Name: cryo-electron microscopy specimen preparation by means of a focused ion beam
Uploaded: 2014-07-26T15:00:00
Duration: 10 min 54 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Cryo-electron Microscopy Specimen Preparation By Means Of a Focused Ion Beam at JoVE.com

מחקר זה זכה לתמיכה מפרויקט QNano http://www.qnano-ri.eu שממומן על ידי תשתיות המחקר של הקהילה האירופית במסגרת תכנית FP7 נפחים (מענק מס &#39;אינפרא 2010-262,163). אנו מודים גם למועצת המחקר Formas לתמיכה כספית.

<ol>
	<li>Echlin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Low Temperature Microscopy and Analysis. , (1992).</li><li>Rubino, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+site-specific+focused-ion-beam+lift-out+method+for+cryo+Transmission+Electron+Microscopy.">A site-specific focused-ion-beam lift-out method for cryo Transmission Electron Microscopy.</a> J. Struct. Biol. 180, 572 (2012).</li><li>Studer, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+approach+for+cryofixation+by+high-pressure+freezing.">A new approach for cryofixation by high-pressure freezing.</a> J. Microsc. 203, 285 (2001).</li><li>Umrath, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cooling+bath+for+rapid+freezing+in+electron+microscopy.">Cooling bath for rapid freezing in electron microscopy.</a> J. Microsc. 101, 103 (1974).</li><li>Walther, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+progress+in+freeze-fracturing+of+high-pressure+frozen+samples.">Recent progress in freeze-fracturing of high-pressure frozen samples.</a> J. Microsc. 212, 34 (2003).</li><li>Elder, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focused+ion+beam+micromachining+of+eukaryotic+cells+for+cryoelectron+tomography.">Focused ion beam micromachining of eukaryotic cells for cryoelectron tomography.</a> Cryo fixation. Techniques in Immunocytochemistry. , (1989).</li><li>Giannuzzi, L. A., Stevie, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Introduction to Focused Ion Beams. , (2005).</li><li>Marko, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focused-ion-beam+thinning+of+frozen-hydrated+biological+specimens+for+cryoelectron+microscopy.">Focused-ion-beam thinning of frozen-hydrated biological specimens for cryoelectron microscopy.</a> Nat. Methods. 4, 215 (2007).</li><li>Hayles, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+making+of+frozen-hydrated,+vitreous+lamellas+from+cells+for+cryo-electron+microscopy.">The making of frozen-hydrated, vitreous lamellas from cells for cryo-electron microscopy.</a> J. Struct. Biol. 172, 180 (2010).</li><li>Rigort, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focused+ion+beam+micromachining+of+eukaryotic+cells+for+cryoelectron+tomography.">Focused ion beam micromachining of eukaryotic cells for cryoelectron tomography.</a> J. Struct. Biol. 109, 4449-44 (2012).</li><li>Hsieh, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+high-resolution+three-dimensional+imaging+of+native+mammalian+tissue:+electron+tomography+of+frozen-hydrated+rat+liver+sections.">Towards high-resolution three-dimensional imaging of native mammalian tissue: electron tomography of frozen-hydrated rat liver sections.</a> J. Struct. Biol. 153, 1 (2006).</li><li>McDowall, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electron+microscopy+of+frozen+hydrated+sections+of+vitreous+ice+and+vitrified+biological+samples.">Electron microscopy of frozen hydrated sections of vitreous ice and vitrified biological samples.</a> J. Microsc. 131, 1 (1983).</li><li>Hayles, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+for+improved+focused+ion+beam+milling+of+cryo-prepared+life+science+specimens.">A technique for improved focused ion beam milling of cryo-prepared life science specimens.</a> J. Microsc. 226, 263 (2007).</li><li>Pettersson, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+producing+site-specific+TEM+specimens+from+low+contrast+materials+with+nanometer+precision.">A method for producing site-specific TEM specimens from low contrast materials with nanometer precision.</a> Microsc. Microanal. 19 (1), 73 (2013).</li><li>W&#228;tjen, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cu+out-diffusion+in+kesterites—A+transmission+electron+microscopy+specimen+preparation+artifact.">Cu out-diffusion in kesterites—A transmission electron microscopy specimen preparation artifact.</a> Appl. Phys. Lett. Appl. Phys. Lett, 051902 (2013).</li></ol>

יש מחברים אין לחשוף.

