Name: harmonic nanoparticles for regenerative research
Uploaded: 2014-05-01T13:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Harmonic Nanoparticles for Regenerative Research at JoVE.com

Авторы хотели бы выразить признательность за частичное финансирование от Европейского FP7-исследовательского проекта NAMDIATREAM (NMP4-LA-2010-246479, http://www.namdiatream.eu) и проекта INTERREG IV Франция-Швейцария NAOMI.

1. Культура и расширения человеческих ЭСК <ol><li> Подготовка среда распространения клеток (так называемый PM), содержащий Нокаут DMEM с добавлением 20% нокаут сыворотки, 1% MEM незаменимых аминокислот, 1% L-глутамина 200 мм, 1% пенициллина-стрептомицина и 3,5 мкл β-меркаптоэтанола. </li><li> Оттепель чело?...

<ol>
	<li>Bonacina, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polar+Fe(IO3)3+nanocrystals+as+local+probes+for+nonlinear+microscopy.">Polar Fe(IO3)3 nanocrystals as local probes for nonlinear microscopy.</a> Applied Physics B-Lasers and Optics. 87, 399-403 (2007).</li><li>Nakayama, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tunable+nanowire+nonlinear+optical+probe.">Tunable nanowire nonlinear optical probe.</a> Nature. 447, 1098-1101 (2007).</li><li>Aufray, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+Synthesis+of+Nanosized+Niobium+Oxides+and+Lithium+Niobate+Particles+and+Their+Characterization+by+XPS+Analysis.">New Synthesis of Nanosized Niobium Oxides and Lithium Niobate Particles and Their Characterization by XPS Analysis.</a> J Nanosci Nanotechno. 9, 4780-4785 (2009).</li><li>Hsieh, C. L., Grange, R., Pu, Y., Psaltis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+harmonic+holographic+microcopy+using+nanoparticles+as+probes+for+cell+imaging.">Three-dimensional harmonic holographic microcopy using nanoparticles as probes for cell imaging.</a> Opt Express. 17, 2880-2891 (2009).</li><li>Pantazis, P., Maloney, J., Wu, D., Fraser, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Second+harmonic+generating+(SHG)+nanoprobes+for+in+vivo+imaging.">Second harmonic generating (SHG) nanoprobes for in vivo imaging.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107, 14535-14540 (2010).</li><li>Baumner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evanescent-field-induced+second+harmonic+generation+by+noncentrosymmetric+nanoparticles.">Evanescent-field-induced second harmonic generation by noncentrosymmetric nanoparticles.</a> Opt Express. 18, 23218-23225 (2010).</li><li>Le Xuan, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photostable+second-harmonic+generation+from+a+single+KTiOPO4+nanocrystal+for+nonlinear+microscopy.">Photostable second-harmonic generation from a single KTiOPO4 nanocrystal for nonlinear microscopy.</a> Small. 4, 1332-1336 (2008).</li><li>Sandeau, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defocused+imaging+of+second+harmonic+generation+from+a+single+nanocrystal.">Defocused imaging of second harmonic generation from a single nanocrystal.</a> Opt Express. 15, 16051-16060 (2007).</li><li>Johnson, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Near-field+imaging+of+nonlinear+optical+mixing+in+single+zinc+oxide+nanowires.">Near-field imaging of nonlinear optical mixing in single zinc oxide nanowires.</a> Nano Lett. 2, 279-283 (2002).</li><li>Kachynski, A. V., Kuzmin, A. N., Nyk, M., Roy, I., Prasad, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zinc+oxide+nanocrystals+for+nonresonant+nonlinear+optical+microscopy+in+biology+and+medicine.">Zinc oxide nanocrystals for nonresonant nonlinear optical microscopy in biology and medicine.</a> J Phys Chem C. 112, 10721-10724 (2008).</li><li>Bonacina, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonlinear+Nanomedecine:+Harmonic+Nanoparticles+toward+Targeted+Diagnosis+and+Therapy.">Nonlinear Nanomedecine: Harmonic Nanoparticles toward Targeted Diagnosis and Therapy.</a> Mol Pharmaceut. 10, 783-792 (2013).</li><li>Dempsey, W. P., Fraser, S. E., Pantazis, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SHG+nanoprobes:+advancing+harmonic+imaging+in+biology.">SHG nanoprobes: advancing harmonic imaging in biology.</a> Bioessays. 34, 351-360 (2012).</li><li>Campagnola, P. J., Loew, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Second-harmonic+imaging+microscopy+for+visualizing+biomolecular+arrays+in+cells,+tissues+and+organisms.">Second-harmonic imaging microscopy for visualizing biomolecular arrays in cells, tissues and organisms.</a> Nat Biotechnol. 21, 1356-1360 (2003).