Name: sample preparation for single virion atomic force microscopy and super-resolution fluorescence imaging
Uploaded: 2014-01-02T21:00:00
Duration: 5 min 31 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Sample Preparation for Single Virion Atomic Force Microscopy and Super-resolution Fluorescence Imaging at JoVE.com

Мы благодарим доктора Тилля Бёкинга за оригинальный протокол подготовки одной молекулы. 
Эта работа была поддержана грантом NSF 1121972 (SS).

<ol>
	<li>Pang, H. -. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virion+stiffness+regulates+immature+HIV-1+entry.">Virion stiffness regulates immature HIV-1 entry.</a> Retrovirology. 10, 4 (2013).</li><li>Kol, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Stiffness+Switch+in+Human+Immunodeficiency+Virus.">A Stiffness Switch in Human Immunodeficiency Virus.</a> Biophys. J. 92, 1777-1783 (2007).</li><li>Ortega-Esteban, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimizing+tip&#8211;sample+forces+in+jumping+mode+atomic+force+microscopy+in+liquid.">Minimizing tip&#8211;sample forces in jumping mode atomic force microscopy in liquid.</a> Ultramicroscopy. 114, 56-61 (2012).</li><li>Ortega-Esteban, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+dynamics+of+human+adenovirus+disassembly+induced+by+mechanical+fatigue.">Monitoring dynamics of human adenovirus disassembly induced by mechanical fatigue.</a> Sci. Rep. 3, (2013).</li><li>Hernando-P&#233;rez, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physical+Virology:+Direct+Measurement+of+Phage.">Physical Virology: Direct Measurement of Phage.</a> phi29 Stiffness Provides Evidence of Internal Pressure (Small 15/2012). Small. 8, 2365-2365 (2012).</li><li>Carrasco, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA-mediated+anisotropic+mechanical+reinforcement+of+a+virus.">DNA-mediated anisotropic mechanical reinforcement of a virus.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 13706-13711 (2006).</li><li>Sofia, S. J., Premnath, V. V., Merrill, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Poly(ethylene+oxide)+Grafted+to+Silicon+Surfaces:+Grafting+Density+and+Protein+Adsorption.">Poly(ethylene oxide) Grafted to Silicon Surfaces: Grafting Density and Protein Adsorption.</a> Macromolecules. 31, 5059-5070 (1998).</li><li>Visnapuu, M. -. L., Duzdevich, D., Greene, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+importance+of+surfaces+in+single-molecule+bioscience.">The importance of surfaces in single-molecule bioscience.</a> Mol. Biosyst. 4, 394-403 (2008).</li><li>Elenko, M. P., Szostak, J. W., Van Oijen, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-molecule+binding+experiments+on+long+time+scales.">Single-molecule binding experiments on long time scales.</a> Rev. Sci. Instrum. 81, (2010).</li><li>van Oijen, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-Molecule+Kinetics+of+&#955;+Exonuclease+Reveal+Base+Dependence+and+Dynamic+Disorder.">Single-Molecule Kinetics of &#955; Exonuclease Reveal Base Dependence and Dynamic Disorder.</a> Science. 301, 1235-1238 (2003).</li><li>B&#246;cking, T., Aguet, F., Harrison, S. C., Kirchhausen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-molecule+analysis+of+a+molecular+disassemblase+reveals+the+mechanism+of+Hsc70-driven+clathrin+uncoating.">Single-molecule analysis of a molecular disassemblase reveals the mechanism of Hsc70-driven clathrin uncoating.</a> Nat. Struct. Mol. Biol. 18, 295-301 (2011).</li><li>Cocucci, E., Aguet, F., Boulant, S., Kirchhausen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+First+Five+Seconds+in+the+Life+of+a+Clathrin-Coated+Pit.">The First Five Seconds in the Life of a Clathrin-Coated Pit.</a> Cell. 150, 495-507 (2012).</li><li>Rust, M. J., Bates, M., Zhuang, X. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sub-diffraction-limit+imaging+by+stochastic+optical+reconstruction+microscopy.">Sub-diffraction-limit imaging by stochastic optical reconstruction microscopy.</a> 3, 793-795 (2006).</li><li>Betzig, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+intracellular+fluorescent+proteins+at+nanometer+resolution.">Imaging intracellular fluorescent proteins at nanometer resolution.</a> Science. 313, 1642-1645 (2006).</li><li>Hess, S. T., Girirajan, T. P. K., Mason, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultra-High+Resolution+Imaging+by+Fluorescence+Photoactivation+Localization+Microscopy.">Ultra-High Resolution Imaging by Fluorescence Photoactivation Localization Microscopy.</a> Biophys. J. 91, 4258-4272 (2006).</li><li>Juette, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+sub-100+nm+resolution+fluorescence+microscopy+of+thick+samples.">Three-dimensional sub-100 nm resolution fluorescence microscopy of thick samples.</a> Nat. Methods. 5, 527-529 (2008).</li><li>Xu, K., Zhong, G., Zhuang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actin,+Spectrin,+and+Associated+Proteins+Form+a+Periodic+Cytoskeletal+Structure+in+Axons.">Actin, Spectrin, and Associated Proteins Form a Periodic Cytoskeletal Structure in Axons.</a> Science. 339, 452-456 (2013).</li><li>Huang, B., Wang, W., Bates, M., Zhuang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-Dimensional+Super-Resolution+Imaging+by+Stochastic+Optical+Reconstruction+Microscopy.">Three-Dimensional Super-Resolution Imaging by Stochastic Optical Reconstruction Microscopy.</a> Science. 319, 810-813 (2008).</li><li>Hodges, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+packaging+of+polymerases+within+vesicular+stomatitis+virus.">Asymmetric packaging of polymerases within vesicular stomatitis virus.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 440, 271-276 (2013).</li><li>Lawson, N. D., Stillman, E. A., Whitt, M. A., Rose, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recombinant+vesicular+stomatitis+viruses+from+DNA.">Recombinant vesicular stomatitis viruses from DNA.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 92, 4477-4481 (1995).</li></ol>