פרוטוקול זה הוא הסתגלות ולא פשוטה לקירור של הכנת מדגם FIB / TEM הסטנדרטי המשמשת במדעי חומר ב RT. השיטה מייצרת דגימות TEM ללא עיוות מכאנית וסימני סכין (החסרון העיקרי של microtomy), אם כי מסוך עלול להתרחש אם מדגם השטח הוא הומוגניות. זה יכול להיות מופחת על ידי cryo-תצהיר של שכבת מכסת (בעבודה זו Pt היה בשימוש), נרפאה עד שהוא חלק וייחוד 13. ניתן להכין דוגמאות עם רכיבים של קשיות שונות מאוד, כמו גם ללא הסיכון שהם יישברו תחת לחץ במהלך הכנה. לחצים פנימיים עדיין עשויים לגרום lamella הדק לכופף או תלתל, ובמקרה זה בגודל של הסעיף צריך להיות מופחת. חסרון בהשוואה לשיטה אחרת הוא האפשרות לשנות את המבנה הביולוגי עקב חשיפה לאלומת היונים והשתלה אפשרית של היונים במדגם. חסרונות אלה להתרחש גם ב RT עבור prepar המדגםation במדע חומרים 15. הם יכולים להיות מופחתים על ידי מילוי הדליל בצעד ליטוש סופי במתח המאיץ הנמוך ביותר ליונים (500-1,000 V). צעד ליטוש עדין מאוד זה יהיה להסיר את השכבה הפגועה מlamella. בשל אופייה של cryo-בתצהיר (שלבים 3.5, 3.10 ו3.13), חלקים גדולים של המדגם יהיו מכוסים, ובכך חוסמים את הנוף של פני השטח המקוריים. זה עשוי להקשות כדי לעקוב אחר ההחזר על ההשקעה, אלא אם כן סימונים מרובים נמצאים בשימוש כפי שהוצעו בשלב 3.3. במהלך שלבים 4.5 ו4.7 סיכוני lamella דקים שבאו במגע עם אוויר. זו יש להימנע כפי שהוא עלול לגרום ללחות באוויר בצורת גבישי קרח על פני השטח של המדגם, אולי עד כדי טשטוש תכונות חשובות. עליך לבצע פעולות אלה מהר ככל האפשר, אבל באותו הזמן טיפולו הכושל במהלך ההעברה עלול לגרום לאובדן של המדגם זהעצמי. מומלץ שהמשתמש נוקט צעדים אלה באמצעות רשתות TEM ריקות לפני ניסיון על מדגם אמיתי הוא עשה. במדעי חומר, מכשיר FIB הפך את השיטה הראשית של הכנת מדגם TEM בתוך עשור של המסחור שלה. שכן הוא יכול לשמש כמעט על כל דגימה, הוא מסיר את הצורך להתאים את טכניקת ההכנה לסוג של מדגם. אנו מאמינים באותו יכול לקרות בקירור, הודות להליך המפורט כאן. היישום שלה לדגימות גדולות יותר הוא עדיין כפוף ליכולת Cryo-לשמר אותם במצב מזוגג, אבל טכניקות כגון צניחה-הקפאה או בלחץ גבוה הקפאת 3,5 יכולות להוכיח להיות הפתרון האופטימלי לבעיה זו.

בפרוטוקול זה cryo-FIB/SEM משמש להפקת דגימות TEM מאזור מסוים של המדגם, זוהה בעבר עם דיוק גבוה על ידי ניתוח SEM. ניתוח מיקרוסקופית אלקטרונים (סריקה או העברת) של דגימות ביולוגיות הוא טכניקה שגרתית המשמשת למחקר ואבחון. SEM הוא די מהיר וקל להעסיק ולפרש, אבל מידע מתקבל רק ממדגם השטח ועם רזולוציה בטווח 1.5 ננומטר. יש TEM ברזולוציה גבוהה יותר, אך קשה יותר ליישום, ניתוח התמונה הוא פחות ישיר ואילו מידע בתפוצה רחבה מתקבל, דגימות צריכה להיות דלילה אלקטרוני שקיפות (פחות מ כ -500 עבה ננומטר). בעיה נוספת היא שדרישות הוואקום של אותם מכשירים נסבלות לעתים רחוקות על ידי דגימות המכילים מים. ברוב המקרים, דגימות ביולוגיות צריכים להיות קבועות או כימי (החלפת מים עם, למשל, פולימרים) או מיובש. בשני המקרים, שינויים משמעותייםמורפולוגיה ומבנה של הדגימה צפויה להופיע. הכנת Cryo TEM של דגימות התייבשות גורמת לשינויים כימיים מינימאליים והיא מייצרת דגימות קרובה ככל האפשר למצב הטבעי שלהם, במיוחד אם vitrification קרח מתקבלת 1-6. FIB נעשה שימוש נרחב להכנת דגימות TEM ליתרונות הרבים שלה 7. עד כמה שם: השימוש ביונים עתירה אנרגיה בשכיחות כמעט נורמלית ממזער את השפעת השינויים בשערי כרסום ההפרש הקשורים לחומר; ניתן לבחור את האזור שחולץ מן המדגם בתפזורת עם דיוק תת מיקרון; כמות קטנה מאוד של חומר מופק. כמה התפתחויות טכניות האחרונות התאפשרו באמצעות FIB גם להכנת מדגם TEM בקירור 2,8-10. ישנם מספר יתרונות על פני שיטת ההכנה המסורתית של cryo-microtomy 11,12 משמש בעיקר לדגימות חומר רך, כגון חוסר העיוות מכאנית של lamella הפרוס,העדר סימני סכין והאפשרות להכנת דגימות מורכבות עם ממשקים קשים / רכים או רכיבים.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Strata DB 235&#160;</td>
			<td style="width:71px;">FEI</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">FIB/SEM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Omniprobe 100&#160;</td>
			<td colspan="2">Oxford Instruments&#160;</td>
			<td>nanomanipulator</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Alto 2500</td>
			<td style="width:71px;">Gatan</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>cryo preparation chamber</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">cryo-holder model 626</td>
			<td style="width:71px;">Gatan</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>cryo transfer TEM holder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Tecnai F30</td>
			<td style="width:71px;">FEI</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>TEM</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

