Name: quantification of breast cancer cell invasiveness using a three-dimensional (3d) model
Uploaded: 2014-06-11T13:00:00
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This work was conducted with funds to M.B. from the Canadian Institutes of Health Research (CIHR) grant MOP 107972. M.B. is a recipient of a CIHR New Investigator Salary Award. D.C. is a recipient of studentships from the Translational Breast Cancer Research Unit and the CIHR Strategic Training Program in Cancer Research and Technology Transfer, London Regional Cancer Program. C.G. is recipient of studentships from the Translational Breast Cancer Research Unit, London Regional Cancer Program and from the CIHR- Strategic Training Program in Cancer Research and Technology Transfer. SGD.

지하 막 매트릭스에있는 유방암 세포의 1. 입체 문화 (매립 기술) <ol><li> 취급 리겔 기저막 매트릭스 : 4 ℃에서 하룻밤 얼음 해동 기저막 매트릭스는 저온에서 액체이지만, 실온에서 고체화. 얼음 (그림 1A-B)에 지하 막 매트릭스를 유지합니다. </li><li> 나선형 패턴 (그림 1C)에서 P-200 Pipetman의 끝 부분을 사용하여 확산 매트릭스에 의한 기저막 행렬의 50 μL와 공 초점 1 번 유?...

<ol>
	<li>Chambers, A. F., Groom, A. C., MacDonald, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissemination+and+growth+of+cancer+cells+in+metastatic+sites.">Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites.</a> Nat Rev Cancer. 2, 563-572 (2002).</li><li>Kramer, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+cell+migration+and+invasion+assays.">In vitro cell migration and invasion assays.</a> Mutat Res. 752, 10-24 (2013).</li><li>Shaw, K. R., Wrobel, C. N., Brugge, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+three-dimensional+basement+membrane+cultures+to+model+oncogene-induced+changes+in+mammary+epithelial+morphogenesis.">Use of three-dimensional basement membrane cultures to model oncogene-induced changes in mammary epithelial morphogenesis.</a> J Mammary Gland Biol Neoplasia. 9, 297-310 (2004).</li><li>Eccles, S. A., Welch, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metastasis:+recent+discoveries+and+novel+treatment+strategies.">Metastasis: recent discoveries and novel treatment strategies.</a> Lancet. 369, 1742-1757 (2007).</li><li>Poincloux, R., Lizarraga, F., Chavrier, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix+invasion+by+tumour+cells:+a+focus+on+MT1-MMP+trafficking+to+invadopodia.">Matrix invasion by tumour cells: a focus on MT1-MMP trafficking to invadopodia.</a> Journal of cell science. 122, 3015-3024 (2009).</li><li>Bissell, M. J., Labarge, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Context,+tissue+plasticity,+and+cancer:+are+tumor+stem+cells+also+regulated+by+the+microenvironment.">Context, tissue plasticity, and cancer: are tumor stem cells also regulated by the microenvironment.</a> Cancer Cell. 7, 17-23 (2005).</li><li>Burgstaller, G., Oehrle, B., Koch, I., Lindner, M., Eickelberg, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplex+Profiling+of+Cellular+Invasion+in+3D+Cell+Culture+Models.">Multiplex Profiling of Cellular Invasion in 3D Cell Culture Models.</a> PLoS One. 8, (2013).</li><li>Debnath, J., Muthuswamy, S. K., Brugge, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphogenesis+and+oncogenesis+of+MCF-10A+mammary+epithelial+acini+grown+in+three-dimensional+basement+membrane+cultures.">Morphogenesis and oncogenesis of MCF-10A mammary epithelial acini grown in three-dimensional basement membrane cultures.</a> Methods. 30, 256-268 (2003).</li><li>Mroue, R., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+cultures+of+mouse+mammary+epithelial+cells.">Three-dimensional cultures of mouse mammary epithelial cells.</a> Methods Mol Biol. 945, 221-250 (2013).</li><li>Vidi, P. A., Bissell, M. J., Lelievre, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+culture+of+human+breast+epithelial+cells:+the+how+and+the+why.">Three-dimensional culture of human breast epithelial cells: the how and the why.</a> Methods Mol Biol. 945, 193-219 (2013).</li><li>Bissell, M. J., Rizki, A., Mian, I. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+architecture:+the+ultimate+regulator+of+breast+epithelial+function.">Tissue architecture: the ultimate regulator of breast epithelial function.</a> Curr Opin Cell Biol. 15, 753-762 (2003).</li><li>Debnath, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+apoptosis+in+creating+and+maintaining+luminal+space+within+normal+and+oncogene-expressing+mammary+acini.">The role of apoptosis in creating and maintaining luminal space within normal and oncogene-expressing mammary acini.</a> Cell. 111, 29-40 (2002).