Name: thin-layer chromatographic (tlc) separations and bioassays of plant extracts to identify antimicrobial compounds
Uploaded: 2014-03-27T22:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Thin-layer Chromatographic TLC Separations and Bioassays of Plant Extracts to Identify Antimicrobial Compounds at JoVE.com

हम हमें इस अध्ययन के लिए अपने लाल तिपतिया घास भूखंडों से नमूने का उपयोग करने की अनुमति के लिए, स्वर्गीय डॉ. नॉर्म टेलर, विभाग प्लांट और केंटकी के विश्वविद्यालय में मृदा विज्ञान धन्यवाद. इस परियोजना के कृषि संयुक्त राज्य अमेरिका विभाग द्वारा वित्त पोषित किया गया.

1. संयंत्र निकालें की तैयारी <ol><li> Trifolium pratense CV से phenolic यौगिकों की निकासी के लिए कगन और Flythe 10 देखें. Kenland. </li><li> अन्य संयंत्रों में अन्य यौगिकों निकालने के लिए, (कई वर्णित हैं) संयंत्र या metabolite विशेष निकासी तरीको?...

<ol>
	<li>Stahl, E., Ashworth, M. R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Thin-layer chromatography. , (1969).</li><li>Marston, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thin-layer+chromatography+with+biological+detection+in+phytochemistry.">Thin-layer chromatography with biological detection in phytochemistry.</a> J. Chromatogr. A. 1218 (19), 2676-2683 .</li><li>Homans, A. L., Fuchs, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+bioautography+on+thin-layer+chromatograms+as+a+method+for+detecting+fungitoxic+substances.">Direct bioautography on thin-layer chromatograms as a method for detecting fungitoxic substances.</a> J. Chromatogr. 51, 327-329 .</li><li>Lund, B. M., Lyon, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+inhibitors+of+Erwinia+carotovora+and+E.+herbicola+on+thin-layer+chromatograms.">Detection of inhibitors of Erwinia carotovora and E. herbicola on thin-layer chromatograms.</a> J. Chromatogr. 110, 193-196 (1975).</li><li>Betina, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioautography+in+paper+and+thin-layer+chromatography+and+its+scope+in+the+antibiotic+field.">Bioautography in paper and thin-layer chromatography and its scope in the antibiotic field.</a> J. Chromatogr. A. 78, 41-51 (1973).</li><li>Weltzien, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ein+biologischer+Test+f&#252;r+fungizide+Substanzen+auf+dem+Papierchromatogramm.">Ein biologischer Test f&#252;r fungizide Substanzen auf dem Papierchromatogramm.</a> Naturwissenschaften. 45, 288-289 (1958).</li><li>Khurram, M., Khan, A. M., Hameed, A., Abbas, N., Quayum, A., Inayat, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibacterial+activities+of+Dodonaea+viscosa+using+contact+bioautography+technique.">Antibacterial activities of Dodonaea viscosa using contact bioautography technique.</a> Molecules. 14 (3), 1332-1341 (2009).</li><li>Khurram, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+anticandidal+potential+of+Quercus+baloot+Griff.+using+contact+bioautography+technique.">Evaluation of anticandidal potential of Quercus baloot Griff. using contact bioautography technique.</a> Afr. J. Pharm. Pharmacol. 5 (12), 1538-1542 (2012).</li><li>Robinson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Organic Constituents of Higher Plants. , (1963).</li><li>Kagan, I. A., Flythe, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+affecting+the+separation+and+bioactivity+of+red+clover+(Trifolium+pratense)+extracts+assayed+against+Clostridium+sticklandii,+a+ruminal+hyper+ammonia-producing+bacterium.">Factors affecting the separation and bioactivity of red clover (Trifolium pratense) extracts assayed against Clostridium sticklandii, a ruminal hyper ammonia-producing bacterium.</a> Nat. Prod. Commun. 7 (12), 1605-1608 (2012).</li><li>Mattila, P., Kumpulainen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+free+and+total+phenolic+acids+in+plant-derived+foods+by+HPLC+with+diode-array+detection.">Determination of free and total phenolic acids in plant-derived foods by HPLC with diode-array detection.</a> J. Agric. Food Chem. 50 (13), 3660-3667 (2002).</li><li>Hamburger, M. O., Cordell, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+direct+bioautographic+TLC+assay+for+compounds+possessing+antibacterial+activity.">A direct bioautographic TLC assay for compounds possessing antibacterial activity.</a> J. Nat. Prod. 50 (1), 19-22 (1987).</li><li>Flythe, M., Kagan, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antimicrobial+effect+of+red+clover+(Trifolium+pratense)+phenolic+extract+on+the+ruminal+hyper+ammonia-producing+bacterium,+Clostridium+sticklandii.">Antimicrobial effect of red clover (Trifolium pratense) phenolic extract on the ruminal hyper ammonia-producing bacterium, Clostridium sticklandii.</a> Curr. Microbiol. 61, 125-131 .</li><li>Rahalison, L., Hamburger, M., Hostettmann, K., Monod, M., Frenk, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+bioautographic+agar+overlay+method+for+the+detection+of+antifungal+compounds+from+higher+plants.">A bioautographic agar overlay method for the detection of antifungal compounds from higher plants.</a> Phytochem. Anal. 2 (5), 199-203 (1991).</li><li>Chomnawang, M. T., Trinapakul, C., Gritsanapan, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+antigonococcal+activity+of+Coscinium+fenestratum+stem+extract.">In vitro antigonococcal activity of Coscinium fenestratum stem extract.</a> J. Ethnopharmacol. 122, 445-449 (2009).</li><li>Stahl, E., Kaldewey, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spurenanalyse+physiologisch+aktiver,+einfacher+Indolderivate.">Spurenanalyse physiologisch aktiver, einfacher Indolderivate.</a> Hoppe-Seyler&#8217;s Z. Physiol. Chem. 323, 182-191 .</li><li>Kagan, I. A., Hammerschmidt, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arabidopsis+ecotype+variability+in+camalexin+production+and+reaction+to+infection+by+Alternaria+brassicicola.">Arabidopsis ecotype variability in camalexin production and reaction to infection by Alternaria brassicicola.</a> J. Chem. Ecol. 28 (11), 2121-2140 (2002).</li><li>Kline, R. M., Golab, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+technique+in+developing+thin-layer+bioautographs.">A simple technique in developing thin-layer bioautographs.</a> J. Chromatogr. 18, 409-411 (1965).</li><li>Wedge, D. E., Nagle, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+2D-TLC+bioautography+method+for+the+discovery+of+novel+antifungal+agents+to+control+plant+pathogens.">A new 2D-TLC bioautography method for the discovery of novel antifungal agents to control plant pathogens.</a> J. Nat. Prod. 63 (8), 1050-1054 (2000).</li><li>Beck, A. B., Knox, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+acylated+isoflavone+glycosides+from+subterranean+clover+and+red+clover.">The acylated isoflavone glycosides from subterranean clover and red clover.</a> Aust. J. Chem. 24 (7), 1509-1518 (1971).</li><li>Kahn, R. A., Bak, S., Svendsen, I., Halkier, B. A., M&#248;ller, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+reconstitution+of+cytochrome+P450ox+and+in+vitro+reconstitution+of+the+entire+biosynthetic+pathway+of+the+cyanogenic+glucoside+dhurrin+from+sorghum.">Isolation and reconstitution of cytochrome P450ox and in vitro reconstitution of the entire biosynthetic pathway of the cyanogenic glucoside dhurrin from sorghum.</a> Plant Physiol. 115 (4), (1997).</li><li>Peterson, C. A., Edgington, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+estimation+of+the+fungicide+benomyl+using+a+bioautograph+technique.">Quantitative estimation of the fungicide benomyl using a bioautograph technique.</a> J. Agr. Food Chem. 17 (4), 898-899 (1969).</li></ol>

इस प्रोटोकॉल यौगिकों के सबसेट में एक उद्धरण को अलग करने और संपर्क bioautography द्वारा उन कैंपेन्स परख करने की क्रिया के लिए एक सरल विधि का वर्णन करता है. विधि सूजाक बैक्टीरिया पैदा करने के लिए निरोधात्मक संयं?...

