Name: quantification of breast cancer cell invasiveness using a three-dimensional (3d) model
Uploaded: 2014-06-11T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional 3D Model at JoVE.com

This work was conducted with funds to M.B. from the Canadian Institutes of Health Research (CIHR) grant MOP 107972. M.B. is a recipient of a CIHR New Investigator Salary Award. D.C. is a recipient of studentships from the Translational Breast Cancer Research Unit and the CIHR Strategic Training Program in Cancer Research and Technology Transfer, London Regional Cancer Program. C.G. is recipient of studentships from the Translational Breast Cancer Research Unit, London Regional Cancer Program and from the CIHR- Strategic Training Program in Cancer Research and Technology Transfer. SGD.

1. الثقافة ثلاثي الأبعاد للخلايا سرطان الثدي في الطابق السفلي غشاء مصفوفة (إن تقنية الغرز) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التعامل مع Matrigel مصفوفة الغشاء القاعدي: ذوبان الجليد على الجليد بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية. الطابق السفلي هو مصفوفة غشاء ال...

<ol>
	<li>Chambers, A. F., Groom, A. C., MacDonald, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissemination+and+growth+of+cancer+cells+in+metastatic+sites.">Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites.</a> Nat Rev Cancer. 2, 563-572 (2002).</li><li>Kramer, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+cell+migration+and+invasion+assays.">In vitro cell migration and invasion assays.</a> Mutat Res. 752, 10-24 (2013).</li><li>Shaw, K. R., Wrobel, C. N., Brugge, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+three-dimensional+basement+membrane+cultures+to+model+oncogene-induced+changes+in+mammary+epithelial+morphogenesis.">Use of three-dimensional basement membrane cultures to model oncogene-induced changes in mammary epithelial morphogenesis.</a> J Mammary Gland Biol Neoplasia. 9, 297-310 (2004).</li><li>Eccles, S. A., Welch, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metastasis:+recent+discoveries+and+novel+treatment+strategies.">Metastasis: recent discoveries and novel treatment strategies.</a> Lancet. 369, 1742-1757 (2007).</li><li>Poincloux, R., Lizarraga, F., Chavrier, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix+invasion+by+tumour+cells:+a+focus+on+MT1-MMP+trafficking+to+invadopodia.">Matrix invasion by tumour cells: a focus on MT1-MMP trafficking to invadopodia.</a> Journal of cell science. 122, 3015-3024 (2009).</li><li>Bissell, M. J., Labarge, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Context,+tissue+plasticity,+and+cancer:+are+tumor+stem+cells+also+regulated+by+the+microenvironment.">Context, tissue plasticity, and cancer: are tumor stem cells also regulated by the microenvironment.</a> Cancer Cell. 7, 17-23 (2005).</li><li>Burgstaller, G., Oehrle, B., Koch, I., Lindner, M., Eickelberg, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplex+Profiling+of+Cellular+Invasion+in+3D+Cell+Culture+Models.">Multiplex Profiling of Cellular Invasion in 3D Cell Culture Models.</a> PLoS One. 8, (2013).</li><li>Debnath, J., Muthuswamy, S. K., Brugge, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphogenesis+and+oncogenesis+of+MCF-10A+mammary+epithelial+acini+grown+in+three-dimensional+basement+membrane+cultures.">Morphogenesis and oncogenesis of MCF-10A mammary epithelial acini grown in three-dimensional basement membrane cultures.</a> Methods. 30, 256-268 (2003).</li><li>Mroue, R., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+cultures+of+mouse+mammary+epithelial+cells.">Three-dimensional cultures of mouse mammary epithelial cells.</a> Methods Mol Biol. 945, 221-250 (2013).</li><li>Vidi, P. A., Bissell, M. J., Lelievre, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+culture+of+human+breast+epithelial+cells:+the+how+and+the+why.">Three-dimensional culture of human breast epithelial cells: the how and the why.</a> Methods Mol Biol. 945, 193-219 (2013).</li><li>Bissell, M. J., Rizki, A., Mian, I. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+architecture:+the+ultimate+regulator+of+breast+epithelial+function.">Tissue architecture: the ultimate regulator of breast epithelial function.</a> Curr Opin Cell Biol. 15, 753-762 (2003).</li><li>Debnath, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+apoptosis+in+creating+and+maintaining+luminal+space+within+normal+and+oncogene-expressing+mammary+acini.">The role of apoptosis in creating and maintaining luminal space within normal and oncogene-expressing mammary acini.</a> Cell. 111, 29-40 (2002).