Name: the corneal micropocket assay: a model of angiogenesis in the mouse eye
Uploaded: 2014-08-16T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Corneal Micropocket Assay: A Model of Angiogenesis in the Mouse Eye at JoVE.com

Vi tackar Kristin Johnson för den grafiska arbetet.

Alla protokoll som handlar om djuren anmäls till och godkänns av Institutional Animal Care och användning kommittén vid barnsjukhuset Boston och bedrivs i enlighet med rekommendationerna från Föreningen för bedömning och ackreditering av Laboratory Animal Care (AAALAC). Se till att använda sterilt instrument och aseptisk techniqure, under hela proceduren. 1 Beredning av pellets <ol><li> Väg upp 10 mg sukralfat och 60 mg hydron med sterila unbent spatel. Placera i separata mikrocen...

<ol>
	<li>Gospodarowicz, D., Moran, J., Braun, D., Birdwell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+growth+of+bovine+vascular+endothelial+cells:+fibroblast+growth+factor+as+a+survival+agent.">Clonal growth of bovine vascular endothelial cells: fibroblast growth factor as a survival agent.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 73, 4120-4124 (1976).</li><li>Glaser, B. M., D'Amore, P. A., Seppa, H., Seppa, S., Schiffmann, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+tissues+contain+chemoattractants+for+vascular+endothelial+cells.">Adult tissues contain chemoattractants for vascular endothelial cells.</a> Nature. 288, 483-484 (1980).</li><li>Kubota, Y., Kleinman, H. K., Martin, G. R., Lawley, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+laminin+and+basement+membrane+in+the+morphological+differentiation+of+human+endothelial+cells+into+capillary-like+structures.">Role of laminin and basement membrane in the morphological differentiation of human endothelial cells into capillary-like structures.</a> J. Cell Biol. 107, 1589-1598 (1988).</li><li>Montesano, R., Orci, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-promoting+phorbol+esters+induce+angiogenesis+in+vitro.">Tumor-promoting phorbol esters induce angiogenesis in vitro.</a> Cell. 42, 469-477 (1985).</li><li>Korff, T., Augustin, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integration+of+endothelial+cells+in+multicellular+spheroids+prevents+apoptosis+and+induces+differentiation.">Integration of endothelial cells in multicellular spheroids prevents apoptosis and induces differentiation.</a> J. Cell Biol. 143, 1341-1352 (1998).</li><li>Nicosia, R. F., Tchao, R., Leighton, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histotypic+angiogenesis+in+vitro:+light+microscopic,+ultrastructural,+and+radioautographic+studies.">Histotypic angiogenesis in vitro: light microscopic, ultrastructural, and radioautographic studies.</a> In Vitro. 18, 538-549 (1982).</li><li>Wong, K. H., Chan, J. M., Kamm, R. D., Tien, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+models+of+vascular+functions.">Microfluidic models of vascular functions.</a> Annu Rev Biomed Eng. 14, 205-230 (2012).</li><li>Sandison, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+for+the+microscopic+study+of+living+growing+tissues+by+the+introduction+of+a+transparent+chamber+in+the+rabbit's+ear.">A new method for the microscopic study of living growing tissues by the introduction of a transparent chamber in the rabbit's ear.</a> Anat. Rec. 28, 281-287 (1924).</li><li>Jain, R. K., Schlenger, K., Hockel, M., Yuan, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+angiogenesis+assays:+progress+and+problems.">Quantitative angiogenesis assays: progress and problems.</a> Nat. Med. 3, 1203-1208 (1997).</li><li>Rogers, M. S., Birsner, A. E., D'Amato, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+cornea+micropocket+angiogenesis+assay.">The mouse cornea micropocket angiogenesis assay.</a> Nat. Protoc. 2 (10), 2545-2550 (2007).</li><li>Gimbrone, M. A., Leapman, S. B., Cotran, R. S., Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+dormancy+in+vivo+by+prevention+of+neovascularization.">Tumor dormancy in vivo by prevention of neovascularization.</a> J. Exp. Med. 136, 261-276 (1972).</li><li>Gimbrone, M. A., Cotran, R. S., Leapman, S. B., Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+growth+and+neovascularization:+an+experimental+model+using+the+rabbit+cornea.">Tumor growth and neovascularization: an experimental model using the rabbit cornea.</a> J. Natl. Cancer Inst. 52, 413-427 (1974).</li><li>Rohan, R. M., Fernandez, A., Udagawa, T., Yuan, J., D'Amato, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+heterogeneity+of+angiogenesis+in+mice.">Genetic heterogeneity of angiogenesis in mice.</a> FASEB J. 14 (7), 871-876 (2000).</li><li>Chang, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dose-dependent+response+of+FGF-2+for+lymphangiogenesis.">Dose-dependent response of FGF-2 for lymphangiogenesis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (32), 11658-11663 (2004).</li><li>Udagawa, T., Birsner, A. E., Wood, M., D'Amato, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+suppression+of+angiogenesis+following+radiation+exposure+is+independent+of+hematopoietic+reconstitution.">Chronic suppression of angiogenesis following radiation exposure is independent of hematopoietic reconstitution.</a> Cancer Res. 67 (5), 2040-2045 (2007).</li><li>Turner, P. V., Albassam, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Susceptibility+of+rats+to+corneal+lesions+after+injectable+anesthesia.">Susceptibility of rats to corneal lesions after injectable anesthesia.</a> Med Comp. 55 (2), 175-182 (2005).</li><li>Calderone, L., Grimes, P., Shalev, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+reversible+cataract+induced+by+xylazine+and+by+ketamine-xylazine+anesthesia+in+rats+and+mice.">Acute reversible cataract induced by xylazine and by ketamine-xylazine anesthesia in rats and mice.</a> Exp. Eye Res. 42, 331-337 (1986).</li></ol>