</li><li>Denk, W., Strickler, J. H., Webb, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=2-Photon+Laser+Scanning+Fluorescence+Microscopy.">2-Photon Laser Scanning Fluorescence Microscopy.</a> Science. 248, 73-76 (1990).</li><li>Magouroux, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-Speed+Tracking+of+Murine+Cardiac+Stem+Cells+by+Harmonic+Nanodoublers.">High-Speed Tracking of Murine Cardiac Stem Cells by Harmonic Nanodoublers.</a> Small. 8, 2752-2756 (2012).</li><li>Staedler, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Harmonic+Nanocrystals+for+Biolabeling:+A+Survey+of+Optical+Properties+and+Biocompatibility.">Harmonic Nanocrystals for Biolabeling: A Survey of Optical Properties and Biocompatibility.</a> Acs Nano. 6, 2542-2549 (2012).</li><li>Extermann, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanodoublers+as+deep+imaging+markers+for+multi-photon+microscopy.">Nanodoublers as deep imaging markers for multi-photon microscopy.</a> Optics Express. 17, 15342-15349 (2009).</li><li>Chen, I. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wavelength+dependent+damage+in+biological+multi-photon+confocal+microscopy:+A+micro-spectroscopic+comparison+between+femtosecond+Ti+:+sapphire+and+Cr+:+forsterite+laser+sources.">Wavelength dependent damage in biological multi-photon confocal microscopy: A micro-spectroscopic comparison between femtosecond Ti : sapphire and Cr : forsterite laser sources.</a> Opt. Quantum Electron. 34, 1251-1266 (2002).</li><li>Ferreira, L., Karp, J. M., Nobre, L., Langer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+opportunities:+The+use+of+Nanotechnologies+to+manipulate+and+track+stem+cells.">New opportunities: The use of Nanotechnologies to manipulate and track stem cells.</a> Cell Stem Cell. 3, 136-146 (2008).</li><li>Kaur, S., Singhal, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=When+nano+meets+stem:+The+impact+of+nanotechnology+in+stem+cell+biology.">When nano meets stem: The impact of nanotechnology in stem cell biology.</a> J Biosci Bioeng. 113, 1-4 (2012).</li><li>Hong, H., Yang, Y. N., Zhang, Y., Cai, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-Invasive+Imaging+of+Human+Embryonic+Stem+Cells.">Non-Invasive Imaging of Human Embryonic Stem Cells.</a> Curr Pharm Biotechno. 11, 685-692 (2010).</li><li>Tumbar, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+the+epithelial+stem+cell+niche+in+skin.">Defining the epithelial stem cell niche in skin.</a> Science. 303, 359-363 (2004).</li><li>Shah, B. S., Clark, P. A., Moioli, E. K., Stroscio, M. A., Mao, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Labeling+of+mesenchymal+stem+cells+by+bioconjugated+quantum+dots.">Labeling of mesenchymal stem cells by bioconjugated quantum dots.</a> Nano Lett. 7, 3071-3079 (2007).</li><li>Zimmer, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size+series+of+small+indium+arsenide-zinc+selenide+core-shell+nanocrystals+and+their+application+to+in+vivo+imaging.">Size series of small indium arsenide-zinc selenide core-shell nanocrystals and their application to in vivo imaging.</a> J Am Chem Soc. 128, 2526-2527 (2006).</li><li>Vallee, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+stem+cell-based+cardiopatches+improve+cardiac+function+in+infarcted+rats.">Embryonic stem cell-based cardiopatches improve cardiac function in infarcted rats.</a> Stem Cells Transl Med. 1, 248-260 (2012).</li><li>Idris, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracking+transplanted+cells+in+live+animal+using+upconversion+fluorescent+nanoparticles.">Tracking transplanted cells in live animal using upconversion fluorescent nanoparticles.</a> Biomaterials. 30, 5104-5113 (2009).</li><li>Haase, M., Schafer, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Upconverting+nanoparticles.">Upconverting nanoparticles.</a> Angew Chem Int Ed Engl. 50, 5808-5829 (2011).</li><li>Cheng, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multifunctional+Upconversion+Nanoparticles+for+Dual-Modal+Imaging-Guided+Stem+Cell+Therapy+under+Remote+Magnetic+Control.">Multifunctional Upconversion Nanoparticles for Dual-Modal Imaging-Guided Stem Cell Therapy under Remote Magnetic Control.</a> Adv Funct Mater. 23, 272-280 (2013).</li><li>Konig, K., So, P. T. C., Mantulin, W. W., Gratton, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+response+to+near-infrared+femtosecond+laser+pulses+in+two-photon+microscopes.">Cellular response to near-infrared femtosecond laser pulses in two-photon microscopes.</a> Optics Letters. 22, 135-136 (1997).</li></ol>