</li><li>Weaver, V. M., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+culture+models+to+study+mechanisms+governing+apoptosis+in+normal+and+malignant+mammary+epithelial+cells.">Functional culture models to study mechanisms governing apoptosis in normal and malignant mammary epithelial cells.</a> J Mammary Gland Biol Neoplasia. 4, 193-201 (1999).</li><li>Weaver, V. M., Howlett, A. R., Langton-Webster, B., Petersen, O. W., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+a+functionally+relevant+cell+culture+model+of+progressive+human+breast+cancer.">The development of a functionally relevant cell culture model of progressive human breast cancer.</a> Semin Cancer Biol. 6, 175-184 (1995).</li><li>Kenny, H. A., Krausz, T., Yamada, S. D., Lengyel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+a+novel+3D+culture+model+to+elucidate+the+role+of+mesothelial+cells,+fibroblasts+and+extra-cellular+matrices+on+adhesion+and+invasion+of+ovarian+cancer+cells+to+the+omentum.">Use of a novel 3D culture model to elucidate the role of mesothelial cells, fibroblasts and extra-cellular matrices on adhesion and invasion of ovarian cancer cells to the omentum.</a> Int J Cancer. 121, 1463-1472 (2007).</li><li>Cougoule, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+leukocytes+and+macrophages+of+various+phenotypes+have+distinct+abilities+to+form+podosomes+and+to+migrate+in+3D+environments.">Blood leukocytes and macrophages of various phenotypes have distinct abilities to form podosomes and to migrate in 3D environments.</a> European journal of cell biology. 91, 938-949 (2012).</li><li>Sung, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+Impact+of+2D+and+3D+Fibroblast+Cultures+on+In+Vitro+Breast+Cancer+Models.">Understanding the Impact of 2D and 3D Fibroblast Cultures on In Vitro Breast Cancer Models.</a> PLoS One. , (2013).</li><li>Li, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beta-arrestin/Ral+signaling+regulates+lysophosphatidic+acid-mediated+migration+and+invasion+of+human+breast+tumor+cells.">Beta-arrestin/Ral signaling regulates lysophosphatidic acid-mediated migration and invasion of human breast tumor cells.</a> Mol Cancer Res. 7, 1064-1077 (2009).</li><li>Zajac, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GPR54+(KISS1R)+transactivates+EGFR+to+promote+breast+cancer+cell+invasiveness.">GPR54 (KISS1R) transactivates EGFR to promote breast cancer cell invasiveness.</a> PLoS One. 6, (2011).</li><li>Underwood, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ultrastructure+of+MCF-10A+acini.">The ultrastructure of MCF-10A acini.</a> J Cell Physiol. 208, 141-148 (2006).</li><li>Lelievre, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+phenotype+depends+on+reciprocal+interactions+between+the+extracellular+matrix+and+the+structural+organization+of+the+nucleus.">Tissue phenotype depends on reciprocal interactions between the extracellular matrix and the structural organization of the nucleus.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 95, 14711-14716 (1998).</li><li>Petersen, O. W., Ronnov-Jessen, L., Howlett, A. R., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+with+basement+membrane+serves+to+rapidly+distinguish+growth+and+differentiation+pattern+of+normal+and+malignant+human+breast+epithelial+cells.">Interaction with basement membrane serves to rapidly distinguish growth and differentiation pattern of normal and malignant human breast epithelial cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 89, 9064-9068 (1992).</li><li>Weaver, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=beta4+integrin-dependent+formation+of+polarized+three-dimensional+architecture+confers+resistance+to+apoptosis+in+normal+and+malignant+mammary+epithelium.">beta4 integrin-dependent formation of polarized three-dimensional architecture confers resistance to apoptosis in normal and malignant mammary epithelium.</a> Cancer Cell. 2, 205-216 (2002).</li><li>Cvetkovic, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KISS1R+Induces+Invasiveness+of+Estrogen+Receptor-Negative+Human+Mammary+Epithelial+and+Breast+Cancer+Cells.">KISS1R Induces Invasiveness of Estrogen Receptor-Negative Human Mammary Epithelial and Breast Cancer Cells.</a> Endocrinology. , 1999-2014 (2013).</li><li>Alemayehu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=beta-Arrestin2+regulates+lysophosphatidic+acid-induced+human+breast+tumor+cell+migration+and+invasion+via+Rap1+and+IQGAP1.">beta-Arrestin2 regulates lysophosphatidic acid-induced human breast tumor cell migration and invasion via Rap1 and IQGAP1.</a> PLoS One. , (2013).</li></ol>

