Name: technique of subnormothermic ex vivo liver perfusion for the storage, assessment, and repair of marginal liver grafts
Uploaded: 2014-08-13T15:00:00
Duration: 9 min 29 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts at JoVE.com

המחקר נתמך על ידי מענקי מחקר של השתלות האיברים רוש קרן מחקר (ROTRF) וAstellas. מרקוס Selzner נתמכה פיתוח פרס ASTS קריירה על ידי. מתיאס Knaak נתמכה על ידי מלגות מחקר Astellas. אנו מודים Uwe Mummenhoff והמשפחה ברמינגהאם על תמיכתם הנדיבה.

<ol>
	<li>Qiu, J., Ozawa, M., Terasaki, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+transplantation+in+the+United+States.">Liver transplantation in the United States.</a> Clinical Transplants. , 17-28 (2005).</li><li>Maheshwari, A., Maley, W., Li, Z., Thuluvath, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+complications+and+outcomes+of+liver+transplantation+from+donors+after+cardiac+death.">Biliary complications and outcomes of liver transplantation from donors after cardiac death.</a> Liver Transpl. 13 (12), 1645-1653 (2007).</li><li>Reich, D. J., Hong, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+status+of+donation+after+cardiac+death+liver+transplantation.">Current status of donation after cardiac death liver transplantation.</a> Curr Opin Organ Transplant. 15 (3), 316-321 (2010).</li><li>Grewal, H. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+transplantation+using+controlled+donation+after+cardiac+death+donors:+an+analysis+of+a+large+single-center+experience.">Liver transplantation using controlled donation after cardiac death donors: an analysis of a large single-center experience.</a> Liver Transpl. 15 (9), 1028-1035 (2009).</li><li>Nguyen, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+outcomes+of+donation+after+cardiac+death+liver+allografts+from+a+single+center.">Long-term outcomes of donation after cardiac death liver allografts from a single center.</a> Clin Transplant. 23 (2), 168-173 (2009).</li><li>Heidenhain, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+of+and+risk+factors+for+ischemic-type+biliary+lesions+following+orthotopic+liver+transplantation.">Incidence of and risk factors for ischemic-type biliary lesions following orthotopic liver transplantation.</a> Transpl Int. 23 (1), 14-22 (2010).</li><li>Moench, C., Uhrig, A., Lohse, A. W., Otto, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CC+chemokine+receptor+5delta32+polymorphism-a+risk+factor+for+ischemic-type+biliary+lesions+following+orthotopic+liver+transplantation.">CC chemokine receptor 5delta32 polymorphism-a risk factor for ischemic-type biliary lesions following orthotopic liver transplantation.</a> Liver Transpl. 10 (3), 434-439 (2004).</li><li>Iacob, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic,+immunological+and+clinical+risk+factors+for+biliary+strictures+following+liver+transplantation.">Genetic, immunological and clinical risk factors for biliary strictures following liver transplantation.</a> Liver Int. 32 (8), 1253-1261 (2012).</li><li>Heidenhain, C., Puhl, G., Moench, C., Lautem, A., Neuhaus, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokine+Receptor-5Delta32+Mutation+is+No+Risk+Factor+for+Ischemic-Type+Biliary+Lesion+in+Liver+Transplantation.">Chemokine Receptor-5Delta32 Mutation is No Risk Factor for Ischemic-Type Biliary Lesion in Liver Transplantation.</a> J Transplant. , (2009).</li><li>Hashimoto, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+tissue+plasminogen+activator+in+liver+transplantation+from+donation+after+cardiac+death+donors.">Use of tissue plasminogen activator in liver transplantation from donation after cardiac death donors.</a> Am J Transplant. 10 (12), 2665-2672 (2010).</li><li>Staib, W., Scholz, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Stoffwechsel der perfundierten Leber. , (1968).</li><li>Brauer, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver.">Liver.</a> Annu Rev Physiol. 18, 253-278 (1956).</li><li>Boehnert, M. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normothermic+acellular+ex+vivo+liver+perfusion+reduces+liver+and+bile+duct+injury+of+pig+livers+retrieved+after+cardiac+death.">Normothermic acellular ex vivo liver perfusion reduces liver and bile duct injury of pig livers retrieved after cardiac death.</a> Am J Transplant. 13 (6), 1441-1449 (2013).</li><li>Guarrera, J. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypothermic+machine+preservation+in+human+liver+transplantation:+the+first+clinical+series.">Hypothermic machine preservation in human liver transplantation: the first clinical series.</a> Am J Transplant. 10 (2), 372-381 (2010).</li><li>Fondevila, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypothermic+oxygenated+machine+perfusion+in+porcine+donation+after+circulatory+determination+of+death+liver+transplant.">Hypothermic oxygenated machine perfusion in porcine donation after circulatory determination of death liver transplant.</a> Transplantation. 94 (1), 22-29 (2012).