Name: application of retinoic acid to obtain osteocytes cultures from primary mouse osteoblasts
Uploaded: 2014-05-13T23:35:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Application of Retinoic Acid to Obtain Osteocytes Cultures from Primary Mouse Osteoblasts at JoVE.com

Finansieringen kom från &quot;Progetto en Concorso Fondazione IRCCS Ospedale Maggiore Policlinico 2009-2010&quot; till MD och Associazione Bambino Nefropatico ABN Onlus, Milano

Alla djurförsök utfördes enligt den nationella och europeiska gällande regler om skydd av djur som används för vetenskapliga ändamål och har granskats och godkänts av den etiska kommittén i Milanos universitet. 1. Isolering av primära Osteoblaster Metoden, med mindre modifiering, följer det förfarande som beskrivs av Dodig et al 14. <ol><li> Förbered digesting medium, genom att tillsätta 0,1% kollagenas P och ...

<ol>
	<li>Schneider, P., Meier, M., Wepf, R., M&#252;ller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+quantitative+3D+imaging+of+the+osteocyte+lacuno-canalicular+network.">Towards quantitative 3D imaging of the osteocyte lacuno-canalicular network.</a> Bone. 47 (5), 848-858 (2010).</li><li>Cheng, F., Hulley, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+osteocyte--a+novel+endocrine+regulator+of+body+phosphate+homeostasis.">The osteocyte--a novel endocrine regulator of body phosphate homeostasis.</a> Maturitas. 67 (4), 327-338 (2010).</li><li>Paic, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+differentially+expressed+genes+between+osteoblasts+and+osteocytes.">Identification of differentially expressed genes between osteoblasts and osteocytes.</a> 45 (4), 682-692 (2009).</li><li>Dallas, S. L., Bonewald, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+the+transition+from+osteoblast+to+osteocyte.">Dynamics of the transition from osteoblast to osteocyte.</a> Ann N Y Acad Sci. 1192, 437-443 (2010).</li><li>van der Plas, A., Nijweide, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+purification+of+osteocytes.">Isolation and purification of osteocytes.</a> J Bone Miner Res. 7 (4), 389-396 (1992).</li><li>Nijweide, P. J., van der Plas, A., Alblas, M. J., Klein-Nulend, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteocyte+isolation+and+culture.">Osteocyte isolation and culture.</a> Methods Mol Med. 80, 41-50 (2003).</li><li>Stern, A. R., Stern, M. M., Van Dyke, M. E., J&#228;hn, K., Prideaux, M., Bonewald, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+primary+osteocytes+from+the+long+bones+of+skeletally+mature+and+aged+mice.">Isolation and culture of primary osteocytes from the long bones of skeletally mature and aged mice.</a> Biotechniques. 52 (6), 361-373 .</li><li>Kalajzic, I., Matthews, B. G., Torreggiani, E., Harris, M. A., Divieti Pajevic, P., Harris, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+and+in+vivo+approaches+to+study+osteocyte.">In vitro and in vivo approaches to study osteocyte.</a> Bone. 54 (2), 296-206 .</li><li>Bonewald, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+characterization+of+an+osteocyte-like+cell+line,+MLO-Y4.">Establishment and characterization of an osteocyte-like cell line, MLO-Y4.</a> J Bone Miner Metab. 17 (1), 61-65 (1999).</li><li>Mattinzoli, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+model+of+in+vitro+osteocytogenesis+induced+by+retinoic+acid+treatment.">A novel model of in vitro osteocytogenesis induced by retinoic acid treatment.</a> Eur Cell Mater. 24, 403-425 (2012).</li><li>Ross, S. A., McCaffery, P. J., Drager, U. C., De Luca, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinoids+in+embryonal+development.">Retinoids in embryonal development.</a> Physiol Rev. 80 (3), 1021-1054 (2000).</li><li>Clagett-Dame, M., McNeill, E. M., Muley, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+all-trans+retinoic+acid+in+neurite+outgrowth+and+axonal+elongation.">Role of all-trans retinoic acid in neurite outgrowth and axonal elongation.</a> J Neurobiol. 66 (7), 739-756 (2006).