Name: isolation of cancer stem cells from human prostate cancer samples
Uploaded: 2014-03-14T18:32:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av Hariri Family Foundation og TJ Martell Foundation.

En. Fangst og foredling av menneskelig prostatakreft Vev fra Kirurgiske prøver <ol><li> Forbered to 50 ml polystyren koniske rør inneholdende 15 ml av Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 kulturmedium supplert med 10% føtalt bovint serum (FBS) og 1% penicillin / streptomycin. </li><li> Patologi servicepersonell høste primær og metastatisk prostatakreft prøver fra prostatektomi og palliativ kirurgi prøver, med henholdsvis en Institutional Review Board godkjent protokoll. Metastatisk prøver kan fås fra l...

<ol>
	<li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hallmarks+of+cancer:+the+next+generation.">Hallmarks of cancer: the next generation.</a> Cell. 144, 646-674 (2011).</li><li>Magee, J. A., Piskounova, E., Morrison, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+stem+cells:+impact,+heterogeneity,+and+uncertainty.">Cancer stem cells: impact, heterogeneity, and uncertainty.</a> Cancer Cell. 21, 283-296 (2012).</li><li>Nguyen, L. V., Vanner, R., Dirks, P., Eaves, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+stem+cells:+an+evolving+concept.">Cancer stem cells: an evolving concept.</a> Nat. Rev. Cancer. 12, 133-143 (2012).</li><li>Valent, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+stem+cell+definitions+and+terminology:+the+devil+is+in+the+details.">Cancer stem cell definitions and terminology: the devil is in the details.</a> Nat. Rev. Cancer. 12, 767-775 (2012).</li><li>Visvader, J. E., Lindeman, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+stem+cells:+current+status+and+evolving+complexities.">Cancer stem cells: current status and evolving complexities.</a> Cell Stem Cell. 10, 717-728 (2012).</li><li>Lapidot, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cell+initiating+human+acute+myeloid+leukaemia+after+transplantation+into+SCID+mice.">A cell initiating human acute myeloid leukaemia after transplantation into SCID mice.</a> Nature. 367, 645-648 (1994).</li><li>Al-Hajj, M., Wicha, M. S., Benito-Hernandez, A., Morrison, S. J., Clarke, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+identification+of+tumorigenic+breast+cancer+cells.">Prospective identification of tumorigenic breast cancer cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100, 3983-3988 (2003).</li><li>Singh, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+human+brain+tumour+initiating+cells.">Identification of human brain tumour initiating cells.</a> Nature. 432, 396-401 (2004).</li><li>Collins, A. T., Berry, P. A., Hyde, C., Stower, M. J., Maitland, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+identification+of+tumorigenic+prostate+cancer+stem+cells.">Prospective identification of tumorigenic prostate cancer stem cells.</a> Cancer Res. 65, 10946-10951 (2005).</li><li>Domingo-Domenech, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+acquired+docetaxel+resistance+in+prostate+cancer+through+depletion+of+notch-+and+hedgehog-dependent+tumor-initiating+cells.">Suppression of acquired docetaxel resistance in prostate cancer through depletion of notch- and hedgehog-dependent tumor-initiating cells.</a> Cancer Cell. 22, 373-388 (2012).</li><li>Patrawala, L., Calhoun-Davis, T., Schneider-Broussard, R., Tang, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hierarchical+organization+of+prostate+cancer+cells+in+xenograft+tumors:+the+CD44+alpha2beta1++cell+population+is+enriched+in+tumor-initiating+cells.">Hierarchical organization of prostate cancer cells in xenograft tumors: the CD44+alpha2beta1+ cell population is enriched in tumor-initiating cells.</a> Cancer Res. 67, 6796-6805 (2007).</li><li>Qin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+PSA(-/lo)+prostate+cancer+cell+population+harbors+self-renewing+long-term+tumor-propagating+cells+that+resist+castration.">The PSA(-/lo) prostate cancer cell population harbors self-renewing long-term tumor-propagating cells that resist castration.</a> Cell Stem Cell. 10, 556-569 (2012).</li><li>Siegel, R., Naishadham, D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics,+2013.">Cancer statistics, 2013.</a> CA Cancer J. Clin. 63, 11-30 (2013).</li><li>Patrawala, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+purified+CD44++prostate+cancer+cells+from+xenograft+human+tumors+are+enriched+in+tumorigenic+and+metastatic+progenitor+cells.">Highly purified CD44+ prostate cancer cells from xenograft human tumors are enriched in tumorigenic and metastatic progenitor cells.</a> Oncogene. 25, 1696-1708 (2006).</li></ol>

Denne protokollen beskriver isolering av CSCS fra frisk human prostata kreftvevet. Flere viktige hensyn påvirke det vellykkede resultatet av denne protokollen. Utvinningen av et høyt antall levedyktige prostatakreftceller er avhengig av forsiktig grov vurdering av kirurgiske prøver. I vår erfaring, er en vellykket isolering av tumorigene prostata celler best sikret når makroskopiske tumor knuter er observert og behandlet 10. Men nå til dags prim?...