3D 세포 배양 기술의 개발은 연구자주세요 극적인 형태 학적 변화를 시각화 할 수 있도록, 유방 상피 세포의 변화를 연구 할 수있다. 세포 침윤을 분석 외에, 단일 또는 다세포 유방 상피 세포 접착 상체는, 증식, 크기 및 기저 혀끝 극성의 변화를 평가하기 위해 사용될 수있다. 세포가 ECM (8)과 겹쳐있다 이전에보고 된 방법과는 대조적으로, 우리의 방법은 정량 할 다 방향 침입을 허용 ECM <su...

마이그레이션 및 개인 또는 집단 세포의 침윤 암의 두 가지 특징입니다, 암세포 1-4의 전이성 확산에 필요합니다. 전이를 개시하는 암 세포의 능력은 이주 및 세포의 기저막을 저하 invadopodia를 사용하여 인접 조직으로 침입하는 그들의 능력에 달려있다. Invadopodia 행렬 분해하는 프로 테아 제 5의 출시를 통해 세포 외 기질의 분해를 가능하게 동적 말라 풍부한 매트릭스 분해 돌출부이다. 암 세포 침윤은 암 세포의 이주 다음 행렬의 저하를 수반하고이를 3 차원 (3D) 행렬이 환경의 재구성을 수반한다. 따라서, 매트릭스를 통해 침투, 세포는 그 모양을 변형하고, 세포 외 기질 (ECM) 2와 상호 작용해야합니다. 유방 조직의 무결성을 유지 단단히 관제사,에 따라 달라집니다세포-ECM과 세포 - 세포 접착 접합 유전자 발현 및 상피 극성의 중단에 영향을 미치는 때문에 D 조직 구조는 암 6-10의 발병으로 이어질 수 있습니다. 그러나, 트랜스 웰 챔버 분석이나 상처 스크래치 분석 등 대부분의 생체 외 마이그레이션 및 침입 분석은 2 차원 (2D)이며, 따라서 이러한 세포와 그 인접 환경 3,6,8,11-14 사이의 복잡한 상호 작용을 무시. 세포 형태의 변화, 세포 분화, 세포 매트릭스 유착과 유전자 발현 패턴을 포함하여 상당한 형태 학적 및 기능적 다양성은 일반적으로 2,6,8,11을 분석 차원에서 부족한 3D 배양 세포를 배양하여 검출되었다. 따라서, 진료소 6-10에 기초 연구에서 획기적인 연구 결과의 더 나은 번역을 선도, 3D 분석의 생체 내 조건에서 더 많은 생리를 recapitulating에 크게 도움이됩니다 사용합니다. 그러나, 주목해야, 3 차원 배양을 이용하여 얻은 많은 장점에도 불구하고,이 모델은 다양한 세포 유형을 포함 생체 내 종양 미세 환경의 복잡성 모두를 캡처 할 수있다. 그러나, 3D 모델로 간질 세포를 포함 할 수있다 (예를 들어, 섬유 아세포, 백혈구 및 대 식세포) 암 세포 부착 및 침윤 15-17에서 종양 - 기질 상호 작용의 효과를 연구한다. 이러한 라미닌 및 콜라겐 ECM 단백질이있을 때 문화의 유방 상피 세포가 가장 효율적으로 성장한다. 이 알려진으로, 상업적으로 이용 가능한 매트릭스 혼합물 Engelbreth-홀름 - 스웜 (EHS) 쥐의 종양에서 파생되어 리겔 기저막 매트릭스 2,8로 알려져있다. 기술의 수는 기저막 매트릭스 2,8 차원의 식민지로 상피 세포 성장하기 위해 설립되었다. 3D 기저막 행렬 모델은 악성 및 비 악성 둘 유방암 세포를 확립하기위한 효과적인성장, 생체 내 환경 (18, 19)에서 발생되는 것을 닮은. MCF10A 세포는 비 악성 유방 상피 세포이다. 기저막 매트릭스에서 성장하는 경우, 이들 세포는 정상적인 유방 세포의 생체 내 특성의 전시 및 세포 증식, 세포 편광 및 루멘 공간 8,12,20을 확립 아폽토시스를 조절 겪는다. 또한, 3 차원 배양을 형성 MCF10A 꽈리 세포의 세포 핵의 외관은 더 가깝게 조직 유선 상피 세포들 (21)에서 단층 배양에 비해 유사. 비셀 및 동료에 의해 연구는 악성 세포가 매우 무질서 표현형을 표시하기 때문에, 라미닌이 풍부한 환경에서 성장 확산을 증가, 감소하면 악성 유방 세포가 아닌 악성 유방 세포에서 분화 될 수 있다는 것을 나타 내기 위해 최초로 세포 - 투 - 세포 부착, 증가 간충직 마커의 발현 및 침입 구조 수의 증가는 3,6,2 형성된2. 셀 환경의 이상이 종양 형성 (20)에 영향을 미칠 수있다. 3D 배양법 효과적으로 종양 세포와 그 주변 환경 사이에서 발생하는 통신을 연구하는 방법과이 단백질의 발현에 영향 같은 통신 14,20,21,23를 결정하는데 사용될 수있다. 이 문서에서는, 침입을 분석하는 3 차원의 문화에서 MDA-MB-231 유방암 세포 성장을, 그리고 상피 마커 라미닌, 세포 기저막 18,19,24의 구성 요소를 사용하여 상피 형태의 손실을 연구하는 자세한 방법을 제공합니다 25. 자세한 절차는 정확하고 재현성있는 침습성 암 세포에 의해 방사상 (침습) 구조의 형성을 정량화하고 MDA-MB-231, Hs578T, MCF-7 또는 T47D 같은 일반적인 유방암 세포주 (에 제한되지 않는 기능을 제공한다 ). 따라서,이 분석은 방법으로 단백질의 세포에서 발현 또는 치료를 평가하기위한 플랫폼 역할을 할 수 있습니다 프로 또는 안티 -침략 화합물은 하나 또는 여러 개의 세포, 세포 외 기질의 분해를 조절한다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1062">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:323px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:265px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:355px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1.5 mL tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CA10011-700</td>
			<td>Sterile, disposable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">100-mm culture dish BD353003</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CABD353003</td>
			<td>Sterile, disposable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 mL Falcon tube</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CA21008-918</td>
			<td>Sterile, disposable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1 mL filtered tips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10011-350</td>
			<td>Sterile, disposable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">200 uL filtered tips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>22234-016</td>
			<td>Sterile, disposable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">20 uL filtered tips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>22234-008</td>