</li><li>Vaughan, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATRA+induces+podocyte+differentiation+and+alters+nephrin+and+podocin+expression+in+vitro+and+in+vivo.">ATRA induces podocyte differentiation and alters nephrin and podocin expression in vitro and in vivo.</a> Kidney Int. 68 (1), 133-144 (2005).</li><li>Dodig, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+TAAT-containing+motif+required+for+high+level+expression+of+the+COL1A1+promoter+in+differentiated+osteoblasts+of+transgenic+mice.">Identification of a TAAT-containing motif required for high level expression of the COL1A1 promoter in differentiated osteoblasts of transgenic mice.</a> J Biol Chem. 271 (27), 16422-16429 (1996).</li><li>Burry, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunocytochemistry.">Immunocytochemistry.</a> A practical guide for biomedical research. , (2010).</li><li>Woo, S. M., Rosse, r. J., Dusevich, V., Kalajzic, I., Bonewald, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+line+IDG-SW3+replicates+osteoblast-to-late-osteocyte+differentiation+in+vitro+and+accelerates+bone+formation+in+vivo.">Cell line IDG-SW3 replicates osteoblast-to-late-osteocyte differentiation in vitro and accelerates bone formation in vivo.</a> J Bone Miner Res. 26 (11), 2634-2646 (2011).</li><li>Gu, G., Nars, M., Hentune, n. T. A., Metsikk&#246;, K., V&#228;&#228;n&#228;nen, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolated+primary+osteocytes+express+functional+gap+junctions+in+vitro.">Isolated primary osteocytes express functional gap junctions in vitro.</a> Cell Tissue Res. 323 (2), 263-271 (2006).</li><li>Boukhechba, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+primary+osteocyte+differentiation+in+a+3D+culture+system.">Human primary osteocyte differentiation in a 3D culture system.</a> J Bone Miner Res. 24 (11), 1927-1935 (2009).</li><li>Krishnan, V., Dhurjati, R., Vogler, E. A., Mastro, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteogenesis+in+vitro:+from+pre-osteoblasts+to+osteocytes:+a+contribution+from+the+Osteobiology+Research+Group,+The+Pennsylvania+State+University.">Osteogenesis in vitro: from pre-osteoblasts to osteocytes: a contribution from the Osteobiology Research Group, The Pennsylvania State University.</a> In Vitro Cell Dev Biol Anim. 46 (1), 28-35 .</li><li>Irie, K., Ejiri, S., Sakakura, Y., Shibui, T., Yajima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix+mineralization+as+a+trigger+for+osteocyte+maturation.">Matrix mineralization as a trigger for osteocyte maturation.</a> J Histochem Cytochem. 56 (6), 561-567 .</li><li>Hirao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxygen+tension+is+an+important+mediator+of+the+transformation+of+osteoblasts+to+osteocytes.">Oxygen tension is an important mediator of the transformation of osteoblasts to osteocytes.</a> J Bone Miner Metab. 25 (5), 266-276 (2007).</li><li>Brounais, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+term+oncostatin+M+treatment+induces+an+osteocyte-like+differentiation+on+osteosarcoma+and+calvaria.">Long term oncostatin M treatment induces an osteocyte-like differentiation on osteosarcoma and calvaria.</a> Bone. 44 (5), 830-839 (2009).</li><li>Gupta, R. R., Yoo, D. J., Hebert, C., Niger, C., Stains, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+an+osteocyte-like+phenotype+by+fibroblast+growth+factor-2.">Induction of an osteocyte-like phenotype by fibroblast growth factor-2.</a> Biochem Biophys Res Commun. 402 (2), 258-264 (2010).</li><li>Poole, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sclerostin+is+a+delayed+secreted+product+of+osteocytes+that+inhibits+bone+formation.">Sclerostin is a delayed secreted product of osteocytes that inhibits bone formation.</a> FASEB J. 19 (13), 1842-1844 (2005).</li><li>Dallas, S. L., Prideaux, M., Bonewald, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Osteocyte:+An+Endocrine+Cell+and+More.">The Osteocyte: An Endocrine Cell and More.</a> Endocr Rev. 34 (5), 658-690 (2013).</li></ol>