</li><li>Rougemont, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One+hour+hypothermic+oxygenated+perfusion+(HOPE)+protects+nonviable+liver+allografts+donated+after+cardiac+death.">One hour hypothermic oxygenated perfusion (HOPE) protects nonviable liver allografts donated after cardiac death.</a> Ann Surg. 250 (5), 674-683 (2009).</li><li>Chung, W. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Addition+of+a+kidney+to+the+normothermic+ex+vivo+perfused+porcine+liver+model+does+not+increase+cytokine+response.">Addition of a kidney to the normothermic ex vivo perfused porcine liver model does not increase cytokine response.</a> J Artif Organs. 15 (3), 290-294 (2012).</li><li>Brockmann, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normothermic+perfusion:+a+new+paradigm+for+organ+preservation.">Normothermic perfusion: a new paradigm for organ preservation.</a> Ann Surg. 250 (1), 1-6 (2009).</li><li>Hessheimer, A. J., Fondevila, C., Garc&#237;a-Valdecasas, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracorporeal+machine+liver+perfusion:+are+we+warming+up.">Extracorporeal machine liver perfusion: are we warming up.</a> Curr Opin Organ Transplant. 17 (2), 143-147 (2012).</li><li>Vogel, T., Brockmann, J. G., Friend, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex-vivo+normothermic+liver+perfusion:+an+update.">Ex-vivo normothermic liver perfusion: an update.</a> Curr Opin Organ Transplant. 15 (2), 167-172 (2010).</li><li>Swindle, M. M., Smith, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Best+practices+for+performing+experimental+surgery+in+swine.">Best practices for performing experimental surgery in swine.</a> J Invest Surg. 26 (2), 63-71 (2013).</li><li>Smith, A. C., Swindle, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+swine+for+the+laboratory.">Preparation of swine for the laboratory.</a> ILAR J. 47 (4), 358-363 (2006).</li><li>Cywes, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+intraportal+glucose+infusion+on+hepatic+glycogen+content+and+degradation,+and+outcome+of+liver+transplantation.">Effect of intraportal glucose infusion on hepatic glycogen content and degradation, and outcome of liver transplantation.</a> Ann Surg. 216 (3), 235-246 (1992).</li><li>Ishida, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+effects+of+oral,+peripheral+intravenous,+and+intraportal+glucose+on+hepatic+glucose+uptake+and+insulin+and+glucagon+extraction+in+conscious+dogs.">Differential effects of oral, peripheral intravenous, and intraportal glucose on hepatic glucose uptake and insulin and glucagon extraction in conscious dogs.</a> J Clin Invest. 72 (2), 590-601 (1983).</li><li>Morsiani, E., Aleotti, A., Ricci, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Haemodynamic+and+ultrastructural+observations+on+the+rat+liver+after+two-thirds+partial+hepatectomy.">Haemodynamic and ultrastructural observations on the rat liver after two-thirds partial hepatectomy.</a> J Anat. 4 (Pt 4), 507-515 (1998).</li><li>Sch&#246;n, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+transplantation+after+organ+preservation+with+normothermic+extracorporeal+perfusion.">Liver transplantation after organ preservation with normothermic extracorporeal perfusion.</a> Ann Surg. 233 (1), 114-123 (2001).</li><li>Currin, R. T., Gores, G. J., Thurman, R. G., Lemasters, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protection+by+acidotic+pH+against+anoxic+cell+killing+in+perfused+rat+liver:+evidence+for+a+pH+paradox.">Protection by acidotic pH against anoxic cell killing in perfused rat liver: evidence for a pH paradox.</a> FASEB J. 5 (2), 207-210 (1991).</li><li>Derveaux, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Does+ex+vivo+vascular+resistance+reflect+viability+of+non-heart-beating+donor+livers?.">Does ex vivo vascular resistance reflect viability of non-heart-beating donor livers?.</a> Transplant Proc. 37 (1), 338-339 (2005).</li><li>Guarrera, J. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypothermic+Machine+Preservation+of+Human+Liver+Allografts:+Markers+of+Reperfusion+Injury+[abstract#+1282].">Hypothermic Machine Preservation of Human Liver Allografts: Markers of Reperfusion Injury [abstract# 1282].</a> Am J Transpl. 7, 476 (2007).</li><li>Tolboom, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subnormothermic+machine+perfusion+at+both+20&#176;C+and+30&#176;C+recovers+ischemic+rat+livers+for+successful+transplantation.">Subnormothermic machine perfusion at both 20&#176;C and 30&#176;C recovers ischemic rat livers for successful transplantation.</a> J Surg Res. 175 (1), 149-156 (2012).</li><li>Vollmar, B., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hepatic+microcirculation:+mechanistic+contributions+and+therapeutic+targets+in+liver+injury+and+repair.">The hepatic microcirculation: mechanistic contributions and therapeutic targets in liver injury and repair.</a> Physiol Rev. 89 (4), 1269-1339 (2009).</li><li>Jamieson, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+steatosis+and+normothermic+perfusion-preliminary+experiments+in+a+porcine+model.">Hepatic steatosis and normothermic perfusion-preliminary experiments in a porcine model.</a> Transplantation. 92 (3), 289-295 (2011).</li></ol>