पौधों में रोगाणुरोधी यौगिकों के लिए परख, एक संयंत्र निकालने के घटकों को अलग करने के लिए उन घटकों के लिए एक परीक्षण सूक्ष्मजीव उजागर, और सूक्ष्मजीव के विकास यौगिकों में से किसी से हिचकते है निर्धारित करने की आवश्यकता है. कई यौगिकों एक planar सतह पर अलग किया जा सकता है क्योंकि कागज या पतली परत क्रोमैटोग्राफी (पीसी या टीएलसी) द्वारा विभाजन सुविधाजनक हैं. पृथक्करण कुछ यौगिकों पी लेनेवाला (पीसी के मामले में सेल्यूलोज, और टीएलसी के मामले में Adsorbents की एक किस्म) को कसकर बाध्यकारी और दूसरों को कम से कम 1 पलायन के साथ, ध्रुवता पर आधारित है. संख्या 1 के सापेक्ष स्थिति का एक उदाहरण प्रदान करता है एक सिलिका टीएलसी थाली पर जुदाई के बाद ध्रुवीय और nonpolar phenolic यौगिकों. <img alt="चित्रा 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51411/51411fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51411/51411fig1.jpg" /> चित्रा 1. एक सिलिका पतली परत chromatographic (टीएलसी) प्लेट पर अलग होने के बाद अलग छोर के यौगिकों का वितरण illustrating आरेख. लाल तिपतिया घास (Trifolium pratense एल) के फिनोलिक यौगिकों एक उदाहरण के रूप में इस्तेमाल कर रहे हैं. ऐसे clovamide के रूप में ध्रुवीय यौगिकों,,, सिलिका की तरह एक ध्रुवीय पी लेनेवाला के लिए एक मजबूत संबंध हैं और मूल (या) के पास रहते हैं, जबकि इस तरह के विलायक सामने के पास तीन isoflavones (एस एफ), विभाजन और अधिक आसानी से विलायकों में के रूप में कम ध्रुवीय यौगिकों, (पानी, एसिड, या कुर्सियां ​​शामिल किए गए हैं, जब तक कि सिलिका से भी कम ध्रुवीय हैं) और आगे थाली ऊपर की ओर पलायन. एक टीएलसी थाली पर एक उद्धरण की जुदाई के बाद, परीक्षण सूक्ष्मजीवों इस प्रकार एक उद्धरण 2 के सक्रिय घटकों की पहचान तेजी, थाली पर सभी यौगिकों से अवगत कराया जा सकता है. एक कवक या जीवाणु संस्कृति वर्णलेख के संपर्क में है, तो माइक्रोबियल विकास विकास अवरोध करनेवाला के साथ क्षेत्रों में छोड़कर हर जगह पाए जाते हैं जाएगाY यौगिकों. निषेध के क्षेत्रों तब कवक 3 लागू किया गया है अगर mycelial विकास और विकास से मुक्त क्षेत्रों के बीच विपरीत देख कर या कोशिकाओं 4 रहने से कम या hydrolyzed जब रंग बदलने कि यौगिकों के साथ छिड़काव द्वारा देखे जा सकते हैं. रोगाणुरोधी assays के लिए कागज या पतली परत chromatograms का उपयोग पहली एंटीबायोटिक दवाओं 5 और fungicides 3,6 करने के लिए लागू किया गया था हालांकि, संयंत्र निष्कर्षों अब अक्सर अक्सर bioautography के रूप में निर्दिष्ट इस विधि के साथ रोगाणुरोधी यौगिकों के लिए जांच कर रहे हैं. वर्णित प्रोटोकॉल के साथ साथ पतली परत chromatograms के bioautography पर लागू होते हैं. यह अपेक्षाकृत तेजी से है और विभिन्न Adsorbents (जैसे सिलिका, स्टार्च, एल्यूमिना), के रूप में भी अच्छा संकल्प और संवेदनशीलता 1 प्रदान करने पर किया जा सकता है क्योंकि टीएलसी व्यापक रूप से इस्तेमाल किया जाता है. पौधों के अर्क कई मायनों में टीएलसी के लिए तैयार किया जा सकता है. आम तरीकों कृत्रिम अंग केन्द्र में निकालने संयंत्र सामग्री शामिलऐसे संभवतः एसिड या आधार 9 के अलावा के साथ 80% इथेनॉल 7,8, के रूप में ohol पानी के मिश्रण. वे एक न्यूनतम मात्रा में टीएलसी प्लेटों के लिए लागू किया जा सकता है, ताकि कुछ पानी रोकने और संभवतः अम्लीय या बुनियादी रहे हैं जो इस तरह के विलायकों, में एक निकासी के बाद, अर्क केंद्रित किया जाना चाहिए. शराब से पानी के अर्क की एकाग्रता पानी अमिश्रणीय कार्बनिक विलायकों 8 के साथ या इस तरह के एथिल एसीटेट एथिल ईथर (1:1, वी / वी) 10,11 जैसे विलायकों, का एक मिश्रण के साथ विभाजन से हासिल किया जा सकता है. विभिन्न संयंत्र मेटाबोलाइट्स उनके छोर पर निर्भर करता है, विभिन्न कार्बनिक विलायकों में निकाले जाते हैं. संयंत्र है कि कार्बनिक अम्ल या ठिकानों इस स्तर पर कार्बनिक विलायकों में निकाला हैं सुनिश्चित करने के लिए, एक शराब का पानी निकालने के पीएच उठाया या तो कर रहे हैं, जो उनके nondissociated रूपों में अलग analytes कन्वर्ट करने के लिए एक पानी में घुलनशील एसिड या आधार के साथ उतारा जा सकता है तटस्थ कार्बनिक विलायकों 9 में घुलनशील. जैविक चरण तो ई किया जा सकता हैकम दबाव के तहत या नाइट्रोजन के तहत vaporated और टीएलसी के लिए वांछित मात्रा को समायोजित. निकालने के पीएच तटस्थ विलायकों, छोटे अंतिम मात्रा, और पूर्व जुदाई के लिए टीएलसी थाली पर निकालने का वाष्पीकरण में analytes के विभाजन की वजह से bioassay सूक्ष्मजीवों के लिए घातक होने की संभावना नहीं है. कवक और बैक्टीरिया दोनों 2 निकालता संयंत्र की bioautography में परीक्षण सूक्ष्मजीवों के रूप में कार्यरत हैं. एक पोषक तत्व समाधान में प्लेटों पर छिड़काव किया और कई दिन 3 के लिए एक नम वातावरण में incubated अगर ऐसी Cladosporium cucumerinum के रूप में कुछ कवक के बीजाणु, (अलावा निरोधात्मक यौगिकों के साथ क्षेत्रों से) टीएलसी प्लेटों पर उगना. सी. के अंधेरे फुई noninhibitory क्षेत्रों पर cucumerinum mycelial विकास के मुक्त क्षेत्र के लिए एक तेज विपरीत प्रदान करता है. बैक्टीरिया में एक ही तरीके 4,12 में पतली परत क्रोमैटोग्राफी (टीएलसी) प्लेटों के लिए लागू किया गया है, जीवाणु भी टीएलसी पर डालते रहे हैंअगर में थाली सतहों 13,14 overlays. ऐसे Candida albicans के रूप में खमीर,, साथ ही 14 अगर ओवरले