Применение нанотехнологий для исследования стволовых клеток является относительно новым, но быстро расширяется поле. Как отметил различных обзорных статей по этой теме, использование наночастиц может применяться для выполнения различных исследовательских задач, начиная от клетки о...

Нелинейные системы микроскопии, благодаря присущей им трехмерных возможностей секционирующих, все чаще срабатывает спрос на фото-стабильным флуорофорами с полос поглощения двух фотонов в ближней инфракрасной. Только в последние пару лет, в дополнение к развитию флуоресценции основе меток (красителей, квантовых точек, до-превращающего наночастицы), другая методология изображений эксплуатирует использование нового семейства по своей сути нелинейных наночастиц в качестве меток, т.е. гармонические наночастицы (HNPs), которые были специально разработаны для многофотонной микроскопии. Эти метки, основанные на неорганических нецентросимметричных кристаллов, оказывать оптический контраст, генерирующий SH частоты возбуждения: например, преобразования долю ближайшем инфракрасном свете импульсного возбуждения (λ = 800 нм) в видимый синий свет (λ / 2 = 400 нм) . Некоторые авторы в недавнем прошлом испытывали различные материалы, в том числе железа иодата Fe (IO <suб&gt; 3) 3 1, ниобата калия (KNbO 3) 2, ниобата лития (LiNbO 3) 3, титанат бария (BaTiO 3) 4,5, титанил фосфат калия (KTiOPO4, КТП) 6-8, и оксид цинка (ZnO ) 5,9,10. По сравнению с флуоресцентных зондов, HNPs обладают рядом привлекательных свойств, таких как полное отсутствие обесцвечивания и мигает, узких полос излучения, возбуждения длин волн управляемость (от ультрафиолетового до инфракрасного), возможностью поиска ориентация, и когерентного оптического отклика. Эти уникальные свойства были недавно объяснил в двух общеобразовательных обзорных статьях 11,12. Возможность работы в инфракрасной области спектра, что увеличивает глубину обработки изображений, минимизируя рассеяния и поглощения, также резко ограничивает образец деградации просмотром 13,14. Кроме того, бесконечно фото-стабильный сигнал гарантируется HNPs делает их идеальными зонды для отслеживания долгосрочных клеток, которые яы особенно привлекательным для регенеративной медицины приложений 15. В этом визуализируется эксперимента, подробно протокола предназначены для маркировки в пробирке человеческих эмбриональных стволовых клеток (чЭСК) с нефункционализованного HNPs. Синтез и подготовка коллоидных суспензий, подробно изложены в предыдущей публикации и в ссылках в нем 16 и выходит за рамки данной работы. Методологии чЭСК расследования многофотонной микроскопии и их дифференциации в сердечных кластеров (поддерживается как долгосрочных воздух-жидкость культур) представлены. Человеком ESC можно позволить дифференцировать в пределах так называемых эмбриональных телец (EBS) двумя различными способами либо путем формирования EB колониеобразующих фрагментов в суспензии или, альтернативно, вынужденных агрегацию отдельных клеток в ЭТ с помощью Aggrewell пластины, как показано на фиг.1А . Культивирование избиении кластеры клеток сердца политетрафторэтилена (ПТФЭ) пористые фильтры факторilitates их долгосрочной эксплуатации для дальнейших исследований (например электрофизиологические измерения потенциалов действия). Источником возбуждения сканирующего микроскопа должны быть способны доставить ультракоротких импульсов (с длительностью импульса, меньшей 300 фс на образце), чтобы достичь пиковую мощность, необходимую для выполнения второй гармоники визуализации HNPs. Например, наиболее распространенным фс-источник используется для работы с изображениями можно настраивать Ti: Sapphire лазеры. С другой стороны, другие сверхбыстрые лазеры могут быть использованы, например