יש לי המחברים אין לחשוף.

במודל חזיר המחקה השתלה כבד DCD, הראינו כי זלוף כבד subnormothermic עם תוצאות פתרון זלוף סלולריות בפרמטרים יציבים זלוף, פציעת הפטוציט מינימאלית, וחילוף חומרים בכבד פעיל. זלוף subnormothermic שלנו להגדיר הוכיח להתאושש הומאוסטזיס וחילוף חומרי hepatocellular. אחסון גליקוגן משוחזר ומטבוליטים מבוטלים. Ex vivo זלוף הכבד כטכניקת שימור מציע בפעם הראשונה את ההזדמנות כדי להעריך סמנים של תפקוד שתל ופגיעה במהלך שימור איברים ולפני ההשתלה. לצד ההערכה מקרוסקופית של הומוגניות זלוף השתל, זרימת ערכים לספק אינדיקציה טובה של הכדאיות של השתל ואת מידת פגיעת איסכמית שספג קודם לכן 29. צריכת חמצן וייצור מיצי מרה הם סמנים של תפקוד מטבולים. רמות של אנזימי כבד כמו AST יכולות לשמש כלsess התואר ודינמיקה של פגיעת hepatocellular 30. הערכת שתל יסודית זה עשויה לאפשר אפליה אמינה בין איברים להשתלה שוליים ולא להשתלה. בחרנו טמפרטורת subnormothermic של 33 מעלות צלזיוס במערכת זלוף כי הטמפרטורה היא מספיק כדי לאפשר את חילוף החומרים, כמו גם ATP וסינתזה של גליקוגן. במקביל, היא מספקת ירידה בביקוש חמצן בהשוואה להגדרות זלוף normothermic המספק בטיחות נוספת מפני פגיעת איסכמית. באופן כללי, טמפרטורות זלוף מעל 30 מעלות צלזיוס הראו לשם צמצום פגיעת איסכמית קרה ולספק את פעילות חילוף חומרים מספיקה ביום 31 ב. בניגוד לקבוצות אחרות, אנחנו לא משתמשים בכל הדם כperfusate, אבל פתרון normo-האוסמוטי אלבומין (Steen) עם תאי דם אדום שטופים ומסוננים. על ידי נטרול רכיבי הפלזמה, כמו גם טרומבוציטים ולויקוציטים, פתרון זלוף הוא דהחתם כדי למזער איתות הפרו דלקתית במהלך זלוף ex vivo. בנוסף להערכת השתל, תנאי זלוף יציבים לאורך כמה שעות יאפשר טיפול שתל. מולקולות רבות הראו להפחתת עוצמת פגיעת reperfusion תחת תנאי ניסויים 32. עם זאת, כמעט ולא משטר טיפול עשה את דרכה לתוך פרקטיקה קלינית, עדיין. נראית סיבה אחת להיות חוסר ההזדמנות ליישם טיפולים אלה במהלך אחסון קר. כבד מטבולית פעיל בvivo לשעבר מערכת זלוף הוא אופטימלי ליישום בכל סוג של טיפול. בהקשר זה, לא רק טיפולים לשיפור תנאי reperfusion כמו הנחתה של פעילות תאי Kupffer או הדחה של מיני חמצן תגובתי הם על הדעת, אלא גם טיפולים כמו ריפוי גנטי להתנות את השתל, למשל, נגד הישנות הפטיטיס C. אסטרטגיות פוטנציאליות אחרות יכולות לכלול הפחתה בsteatosis במהלך זלוף vivo לשעברתקופת 33. לסיכום, לשעבר vivo זלוף הכבד הוא אסטרטגיה חדשנית לצמצום פגיעת איסכמית קרה ולהעריך שתלי כבד שוליים לפני ההשתלה כבד. הגדרת זלוף vivo לשעבר מספקת הזדמנות ייחודית לתקן ושתלי מצב לפני ההשתלה.

