Name: isolation and culture of adult mouse cardiomyocytes for cell signaling and in vitro cardiac hypertrophy
Uploaded: 2014-05-21T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Adult Mouse Cardiomyocytes for Cell Signaling and in vitro Cardiac Hypertrophy at JoVE.com

وأيد هذا العمل من قبل القومي للقلب والرئة والدم المعهد منحة HL-36573. نشكر السيد ديفيد سوا لتحرير هذه المخطوطة.

وقد تم كل البحوث التي أجريت على الفئران وفقا للإجراءات ومبادئ توجيهية من المعاهد الوطنية للصحة، وتمت الموافقة على البروتوكولات من قبل اللجنة المؤسسية رعاية الحيوان واستخدام جامعة توليدو، كلية الطب وعلوم الحياة. 1. الإرواء تحضير ?...

<ol>
	<li>Louch, W. E., Sheehan, K. A., Wolska, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+in+cardiomyocyte+isolation,+culture,+and+gene+transfer.">Methods in cardiomyocyte isolation, culture, and gene transfer.</a> J. Mol. Cell. 51, 288-298 (2011).</li><li>Gross, D. R., Gross, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Isolated heart preparations, problems, and pitfalls. In: Animal Models in Cardiovascular Research. , 109-130 (2009).</li><li>Schl&#252;ter, K. D., Piper, H. M., Dheim, S., Mohr, F. W., Delmar, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+adult+ventricular+cardiomyocytes.">Isolation and culture of adult ventricular cardiomyocytes.</a> Practical Methods in Cardiovascular Research. , 557-567 (2005).</li><li>O&#39;Connell, T. D., Ni, Y. G., Lin, K. M., Han, H. P., Yan, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+adult+cardiac+myocytes+for+signaling+studies.">Isolation and culture of adult cardiac myocytes for signaling studies.</a> AfCS research reports. 1 (5), 1-9 (2003).</li><li>O&#39;Connell, T. D., Rodrigo, M. C., Simpon, P. C., Vivanco, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+adult+mouse+cardiac+myocytes.">Isolation and culture of adult mouse cardiac myocytes.</a> Methods in Molecular Biology. 35, 271-296 (2007).</li><li>Nilolskaya, A., Sharma, V., Sigg, D. C., Laizzo, P. S., Xiao, Y. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+culture+models+and+methods.">Cell culture models and methods.</a> Cardiac Electrophysiology Methods and Models. , 213-235 (2010).</li><li>Merx, M. W., Schrader, M., Dhein, S., Mohr, F. W., Delmar, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+working+heart.">The working heart.</a> Practical Methods in Cardiovascular Research. , 173-189 (2005).</li><li>Kabaeva, Z., Zhao, M., Michele, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blebbistatin+extends+culture+life+of+adult+mouse+cardiac+myocytes+and+allows+efficient+and+stable+transgene+expression.">Blebbistatin extends culture life of adult mouse cardiac myocytes and allows efficient and stable transgene expression.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, 1667-1674 (2008).</li><li>Lou, Q., Li, W., Efimov, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+dynamic+instability+and+wavelength+in+arrhythmia+maintenance+as+revealed+by+panoramic+imaging+with+blebbistatin+vs.+2,3-butanedione+monoxime.">The role of dynamic instability and wavelength in arrhythmia maintenance as revealed by panoramic imaging with blebbistatin vs. 2,3-butanedione monoxime.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 302, 262-269 (2012).</li><li>Liu, C. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduction+of+Na/K-ATPase+potentiates+Marinobufagenin-induced+cardiac+dysfunction+and+myocyte+apoptosis.">Reduction of Na/K-ATPase potentiates Marinobufagenin-induced cardiac dysfunction and myocyte apoptosis.</a> J. Biol. Chem. 287 (20), 16390-16398 (2012).</li><li>Bai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+roles+of+the+cardiac+Na+/Ca2+-exchanger+in+ouabain-induced+inotropy,+cell+signaling,+and+hypertrophy.">Different roles of the cardiac Na+/Ca2+-exchanger in ouabain-induced inotropy, cell signaling, and hypertrophy.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 304, 427-435 (2013).</li><li>Liu, L. J., Zhao, X. C., Pierre, S. V., Askari, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+PI3K-AKT+signaling+pathway+with+digitalis-induced+hypertrophy+of+cardiac+myocytes.">Association of PI3K-AKT signaling pathway with digitalis-induced hypertrophy of cardiac myocytes.</a> Am. J. Physiol. Cell Physiol. 293, 1489-1497 (2007).</li><li>Flynn, J. M., Santana, L. F., Melov, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+Cell+Transcriptional+Profiling+of+Adult+Mouse+Cardiomyocytes.">Single Cell Transcriptional Profiling of Adult Mouse Cardiomyocytes.</a> J. Vis. Exp. (58), (2011).</li></ol>