में लागू किया जा सकता है. वैकल्पिक रूप से, टीएलसी प्लेटें बैक्टीरिया 10,15 या खमीर 8, संपर्क bioautography 2 के रूप में जाना विधि के साथ inoculated अगर पर नीचे चेहरा रखा जा सकता है. हम लाल तिपतिया घास (Trifolium pratense CV. Kenland) से रोगाणुरोधी phenolic यौगिकों के लिए स्क्रीन संपर्क bioautography के लिए एक विधि का वर्णन. परीक्षण सूक्ष्मजीव क्लोस्ट्रीडियम sticklandii, एक ruminal हाइपर अमोनिया उत्पादन जीवाणु (HAB) और आग्रही वातनिरपेक्षी है. इस्तेमाल किया विभाजन निकालने के सभी घटकों को हल नहीं करते हैं, वे इस प्रकार संभव रोगाणुरोधी यौगिकों के पूल संकुचन, रोगाणुरोधी गतिविधि के क्षेत्रों की पहचान की सुविधा. प्रोटोकॉल टीएलसी 1 के लिए मानक प्रक्रियाओं का इस्तेमाल करता. प्रोटोकॉल भी संवर्धन obli के लिए आवश्यक तकनीक का वर्णनइस तरह के एक परख के लिए गेट anaerobes, जीवित कोशिकाओं 2,4 दाग जो एक tetrazolium नमक, साथ संपर्क bioautography 15 और एक दृश्य विधि का उपयोग.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="739">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Silica F254 TLC plates, aluminum-backed, 0.2 mm thickness, 20 &#215; 20 cm</td>
			<td>EMD Chemicals&#160;</td>
			<td>5554/7</td>
			<td>These plates are coated with silica that contains an indicator fluorescing at 254 nm.&#160; Compounds absorbing at that wavelength appear dark on a fluorescent green background.&#160; Alternative sources include Analtech, Selecto Scientific, Fluka.&#160; Adsorbents other than silica may be needed.&#160; Plastic-backed plates may be suitable, depending on the solvents to be used.&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharp, heavy-duty scissors&#160;</td>
			<td>any sewing supply company</td>
			<td>similar to Fiskars&#160; 175800-1002</td>
			<td>For cutting TLC plates.&#160; A paper cutter with a sharp blade can be used as well.&#160; Do not inhale silica dust.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drying oven at 100 &#176;C (mechanical convection)</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>PR305225M</td>
			<td>Quincy Lab, Inc, Chicago, IL (www.quincylab.com); Cascade Technical Sciences, Hillsboro, OR (www.cascadetek.com)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TLC chamber</td>
			<td>Kimble Chase&#160;</td>
			<td>416180-0000</td>
			<td>Alternative sources:&#160; Aldrich. Pyrex beakers or preserving jars can be used for small plates (i.e. 5 &#215; 10 cm).&#160; Cover with aluminum foil (jar lids may contain material extractable by solvent vapors).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50-&#181;L syringe with flat needle tip</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>80965</td>
			<td>For loading amounts of standard or sample exceeding 5-10 &#181;L.&#160; Alternative sources are equivalent.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>micropipets</td>
			<td>Drummond</td>
			<td>2-000-001</td>
			<td>For loading small amounts of standards or samples.&#160; Alternative sources:&#160; VWR.&#160; Also, Pasteur pipets can be stretched to a thinner diameter with a butane torch.&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper (#1 grade)</td>
			<td>Whatman</td>
			<td>1001 917</td>
			<td>Serves as a chamber wick.&#160; Other grades of filter paper are OK.&#160; This size can be trimmed for the chambers holding 20 &#215; 20 cm plates.&#160;&#160;&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beaker tongs</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>15-186</td>
			<td>For putting plates in and out of a large TLC chamber.&#160; Alternate sources: VWR&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flat-edge forceps&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10-275</td>
			<td>For putting plates in and out of a small chamber.&#160;&#160; Alternate sources: VWR&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small portable UV lamp with 4-Watt or 6-Watt bulbs for short- and long-wave UV light illumination (254 and 365 nm, respectively)</td>
			<td>Ultraviolet Products&#160;</td>
			<td>95-0271-01</td>
			<td>Alternate sources: Spectronics Corporation (www.spectroline.net)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Viewing cabinet for use with hand-held UV lamp</td>
			<td>Ultraviolet Products&#160;</td>
			<td>Chromato-Vue C-10E</td>
			<td>UV-active bands are more easily circled if plates can be set in here.&#160; Alternate sources: Spectronics Corporation.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photodocumentation system with overhead UV lamp and visible lamp</td>
			<td>Kodak&#160;</td>
			<td>Gel Logic 200</td>