cryo-electron microscopy specimen preparation by means of a focused ion beam

כאן אנו מציגים פרוטוקול המשמש להכנת דגימות cryo-TEM של נבגי ניז&#39;ר ​​אספרגילוס, אך אשר יכולים בקלות להיות מותאם עבור כל מספר של מיקרואורגניזמים או פתרונות. אנו עושים שימוש בתחנת cryo-העברה בנויה מותאם אישית וחדר הכנת cryo-SEM שונה 2. נבגי לקוחים מתרבות, לצלול, קפוא בחנקן נוזלי רפש ונצפו בcryo-SEM כדי לבחור אזור של עניין. Lamella דקה לאחר מכן הופקה באמצעות FIB, מחובר לרשת TEM ולאחר מכן דליל אלקטרוני שקיפות. הרשת מועברת לבעל cryo-TEM ולTEM ללימודים ברזולוציה גבוהה. בזכות כניסתה של טיפ nanomanipulator מקורר ותחנת cryo-העברה, פרוטוקול זה הוא עיבוד ישיר לטמפרטורת קירור של הכנת FIB בשימוש שגרתית של דגימות TEM. ככזה יש לו את היתרונות של צורך בכמות קטנה של שינויים במכשירים, הגדרות ונהלים קיימים; אני זהזה קל ליישום; יש לו מגוון רחב של יישומים, באופן עקרוני זהה להכנת מדגם cryo-TEM. מגבלה אחת היא שזה דורש טיפול מיומן של הדגימות בשלבים קריטיים, כדי למנוע או למזער את זיהומים.