</li><li>Weaver, V. M., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+culture+models+to+study+mechanisms+governing+apoptosis+in+normal+and+malignant+mammary+epithelial+cells.">Functional culture models to study mechanisms governing apoptosis in normal and malignant mammary epithelial cells.</a> J Mammary Gland Biol Neoplasia. 4, 193-201 (1999).</li><li>Weaver, V. M., Howlett, A. R., Langton-Webster, B., Petersen, O. W., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+a+functionally+relevant+cell+culture+model+of+progressive+human+breast+cancer.">The development of a functionally relevant cell culture model of progressive human breast cancer.</a> Semin Cancer Biol. 6, 175-184 (1995).</li><li>Kenny, H. A., Krausz, T., Yamada, S. D., Lengyel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+a+novel+3D+culture+model+to+elucidate+the+role+of+mesothelial+cells,+fibroblasts+and+extra-cellular+matrices+on+adhesion+and+invasion+of+ovarian+cancer+cells+to+the+omentum.">Use of a novel 3D culture model to elucidate the role of mesothelial cells, fibroblasts and extra-cellular matrices on adhesion and invasion of ovarian cancer cells to the omentum.</a> Int J Cancer. 121, 1463-1472 (2007).</li><li>Cougoule, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+leukocytes+and+macrophages+of+various+phenotypes+have+distinct+abilities+to+form+podosomes+and+to+migrate+in+3D+environments.">Blood leukocytes and macrophages of various phenotypes have distinct abilities to form podosomes and to migrate in 3D environments.</a> European journal of cell biology. 91, 938-949 (2012).</li><li>Sung, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+Impact+of+2D+and+3D+Fibroblast+Cultures+on+In+Vitro+Breast+Cancer+Models.">Understanding the Impact of 2D and 3D Fibroblast Cultures on In Vitro Breast Cancer Models.</a> PLoS One. , (2013).</li><li>Li, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beta-arrestin/Ral+signaling+regulates+lysophosphatidic+acid-mediated+migration+and+invasion+of+human+breast+tumor+cells.">Beta-arrestin/Ral signaling regulates lysophosphatidic acid-mediated migration and invasion of human breast tumor cells.</a> Mol Cancer Res. 7, 1064-1077 (2009).</li><li>Zajac, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GPR54+(KISS1R)+transactivates+EGFR+to+promote+breast+cancer+cell+invasiveness.">GPR54 (KISS1R) transactivates EGFR to promote breast cancer cell invasiveness.</a> PLoS One. 6, (2011).</li><li>Underwood, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ultrastructure+of+MCF-10A+acini.">The ultrastructure of MCF-10A acini.</a> J Cell Physiol. 208, 141-148 (2006).</li><li>Lelievre, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+phenotype+depends+on+reciprocal+interactions+between+the+extracellular+matrix+and+the+structural+organization+of+the+nucleus.">Tissue phenotype depends on reciprocal interactions between the extracellular matrix and the structural organization of the nucleus.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 95, 14711-14716 (1998).</li><li>Petersen, O. W., Ronnov-Jessen, L., Howlett, A. R., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+with+basement+membrane+serves+to+rapidly+distinguish+growth+and+differentiation+pattern+of+normal+and+malignant+human+breast+epithelial+cells.">Interaction with basement membrane serves to rapidly distinguish growth and differentiation pattern of normal and malignant human breast epithelial cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 89, 9064-9068 (1992).</li><li>Weaver, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=beta4+integrin-dependent+formation+of+polarized+three-dimensional+architecture+confers+resistance+to+apoptosis+in+normal+and+malignant+mammary+epithelium.">beta4 integrin-dependent formation of polarized three-dimensional architecture confers resistance to apoptosis in normal and malignant mammary epithelium.</a> Cancer Cell. 2, 205-216 (2002).</li><li>Cvetkovic, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KISS1R+Induces+Invasiveness+of+Estrogen+Receptor-Negative+Human+Mammary+Epithelial+and+Breast+Cancer+Cells.">KISS1R Induces Invasiveness of Estrogen Receptor-Negative Human Mammary Epithelial and Breast Cancer Cells.</a> Endocrinology. , 1999-2014 (2013).</li><li>Alemayehu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=beta-Arrestin2+regulates+lysophosphatidic+acid-induced+human+breast+tumor+cell+migration+and+invasion+via+Rap1+and+IQGAP1.">beta-Arrestin2 regulates lysophosphatidic acid-induced human breast tumor cell migration and invasion via Rap1 and IQGAP1.</a> PLoS One. , (2013).</li></ol>