Авторы не имеют конкурирующих финансовых интересов в этой статье.

Одновийная визуализация с помощью AFM и флуоресцентной визуализации высокого разрешения может быть использована в качестве альтернативной методологии криоэмографии. Каждая из этих методологий имеет свои специфические сильные стороны. Например AFM можно сделать на WT virions без требования на маркировании образца или внутренне вирусных протеинов. Расположение вирусных структур не связано с их вкладом в эластичные свойства вириона.
Одновирионная визуализация супер-разрешения в сочетании с недавно разработанными вирусными обратными генетическими подходами становится мощным методом локализации низкого числа копийвирусных белков 20. Рекомбинантные вирусы с заменой их белков белками, слитыми с флуоресцентными белками, могут быть сделаны и очищены с помощью этих обратных генетических подходов. Хотя визуализация супер-разрешения имеет специфичность отчасти из-за генетической пометки, она требует использования вирусов-мутантов.
AFM и супер-разрешение изображения являются бесплатные методы, которые используют очень похожие препараты образца. Методы, изложенные в этой статье, которые приняты в виде более ранних анализов одной молекулы изображения, позволяют якорь одного виньоны с небольшим влиянием на топологию виньонов.

Зарядка на основе неспецифических взаимодействий обычно используется для приобщения виньонов в атомной силовоймикроскопии 1,2. Эти методы особенно хорошо работают при использовании на неуроногих вирионов с очень жесткойкапсиды 3-6. Хотя эти методы очень эффективны в обездвиживания образца, они не препятствуют неспецифической привязки белков к поверхности. Неспецифическая привязка может создать проблему при попытке изображения вирионов с AFM и супер-разрешение флуоресценции методы, которые требуют инкубации образца с различными антителами. Здесь мы наметим метод подготовки образца для специфической иммобилизации виньонов.
Поли (этиленгликоль) (PEG), привитый поли (L-лизин) (PLL) и адсорбирован на стеклянную поверхность, обеспечивает значительный блок для электростатических взаимодействий белков со стеклом7. Одноявекулярные анализы, требующие иммобилизации отдельных молекул на стеклянных поверхностях, воспользовались этим свойством и использовали его для создания специфической техники иммобилизации одной молекулы на основе PEG8-10. Этот препарат был также использован для обездвиживания клеток клатринана поверхности стекла 11, а также создание однородного фибронектина покрытие для управления клеточной адгезии 12.
Мы приняли метод подготовки образца на основе PLL-g-PEG adorption к стеклянным поверхностям из одной молекулы визуализации методологии и применил его для визуализации одного virions вируса везикулярного стоматита (VSV). Эти одиночные виньоны были изображены с помощью атомной микроскопии силы (AFM). Аналогичные эксперименты проводились и на функционализированных бусинках в качестве контроля. Виньоны были также изображены супер-разрешение флуоресценции микроскопии были VSV-G антитела помечены Alexa 647 был использован для создания изображения конверта одного virions. Высокое разрешение флуоресцентной визуализации использует локализацию отдельных молекул для созданияизображения 13-15. двухпланарная визуализация fPALM позволяет локализации отдельных молекул с разрешением 20 нм в плоскости и разрешением 50нм вдоль оптической оси 15,16. Этот двухплановый метод был использован для изображения флуоресцентных изображений супер-разрешения, присутствующих в этом исследовании. Альтернативный метод, который имеет аналогичные результаты STORM13,17,18.
И AFM и супер-разрешение флуоресцентные изображения VSV закреплены на стекле процедур, изложенных в этой работе, показали конкретные привязки виньонов к стеклу с минимальными неспецифическимивзаимодействиями 19. Здесь мы представляем протоколы подготовки образцов для экспериментов AFM и супер-разрешения флуоресцентных изображений. Короче говоря: Чистые стеклянные крышки функционируют путем адсорбирования смеси PLL-g-PEG и PLL-g-PEG-биотина. Это типично для этой тонкой пленки, которая будет разработана, чтобы обеспечить между 15-25% функционализированного биотина на покрытой поверхностью. Крышки дополнительно инкубируется тетрамерическим алдином. Биотинилированные вирусные антитела затем используется для создания уникального сайта связывания для виритов. Связывание антител может быть сделано двумя способами.