иона эрбия 17, хром форстеритом 18 или титан-сапфирового закачивается инфракрасных оптических параметрических генераторов. Микроскоп может быть оснащен объективом с предпочтительно достаточно высокой числовой апертурой. Очень важно, до измерений, и каждый раз цель заменяется, он является обязательным, чтобы минимизировать дисперсии, присутствующий в настройки (линзы) за счет оптимизации настроек лазерного импульса предварительной компрессора на работыдлина волны выбора. Эта процедура, подробно описаны в протоколе, гарантирует, что лазерный импульс является как можно ближе к преобразованию ограниченный срок (то есть самый короткий, насколько это возможно) в фокальной плоскости и максимизирует образец нелинейный отклик. Цель анализа изображения, описанного в конце протокола является для выявления и отслеживания в движениях 3D HNPs связанных с ритмическими сокращениями избиении сердечные кластеров. Отслеживание наночастицы в плоскости изображения просто реализуется путем выявления их позиции в последовательных кадров фильма. Чтобы извлечь информацию о осевого перемещения, до калибровка ответ нелинейной интенсивности в зависимости от осевого смещения является обязательным. Заметим, что для долгосрочных измерений, для активного интерферометрического контроля образца осевом положении обязан поддерживать справедливость калибровочной кривой в присутствии тепловых и / или механических заносов. В HNPs используемые здесь, чтобы ПРОФэ избиение клетки внутри агрегатов на основе оксида ниобата калия (KNbO 3), но и другие доступные нелинейные наноматериалы подробно рассмотрены в работе Staedler др. 16. Нелинейные оптические эффективность большинства из наноматериалов исследованных до сих пор очень сопоставимы. Выбор для KNbO 3 по существу мотивировано хорошей стабильности коллоидного раствора и хорошей биосовместимости, протестированных на нескольких клеточных линий человека даже при довольно высокой концентрации и длительным временем экспозиции 16. Учитывая новизну наноматериала, применяемого для этой работы, основные характеристики HNPs по сравнению с люминесцентными / люминесцентных биомаркеров показаны на короткий оригинальной компьютерной анимации видео реализованного авторами.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1008">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:231px;">Microscope Incubator</td>
			<td style="width:231px;">OKO LAB</td>
			<td style="width:205px;">UNO package (top stage)</td>
			<td style="width:343px;">&#160;37&#176;C, 5% CO2, moisturized</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="64" rowspan="2" style="height:64px;width:231px;">Multiphoton microscope</td>
			<td rowspan="2" style="width:231px;">Nikon</td>
			<td rowspan="2" style="width:205px;">AR1-MP</td>
			<td style="width:343px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:343px;">Fast scanning, four non photomultiplier descanned detectors</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="64" rowspan="3" style="height:64px;width:231px;">Filters SHG and autofluorescence</td>
			<td rowspan="3" style="width:231px;">Semrock</td>
			<td style="width:205px;">FF01-360/12-25</td>
			<td rowspan="3" style="width:343px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:205px;">FF01-395/11-25&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:205px;">FF02-485/20-25</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="64" rowspan="3" style="height:64px;width:231px;">Microscope objectives</td>
			<td rowspan="3" style="width:231px;">Nikon</td>
			<td style="width:205px;">CFI Plan Fluor 10x</td>
			<td style="width:343px;">NA 0.30, WD 16 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:205px;">CFI Plan Apo 20x</td>