			<td>&#160;Alternate sources: Ultraviolet Products (www.uvp.com).&#160; See protocol for homemade alternative.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anaerobic Chamber, Type A, Vinyl</td>
			<td>Coy&#160;</td>
			<td>7150000</td>
			<td>This chamber is appropriate for anaerobic bacteria, like Clostridium sticklandii, as described. &#160;However, growth conditions must be tailored to organism used in the assay.&#160; A biosafety cabinet and other precautions should be taken if pathogenic organisms are used. Alternate sources: Anaerobe Systems, BioRad, Plas Labs, others&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetrazolium red</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T8877</td>
			<td>Alternate sources: MP Biomedicals, Santa Cruz Biotechnology, Alfa Aesar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Ingredients for HAB media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyridoxamine &#183; 2 HCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9380</td>
			<td>For this and for all the other reagents in this table, alternative sources are equivalent.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Riboflavin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R4500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thiamine HCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T3902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nicotinamide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N3376</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium D-Pantothenate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C8731</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipoic Acid&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T5625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p-Aminobenzoic acid&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9878</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Folic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F8798</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B4639</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cobalamine&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C3607</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyridoxal HCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyridoxine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5669</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>&#160;E6758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iron sulfate &#183; 7 H2O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>&#160;F8263</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zinc sulfate &#183; 7 H2O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z0251</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manganese chloride &#183; 4 H2O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M8054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Boric acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B6768</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cobalt chloride &#183; 6 H2O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>&#160;C8661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper chloride &#183; 2 H2O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>459097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nickel chloride &#183; 6 H2O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>203866</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium molybdate &#183; 2 H2O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>331058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Trypticase (Pancreatic digest of casein)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>B11921</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate monobasic anhydrous</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>P284</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium carbonate &#183; H2O&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>S636</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>50841063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate &#183; 6 H2O</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>7791-18-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride &#183; 2 H2O</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>BP510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cysteine HCl</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>19464780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate dibasic anhydrous</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>P290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>BP358</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