للحصول على أفضل إعداد، الخطوات الأكثر أهمية هي: 1) ربط سرعان ما قلب الماوس إلى قنية بعد الاستئصال؛ 2) نضح القلب المناسبة. أيضا، لاحظ أن نوعية المياه ودرجة الحرارة التروية، ودرجة الحموضة من العازلة، والتعقيم، ونقاء الكيميائية، ونظيفة، وأنابيب وغرف غير الملوثة هي أيضا من العوامل ا...

العضلية ليست التكاثري. هناك بعض خطوط الخلايا cardiomyocyte الأذيني، مثل HL-1 و AT-1 الخلايا المشتقة من الأورام الأذيني الماوس؛ ومع ذلك، لا توجد البطين الكبار cardiomyocyte خطوط الخلايا المتاحة للبحوث. مزارع الخلايا العضلية الأولية من الماوس الكبار تقدم نموذجا قويا للأبحاث القلب على المستويات الخلوية والجزيئية. حتى الآن، كانت قد استخدمت على نطاق واسع لالبيوكيميائية والفسيولوجية والدوائية والبحوث 1. بالإضافة إلى ذلك، فإن الاستخدام المتكرر من الفئران المعدلة وراثيا وقد استلزم أساليب فعالة من cardiomyocyte العزلة. يسمح ثقافة نقية لظروف خالية من التفاعل مع أجهزة أخرى والدوران الجهازي، مثل من خلال العوامل الهرمونية العصبية والهرمونات مثل الذاتية 2،3. ومع ذلك، والعزلة الناجح العضلية يمكن أن يكون تحديا. ويستند البروتوكول ونحن نقدم هنا على تجاربنا مع cardiomyocyt الفئران الكباروفاق وطريقة وصفها أوكونيل وآخرون 4،5. وخاصة في عام 2007 5، وصفوه تقنيات مفصل من الاستعدادات عازلة لزراعة الخلايا وفحص وظيفية. منذ myocytes الماوس هي عرضة للانكماش مقارنة العضلية الفئران، وتستكمل المخازن المؤقتة أو وسائل الإعلام المستخدمة في نضح، والهضم، كا 2 + تسامح، والطلاء والثقافة في بروتوكول الماوس مع غير محدد الإثارة، تقلص اقتران المانع، 2، 3 Butanedione monoxime (بي دي إم) لمنع الانكماش لعفوية، وبالتالي الجدوى والعائد من myocytes على شكل قضيب تحسن إلى حد كبير. في البروتوكول قدم هنا، يتم فصل myocytes في منطقة عازلة البوتاسيوم عالية من القلب معزولة عن طريق تعديل نضح Langendorff مع النوع الثاني كولاجيناز. كولاجيناز الثاني فواصل بفعالية أسفل المصفوفة بين الخلايا والخلايا النشرات. يبقي الحل نضح أيضا الأيض الخلوي عند مستوى منخفض 6. في additiعلى، ونظام القلب معزولة عن جهاز هارفارد كنا هنا هو مصممة تصميما جيدا لدرجة حرارة محددة وثابتة السيطرة على ضغط 7. ويوفر هذا النهج الاستعدادات تكرار للغاية والسكان موحدة من نوع خلية واحدة، والتي يمكن استخدامها في الثقافة بين عشية وضحاها لقياس إشارات البروتينات أو الثقافة 2-3 اليوم لفحوصات القلب الضخامي.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="774">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="41" rowspan="2" style="height:41px;width:257px;">Isolated heart system for small rodent</td>
			<td style="width:131px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:99px;">IHSR-mouse 73-4019</td>
			<td style="width:288px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:257px;">Aortic Cannula, OD 1.0 mm</td>
			<td style="width:131px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:99px;">73-2816</td>
			<td style="width:288px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:257px;">Dumont #4 Forceps</td>
			<td style="width:131px;">Fine science tools</td>
			<td style="width:99px;">11294-00</td>
			<td style="width:288px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:257px;">Straight sharp serrated scissors</td>
			<td style="width:131px;">Fine science tools</td>
			<td style="width:99px;">14070-12</td>
			<td style="width:288px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:257px;">Serrated Graefe forceps</td>
			<td style="width:131px;">Fine science tools</td>
			<td style="width:99px;">11050-10</td>
			<td style="width:288px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:257px;">Curved, serrated Graefe forceps</td>
			<td style="width:131px;">Fine science tools</td>
			<td style="width:99px;">11052-10</td>
			<td style="width:288px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:257px;">Straight Mini Serrefines clamps</td>
			<td style="width:131px;">Fine science tools</td>
			<td style="width:99px;">18054-28</td>
			<td style="width:288px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:257px;">MEM</td>
			<td style="width:131px;">Gibco</td>
			<td style="width:99px;">11575-032</td>
			<td style="width:288px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:257px;">Collagenase II</td>
			<td style="width:131px;">Worthington</td>
			<td style="width:99px;">4176</td>
			<td style="width:288px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mucosal universal detergent</td>
			<td style="width:131px;">Sigma</td>
			<td style="width:99px;">Z637181</td>
			<td>Mucasol is a fast alkaline residue-free detergent.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation and culture of adult mouse cardiomyocytes for cell signaling and in vitro cardiac hypertrophy