			<td style="width:343px;">NA 0.75, WD 1.0 mm, VC</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:205px;">CFI Apo 40x</td>
			<td style="width:343px;">NA 1.25, WD 0.18mm &#955;S, Nano-Crystal Coat</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:231px;">Rhock inhibitor&#160;</td>
			<td style="width:231px;">Sigma</td>
			<td style="width:205px;">Y-27632</td>
			<td style="width:343px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:231px;">Knockout DMEM</td>
			<td style="width:231px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:205px;">10829</td>
			<td style="width:343px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:231px;">Knockout Serum&#160;</td>
			<td style="width:231px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:205px;">10828</td>
			<td style="width:343px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:231px;">MEM Non-Essential Amino Acids&#160;</td>
			<td style="width:231px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:205px;">1140</td>
			<td style="width:343px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:231px;">L-glutamine 200mM&#160;</td>
			<td style="width:231px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:205px;">25030</td>
			<td style="width:343px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:231px;">Penicillin-streptomycin</td>
			<td style="width:231px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:205px;">15140</td>
			<td style="width:343px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:231px;">&#946;-mercaptoethanol&#160;</td>
			<td style="width:231px;">Sigma</td>
			<td style="width:205px;">M7522</td>
			<td style="width:343px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:231px;">Collagenase IV&#160;</td>
			<td style="width:231px;">Gibco</td>
			<td style="width:205px;">17104-019</td>
			<td style="width:343px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:231px;">Roller scraper tool&#160;</td>
			<td style="width:231px;">StemPro EZPassage, Invitrogen</td>
			<td style="width:205px;">23181-010</td>
			<td style="width:343px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:231px;">StemPro Accutase&#160;</td>
			<td style="width:231px;">Gibco</td>
			<td style="width:205px;">S11105-01</td>
			<td style="width:343px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:231px;">Aggrewell system&#160;</td>
			<td style="width:231px;">StemCell Technologies</td>
			<td style="width:205px;">27845</td>
			<td style="width:343px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:231px;">Hyclone serum&#160;</td>
			<td style="width:231px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:205px;">SH30070.03</td>
			<td style="width:343px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:231px;">Gelatin</td>
			<td style="width:231px;">Sigma</td>
			<td style="width:205px;">G9391</td>
			<td style="width:343px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:231px;">6-well plates&#160;</td>
			<td style="width:231px;">Falcon</td>
			<td style="width:205px;">353046</td>
			<td style="width:343px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:231px;">24-well plates&#160;</td>
			<td style="width:231px;">Nunclon</td>
			<td style="width:205px;">142475</td>
			<td style="width:343px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:231px;">Polytetrafluoroethylene (PTFE) filters</td>
			<td style="width:231px;">Millipore&#160;</td>
			<td style="width:205px;">NA76/25</td>
			<td style="width:343px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:231px;">Inserts</td>
			<td style="width:231px;">Millipore</td>
			<td style="width:205px;">PICM03050</td>
			<td style="width:343px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