השתלה כבד היא אפשרות הטיפול רק לחולים הסובלים ממחלת כבד סופנית או קרצינומה hepatocellular המתקדמת. ל25 השנים האחרונות, מספרם של מועמדי רשימת המתנה גדל בהדרגה ועלה על מספר השתלים הזמינים. מספר תורמי לב פועם ירד בעשור האחרון. במקביל, מספרם של שתלים שוליים, כגון תרומה לאחר המוות לבבי (DCD), כמו גם כבדים ישנים ושומן גדל 1,2. שתלי שוליים לעתים קרובות ירדו להשתלת כבד בשל הסיכוי גבוה יותר של פונקציה שאינה או מתעכבת שתל העיקרי. בשתלי DCD, פיתוח חומרות סוג איסכמי מרה (ITBS) הוא דאגה מיוחדת. עם טכניקת השימור הקונבנציונלית סטטי הקרה, ITBS להתרחש בכ 10-40% משתלי DCD. ברוב המכריע של חולים, ITBS מוביל מחדש השתלה או מות חולה. במיוחד פעמים איסכמי חמות וקרות ממושכות הן סיכוןגורמים לITBS 3-7. גיל תורם, נטיות גנטיות (כגון דלתא CCR5 32), והבחירה של פתרון שימור יש גם דן כסיכון נוסף גורמי 7-10. microthrombosis החלקי של כלי peribiliary הוצע כמנגנון פוטנציאלי לITBS לאחר השתלה כבד עם DCD תל 11. לקראת כניסתה הקלינית של השתלה כבד, vivo לשעבר הזלפות כבד היו בשימוש ללמוד את חילוף החומרים ופיזיולוגיה 12,13 כבד. לאחר השתלה כבד מצאה את דרכה לתוך ההגדרה הקלינית ב1960s, ניסיונות אין ספור נעשו כדי להשתמש ex vivo זלוף כבד כשיטת שימור על ידי חיקוי תנאי תזונה וחמצון פיסיולוגיים. השירות שלה לשמירה על שתלי שוליים נחקר בעשור האחרון, אבל זה לא הגיע לטיפול קליני סטנדרטי. לאחרונה תיארו הפחתה בפגיעה בצינור מרה בDהשתלה כבד CD ידי vivo לשעבר perfused שימור 14. גישות שונות בנוגע לפתרון זלוף נעשו. הבחירה נעה בין פתרונות סלולריים כמו כל דם מבעלי חי התורם או תאים אדומים ארוזים בשילוב עם פלזמה אנושית, לגישות acellular כמו אוניברסיטת מכונה של פתרון ויסקונסין, פתרון IGL, או פתרון Steen 14-19. הטמפרטורה נעה בין C ° 4-37 20. המינוח בהיפותרמיה,, וnormothermic subnormothermic הוא מאוד משתנה ולא עקבי. כל טכניקות, פתרונות, והגדרות הטמפרטורה השונות שואפים ליום 1 בתנאים) יציבים זלוף, 2) חמצון מספיק, ו3) הקמתה מחדש של תפקוד איבר. יכולת שימור משופרת, כמו גם את היכולת של הערכת איברים וטיפול במהלך זלוף normothermic וsubnormothermic פרצופים מורכבות טכנית גבוהה יותר ועלויות בהשוואה לזלוף היפותרמיה 20,21. פיתחנו vivo לשעבר מערכת זלוף כבד subnormothermic מעל 4 השנים האחרונות. המערכת יכולה לשמש ל1) &quot;להטעין&quot; תכולת אנרגיה בכבד, 2) כדי להעריך את האיכות של השתל, ועד 3) לתקן את הכבדים שוליים לפני ההשתלה. הפרוטוקול הבא מכיל את כל המידע לזלוף כבד יציב.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>circuit</td>
			<td>Maquet (Hirrlingen, GER)</td>
			<td>custom made</td>
			<td>main reservoir (3L, 3/8&#34; outflow)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>portal reservoir (1.5L, 1/4&#34;, outflow)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>centrifugal pump</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>oxygenator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>leukocyte filter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tubing (1/4&#34; x 1/16&#34;)</td>
			<td>Raumedic (Helmbrechts, GER)</td>
			<td>MED7506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tubing (3/8&#34; x 3/32&#34;)</td>
			<td>Raumedic (Helmbrechts, GER)</td>
			<td>MED7536</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tubing connectors</td>
			<td>Raumedic (Helmbrechts, GER)</td>
			<td></td>
			<td>various sizes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dialysis filter, Optiflux F160NR</td>
			<td>Fresenius Medical Care (Waltham, MA)</td>
			<td>F160NR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>STEEN solution</td>
			<td>XVIVO (G&#246;teborg, SWE)</td>
			<td>19004</td>
			<td>2L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dialysis acid concentrate A</td>
			<td>Baxter (Mississauga, ON)</td>
			<td>D12188M</td>
			<td>45ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>amino acid, Travasol 10%</td>
			<td>Baxter (Mississauga, ON)</td>
			<td>JB6760</td>
			<td>100ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Pyruvate</td>
			<td>Sigma-Aldrich (St. Louis, MO)</td>
			<td>P2256</td>
			<td>1.1g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Sandoz Canada Inc (Toronto, ON)</td>
			<td>10750</td>
			<td>40000 iU</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Gluconate</td>
			<td>Pharmaceutical Partners of Canada (Richmond Hill, ON)</td>
			<td>C31110</td>
			<td>10mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fast acting Insulin</td>
			<td>various vendors</td>
			<td></td>
			<td>1000 iU</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cefazoline</td>
			<td>various vendors</td>
			<td></td>
			<td>1g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metronidazole</td>
			<td>Baxter (Mississauga, ON)</td>
			<td>JB3401</td>
			<td>500mg</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