			<td>Sterile, disposable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">35-mm glass-bottomed Confocal No.1 culture dishes&#160;</td>
			<td style="width:265px;">MatTek Corporation</td>
			<td>P35G-1.0-14-C</td>
			<td>Precooled before use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>ALB003.100</td>
			<td>Used at 3% for IF</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Alexa Fluor 488 Goat Anti-Mouse IgG (H+L) Antibody, highly cross-adsorbed</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>&#160;A11029</td>
			<td>1:250 for IF</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Alexa Fluor 568 Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) Antibody</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>&#160;A11011</td>
			<td>1:1200 for IF</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:323px;">Anti-Beta-Catenin&#160;</td>
			<td>BD Transduction Laboratories</td>
			<td>610153</td>
			<td>Mouse-monoclonal; Used at 1:100 for IF</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F1051</td>
			<td>Used at 10% (v/v)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hoechst 33258, Pentahydrate (bis-Benzimide) - 10 mg&#8260;mL Solution in Water</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>H3569</td>
			<td>Used at 0.1% (1:10000 dilution)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">InVivo Analyzer Suite&#160;</td>
			<td style="width:265px;">Media Cybernetics</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for 3D culture imaging (DIC images at 10x and 40x)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Kisspeptin-10 (KP-10)</td>
			<td style="width:265px;">EZ Biolabs</td>
			<td style="width:119px;">PT0512100601</td>
			<td>Used at 100nM&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-Laminin&#160;</td>
			<td>Cedarlane</td>
			<td>AB19012(CH)</td>
			<td>Rabbit-polyclonal full length human; Used at 1:100 for IF</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LSM-510 META laser scanning microscope&#160;</td>
			<td style="width:265px;">Zeiss</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used at 63X objective; oil immersion lens</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Matrigel phenol red free (BD356237)</td>
			<td style="width:265px;">VWR</td>
			<td>CACB356237</td>
			<td>&#160;Lot No.2180819; 10.4 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Olympus IX-81 microscope&#160;</td>
			<td style="width:265px;">Olympus</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for 3D culture imaging (DIC images at 10x and 40x)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>Antibiotic (added to media; used at 0.01%)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10 mL pipet&#160;</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CA53300-523</td>
			<td>Sterile, disposeable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RPMI 1640 Medium with Glutamine</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11875-119</td>
			<td>Used for culturing of MDA-MB-231 cells</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">0.25% Trypsin-EDTA (1X), Phenol Red</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>25200-072</td>
			<td>Used to trypsinize MDA-MB-231 cells</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:323px;">MEGM (bullet kit): MEBM (CC3151)+Single quots (CC4136)</td>
			<td style="width:265px;">Lonza</td>
			<td style="width:119px;">CC-3150</td>
			<td>Used for culturing of MCF10A cells</td>
		</tr>
	</tbody>
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quantification of breast cancer cell invasiveness using a three-dimensional (3d) model