Det finns flera viktiga steg i att utföra en framgångsrik hornhinnan analys. Det första är att göra enhetliga pellets kan vara implantat och stimulerande fartyg. De viktigaste delarna av pellets förbehandlingen 1) med hjälp av bärare fritt tillväxtfaktor; 2) säkerställa en god blandning av tillväxtfaktor med sukralfat och hydron och 3) att flytta den slutliga blandningen snabbt men försiktigt från Eppendorf-rör till det nät där pelletsen gjuts. Det rekommenderas att &quot;dummy&quot; pelletar göras uta...

Processen för angiogenes, nybildning av blodkärl bildas redan existerande sådana, är mycket komplex och regleras av flera endogena faktorer som styr olika stegen i fartygets groning och morfogenes. Angiogenes utlöses på grund av en förskjutning i jämvikten mellan pro-och anti-angiogena faktorer, en balans som normalt bibehåller vaskulaturen i ett vilotillstånd. Angiogenes hos vuxna förekommer i vissa fysiologiska förhållanden såsom under den kvinnliga äggstock cykeln eller i reparationsprocesser såsom sårläkning och vävnadsregenerering. Men det är också ett kännetecken för flera sjukdomar, inklusive maligniteter, autoimmuna sjukdomar och inflammatoriska sjukdomar. Medverkan av angiogenes i dessa fysiologiska och patologiska tillstånd är det ett viktigt ämne för forskning och ett attraktivt mål för behandling. På grund av komplexiteten av angiogenes och medverkan av flera cells och faktorer i processen, bland annat endotelceller, pericyter, cirkulerande celler och stromaceller, in vitro-modellerna fortfarande är begränsade och inte kan rekapitulera den unika in vivo mikromiljö. Huvud in vitro-analyser av angiogenes är till stor del inriktad på att observera direkta effekter på endotelceller och mäta vissa steg i angiogen process under kontrollerade förhållanden. Dessa analyser innefattar kvantifiering av endotelcellproliferation 1, migration 2, nätverksbildning 3, rörbildning 4 och groning från sfäroider 5. Ex vivo-modeller, till skillnad från de som in vitro, är mer komplicerade och inkorporera multipla typer vävnad cell, varvid ett exempel är aortaringanalys 6. Icke desto mindre, i likhet med andra system, kan det inte fånga bidraget av cirkulerande celler och den naturliga stroma av endotelceller som existerar in vivo. Försökatt studera angiogenes i flödet för att efterlikna den miljö i vivo utförs med mikroflödessystem 7, men till och med dessa analyser, även om mycket förbättrats, fortfarande inte kan redogöra för alla fack befintliga in vivo. På grund av begränsningar i in vitro och ex vivo angiogenesmodeller in vivo-modeller förblir de mer tillförlitliga val för angiogenesstudier. Exempel på dessa modeller inkluderar implantation av transparenta kammare, &quot;fönster&quot;, som tillåter visualisering av växande blodkärl under mikroskop 8, injicerbara subkutana implantat såsom matrigel och kärlbildning i normala vävnader såsom mus öron och kyckling korioallantoinmembranet (CAM ). Men en av de mest acceptabla och kvantitativa in vivo angiogenes modellerna är hornhinnans micropocket kärlnybildning analys som beskrivs här, som utnyttjar naturligt avaskulärahornhinnan som en &quot;skärm&quot; för att visualisera och utvärdera nya angiogenes tillväxt 9. Här beskriver vi hornhinnans micropocket analys såsom utvecklats i möss. Initialt modellen användes för att mäta ospecifika angiogena stimuli i kaninhornhinnor. Detta gjordes genom att tumör bitar i kammarvattnet i främre kammaren i kaninögon och uppmätt tumörinducerad kärlnybildning 11. Dock analysen senare utvecklats för att studera effekter av specifika tillväxtfaktorer 10 att bättre specificera och standardisera den angiogena effekten. För att frigöra den tillväxtfaktor i ögat, har långsam frisättning pellets innehållande kända kvantiteter av angiogena tillväxtfaktorer användes istället för vävnader. Tillgången på renade rekombinanta angiogena proteiner såsom bFGF eller VEGF aktiverat deras användning som specifika mål för angiogenes modulaters 12. Initialt var analysentill stor del används i kaniner, som är lättare att arbeta med på grund av sin storlek men senare modellen översattes till möss; en mindre och billigare djurmodell. Övergången från kanin till möss gav en viktig fördel av att kunna använda genmanipulerade djur och därigenom skapa ett nytt område för forskning om genetiska komponenter som påverkar angiogenes 13. Förutom den mer acceptabel användning av kornea-analysen i att studera angiogenes, kan andra biologiska processer, undersöks också med användning av modifierade analyser. Till exempel har studier av lymfangiogenes möjliggjorts genom implantation av låg dos bFGF pellets som gjorde visualiseringen av lymfkärlen genom specifika molekylära markörer 14. Dessutom har denna analys tillhandahålls ett medel för att utvärdera effekterna av strålning på angiogenes 15. I summering, är hornhinnans micropocket angiogenes analysen en kvantitativ, reproducible, flexibel bedömning av angiogenes in vivo. En stor fördel med denna analys är att mätningen av bakgrundsfartyg är onödigt eftersom fartygen växer på ett naturligt avaskulär vävnad. Vi beskriver här protokollet för denna analys i detalj och diskutera olika scenarier som kan uppstå. Analysen består av tre diskreta segment. Här kommer vi att beskriva framställningen av tillväxtfaktorfattande pellets, den efterföljande kirurgisk implantation och slutligen den metod som används för att kvantifiera den resulte neovaskulär tillväxt.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="612">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Section 1: Pellet preparation</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sucralfate</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">#S0652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Hydron (aka Poly(2-Hema))</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">#P3932-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Ethanol</td>