technique of subnormothermic ex vivo liver perfusion for the storage, assessment, and repair of marginal liver grafts

ההצלחה של השתלה כבד שהובילה למחסור באיברים דרמטי. ברוב אזורי השתלת 20-30% מהחולים ברשימת ההמתנה להשתלת כבד למות מבלי לקבל השתלת איברים או נמחקו להתקדמות מחלה. אסטרטגיה אחת כדי להגדיל את המאגר התורם היא הניצול של שתלים שוליים, כגון כבד שומני, שתלי מתורמים מבוגרים, או תרומה לאחר מוות לבבי (DCD). טכניקת השימור הנוכחית של אחסון סטטי הקר נסבלת רק בצורה גרועה על ידי כבדים שוליים וכתוצאה מכך לפגיעה באיברים משמעותית. בנוסף, אחסון איבר סטטי קר אינו מאפשר הערכת שתל או תיקון לפני ההשתלה. חסרונות אלה של שימור סטטי הקר עוררו עניין בשימור איברי perfused חם כדי להפחית את פגיעת איסכמית קרה, להעריך שתלי כבד במהלך שימור, ולחקור את ההזדמנות כדי לתקן את הכבדים שוליים לפני ההשתלה. פרה האופטימליתנאים בטוחים וזרימה, טמפרטורת זלוף, הרכב של פתרון זלוף ואת הצורך במוביל חמצן היו שנויים במחלוקת בעבר. למרות תוצאות מבטיחות בכמה מחקרים בבעלי חיים, את המורכבות ואת העלויות מנעו יישום קליני רחב יותר עד כה. לאחרונה, עם טכנולוגיה משופרת והבנה טובה יותר של פיזיולוגיה של כבד במהלך זלוף ex vivo התוצאה של זלוף כבד החם השתפרה וניתן להשיג תוצאות טובות באופן עקבי. מאמר זה יספק מידע על שליפת כבד, טכניקות אחסון, וזלוף כבד המבודד בחזירים. אנו להמחיש) הדרישות כדי להבטיח אספקת חמצן מספיקה לאיבר, ב) שיקולים טכניים על המכונה זלוף ופתרון זלוף, וג) היבטים ביוכימיים של איברים מבודדים.