وقد سمح تطوير تقنيات زراعة الخلايا 3D الباحثين لدراسة تحويل خلايا الثدي الظهارية، مما يسمح لنا لتصور التغيرات المورفولوجية دراماتيكية. إلى جانب تحليل غزو الخلايا والأجسام الشبه الكروية الظهارية الثديية واحدة أو متعددة الخلايا يمكن استخدامها لتقييم التغيرات في الت?...

الهجرة وغزو الخلايا الفردية أو الجماعية نوعان من السمات المميزة لمرض السرطان، والمطلوبة للانتشار النقيلي خلايا سرطان 1-4. قدرة الخلايا السرطان لبدء ورم خبيث يعتمد على قدرتها على الهجرة وغزو الأنسجة المجاورة في استخدام invadopodia للحط من الغشاء القاعدي الخلايا. Invadopodia ديناميكية نتوءات تدهور المصفوفة الأكتين الغنية التي تمكن تدهور المصفوفة خارج الخلية من خلال إطلاق سراح-مهينة مصفوفة البروتياز 5. غزو ​​الخلايا السرطانية ينطوي على تدهور المصفوفة تليها الهجرة من الخلايا السرطانية، وهذا يترافق مع إعادة تنظيم ثلاثية الأبعاد (3D) بيئة مصفوفة 2. وبالتالي، لاختراق من خلال مصفوفة، خلية يجب تحويل شكله والتفاعل مع المصفوفة خارج الخلية (ECM) 2. الحفاظ على سلامة أنسجة الثدي يعتمد على المراقب المالي بإحكامالعمارة الأنسجة د منذ تقاطعات خلية ECM وخلية خلية التصاق تؤثر التعبير الجيني وتعطيل قطبية الظهارية يمكن أن تؤدي إلى ظهور السرطان 6-10. ومع ذلك، فإن معظم في المختبر الهجرة والغزو المقايسات مثل transwell المقايسات غرفة أو المقايسات الجرح للخدش هي ثنائية الأبعاد (2D)، وبالتالي إهمال هذه التفاعلات المعقدة بين الخلايا والبيئة المجاورة لها 3،6،8،11-14. تم الكشف عن الاختلافات المورفولوجية والوظيفية كبيرة بما في ذلك الاختلافات في التشكل الخلوي، والتمايز الخلوي، التصاقات خلية مصفوفة وأنماط التعبير الجيني عن طريق زراعة الخلايا في الثقافات 3D التي تفتقر عادة في المقايسات 2D 2،6،8،11. وبالتالي، يستخدم من المقايسات 3D هي مفيدة بشكل كبير في تلخص أكثر الفسيولوجية في الجسم الحي حالة، مما أدى إلى ترجمة أفضل النتائج آفاقا جديدة في مجال البحوث الأساسية إلى العيادة 6-10. ومع ذلك، تجدر الإشارة إلى، على الرغم من العديد من المزايا المكتسبة من استخدام الثقافات 3D، وهذا النموذج لا يمكن القبض على جميع من تعقيدات في الجسم الحي الورم المكروية التي تضم مختلف أنواع الخلايا. ومع ذلك، فمن الممكن لدمج الخلايا اللحمية في نماذج 3D (على سبيل المثال، الخلايا الليفية، الكريات البيض، والضامة) لدراسة تأثير التفاعلات للورم اللحمية على التصاق الخلايا السرطانية والغزو 15-17. خلايا الثدي الظهارية في الثقافة تنمو أكثر فعالية عندما البروتينات ECM مثل laminin والكولاجين موجودة. مع هذا معروف، وقد استمدت خليط مصفوفة المتاحة تجاريا من Engelbreth-هولم-سرب (الصحة والسلامة) الورم الفئران وكما هو معروف غشاء الطابق السفلي مصفوفة Matrigel 2،8. وقد أنشئ عدد من التقنيات لزراعة الخلايا الظهارية كما المستعمرات 3D في الغشاء القاعدي مصفوفة 2،8. الطابق السفلي غشاء نموذج مصفوفة 3D فعالة لإنشاء خلايا الثدي الخبيثة على حد سواء وغير الخبيثةالنمو، تشبه ما يحدث في الجسم الحي في البيئة 18،19. الخلايا هي الخلايا الظهارية MCF10A الثديية غير الخبيثة. عندما نمت في الطابق السفلي مصفوفة الغشاء، وهذه الخلايا في المعرض الصفات المجراة من خلايا الثدي العادية والخضوع لسيطرة تكاثر الخلايا، والاستقطاب الخلية، وموت الخلايا المبرمج لإنشاء مساحة التجويف 8،12،20. وعلاوة على ذلك، وظهور نواة خلية من خلايا MCF10A تشكيل عنيبات ​​في الثقافات 3D أكثر شبها تلك الخلايا الظهارية الثديية في الأنسجة من تلك المستزرعة في أحادي الطبقة 21. وكانت الدراسات التي بيسيل وزملاؤه أول من كشف عن أن خلايا الثدي الخبيثة يمكن أن تكون متباينة من خلايا الثدي غير الخبيثة عندما نمت في محيط-laminin الغنية، منذ عرض الخلايا الخبيثة النمط الظاهري غير منظم للغاية، وزيادة الانتشار، وانخفضت الخلية الى التصاق الخلايا، وزيادة التعبير عن علامات الوسيطة وزيادة في عدد الغازية شكلت هيكل 3،6،22. يمكن تشوهات البيئة خلية التأثير تشكيل الورم 20. طريقة الثقافة 3D يمكن استخدامها لدراسة فعالية الاتصال الذي يحدث بين الخلايا السرطانية والبيئة المحيطة بها وتحديد كيفية تعبير البروتين مثل هذه التأثيرات 14،20،21،23 الاتصالات. توفر هذه المقالة منهجية مفصلة لتنمو MDA-MB-231 خلايا سرطان الثدي في الثقافات 3D لتحليل الغازية، ودراسة فقدان مورفولوجيا الظهارية باستخدام laminin علامة الظهارية، وهو مكون من الغشاء القاعدي الخلايا 18،19،24، 25. توفير الإجراءات التفصيلية القدرة على تحديد بدقة وبتكاثر النجمية (الغازية) تشكيل هيكل من قبل أي الخلايا السرطانية الغازية وليس يحد إلى الثدي شيوعا خطوط الخلايا السرطانية (مثل MDA-MB-231، Hs578T، MCF-7، أو T47D ). وبالتالي، يمكن هذا الاختبار بمثابة منصة لتقييم كيفية التعبير البروتين في الخلايا أو العلاج مع الموالاة أو المضادة للمركبات الغازية تنظيم تدهور المصفوفة خارج الخلية، من قبل خلايا مفردة أو متعددة.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1062">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:323px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:265px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:355px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1.5 mL tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CA10011-700</td>