Первый метод оптимизирован для AFM, однако он остается пригодным для визуализации флуоресценции супер-разрешения. В этом методе avidin покрытием поверхности рассматривается с биотинилированным антителом до вирусной адгезии. Обездвиженные виньоны обрабатываются антителами Alexa 647 с маркировкой, чтобы покрыть оболочку и позволить супер-разрешение флуоресценции изображения виньонов.
Второй метод заключается в атаке вируса в растворе с биотинилированным антителом и Alexa 647 помечены антитела до прилипния вирусов к avidin обработанной поверхности; этот метод оптимизирован для экспериментов по визуализации флуоресценции супер-разрешения, в которых важно восстановление вирусного конверта. Этот метод имеет то преимущество, что позволяет равномерное покрытие антител на вирусной поверхности. Биотинилированные антитела могут быть смешаны с Alexa 647 помечены вирусные антитела в соотношении, которые позволяют достаточно adorption вируса к avidin обработанной поверхности при сохранении высокой концентрации флуоресцентной этикетки на внешней стороне вирусной оболочки. Эти Alexa 647 помечены вирусные антитела не биотинилированные и их избыток может быть промыть прочь для того, чтобы уменьшить фоновый шум.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">Glass coverslips (fPALM)</td>
			<td style="width:71px;">Electron Microscopy Services</td>
			<td style="width:119px;">72225-01</td>
			<td style="width:167px;">25 mm Coverslips</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">PLL(20)-g[3.5]-PEG(2)/PEG(3.4)-Biotin (20%)&#160;</td>
			<td style="width:71px;">SuSoS&#160;</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td style="width:167px;">Stock: 0.5 mg/ml in PBS</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">NeutrAvidin biotin-binding protein</td>
			<td style="width:71px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">A2666</td>
			<td style="width:167px;">Stock: 0.25 mg/ml in PBS</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:216px;">Alexa Fluor 647 goat anti-rabbit IgG (H+L)&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">A21245</td>
			<td style="width:167px;">1:200 in 0.2 M KPO4, 0.15 M NaCl, 10% Glycol, pH 7.2 buffer</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">&#945;-VSV-G&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">ab34774</td>
			<td style="width:167px;">1:200 in 0.2 M KPO4, 0.15 M NaCl, 10% Glycol, pH 7.2 buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gluox</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td>G2133-250KU&#160;</td>
			<td>Glucose oxidase type seven from Aspergillius&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Catalase</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">C40-100mg&#160;</td>
			<td>Catalase from Bovine liver&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MEA</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td>30070-10G&#160;</td>
			<td>Cysteamine (MEA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Stock Buffer</td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>50 mM Tris-HCl (pH 8.0) + 10 mM NaCl + 10% glucose</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">NTE</td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>10 mM Tris pH 7.4, 100 mM NaCl, 66 mM EDTA</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Slide-A-Lyzer, mini dialysis unit</td>
			<td style="width:71px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>10,000 MW</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Microscope Cover Glass: 35 CIRCLE #1</td>
			<td style="width:71px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:119px;">35 CIRCLE #1</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sample preparation for single virion atomic force microscopy and super-resolution fluorescence imaging