להלן, אנו מציגים את התוצאות של 5 ניסויים זלוף עם DCD-שתלים לאחר 45 חמים תלויים דקות ואיסכמיה 4 שעות קרות לפני תחילת subnormothermic לשעבר vivo זלוף. המטרה העיקרית לזלוף כבד vivo לשעבר היא להבטיח אספקת חמצן מספיקה לאיבר. איסכמיה גורמת התכווצות כלי דם, ובכך להגדיל את התנגדות זלוף. השגת תזרים כלי דם מתמיד עם לחצים יציבים היא אינדיקטור טוב של חמצון נאות. במהלך תקופת גיוס של 1-2 hr פתרון זלוף והאיבר הם חיממו עד 33 ° C, אשר deceases התנגדות כלי הדם של הכבד. ברגע שטמפרטורת היעד של 33 ° C מושגת, זרימת ערכי רמה בטווח קבוע, כמעט פיסיולוגי לשאר זמן 6 שעות זלוף (ציורים A3-3D). באותו הזמן, האיבר הופך מטבולית פעיל. איור 4 א מציג את PO הוורידים &lt;תת&gt; 2, סמן של צריכת חמצן. בתוך שעה 2 הראשונית PO 2 ירידות ורידים לרמה קבועה. במדינת מטבולית פעילה זה, הכבד מתחיל לייצר מיצי מרה (איור 4). Dialyzer מספק הומאוסטזיס מאוזן אלקטרוליט (איורים 4C-4D). היפרקלמיה ראשונית התיישר במהירות. מדידת AST מקוונת משמשת כניטור של נזק hepatocellular. איור 5 מציג עליית AST יניארי רדודה רק לאורך כל תקופת זלוף. H &amp; E הכתמה לאחר 6 שעות של זלוף מגלה נמק הפטוציט &lt;5% עם אונתית שלמה ומבנה סינוסי (איור 6). צביעת PAS באותה נקודת זמן תערוכות מתחדשת אחסון גליקוגן סלולארי בהשוואה לאחסון מותש בDCD-תלים קרים השתמרו (איור 7). <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/51419/51419fig3highres.jpg" /> איור 3 תזרים זלוף ולחץ (n = 5, ברים שגיאה להראות סטיית תקן). (A, B) עורק כבד (HA) לזרום ולחץ: בשלב ההתחממות ב1-2 שעות הראשונות, זרימת העליות בלחצים יציבים וקבועות לאחר מכן. כאשר מסתכל על לחץ ורידי הפורטל יורד (C), הגידול של זרימת HA לקראת סוף זלוף עשוי להיות תגובת autoregulatory של הכבד. (C, D) ורידי הפורטל מגביר את הזרימה (PV) התואם את זרימת HA במהלך 2 שעות הראשונות של ההתחממות. הלחצים להישאר יציבים יחסית. <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/51419/51419fig4highres.jpg" /> .4 פרמטרים ניטור איור (n = 5, ברים שגיאה להראות סטיית תקן). () PO ורידי 2 כסמן של צריכת חמצן ופעילות מטבולית יורד במסגרת השלב הראשוני של ההתחממות בשל cellula מופעלחילוף חומרים r; הוא נשאר יציב לאחר מכן ייצור מרה (ב &#39;) כסמן של פעילות המטבולית מתחיל בטמפרטורות סביב 30 מעלות צלזיוס, ולכן, בין השעה הראשונה והשנייה של זלוף (C, D) dialyzer מבטיח הומאוסטזיס אלקטרוליט..; היפרקלמיה ראשונית היא מאוזנת במהירות. <img alt="איור 5" src="/files/ftp_upload/51419/51419fig5highres.jpg" /> AST .5 איור (n = 5, ברים שגיאה להראות סטיית תקן) AST הוא סמן רגיש של פגיעת hepatocellular.; הגידול הרדוד מרמז אין פגיעה משמעותית במהלך זלוף ex vivo. <img alt="איור 6" src="/files/ftp_upload/51419/51419fig6highres.jpg" /> איור 6 H &amp; E מכתימה (הגדלה 20X). (א) מדגם כבד שאם לפני איסכמיה החמה, lobule כבד נציג אחד עם אדריכלי ללא פגעדואר. מדגם (B) כבד לאחר 45 דקות של איסכמיה החמה, 4 שעות של איסכמיה הקרה, ו6 שעות של זלוף subnormothermic, ארכיטקטורת אונתית היא שלמה ללא נמק ורק נפיחות תא מינימאלית, חללי סינוסי מורחבים במתינות בהשוואה ל מדגם דמה.