그것은 지금 잘 세포 및 조직 미세 종양의 개시 및 진행에 영향을 미치는 중요한 규제 것으로 알려져있다. 또한, 세포 외 기질 (ECM)는 생체 내에서의 문화와 항상성에있는 세포 행동의 중요한 조절기로 입증되었습니다. 이차원 (2D)에서 세포를 배양의 현재의 접근 방식, 그리고 그들의 세포 미세 환경 간의 복잡한 상호 작용의 교란 및 손실 플라스틱 표면 결과. 3 차원 (3D) 배양 분석의 사용을 통해, 세포 미세 환경 상호 작용을위한 조건은 생체 내 미세 환경을 닮은 확립된다. 이 문서는 주변 환경에 세포 침략의 평가에 3D 문화의 가능성을 예시, 3D 지하 막 단백질 매트릭스에서 유방암 세포를 성장하기위한 세부 방법론을 제공합니다. 또, 이러한 3D 분석법은 molec 신호의 손실을 검사 할 가능성이있는 방법을 논의절차를 면역 염색에서 상피 형태를 조절 ules. 이러한 연구는 유방암의 확산에 필요한 침입을 조절 공정에 중요한 기계적 세부 사항을 확인하는 데 도움.

3D 행렬에 침입하는 MDA-MB-231 세포의 예는도 3C에 도시되어있다. 세포는 매트릭스 (1 일)에 포함하고, 3 일에 의해 침략 (별 모양) 구조를 형성하기 시작하고, 완전 5 일 (그림 3C)에 의해 매트릭스에 침투하고 있습니다. 형성 성상 식민지의 수는 계산하고, (침습적 및 비 침습적) 접시 당 콜로니의 총 수의 백분율로 표시됩니다. 측정이 5 일 동안 매일 수행하고 있기 때문에 또한...