thin-layer chromatographic (tlc) separations and bioassays of plant extracts to identify antimicrobial compounds

संयंत्र रोगाणुरोधी यौगिकों के लिए एक सामान्य स्क्रीन (जैसे कवक या बैक्टीरिया शोरबा में या अगर), रोगाणुओं के लिए समय में विकसित करने की अनुमति माइक्रोबियल निलंबन को chromatograms उजागर, कागज या पतली परत क्रोमैटोग्राफी (पीसी या टीएलसी) द्वारा पौधों के अर्क को अलग करने के होते हैं एक आर्द्र वातावरण, और कोई माइक्रोबियल विकास के साथ क्षेत्रों visualizing. bioautography के रूप में जाना जाता है इस स्क्रीनिंग विधि की प्रभावशीलता, chromatographic जुदाई की गुणवत्ता और माइक्रोबियल संस्कृति शर्तों के साथ ध्यान रखा दोनों पर निर्भर करता है. इस पत्र एसिड fermenting बैक्टीरिया एमिनो एक उपन्यास आवेदन के साथ टीएलसी और संपर्क bioautography के लिए मानक प्रोटोकॉल का वर्णन करता है. निकालने लचीला (एल्यूमीनियम समर्थित) सिलिका टीएलसी प्लेटों पर अलग है, और बैंड पराबैंगनी (यूवी) प्रकाश के तहत कल्पना कर रहे हैं. जोन परीक्षण सूक्ष्मजीव साथ inoculated अगर पर बाहर कटौती और चेहरा नीचे incubated हैं. निरोधात्मक बैंड अगर प्लेट धुंधला द्वारा कल्पना कर रहे हैंएस के साथ tetrazolium लाल. विधि लाल तिपतिया घास की जुदाई (Trifolium pratense CV. Kenland) phenolic यौगिकों और क्लोस्ट्रीडियम sticklandii, गोजातीय रूमेण का निवासी है कि एक अति अमोनिया उत्पादन जीवाणु (HAB) के खिलाफ गतिविधि के लिए उनकी स्क्रीनिंग के लिए लागू किया जाता है. टीएलसी तरीकों (एरोबिक या anaerobic), साथ ही कवक पौधों के अर्क और अन्य प्रजातियों के जीवाणु के कई प्रकार के लिए लागू संस्कृति शर्तों प्रजातियों के विकास की आवश्यकताओं को फिट करने के लिए संशोधित कर रहे हैं, परीक्षण जीवों के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है.