			<td>Sterile, disposable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">100-mm culture dish BD353003</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CABD353003</td>
			<td>Sterile, disposable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 mL Falcon tube</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CA21008-918</td>
			<td>Sterile, disposable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1 mL filtered tips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10011-350</td>
			<td>Sterile, disposable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">200 uL filtered tips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>22234-016</td>
			<td>Sterile, disposable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">20 uL filtered tips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>22234-008</td>
			<td>Sterile, disposable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">35-mm glass-bottomed Confocal No.1 culture dishes&#160;</td>
			<td style="width:265px;">MatTek Corporation</td>
			<td>P35G-1.0-14-C</td>
			<td>Precooled before use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>ALB003.100</td>
			<td>Used at 3% for IF</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Alexa Fluor 488 Goat Anti-Mouse IgG (H+L) Antibody, highly cross-adsorbed</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>&#160;A11029</td>
			<td>1:250 for IF</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Alexa Fluor 568 Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) Antibody</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>&#160;A11011</td>
			<td>1:1200 for IF</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:323px;">Anti-Beta-Catenin&#160;</td>
			<td>BD Transduction Laboratories</td>
			<td>610153</td>
			<td>Mouse-monoclonal; Used at 1:100 for IF</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F1051</td>
			<td>Used at 10% (v/v)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hoechst 33258, Pentahydrate (bis-Benzimide) - 10 mg&#8260;mL Solution in Water</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>H3569</td>
			<td>Used at 0.1% (1:10000 dilution)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">InVivo Analyzer Suite&#160;</td>
			<td style="width:265px;">Media Cybernetics</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for 3D culture imaging (DIC images at 10x and 40x)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Kisspeptin-10 (KP-10)</td>
			<td style="width:265px;">EZ Biolabs</td>
			<td style="width:119px;">PT0512100601</td>
			<td>Used at 100nM&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-Laminin&#160;</td>
			<td>Cedarlane</td>
			<td>AB19012(CH)</td>
			<td>Rabbit-polyclonal full length human; Used at 1:100 for IF</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LSM-510 META laser scanning microscope&#160;</td>
			<td style="width:265px;">Zeiss</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used at 63X objective; oil immersion lens</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Matrigel phenol red free (BD356237)</td>
			<td style="width:265px;">VWR</td>
			<td>CACB356237</td>
			<td>&#160;Lot No.2180819; 10.4 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Olympus IX-81 microscope&#160;</td>
			<td style="width:265px;">Olympus</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for 3D culture imaging (DIC images at 10x and 40x)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>Antibiotic (added to media; used at 0.01%)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10 mL pipet&#160;</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CA53300-523</td>
			<td>Sterile, disposeable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RPMI 1640 Medium with Glutamine</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11875-119</td>
			<td>Used for culturing of MDA-MB-231 cells</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">0.25% Trypsin-EDTA (1X), Phenol Red</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>25200-072</td>
			<td>Used to trypsinize MDA-MB-231 cells</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:323px;">MEGM (bullet kit): MEBM (CC3151)+Single quots (CC4136)</td>
			<td style="width:265px;">Lonza</td>
			<td style="width:119px;">CC-3150</td>
			<td>Used for culturing of MCF10A cells</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantification of breast cancer cell invasiveness using a three-dimensional (3d) model