Intratumoral heterogenitet er ansett å være et kjennetegn på kreft en. Faktisk har mange mekanismer for intratumoral heterogenitet blitt beskrevet, inklusive genetisk mutasjon og interaksjoner med mikromiljøet. I tillegg kan noen kreftformer inneholde en cellulær hierarki med en subpopulasjon av kreft stamceller (CSCS) som oppviser egenskapene til tumor initiere kapasitet og selvfornyelse i serietransplantasjon assays 2-5. Utgangspunktet er beskrevet i hematologisk 6, bryst 7, og hjernen 8 maligniteter, har CSCS også blitt undersøkt i prostatakreft 9-12, så vel som andre tumortyper 2-5. CSCS er generelt ansett som en cellulær brøkdel innenfor en heterogen befolkning 2-5. Derfor er funksjonell og molekylær karakterisering av CSCS betinget av deres berikelse fra bulk populasjoner. Følgelig, i løpet av de siste to tiårene flere møttehodologies av CSC anrikning har blitt utviklet som typisk involverer separasjon av merket populasjoner ved strømningscytometri. I tillegg er en betydelig faktor i studiet av CSCS at den hierarkiske organiseringen av menneskelig vev kan bli avbrutt av eksperimentelle manipulasjoner slik som seriepassaging i kultur eller i immundefekte mus. Som et resultat, har den direkte isolering av CSCS fra humant vev dukket opp som et viktig metode i CSC-feltet. Prostatakreft er en ledende årsak til kreft sykelighet og dødelighet i USA og rundt om i verden 13. Derfor er isolert og biologisk karakterisering av prostata CSCS av betydelig interesse. Prostata CSCS har tidligere blitt beriket fra cellelinjer, pasient avledet xenograftene og lav passasje pasient avledet suspensjonskulturer 9,10,12,14. Vi har nylig rapportert isolering av prostata CSCS direkte fra humane kirurgiske samples i kraft av sin HLAI-negative celleoverflaten fenotype 10. Her har vi detalj fremgangsmåtene implementeres for isolering av disse cellene. Prostatakreft er høstet fra kirurgiske prøver og gjort til cellesuspensjoner. Celler blir deretter farget med antistoffer mot HLAI samt stromale og levedyktighet markører, og CSCS blir isolert ved fluorescens-aktivert cellesortering (FACS). Isolerte CSCS kan deretter brukes for analyser som krever levedyktige celler.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="779">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">RPMI</td>
			<td style="width:195px;">Gibco Life Technologies</td>
			<td style="width:187px;">11875-093</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">Fetal bovine serum</td>
			<td style="width:195px;">Gibco Life Technologies</td>
			<td style="width:187px;">10437-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">Penicillin Streptomycin</td>
			<td style="width:195px;">Gibco Life Technologies</td>
			<td style="width:187px;">15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">PBS</td>
			<td style="width:195px;">Corning cell gro</td>
			<td style="width:187px;">21-031-CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">60 mm-15 mm cell culture dish</td>
			<td style="width:195px;">Corning</td>
			<td style="width:187px;">3295</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">35 &#181;m Cell Strainer</td>
			<td style="width:195px;">BD Falcon</td>
			<td style="width:187px;">352340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">50 ml conial tube</td>
			<td style="width:195px;">Crystalgen</td>
			<td style="width:187px;">23-2263</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">15 ml conical tune</td>
			<td style="width:195px;">Crystalgen</td>
			<td style="width:187px;">23-2265</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">Red blood cell lysing buffer</td>
			<td style="width:195px;">Sigma</td>
			<td style="width:187px;">R7757</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">HLA class I (W6/32) PE antibody</td>
			<td style="width:195px;">Abcam</td>
			<td style="width:187px;">ab43545</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">CD31 FITC antibody</td>
			<td style="width:195px;">ebioscience</td>
			<td style="width:187px;">11-0319-42</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">CD45 FITC antibody</td>
			<td style="width:195px;">Abcam</td>
			<td style="width:187px;">ab27287</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">IgG2a&#954; PE antibody</td>
			<td style="width:195px;">BD Pharminogen</td>
			<td style="width:187px;">555574</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">IgG1&#954; FITC antibody</td>
			<td style="width:195px;">BD Pharminogen</td>
			<td style="width:187px;">551954</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">DAPI</td>
			<td style="width:195px;">Invitrogen&#160;</td>
			<td style="width:187px;">d3571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:232px;">12 x 75 mm polystyrene tubes with cell strainer cap</td>
			<td style="width:195px;">BD Falcon&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;</td>
			<td style="width:187px;">352235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">Vortex Mixer</td>
			<td style="width:195px;">Crystalgen</td>
			<td style="width:187px;">CG-BV1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">10% Neutral Buffer Formalin</td>
			<td style="width:195px;">Fisher</td>
			<td style="width:187px;">RBBP-0480</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of cancer stem cells from human prostate cancer samples