लाल तिपतिया घास (Trifolium pratense CV. Kenland) के अर्क, phenolic यौगिकों से युक्त के प्रतिनिधि सिलिका टीएलसी विभाजन चित्रा 2 में दिखाया गया. एथिल एसीटेट हेक्सेन में लाल तिपतिया घास निकालने का पृथक्करण (09:01, वी / वी), 8.5 से...

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Thin-layer Chromatographic TLC Separations and Bioassays of Plant Extracts to Identify Antimicrobial Compounds

पतली परत chromatographic (टीएलसी) विभाजन और संयंत्र निष्कर्षों की bioassays रोगाणुरोधी यौगिकों की पहचान करने के लिए

तरीके पौधों के अर्क की पतली परत chromatographic (टीएलसी) जुदाई और जीवाणुरोधी मेटाबोलाइट्स की पहचान करने के लिए संपर्क bioautography के लिए वर्णित हैं. तरीकों गोजातीय रूमेण का निवासी हाइपर अमोनिया उत्पादन बैक्टीरिया (HAB) बाधा लाल तिपतिया घास phenolic यौगिकों की स्क्रीनिंग के लिए लागू कर रहे हैं.

A common screen for plant antimicrobial compounds consists of separating plant extracts by paper or thin-layer chromatography (PC or TLC), exposing the ...