			<td style="width:111px;">Pharmco Products Inc</td>
			<td style="width:119px;">#111000200CSGL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Growth factors:</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Must be carrier-free (no bovine serum albumin(BSA))</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">&#160;Fibroblast growth factor (FGF)</td>
			<td style="width:111px;">PeproTech</td>
			<td style="width:119px;">#AF-100-18B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Vascular endothelial growth factor (VEGF)</td>
			<td style="width:111px;">R &#38; D Systems</td>
			<td style="width:119px;">#293-VE-050/CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">35 mm dish</td>
			<td style="width:111px;">Becton-Dickson</td>
			<td style="width:119px;">#353001</td>
			<td>Used for storage of pellets</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">10 cm petri dish</td>
			<td style="width:111px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">#25384-342</td>
			<td>Used as work surface for preparing pellets</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Mesh</td>
			<td style="width:111px;">Sefar America</td>
			<td style="width:119px;">#03--300/51</td>
			<td>300 um nitex nylon, cut into cm square pieces and sterilzed in autoclave</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Spatulas</td>
			<td style="width:111px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">#21-401-10</td>
			<td>Use tapered end of one to break up pellet mixture. Bend tapered end of other to help remove mixture from microcentrifuge tube.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:111px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">#05-408-146</td>
			<td>One for hydron, one for sucralfate</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Jewelers forceps, #5</td>
			<td style="width:111px;">Ambler Surgical</td>
			<td style="width:119px;">#2315E</td>
			<td>Need 2 for pulling mesh apart</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Centrifugal evaporator</td>
			<td style="width:111px;">ThermoSavant</td>
			<td style="width:119px;">DNA110 SpeedVac</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Section 2: Surgical implantation of pellets</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Operating microscope</td>
			<td style="width:111px;">Zeiss</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">2.5% Avertin</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>General anesthetic</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Proparacaine hydrochloride ophthalmic solution 0.5%</td>
			<td style="width:111px;">Falcon</td>
			<td>NDC# 6131401601</td>
			<td>Eye anesthetic</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Triple Antibiotic Ophthalmic Ointment</td>
			<td style="width:111px;">Bausch &#38; Lomb</td>
			<td style="width:119px;">NDC# 2420878055</td>
			<td>Contains neomycin, polymixin and bacitracin</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ophthalmic microknife, 5 mm</td>
			<td style="width:111px;">Surgistar</td>
			<td style="width:119px;">#924501</td>
			<td>30 degree angle</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">von Graef knife</td>
			<td style="width:111px;">Ambler Surgical</td>
			<td style="width:119px;">#3401E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Jewelers forceps, #1</td>
			<td style="width:111px;">Ambler Surgical</td>
			<td style="width:119px;">#2301E</td>
			<td>Must be blunted with sharpening stone for proptosing eye</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Jewelers forceps, #5</td>
			<td style="width:111px;">Ambler Surgical</td>
			<td style="width:119px;">#2305E</td>
			<td>For picking up pellets and placing on eye</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Small curved scissors</td>
			<td style="width:111px;">Ambler Surgical</td>
			<td style="width:119px;">#5636E</td>
			<td>For trimming whiskers</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Gauze</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>For blotting eye after proparacaine</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Section 3: Grading of Corneal Neovascularization</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">2.5% Avertin</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>General anesthetic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Slit lamp</td>
			<td style="width:111px;">Nikon</td>
			<td style="width:119px;">FS-2</td>
			<td>Needs an ocular with a reticule to assist in measuring</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the corneal micropocket assay: a model of angiogenesis in the mouse eye