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Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional 3D Model

이 문서는 유방암 세포의 침입을 정량화하는 3 차원 (3D) 분석의 사용에 대한 자세한 방법을 제공합니다. 특히, 우리는 세포가 침입 할 때 발생하는 멤브레인 무결성의 손실을 검사하는 등의 분석을 설정하는 데 필요한 절차, 정량화 및 데이터 분석뿐만 아니라 방법에 대해 설명합니다.

3 차원 (3D) 모델을 사용하여 유방암 세포 침윤의 정량화

It is now well known that the cellular and tissue microenvironment are critical regulators influencing tumor initiation and progression. Moreover, the ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional (3D) Model

Multi-modal Imaging of Angiogenesis in a Nude Rat Model of Breast Cancer Bone Metastasis Using Magnetic Resonance Imaging, Volumetric Computed Tomography and Ultrasound

자기 공명 영상, 체적 계산의 Tomography 및 초음파를 이용한 유방암의 뼈 전이의 누드 쥐 모델에서 Angiogenesis의 멀티 모달 이미징

Angiogenesis is an essential feature of cancer growth and metastasis formation. In bone metastasis, angiogenic factors are pivotal for tumor cell ...

연구

의학

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

3 차원 Heterotypic<em&gt; 체외에서</em난소 암 개시 및 진행하는 동안 Stromal - 상피 조직의 상호 작용&gt; 모델링

Epithelial ovarian cancers (EOCs) are the leading cause of death from gynecological malignancy in Western societies. Despite advances in surgical ...

Human Neuroendocrine Tumor Cell Lines as a Three-Dimensional Model for the Study of Human Neuroendocrine Tumor Therapy

인간 Neuroendocrine 종양 치료의 연구를위한 3 차원 모델로 인간 Neuroendocrine 종양 세포 라인

Neuroendocrine tumors (NETs) are rare tumors, with an incidence of two per 100,&#x200A;000 individuals per year, and they account for 0.5% of all human ...

A Three-dimensional Tissue Culture Model to Study Primary Human Bone Marrow and its Malignancies

차 사람 골수 및 악성 종양을 연구하는 세 가지 차원 조직 배양 모델

Tissue culture has been an invaluable tool to study many aspects of cell function, from normal development to disease. Conventional cell culture methods ...

Initiation of Metastatic Breast Carcinoma by Targeting of the Ductal Epithelium with Adenovirus-Cre: A Novel Transgenic Mouse Model of Breast Cancer

유방암의 소설 형질 전환 마우스 모델 : 아데노 바이러스 크레와 유관 상피의 대상으로 전이성 유방암의 개시

Breast cancer is a heterogeneous disease involving complex cellular interactions between the developing tumor and immune system, eventually resulting in ...

Profiling of Estrogen-regulated MicroRNAs in Breast Cancer Cells

유방암 세포에서 에스트로겐 조절 마이크로 RNA의 프로파일

Estrogen plays vital roles in mammary gland development and breast cancer progression. It mediates its function by binding to and activating the estrogen ...

Three Dimensional Cultures: A Tool To Study Normal Acinar Architecture vs. Malignant Transformation Of Breast Cells

세 가지 차원 문화 : 유방 세포의 악성 변형 대 일반 선포 건축을 연구하는 도구

Invasive breast carcinomas are a group of malignant epithelial tumors characterized by the invasion of adjacent tissues and propensity to metastasize. The ...

Three-dimensional Co-culture Model for Tumor-stromal Interaction

종양 기질 상호 작용에 대한 세 가지 차원의 공동 문화 모델

Cancer progression (initiation, growth, invasion and metastasis) occurs through interactions between malignant cells and the surrounding tumor stromal ...

Three-Dimensional (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Three-Dimensional 3D Tumor Spheroid Invasion Assay

3 차원 (3D) 종양 회전 타원체 침공 분석

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in ...