Research

JoVE Journal

Chemistry

Thin-layer Chromatographic (TLC) Separations and Bioassays of Plant Extracts to Identify Antimicrobial Compounds

Profiling the Triacylglyceride Contents in Bat Integumentary Lipids by Preparative Thin Layer Chromatography and MALDI-TOF Mass Spectrometry

प्रारंभिक पतली परत क्रोमैटोग्राफी और MALDI-TOF मास स्पेक्ट्रोमेट्री द्वारा चमगादड़ कोल लिपिड में Triacylglyceride सामग्री रूपरेखा

The mammalian integument includes sebaceous glands that secrete an oily material onto the skin surface. Sebum production is part of the innate immune ...

Methods to Identify the NMR Resonances of the 13C-Dimethyl N-terminal Amine on Reductively Methylated Proteins

Methods to Identify the NMR Resonances of the 13C-Dimethyl N-terminal Amine on Reductively Methylated Proteins

Nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy is a proven technique for protein structure and dynamic studies. To study proteins with NMR, stable magnetic ...

Analysis of Volatile and Oxidation Sensitive Compounds Using a Cold Inlet System and Electron Impact Mass Spectrometry

एक शीत इनलेट सिस्टम और इलेक्ट्रॉन प्रभाव मास स्पेक्ट्रोमेट्री का उपयोग अस्थिर और ऑक्सीकरण संवेदनशील यौगिकों का विश्लेषण

This video presents a protocol for the mass spectrometrical analysis of volatile and oxidation sensitive compounds using electron impact ionization. The ...

Sequencing of Plant Wall Heteroxylans Using Enzymic, Chemical (Methylation) and Physical (Mass Spectrometry, Nuclear Magnetic Resonance) Techniques

Sequencing of Plant Wall Heteroxylans Using Enzymic, Chemical Methylation and Physical Mass Spectrometry, Nuclear Magnetic Resonance Techniques

संयंत्र दीवार Heteroxylans का अनुक्रमण Enzymic, रासायनिक (मेथिलिकरण) और शारीरिक (मास स्पेक्ट्रोमेट्री, परमाणु चुंबकीय अनुनाद) तकनीकों का प्रयोग

This protocol describes the specific techniques used for the characterization of reducing end (RE) and internal region glycosyl sequence(s) of ...

On-line Analysis of Nitrogen Containing Compounds in Complex Hydrocarbon Matrixes

ऑन लाइन नाइट्रोजन का विश्लेषण परिसर हाइड्रोकार्बन matrixes में यौगिकों से युक्त

The shift to heavy crude oils and the use of alternative fossil resources such as shale oil are a challenge for the petrochemical industry. The ...

Using Capillary Electrophoresis to Quantify Organic Acids from Plant Tissue: A Test Case Examining Coffea arabica Seeds

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प्लांट टिश्यू से कार्बनिक अम्ल यों केशिका वैद्युतकणसंचलन का उपयोग: एक परीक्षण के मामले की जांच<em&gt; Coffea अरेबिका</em&gt; बीज

Carboxylic acids are organic acids containing one or more terminal carboxyl (COOH) functional groups. Short chain carboxylic acids (SCCAs; carboxylic ...

Synthesis of Plant Phenol-derived Polymeric Dyes for Direct or Mordant-based Hair Dyeing

प्रत्यक्ष या रंगस्थापक आधारित बालों को रंगने के लिए संयंत्र फिनोल व्युत्पन्न Polymeric रंगों का संश्लेषण

Effective hair dyeing through in situ incubation of keratin hair with the products of fungal laccase-catalyzed polymerization of plant phenols has been ...

Raman and IR Spectroelectrochemical Methods as Tools to Analyze Conjugated Organic Compounds

संयुग्मित कार्बनिक यौगिकों का विश्लेषण करने के लिए उपकरण के रूप में रमन और IR Spectroelectrochemical तरीके

In the presented work, two spectroelectrochemical techniques are discussed as tools for the analysis of the structural changes occurring in the molecule ...

Using Cyclic Voltammetry, UV-Vis-NIR, and EPR Spectroelectrochemistry to Analyze Organic Compounds

कार्बनिक यौगिकों का विश्लेषण करने के लिए चक्रीय Voltammetry, यूवी विज़-NIR, और EPR Spectroelectrochemistry का उपयोग करना

Cyclic voltammetry (CV) is a technique used in the analysis of organic compounds. When this technique is combined with electron paramagnetic resonance ...

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Ultrathin उच्च प्रदर्शन धातु-कार्बनिक फ्रेमवर्क झिल्ली की Electrophoretic क्रिस्टलीकरण

We report the synthesis of thin, highly intergrown, polycrystalline metal-organic framework (MOF) membranes on a wide range of unmodified porous and ...