بات معروفا أن المكروية الخلوية والأنسجة والمنظمين الحرجة التي تؤثر على بدء الورم والتقدم. وعلاوة على ذلك، فقد ثبت المصفوفة خارج الخلية (ECM) ليكون منظم تنتقد سلوك الخلية في الثقافة والتوازن في الجسم الحي. النهج الحالي لزراعة الخلايا على ثنائي الأبعاد (2D)، والنتائج الأسطح البلاستيكية في اضطراب وفقدان التفاعلات المعقدة بين الخلايا والمكروية بهم. من خلال استخدام ثلاثية الأبعاد (3D) المقايسات والثقافة، وضعت شروط للتفاعل الخلايا المكروية تشبه المكروية في الجسم الحي. توفر هذه المقالة منهجية مفصلة لزراعة خلايا سرطان الثدي في مصفوفة 3D الطابق السفلي بروتين الغشاء، لاثبات القدرة الثقافة 3D في تقييم غزو الخلايا في البيئة المحيطة. بالإضافة إلى ذلك، نحن نناقش كيف يكون لهذه المقايسات 3D القدرة على دراسة فقدان إشارة molecules التي تنظم مورفولوجيا الظهارية بواسطة المناعية الإجراءات. مساعدة هذه الدراسات لتحديد تفاصيل الآلية الهامة في عمليات تنظيم الغزو، اللازمة لانتشار سرطان الثدي.

ويتضح مثال على الخلايا MDA-MB-231 في غزو 3D مصفوفة في الشكل 3C. هي جزء لا يتجزأ من الخلايا في المصفوفة (يوم 1)، والبدء في تشكيل الغازية (النجمية) هياكل من قبل يوم 3، وغزو تماما في مصفوفة من قبل يوم 5 (الشكل 3C). يتم حساب عدد المستعمرات النجمية شكلت، وكنسبة مئوية م...

Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional 3D Model at JoVE.com

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional 3D Model

توفر هذه المقالة منهجيات تفصيلية لاستخدام ثلاثية الأبعاد (3D) فحوصات لتحديد سرطان الثدي غزو الخلية. على وجه التحديد، ونحن مناقشة الإجراءات المطلوبة لانشاء مثل هذه المقايسات، الكمي، وتحليل البيانات، فضلا عن أساليب لدراسة فقدان النزاهة الغشاء الذي يحدث عندما تغزو الخلايا.

الكمي لسرطان الثدي الغزو خلية باستخدام ثلاثي الأبعاد (3D) نموذج

It is now well known that the cellular and tissue microenvironment are critical regulators influencing tumor initiation and progression. Moreover, the ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional (3D) Model

Multi-modal Imaging of Angiogenesis in a Nude Rat Model of Breast Cancer Bone Metastasis Using Magnetic Resonance Imaging, Volumetric Computed Tomography and Ultrasound

ومتعددة الوسائط التصوير من الأوعية الدموية في نموذج الفئران عاري من سرطان الثدي الإنبثاث العظام باستخدام التصوير بالرنين المغناطيسي، الحجمي التصوير المقطعي والموجات فوق الصوتية

Angiogenesis is an essential feature of cancer growth and metastasis formation. In bone metastasis, angiogenic factors are pivotal for tumor cell ...

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

غيروي ثلاثي الأبعاد<em&gt; في المختبر</em&gt; نمذجة التفاعلات اللحمية-طلائي سرطان المبيض خلال بدء والتقدم

Epithelial ovarian cancers (EOCs) are the leading cause of death from gynecological malignancy in Western societies. Despite advances in surgical ...

Human Neuroendocrine Tumor Cell Lines as a Three-Dimensional Model for the Study of Human Neuroendocrine Tumor Therapy

الإنسان الخلية السرطانية الهرموني العصبي خطوط بمثابة نموذج ثلاثي الأبعاد لدراسة الإنسان علاج ورم الغدد الصم العصبية

Neuroendocrine tumors (NETs) are rare tumors, with an incidence of two per 100,&#x200A;000 individuals per year, and they account for 0.5% of all human ...

A Three-dimensional Tissue Culture Model to Study Primary Human Bone Marrow and its Malignancies

ثقافة الأنسجة نموذج ثلاثي الأبعاد لدراسة الابتدائية نخاع العظم الإنسان والأورام الخبيثة في

Tissue culture has been an invaluable tool to study many aspects of cell function, from normal development to disease. Conventional cell culture methods ...

Initiation of Metastatic Breast Carcinoma by Targeting of the Ductal Epithelium with Adenovirus-Cre: A Novel Transgenic Mouse Model of Breast Cancer

بدء النقيلي سرطان الثدي عن طريق استهداف ظهارة الأقنية مع اتش، لجنة المساواة العرقية: رواية المعدلة وراثيا نموذج الفأر من سرطان الثدي

Breast cancer is a heterogeneous disease involving complex cellular interactions between the developing tumor and immune system, eventually resulting in ...

Profiling of Estrogen-regulated MicroRNAs in Breast Cancer Cells

التنميط من MicroRNAs الاستروجين التنظيم في خلايا سرطان الثدي

Estrogen plays vital roles in mammary gland development and breast cancer progression. It mediates its function by binding to and activating the estrogen ...

Three Dimensional Cultures: A Tool To Study Normal Acinar Architecture vs. Malignant Transformation Of Breast Cells

ثلاثة الثقافات الأبعاد: أداة لدراسة الهندسة المعمارية عادي عنيبية مقابل التحول السرطاني للخلايا الثدي

Invasive breast carcinomas are a group of malignant epithelial tumors characterized by the invasion of adjacent tissues and propensity to metastasize. The ...

Three-dimensional Co-culture Model for Tumor-stromal Interaction

ثلاثي الأبعاد نموذج المشارك الثقافة ل-ورم انسجة التفاعل

Cancer progression (initiation, growth, invasion and metastasis) occurs through interactions between malignant cells and the surrounding tumor stromal ...

Three-Dimensional (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Three-Dimensional 3D Tumor Spheroid Invasion Assay

ثلاثي الأبعاد (3D) ورم الجسم الشبه الكروي الغزو الفحص

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in ...