Иммобилизация вирионов на стеклянные поверхности является важным шагом в одной вирионной визуализации. Здесь мы представляем методику, основанную на анализах изображений одной молекулы, которая позволяет с специфичностью присвежесть одиночные вировы к стеклянным поверхностям. Этот препарат основан на прививке поверхности стекла смесью PLL-g-PEG и PLL-g-PEG-Biotin, добавляя слой алдин, и, наконец, создавая якоря вириона через вложение биотинилированных специфических антител вируса. Мы применили этот метод в различных экспериментах, включая атомную силовую микроскопию (AFM) и флуоресценцию супер-разрешения. Этот метод подготовки образца приводит к борьбе с притяговкой виньонов на поверхность.

Одновийная визуализация с помощью AFM:
Протокол подготовки образца, изложенный выше, использовался для прикрепления диких виньонов типа к поверхности стекла. VSV virions имеют пулевую форму 180 нм в длину и 80 нм в диаметре. Поскольку существует множество виритов, для которых этот метод может быть применен, концепция также демонстрируется здесь на биотинилированных 36 нм бисера, а также. Полученные эксперименты AFM показаны на рисунке 1. Важно отметить, что VSV virions имеют более низкий модуль Янга (100 MPa) по сравнению с неувелицами вирусами (GPa). Конкретные изображения одного вириона VSV были получены в режиме касания в условиях окружающей среды с жесткой кантилевером. Цель состояла в том, чтобы деформировать вирус до точки, что дополнительная плотность белка в вирусе становится видимым в качестве удара в изображении AFM. Этот метод используется для обнаружения дополнительной плотности белка в вирусной полости19.
Одновийная визуализация супер разрешения:
Антитела Alexa 647 с маркировкой VSV-G использовались для покрытия оболочки отдельных виньонов VSV для экспериментов с супер-разрешением с использованием метода 5A. Чтобы продемонстрировать плотность привязывания и низкий неспецифический связывание, на рисунке 2A показано большое сканирование образца. Восстановление вирусного конверта на репрезентативном вирионе показано на рисунке 2B (синий изосурфейс).
<img alt="Figure 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51366/51366fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51366/51366fig1.jpg" style="opacity: 0.9; font-size: 14.399999618530273px; line-height: 28px;">
Рисунок 1. AFM изображения бисера и VSV на функциональной поверхности PEGG. AFM сканирование 36 нм биотинилированных бусин(A, B) и VSV virion(C) закреплены на поверхности с биотинилированным антителом VSVG. AFM был сделан в режиме топографии воздуха переменного тока. Радиус наконечника составляет <25 нм, а измерения проводились под силовой модуляцией и нажатием света. Наконечник имел константу силы 3 Н/м и резонансную частоту 75 кГц с неопределенностью 15 кГц. В то время как бисер сохранил свой рост во время сканирования AFM, VSV virion имеет модулы значительно меньше молодых и значительно деформирован в высоту. На этом изображении вирион был специально изображен с жесткой кантилевер в режиме постукивания, который произвел небольшой xy свертки (используется для определения кончика против тупой конец вируса) и разница в высоте между кончиком и тупым концом вируса используется для обнаружения дополнительной плотности белка на тупомконце вируса 19.
<img alt="Figure 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51366/51366fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51366/51366fig2.jpg"> Рисунок 2. Флуоресценция на основе изображения VSV виньоны на функциональной поверхности PEGG. A)рекомбинантные VSV virions обездвижены на поверхности PEGG с помощью биотинилированных анти VSVG антител, изображенных в широком поле флуоресценции. B)Реконструкция флуоресценции высокого разрешения оболочки VSV, прикрепленной к поверхности PEGG через биотинилированные анти VSVG антитела и украшенные Alexa 647 помечены анти-VSVG антитела (Метод 5A был использован для создания этих изображений). Синяя поверхность является 2D проекцией изосурфейса. Слева показана модель вируса в форме пули. 
<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="212"><colgroup>
<col>
<col>
</colgroup>
<tbody>
<tr height="27">
<td height="27" style="height:27px;width:119px;">Размер обложки</td>
			<td style="width:93px;">жидкость</td>
		</tr>
<tr height="20">
<td height="20" style="height:20px;">40 мм</td>
			<td>65 хл</td>
		</tr>
<tr height="20">
<td height="20" style="height:20px;">35 мм</td>
			<td>50 мкл</td>
		</tr>
<tr height="20">
<td height="20" style="height:20px;">30 мм</td>
			<td>36 хл</td>
		</tr>
<tr height="20">
<td height="20" style="height:20px;">25 мм</td>
			<td>25 хл</td>
		</tr>
<tr height="20">
<td height="20" style="height:20px;">20 мм</td>
			<td>16 хл</td>
		</tr>
</tbody></table>Таблица 1. Алициты жидкости в соответствии с размером крышки.