Kreften stamcelle (CSC) modellen er betydelig revisited i løpet av de siste to tiårene. I løpet av denne tiden CSCS har blitt identifisert og isolert direkte fra humane vev og serielt dyrket i immundefekte mus, vanligvis gjennom antistoffmerking av subpopulasjoner av celler og fraksjonering ved strømningscytometri. Imidlertid har de unike kliniske funksjoner av prostata kreft betraktelig begrenset studiet av prostata CSCS fra friske humane tumorprøver. Vi har nylig rapportert isolering av prostata CSCS direkte fra humant vev på grunn av HLA klasse I (HLAI)-negativ fenotype. Prostatakreftceller er høstet fra kirurgiske prøver og mekanisk dissosiert. En cellesuspensjon blir generert, og som er merket med fluorescently konjugerte HLAI og stromale antistoffer. Subpopulasjoner av HLAI-negative celler er til slutt isolert ved anvendelse av et flowcytometer. Den viktigste begrensning av denne protokollen er det ofte mikroskopiske og multifokal naturprimære kreft i prostatektomi prøver. Likevel, isolerte levende prostata CSCS er egnet for molekylær karakterisering og funksjonelle validering ved transplantasjon i immunsvikt mus.

<img alt="Figur 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51332/51332fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51332/51332fig1.jpg" /> Figur 1. Humant prostata cancer tumor høsting og flowcytometri plott som illustrerer spesifikke populasjoner fra en human prostatakreft. (A) Tumor knuter høstes for å generere en cellesuspensjon. Tumor innholdet i den behandlede prøve er bekreftet ved hjelp av konvensjonelle Hematoxylin og Eosin farging. (B)<...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples at JoVE.com

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

Isoleringen av kreft stamceller (CSCS) direkte fra humane vev er nødvendige for deres biologiske karakterisering. Dette manuskriptet beskriver en metode for isolering av prostata CSCS fra menneskelig vev, samtidig gir tips om feilsøking vanskelige trinn.

Isolering av kreft stamceller fra menneskelige prostata kreft Samples

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Evaluation of Nanoparticle Uptake in Tumors in Real Time Using Intravital Imaging

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle ...

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

Isolasjon, karakterisering og Comparative Differensiering av Human tannpulpa stamceller hentet fra permanente tenner ved hjelp av to ulike metoder

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

Pasient avledet celle Kultur og Isolering av CD133<sup&gt; +</sup&gt; Antatte kreft stamceller fra melanom

Despite improved treatments options for melanoma available today, patients with advanced malignant melanoma still have a poor prognosis for ...

Formation of Human Prostate Epithelium Using Tissue Recombination of Rodent Urogenital Sinus Mesenchyme and Human Stem Cells

Dannelse av human prostata Epitel hjelp Tissue rekombinasjon av gnager Urogenitale Sinus mesenchyme og menneskelige stamceller

Progress in prostate cancer research is severely  limited by the availability of human-derived and hormone-na&iuml;ve model systems,  which limit our ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

En orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastase

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

Isolation and Functional Characterization of Human Ventricular Cardiomyocytes from Fresh Surgical Samples

Isolasjon og Funksjonell karakterisering av menneskelig Ventrikulær Cardiomyocytes fra Fresh Kirurgiske Samples

Cardiomyocytes from diseased hearts are subjected to complex remodeling processes involving changes in cell structure, excitation contraction coupling and ...

Enrichment for Chemoresistant Ovarian Cancer Stem Cells from Human Cell Lines

Berikelse for kjemoresistent eggstokkreft stamceller fra humane cellelinjer

Cancer stem cells (CSCs) are defined as a subset of slow cycling and undifferentiated cells that divide asymmetrically to generate highly proliferative, ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

Studerer Bukspyttkjertelkreft Stem Cell Kjennetegn for å utvikle nye behandlingsstrategier

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Isolation and Propagation of Circulating Tumor Cells from a Mouse Cancer Model

Isolasjon og forplantning av sirkulerende tumorceller fra en mus Cancer Model

Cancer metastasis is the foremost cause of cancer-associated deaths. Recent studies have shown that circulating tumor cells (CTCs) are important in cancer ...