Musen hornhinnan micropocket analysen är en robust och kvantitativ analys in vivo för utvärdering angiogenes. Genom att använda standardiserade långsam frisättning pellets innehållande specifika tillväxtfaktorer som utlöser blodkärlstillväxt i hela naturligt avaskulära hornhinnan, kan angiogenes mätas och kvantifieras. I denna analys det angiogena svaret alstras under loppet av flera dagar, beroende på typen och dosen av tillväxtfaktorn användas. Induktionen av neovaskularisation utlöses vanligtvis genom antingen basisk fibroblasttillväxtfaktor (bFGF) eller vaskulär endotelial tillväxtfaktor (VEGF). Genom att kombinera dessa tillväxtfaktorer med sukralfat och hydron (poly-HEMA (poly (2-hydroxietylmetakrylat))) och gjutning av blandningen till pellets kan de inopererade i musen ögat. Dessa enhetliga pellets långsamt frigöra tillväxtfaktorer under fem eller sex dagar (bFGF eller VEGF respektive) som möjliggör tillräcklig angiogen respons som krävs för fartygets område quantification användning av en spaltlampa. Denna analys kan användas för olika tillämpningar, inklusive en utvärdering av angiogena modulator läkemedel eller behandlingar samt jämförelse mellan olika genetisk bakgrund påverkar angiogenes. En skicklig utredare efter praktisera denna analys kan implantera en pellet på mindre än 5 minuter per öga.