Watch this Scientific Journal Video about Sample Preparation for Single Virion Atomic Force Microscopy and Super-resolution Fluorescence Imaging at JoVE.com

Sample Preparation for Single Virion Atomic Force Microscopy and Super-resolution Fluorescence Imaging

Подготовка образцов для одной микроскопии атомной силы Virion и флуоресценции супер-разрешения

Пристройка вирионов к поверхности является обязательным условием для одной вирионной визуализации с помощью флуоресцентной визуализации суперпозвания или атомной силовой микроскопии (AFM). Здесь мы демонстрируем метод подготовки образца для контролируемого прикрас виньонов к стеклянным поверхностям, пригодным для использования в AFM и флуоресценции супер-разрешения.

Immobilization of virions to glass surfaces is a critical step in single virion imaging. Here we present a technique&#160;adopted from single molecule ...

Research

JoVE Journal

Biology

Time-lapse Imaging of Mitosis After siRNA Transfection

Покадровый Визуализация Митоз После трансфекции миРНК

Changes in cellular organization and chromosome dynamics that occur during mitosis are tightly coordinated to ensure accurate inheritance of genomic and ...

Micro-Mechanical Characterization of Lung Tissue Using Atomic Force Microscopy

Микро-механические характеристики легочной ткани с помощью атомно-силовой микроскопии

Matrix stiffness strongly influences growth, differentiation and function of adherent cells1-3.  On the macro scale the stiffness of tissues and organs ...

Super-resolution Imaging of the Bacterial Division Machinery

Super-Resolution Imaging бактериального Машины отдела

Bacterial cell division requires the coordinated  assembly of more than ten essential proteins at midcell1,2. Central  to this process is the formation of ...

Test Samples for Optimizing STORM Super-Resolution Microscopy

Опытные образцы для оптимизации STORM супер-разрешения микроскопии

STORM is a recently developed super-resolution microscopy technique with up to 10 times better resolution than standard fluorescence microscopy ...

Rapid Analysis and Exploration of Fluorescence Microscopy Images

Экспресс-анализ и разведка флуоресцентной микроскопии Images

Despite rapid advances in high-throughput microscopy, quantitative image-based assays still pose significant challenges. While a variety of specialized ...

Three-dimensional Super Resolution Microscopy of F-actin Filaments by Interferometric PhotoActivated Localization Microscopy (iPALM)

Three-dimensional Super Resolution Microscopy of F-actin Filaments by Interferometric PhotoActivated Localization Microscopy iPALM

Трехмерная Суперразрешение Микроскопия F-актин филаментов интерферометрической фотоактивированного локализации микроскопии (iPALM)

Fluorescence microscopy enables direct visualization of specific biomolecules within cells. However, for conventional fluorescence microscopy, the spatial ...

Open-source Single-particle Analysis for Super-resolution Microscopy with VirusMapper

С открытым исходным кодом Анализ Одночастичного для супер-разрешение микроскопии с VirusMapper

Super-resolution fluorescence microscopy is currently revolutionizing cell biology research. Its capacity to break the resolution limit of around 300 nm ...

Ground State Depletion Super-resolution Imaging in Mammalian Cells

Основного состояния истощения суперразрешением изображений в клетках млекопитающих

Advances in fluorescent microscopy and cell biology are intimately correlated, with the enhanced ability to visualize cellular events often leading to ...

Sample Preparation and Imaging of Exosomes by Transmission Electron Microscopy

Подготовка образцов и изображений Exosomes, просвечивающей электронной микроскопии

Exosomes are nano-sized extracellular vesicles secreted by body fluids and are known to represent the characteristics of cells that secrete them. The ...

Miniaturized Sample Preparation for Transmission Electron Microscopy

Миниатюрных Пробоподготовка для просвечивающей электронной микроскопии

Due to recent technological progress, cryo-electron microscopy (cryo-EM) is rapidly becoming a standard method for the structural analysis of protein ...