בעבודה זו עשינו שימוש ב: הקורה כפול FIB / SEM מצויד בnanomanipulator וקאמרי cryo-הכנה; TEM עם בעל cryo-העברה; תחנת cryo-העברת אב טיפוס. Anticontaminator (AC) להבים של חדר cryo-ההכנה וקצה nanomanipulator (NM) שונו על ידי Gatan. עם כל כבוד לקאמרי cryo-הכנה סטנדרטית, להבי AC גדולים יותר כדי לספק גוף קירור גדול יותר לקצה NM. יתר על כן, AC מצויד במהדק לחיבור צמות Cu להחלפת חום עם קצה NM. הפנאומטיקה של FIB / SEM שונו כדי לאפשר NM להיות ולהישאר גם כאשר הוכנסה לתא המדגם פרקה. יש לציין כי הפרמטרים המשמשים בעבודה זו מתאימים ביותר לציוד המפורט לעיל; פרמטרים אלה עלולים צריכים להיות מותאמים בעבודה עם סוגים אחרים של ציוד. כדי לעבוד עם פרוטוקול זה, אמצעי הזהירות הרגילה לטיפול בנושא הקפאה, מערכות חנקן וואקום נוזל צריכהלהיות אחריו. השיטה נבדקה על סוגים שונים של דגימות עם תוצאות טובות, החל מפתרונות או מטריצות פולימר המכילות חלקיקים, לאורגניזם חד תאי לנמטודות. דוגמאות לשלבים השונים של ההליך באים לידי ביטוי בדמויות 1-12 בא נבגי ניז&#39;ר ​​מוכתמים בtetroxide אוסמיום וpermanganate אשלגן. הנבגים הם צילמו לראשונה על ידי SEM (איור 1) לזהות את האתר להפקה. במקרה זה, חתך של כל נבג היה מספיק, אבל זה אפשרי למקם את ההחזר על ההשקעה עבור חילוץ עם דיוק תת מיקרומטר, למשל, פורס תא מסוים במרחק מסוים מקרום התא. ברגע שהתכונה של עניין זוהתה, הצעד הראשון של תצהיר cryo-Pt מיושם (איור 2), כדי להגן על המדגם מנזק קורה מכרסום יון. המדגם מוטה ל52 ° להמשיך עם o הצעדים הראשוניםו הטחינה (איור 3): המקרטעת של שתי תעלות משני צידי lamella. המדגם מוטה לאחור ולאחר מכן עוד הסתובב לעזוב רק שני גשרים קטנים המחברים אותו לתפוצה הרחבה (איור 4). Nanomanipulator מקורר הוא הביא במגע עם אמילה (איור 5) ועוד cryo-תצהיר של Pt חיילים אותם יחד (איור 6). אז גשרי חיבור הקטנים הם הסתובבו שם וNM נע lamella בסמוך לאזור החיבור של רשת TEM (איור 7), שבו הוא מולחם עם cryo-תצהיר סופי של Pt (איור 8). NM מכן הופרד מlamella (איור 9), שהוא דלל את אלקטרוני שקיפות עם אלומת היונים (איור 10 ו11). Lamella לבסוף הועברה לTEM (איור 12) שבו הדמיה ברזולוציה גבוהה, ספקטרוסקופיה, טומוגרפיה וטכניקות אחרות can להיות מועסק. <img alt="איור 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51463/51463fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51463/51463fig1.jpg" /> איור 1. תמונת Cryo-SEM של נבגים של א &#39; ניז&#39;ר, לפני תצהיר Pt. <img alt="איור 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51463/51463fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51463/51463fig2.jpg" /> איור 2. אותו האזור באיור 1 לאחר בתצהיר Pt אבל לפני הריפוי. <img alt="איור 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51463/51463fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51463/51463fig3.jpg" /> איור 3. תמונת Cryo-SEM של אותו האזור באיור 2, מוטה 52 º, לאחר בתצהיר Pt וריפוי, עם טחינת תעלה לדרך(ראה שלב 3.7). <img alt="איור 4" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51463/51463fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51463/51463fig4.jpg" /> איור 4. Lamella, מוכנה לעילוי-out. <img alt="איור 5" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51463/51463fig5highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51463/51463fig5.jpg" /> איור 5. קצה nanomanipulator הקר יוצר קשר עם lamella. <img alt="איור 6" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51463/51463fig6highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51463/51463fig6.jpg" /> איור 6. Cryo-תצהיר Pt שני משמש לרתך יחד nanomanipulator וlamella. <i<html> גובה מ&quot;ג = &quot;איור 7&quot; עבור: תוכן width = &quot;5in&quot; עבור: src = /&gt; &quot;/ files/ftp_upload/51463/51463fig7highres.jpg&quot; = &quot;/ files/ftp_upload/51463/51463fig7.jpg&quot; src איור 7. Nanomanipulator הקר משמש להעברת lamella לאזור החיבור של רשת TEM. <img alt="איור 8" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51463/51463fig8highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51463/51463fig8.jpg" /> איור 8. קריו בתצהיר משמש פעם נוספת לצרף lamella לרשת TEM. <img alt="איור 9" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51463/51463fig9highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51463/51463fig9.jpg" /> איור 9. Lamella נחתך ללא nanomanipulator והוא מוכן כעת לאו אחסון או דילול אלקטרוני שקיפות. = &quot;תמיד&quot;&gt; בתוך עמודים <img alt="איור 10" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51463/51463fig10highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51463/51463fig10.jpg" /> איור 10. שלב ביניים של הדילול, עם כמה נבגים נראים בחתך. <img alt="איור 11" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51463/51463fig11highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51463/51463fig11.jpg" /> איור 11 תמונת Cryo-SEM של המדגם לאחר דילול סופי.; רוב הנבגים האחרים היה צריכים להיות הסתובבו משם כי lamella התחילה להתנפח. <img alt="איור 12" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51463/51463fig12highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51463/51463fig12.jpg" /> איור 12. תמונת cryo-TEM מורכב של lamella. חלק מבדל אל נכללבlamella (החץ שחור).

