iuml;ve model systems,  which limit our ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

मानव प्रोस्टेट कैंसर मेटास्टेसिस के एक orthotopic murine मॉडल

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

Isolation and Functional Characterization of Human Ventricular Cardiomyocytes from Fresh Surgical Samples

ताजा सर्जिकल नमूने से अलगाव और मानव निलय cardiomyocytes की कार्यात्मक विशेषता

Cardiomyocytes from diseased hearts are subjected to complex remodeling processes involving changes in cell structure, excitation contraction coupling and ...

Enrichment for Chemoresistant Ovarian Cancer Stem Cells from Human Cell Lines

मानव कोशिका लाइनों से Chemoresistant डिम्बग्रंथि के कैंसर स्टेम सेल के लिए संवर्धन

Cancer stem cells (CSCs) are defined as a subset of slow cycling and undifferentiated cells that divide asymmetrically to generate highly proliferative, ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

अग्नाशय के कैंसर नई उपचार रणनीतियों के विकास के लिए सेल के लक्षण स्टेम का अध्ययन

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Isolation and Propagation of Circulating Tumor Cells from a Mouse Cancer Model

एक माउस कर्क मॉडल से परिसंचारी ट्यूमर कोशिकाओं के अलगाव और प्रचार

Cancer metastasis is the foremost cause of cancer-associated deaths. Recent studies have shown that circulating tumor cells (CTCs) are important in cancer ...