جعلت التطورات التكنولوجية الفئران المعدلة وراثيا، بما في ذلك المعدلة وراثيا والفئران خروج المغلوب الجينات، وأداة أساسية في العديد من المجالات البحثية. تحظى بقبول واسع العضلية الكبار كنموذج جيد للالفيزيولوجيا الخلوية القلب والفيزيولوجيا المرضية، فضلا عن التدخل الصيدلانية. الفئران المعدلة وراثيا يحول دون الحاجة إلى عمليات العدوى cardiomyocyte معقدة التركيب الوراثي لتوليد المرجوة، والتي هي غير فعالة نظرا لتمايز محطة العضلية. سوف العزلة وثقافة كمية عالية الجودة والعضلية وظيفية تستفيد بشكل كبير بحوث القلب والأوعية الدموية، وتوفير أداة مهمة للإشارة الخلية البحوث والتنمية تنبيغ المخدرات. هنا، نحن تصف طريقة راسخة لعزل العضلية الماوس الكبار التي يمكن تنفيذها مع قليل من التدريب. يتم استئصاله قلب الفأر ومقنى إلى نظام القلب معزولة، ثم مع perfused ع خالية من الكالسيوم وعاليةotassium العازلة تليها النوع الثاني كولاجيناز الهضم في وضع Langendorff نضح الوراء. هذا البروتوكول تعطي نتيجة متسقة لجمع الوظيفية العضلية الماوس الكبار من مجموعة متنوعة من الفئران المعدلة وراثيا.