Watch this Scientific Journal Video about Cryo-electron Microscopy Specimen Preparation By Means Of a Focused Ion Beam at JoVE.com

Cryo-electron Microscopy Specimen Preparation By Means Of a Focused Ion Beam

Cryo-אלקטרון מתכוון בהכנה מיקרוסקופית דגימה של אלומת יונים ממוקדת

Cryo אלקטרונים מיקרוסקופים, או סורק (SEM) או הילוכים (TEM), נמצא בשימוש נרחב לאפיון של דגימות ביולוגיות או חומרים אחרים עם תכולת מים גבוהה 1. SEM / אלומת יונים ממוקדת (FIB) משמשת לזיהוי תכונות של עניין בדגימות ולחלץ lamella להעברה לcryo-TEM דק, אלקטרונים שקופים.

Here we present a protocol used to prepare cryo-TEM samples of Aspergillus niger spores, but which can easily be adapted for any number of microorganisms ...

Research

JoVE Journal

Biology

MALDI Sample Preparation: the Ultra Thin Layer Method

MALDI הכנה לדוגמא: שיטת אולטרה שכבה דקה

This video demonstrates the preparation of an ultra-thin matrix/analyte layer for analyzing peptides and proteins by Matrix-Assisted Laser Desorption ...

Cell Block Preparation from Cytology Specimen with Predominance of Individually Scattered Cells

בלוק תא הכנה מן הדגימה ציטולוגיה עם דומיננטיות של תאים פזורים בנפרד

This video demonstrates Shidham's method for preparation of cell blocks from liquid based cervicovaginal cytology specimens containing individually ...

Examination of Drosophila Larval Tracheal Terminal Cells by Light Microscopy

Examination of Drosophila Larval Tracheal Terminal Cells by Light Microscopy

בחינה של<em&gt; דרוזופילה</em&gt; Terminal תאי קני הזחל על ידי מיקרוסקופ אור

Cell shape is critical for cell function. However, despite the importance of cell morphology, little is known about how individual cells generate specific ...

Sample Preparation for Single Virion Atomic Force Microscopy and Super-resolution Fluorescence Imaging

הכנה לדוגמה למיקרוסקופיה של כוח אטומי של Virion יחיד והדמיית פלואורסצנטיות ברזולוציה גבוהה במיוחד

Immobilization of virions to glass surfaces is a critical step in single virion imaging. Here we present a technique&#160;adopted from single molecule ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

במעקב 4 ממדי Vivo של תאי גזע ואבות היווצרות דם במבוגרי עכבר calvarial מח עצם

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Do's and Don'ts of Cryo-electron Microscopy: A Primer on Sample Preparation and High Quality Data Collection for Macromolecular 3D Reconstruction

עשה ואל תעשה של מיקרוסקופ אלקטרוני cryo-: פריימר על הכנת דוגמאות וגבוהה איסוף נתונים איכות לשיקום Macromolecular 3D

Cryo-electron microscopy (cryoEM) entails flash-freezing a thin layer of sample on a support, and then visualizing the sample in its frozen hydrated state ...

Sample Preparation and Imaging of Exosomes by Transmission Electron Microscopy

הכנת הדוגמא והדימות של Exosomes על ידי במיקרוסקופ אלקטרונים הילוכים

Exosomes are nano-sized extracellular vesicles secreted by body fluids and are known to represent the characteristics of cells that secrete them. The ...

Visualization of DNA Compaction in Cyanobacteria by High-voltage Cryo-electron Tomography

ויזואליזציה של דחיסת DNA ב כחוליות על ידי מתח גבוה הקפאה-אלקטרון טומוגרפיה

This protocol describes how to visualize the transient DNA compaction in cyanobacteria. DNA compaction is a dramatic cytoplasmic event recently found to ...

Miniaturized Sample Preparation for Transmission Electron Microscopy

הכנת הדוגמא ולמחקר במיקרוסקופ אלקטרונים הילוכים

Due to recent technological progress, cryo-electron microscopy (cryo-EM) is rapidly becoming a standard method for the structural analysis of protein ...

Biological Sample Preparation by High-pressure Freezing, Microwave-assisted Contrast Enhancement, and Minimal Resin Embedding for Volume Imaging

הכנת הדוגמא ביולוגית על ידי הקפאת בלחץ גבוה, שיפור ניגודיות בסיוע מיקרוגל, ושרף מינימלי הטמעה של אמצעי הדמיה

The described sample preparation technique is designed to combine the best quality of ultrastructural preservation with the most suitable contrast for the ...