Watch this Scientific Journal Video about Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts at JoVE.com

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

שתלי שוליים, כגון כבד שומני, שתלי מתורמים מבוגרים, או כבדים הוחזרו לאחר מוות לבבי (DCD) לסבול אחסון קונבנציונלי, קר סטטי רק בצורה גרועה. פיתחנו מודל חדשני של vivo לשעבר זלוף כבד subnormothermic לשימור, הערכה, ותיקון של שתלי כבד שוליים לפני ההשתלה.

טכניקה של Subnormothermic<em&gt; Ex Vivo</em&gt; הכבד זלוף לאחסון, ההערכה, ותיקון שתלי כבד שולי

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

צעדים לעצמיים ב<em&gt; Ex vivo</emניסוי כבד וכליה&gt; perfused בשר חזירים

The use of ex vivo perfused models can mimic the physiological conditions of the liver for short periods, but to maintain normal homeostasis for an ...

Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

נוהל saphenous אדם הוורידים<em&gt; Ex Vivo</em&gt; זלוף וחיצוני חיזוק

The mainstay of contemporary therapies for extensive occlusive arterial disease is venous bypass graft. However, its durability is threatened by intimal ...

Isolated Hepatic Perfusion as a Treatment for Liver Metastases of Uveal Melanoma

כבדית זלוף המבודד לטיפול בכבד גרורות של מלנומה של הענביה

Isolated hepatic perfusion (IHP) is a procedure where the liver is surgically isolated and perfused with a high concentration of the chemotherapeutic ...

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

באתרו לשעבר Normothermic מכונת זלוף של כבדים תורמים

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous ...

Functional Human Liver Preservation and Recovery by Means of Subnormothermic Machine Perfusion

אדם תפקודי כבד שימור ושחזור על ידי אמצעי Subnormothermic מכונת זלוף

There is currently a severe shortage of liver grafts available for transplantation.  Novel organ preservation techniques are needed to expand the pool of ...

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

Normothermic<em&gt; Ex Vivo</em&gt; זלוף כליות לשימור הכליה שתלים לפני השתלה

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a ...

Method of Direct Segmental Intra-hepatic Delivery Using a Rat Liver Hilar Clamp Model

שיטה של ​​המגזרים הישירים Intra-כבדית משלוח באמצעות מודל קלאמפ עכברוש הכבד hilar

Major hepatic surgery with inflow occlusion, and liver transplantation, necessitate a period of warm ischemia, and a period of reperfusion leading to ...

Laparoscopic Technique for Serial Collection of Liver and Mesenteric Lymph Nodes in Macaques

טכניקה לפרוסקופית עבור אוסף סידורי של צומת כבדים Mesenteric הלימפה קופי מקוק

The mesenteric lymph nodes (MLN) and the liver are exposed to microbes and microbial products from the gastrointestinal (GI) tract, making them ...

Assessment of Plasma Coagulation on Liver Tissue in a Large Animal Model In Vivo

Assessment of Plasma Coagulation on Liver Tissue in a Large Animal Model In Vivo

הערכה של קרישה בפלסמה על רקמת הכבד במודל חיה גדולה In Vivo

Plasma coagulation as a form of electrocautery is used in liver surgery for decades to seal the large liver cut surface after major hepatectomy to prevent ...

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

מודל בעלי חיים קטנים של זלוף הכבד Normothermic Vivo לשעבר

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, ...