1. الناجحة عزل الكمي وتستخدم معيارين لقياس نجاح العزلة: أولا، عدد العضلية معزولة، والثانية، ونسبة على شكل قضيب الكالسيوم متسامحة لتقريب myocytes غير متسامح. عموما هذا البروتوكول يستغرق حوالي 75-90 دقيقة من القلب إلى إزالة الطلاء خلية عض?...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Adult Mouse Cardiomyocytes for Cell Signaling and in vitro Cardiac Hypertrophy at JoVE.com

Isolation and Culture of Adult Mouse Cardiomyocytes for Cell Signaling and in vitro Cardiac Hypertrophy

العزلة وثقافة الكبار ماوس العضلية للاشارة الخليوي و<em&gt; في المختبر</em&gt; تضخم القلب

نحن تصف طريقة موثوق بها لعزل العضلية الماوس الكبار. هذا البروتوكول تعطي نتيجة متسقة لثقافة الكبار العضلية وظيفية من مجموعة متنوعة من الفئران المعدلة وراثيا.

Technological advances have made genetically modified mice, including transgenic and gene knockout mice, an essential tool in many research fields. Adult ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation and Culture of Adult Mouse Cardiomyocytes for Cell Signaling and in vitro Cardiac Hypertrophy

Isolation and Genetic Manipulation of Adult Cardiac Myocytes for Confocal Imaging

العزلة والتلاعب الجيني لأمراض القلب للبالغين Myocytes التصوير متحد البؤر

Cardiac myocytes isolated from adult hearts are widely accepted as a model somewhere half way between embryonic and neonatal muscle cells on one side and ...

Single Cell Transcriptional Profiling of Adult Mouse Cardiomyocytes

التنميط واحدة من الخلايا العضلية الترانسكربتي ماوس الكبار

While numerous studies have examined gene expression changes from homogenates of heart tissue, this prevents studying the inherent stochastic variation ...

Isolation and Culture of Individual Myofibers and their Satellite Cells from Adult Skeletal Muscle

العزلة وثقافة فردية وMyofibers زنزاناتهم القمر الصناعي من العضلات الهيكلية الكبار

Muscle  regeneration in the adult is performed by resident stem cells called satellite  cells. Satellite cells are defined by  their position between the ...

Isolation and Culture of Neonatal Mouse Cardiomyocytes

العزلة وثقافة الأطفال حديثي الولادة ماوس العضلية

Cultured neonatal cardiomyocytes have long been used to study  myofibrillogenesis and myofibrillar functions. Cultured cardiomyocytes allow  for easy ...

Isolation, Culture, and Functional Characterization of Adult Mouse Cardiomyoctyes

العزلة والثقافة، وتوصيف وظيفي من الكبار ماوس Cardiomyoctyes

The use of primary cardiomyocytes (CMs) in culture has provided a powerful complement to murine models of heart disease in advancing our understanding of ...

Isolation and Physiological Analysis of Mouse Cardiomyocytes

العزلة والفسيولوجية تحليل ماوس العضلية

Cardiomyocytes, the workhorse cell of the heart, contain exquisitely organized cytoskeletal and contractile elements that generate the contractile force ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

العزلة وثقافة الأسنان طلائي الخلايا الجذعية من الكبار ماوس القاطعة

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

Isolation, Culture and Transduction of Adult Mouse Cardiomyocytes

العزلة والثقافة وتنبيغ الخلايا العضلية ماوس الكبار

Cultured cardiomyocytes can be used to study cardiomyocyte biology using techniques that are complementary to in vivo systems. For example, the purity and ...

Isolation and Culture of Primary Mouse Keratinocytes from Neonatal and Adult Mouse Skin

عزل وثقافة الكرياتينية الماوس الرئيسية من حديثي الولادة والفأر الكبار الجلد

The keratinocyte (KC) is the predominant cell type in the epidermis, the outermost layer of the skin. Epidermal KCs play a critical role in providing skin ...

Isolation of Mouse Epidermal Keratinocytes and Their In Vitro Clonogenic Culture

عزل الخلايا الكيراتينية البشرة الماوس وثقافتهم في المختبر Clonogenic

The protocol described here is a reliable method of harvesting primary keratinocytes from adult female mice (54 &#177; 2 days old) yielding approximately ...