harmonic nanoparticles for regenerative research

В этом визуализируется эксперимента, подробно протокола предназначены для маркировки в пробирке человеческих эмбриональных стволовых клеток (чЭСК) со вторыми наночастиц гармоники поколения (HNPs). Последние являются новое семейство датчиков недавно введенных для маркировки биологических образцов для визуализации многофотонной. HNPs способны удвоения частоты возбуждающего света в нелинейной оптической процессе генерации второй гармоники без ограничений по длине волны возбуждения. Многофотонная основе методологии чЭСК дифференцировки в сердечных кластеров (поддерживается как долгосрочных воздух-жидкость культур) представлены в деталях. В частности, данные о том, как максимально интенсивный второй гармоники (SH) эмиссию изолированных HNPs в режиме 3D мониторинга избиении сердечную ткань в 3D показана. Анализ полученных изображений для получения 3D моделей смещения также подробно.

До оценки биений активности по конфокальной микроскопии, тщательный характеристика нелинейного оптического отклика ПТФЭ фильтра была выполнена, либо отдельно, либо в присутствии HNPs при высокой концентрации (1 мг / мл). Было обеспечено: я) обнаженного субстрата двухфотонного рады флуор?...

Watch this Scientific Journal Video about Harmonic Nanoparticles for Regenerative Research at JoVE.com

Harmonic Nanoparticles for Regenerative Research

Гармоник Наночастицы регенеративной исследований

Детали протокола предоставляются для лабораторного маркировки человеческих эмбриональных стволовых клеток с второй гармоники наночастиц генерирующих. Методологии чЭСК расследования многофотонной микроскопии и их дифференциации в сердечных кластеров также представлены.

In this visualized experiment, protocol details are provided for in vitro labeling of human embryonic stem cells (hESC) with second harmonic generation ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Constructing a Collagen Hydrogel for the Delivery of Stem Cell-loaded Chitosan Microspheres

Построение коллагена Гидрогель для доставки стволовых клеток, загруженных Хитозан микросфер

Multipotent stem cells have been shown to be extremely useful in the field of regenerative medicine1-3. However, in order to use these cells effectively ...

Viral Nanoparticles for In vivo Tumor Imaging

Viral Nanoparticles for In vivo Tumor Imaging

Вирусный наночастиц для<em&gt; В естественных условиях</em&gt; Изображения опухоли

The use of nanomaterials has the potential to revolutionize materials science and medicine. Currently, a number of different nanoparticles are being ...

Biofunctionalized Prussian Blue Nanoparticles for Multimodal Molecular Imaging Applications

Biofunctionalized берлинская лазурь Наночастицы для мультимодальных молекулярной визуализации приложений

Multimodal, molecular imaging allows the visualization of biological processes at cellular, subcellular, and molecular-level resolutions using multiple, ...

Solid Lipid Nanoparticles (SLNs) for Intracellular Targeting Applications

Solid Lipid Nanoparticles SLNs for Intracellular Targeting Applications

Твердые липидов Наночастицы (SLNS) для внутриклеточного Ориентация Приложения

Nanoparticle-based delivery vehicles have shown great promise for intracellular targeting applications, providing a mechanism to specifically alter ...

Correlative Light- and Electron Microscopy Using Quantum Dot Nanoparticles

Коррелятивное свето- и электронной микроскопии с помощью Quantum Dot Наночастицы

A method is described whereby quantum dot (QD) nanoparticles can be used for correlative immunocytochemical studies of human pathology tissue using ...

Neonatal Cardiac Scaffolds: Novel Matrices for Regenerative Studies

Новорожденных сердца Каркасы: Новые Матрицы для регенеративных исследований

The only definitive therapy for end stage heart failure is orthotopic heart transplantation.  Each year, it is estimated that more than 100,000 donor ...

Production of Metal Nanoparticles by Pulsed Laser-ablation in Liquids: A Tool for Studying the Antibacterial Properties of Nanoparticles

Получение металлических наночастиц импульсной лазерной абляцией в жидкостях: инструмент для изучения антибактериальных свойств наночастиц

The emergence of multidrug-resistant bacteria is a global clinical concern leading some to speculate about our return to a "pre-antibiotics" era of ...

20 mJ, 1 ps Yb:YAG Thin-disk Regenerative Amplifier

20 мДж, 1 пс Yb: YAG Тонкий дисковый регенеративный усилитель

This is a report on a 100 W, 20 mJ, 1 ps Yb:YAG thin-disk regenerative amplifier. A homemade Yb:YAG thin-disk, Kerr-lens mode-locked oscillator with ...

3D Microtissues for Injectable Regenerative Therapy and High-throughput Drug Screening

3D Microtissues для инъекций восстановительной терапии и высок объём наркотиков скрининг

To upgrade traditional 2D cell culture to 3D cell culture, we have integrated microfabrication with cryogelation technology to produce macroporous ...

Recombinant Collagen I Peptide Microcarriers for Cell Expansion and Their Potential Use As Cell Delivery System in a Bioreactor Model

Рекомбинатные коллаген я пептидные Microcarriers для расширения клеток и их потенциального использования в качестве системы доставки клеток в биореакторе модель