Typiska resultat för bFGF och VEGF pellets i de normala låga angiogena C57BL / 6J möss visas i Figur 2A och B, respektive. Figur 2E visar normalfördelningen fartygsområde (VA) i C57BL / 6J stam med varierande doser av dessa tillväxt faktorer. 80 ng bFGF pellets normalt resultera i en VA på ca 2,0 mm 2, även om värden i ett intervall av 1,8-2,4 mm 2 är acceptabla. 200 ng VEGF pellets orsakar oftast ett svar på ca 0,7 mm 2, med ...

Watch this Scientific Journal Video about The Corneal Micropocket Assay: A Model of Angiogenesis in the Mouse Eye at JoVE.com

The Corneal Micropocket Assay: A Model of Angiogenesis in the Mouse Eye

Hornhinnans Micropocket Analys: En modell av angiogenes i mus Eye

Protokollet beskriver hornhinnans micropocket analys såsom utvecklats i möss.

The mouse corneal micropocket assay is a robust and quantitative in vivo assay for evaluating angiogenesis. By using standardized slow-release pellets ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

Isolering och utvidgning av den vuxna Mouse neurala stamceller Använda Neurosphere analys

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

Etablera Embryonala Mus Neurala Kultur Stem Cell Använda Neurosphere analys

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Dissection of a Mouse Eye for a Whole Mount of the Retinal Pigment Epithelium

Dissekering av en mus Eye för en hel berget av pigmentepitelet

The retinal pigment epithelium (RPE) lies at the back of the mammalian eye, just under the neural retina, which contains the photoreceptors (rods and ...

An Optic Nerve Crush Injury Murine Model to Study Retinal Ganglion Cell Survival

En Optic Nerve krosskada Murine modell för att studera näthinnan Survival Ganglion Cell

Injury to the optic nerve can lead to axonal degeneration, followed by a gradual death of retinal ganglion cells (RGCs), which results in irreversible ...

Detection of Neuritic Plaques in Alzheimer's Disease Mouse Model

Upptäckt av Neuritic plack i Alzheimers sjukdom musmodell

Alzheimer's disease (AD) is the most common neurodegenerative disorder leading to dementia. Neuritic plaque formation is one of the pathological hallmarks ...

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

Hela Mount immunfluorescensfärgning av neonatal mus Retina att undersöka Angiogenesis<em&gt; In vivo</em

Angiogenesis  is the complex process of new blood vessel formation defined by the sprouting  of new blood vessels from a pre-existing vessel network. ...

Isolation and Culture of Endothelial Cells from the Embryonic Forebrain

Isolering och odling av endotelceller från embryonal framhjärnan

Embryonic brain endothelial cells can serve as an important tool in the study of angiogenesis and neurovascular development and interactions. The two ...

A Simple Behavioral Assay for Testing Visual Function in Xenopus laevis

A Simple Behavioral Assay for Testing Visual Function in Xenopus laevis

En enkel Behavioral analys för Testa Visual Function i<em&gt; Xenopus laevis</em

Measurement of the visual function in the tadpoles of the frog, Xenopus laevis, allows screening for blindness in live animals. The optokinetic response ...

Telomerase Activity in the Various Regions of Mouse Brain: Non-Radioactive Telomerase Repeat Amplification Protocol (TRAP) Assay

Telomerase Activity in the Various Regions of Mouse Brain: Non-Radioactive Telomerase Repeat Amplification Protocol TRAP Assay

Telomerasaktivitet i de olika regionerna i Mouse Brain: Ej Radioaktiv Telomeras Upprepa Amplification Protocol (TRAP) analys

Telomerase, a ribonucleoprotein, is responsible for maintaining the telomere length and therefore promoting genomic integrity, proliferation, and ...

A Volumetric Method for Quantification of Cerebral Vasospasm in a Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

En volymetrisk metod för kvantifiering av Cerebral Vasospasm i en murin modell av subarachnoidalblödning

Subarachnoid hemorrhage (SAH) is a subtype of hemorrhagic stroke. Cerebral vasospasm that occurs in the aftermath of the bleeding is an important factor ...