Under de senaste åren har osteocyte har blivit den mest centrala cellen i benet. Forsknings framsteg successivt avslöjar ett antal tidigare varit misstänkta eller obevisade osteocyte egenskaper, som är av enormt värde för att utforma nya och bättre behandling för en mängd olika skelettsjukdomar. Däremot har utredningen av osteocyte biologi lidit av den begränsade tillgången på in vitro-modeller i en sådan utsträckning att osteoblaster har använts som surrogat celler under lång tid innan osteocy...

Osteocyter, den mest förekommande ben celltyp, är obotligt differentierade, mycket förgrenade celler djupt belägna i skelettet. Cellkroppen av mogna osteocyter finns i ben luckor och har olika former; osteocyter med avlånga cellkroppar finns i det kortikala benet, medan rundade osteocyter är vanligare i trabekulärt ben 1. Grenade dendriter sträcker sig från cellkroppen och bor i små kanaler kallade canaliculi, bildar en intrikat väv som gör att flera kontakter inte bara med andra osteocyter, men även med andra typer av ben celler, benmärg, blodkärl och tillhörande pericyter. Genom interstitiell vätska som finns i luckor och canaliculi, osteocyter är också ytterst kopplad till cirkulationssystemet, därför att de kan påverka inte bara lokalt utan även systemiska händelser, och tvärtom deras beteende kan regleras av både lokala och systemförändringar 2. Denstudie av osteocyter har nyligen tagit fart, tack vare flera tekniska framsteg, exempelvis generering av vävnads-och cellspecifika transgena djur, användning av kraftfulla mikroskopitekniker och av hög genomströmning molekylär screening 3,4. Dock är fortfarande ofullständig kunskap om dessa celler, främst på grund av den relativa bristen på adekvat in vitro-modeller. Egentligen har osteocyter alltid varit svårt att få och bibehålla i kultur på grund av den djupa läge, och den låga spridning som kännetecknar en sådan differentierad celltyp. Under åren har ett antal metoder utvecklats för att isolera primära osteocyter 5-7, även om de i allmänhet producerar låga cellutbyten och bär risken för att ens några förorenande fibroblaster snabbt kommer att växa över den osteocyter 8. Därför har de flesta experimentella in vitro arbete genomförts hittills på den väletablerade osteocyte cell line MLO-Y4 9. Ytterligare in vitro-metoder kan öka möjligheten att studera dessa celler och skulle kunna förbättra analysen av osteocyte biologi och patofysiologi. Till stor del antas bör sådana metoder vara lätt att reproducera, och skulle inte kräva speciell instrumentering eller mycket långa tider för att nå cellmognad. Viktigt är, i förekommande fall till primära celler, de skulle göra det möjligt att dra fördel av transgena djur. Vi har nyligen beskrivits att behandling av den osteoblast cellinjen MC3T3-E1 och av primära osteoblaster med retinsyra inducerar en snabb förändring fenotyp som leder till utvecklingen av en homogen population av förgrenade celler med morfologiska och molekylära egenskaperna hos osteocyter 10. All-trans-retinoinsyra (ATRA) är en aktiv metabolisk produkt av vitamin A, som reglerar gentranskription genom bindning av de nukleära retinsyrareceptorer (RAR). RARbinda till DNA som heterodimererna med retinoid X-receptorer (RXR), vilket slutligen leder till modulering av retinoinsyra (RA)-lyhörd målgener 11. ATRA har visats för att modulera differentiering och mognad av flera celltyper, däribland andra förgrenade celler såsom neuronala celler 12 och podocytes 13. Metoden beskrivs här är baserad på tillsats av ATRA primära osteoblaster. För att vara effektivt måste ATRA som skall tillsättas vid en exakt mognadsstadiet på celler ströks ut med en definierad densitet; i vår erfarenhet dessa villkor är avgörande för att få fenotypen övergången från osteoblaster till osteocyter.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:923px;" width="923">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:283px;">Name</td>
			<td style="width:239px;">Company</td>
			<td style="width:219px;">Cat #</td>
			<td style="width:183px;">comments</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Collagenase P</td>
			<td>Roche Applied Science</td>
			<td>11213857001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Trypsin</td>
			<td>Gibco, Life Technologies</td>
			<td>15400054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">HBSS</td>
			<td>Gibco, Life Technologies</td>
			<td>14175129</td>
			<td>Pre-warm at 37&#176;C before use</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Alpha-MEM</td>
			<td>Invitrogen, Life Technologies</td>
			<td>22571038</td>
			<td>Pre-warm at 37&#176;C before use</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">FBS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F4135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Streptomycin/Penicillin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ascorbic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A4403</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">glycerol 2-phosphate disodium salt hydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G9422</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">ATRA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R2625</td>
			<td>Protect ATRA from light</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td>Dissolve in PBS and filter before use. Work always under a chemical hood.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">DAPI</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>32670</td>
			<td>Can be added to the secondary antibody</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Alizarin red</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A5533</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Janus Green</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>201677</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Perchloric acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>176745</td>
			<td>Use with caution (skin and eye protection are recommended)</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">HCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>320331</td>
			<td>Use with caution (skin and eye protection are recommended)</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">glycerol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G5516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">fluorsave</td>
			<td>Calbiochem - Merck</td>
			<td>345789</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Economy Tweezers #7, 0.40 x 0.5mm tips</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501981</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Economy Tweezers #4, 0.40 x 0.45mm tips</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501978</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Dissecting Scissors, straight,10cm curved</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>14394</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Surgical Scissors, 14 cm, straight, S/S</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501218</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Culture flasks</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430168</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Well-plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3335</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Thermanox coverslips</td>
			<td>Thermo Scientific Nunc</td>
			<td>12-565-27</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">microscope</td>
			<td>Zeiss Apotome</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">spectrometer</td>
			<td>Safas Xenius</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

application of retinoic acid to obtain osteocytes cultures from primary mouse osteoblasts

<html> Behovet av osteocyte kulturer är välkänd för den gemenskap av ben forskare; isolering av primära osteocyter är svårt och ger låga cellantal. Därför är det mest använda cellulära systemet den osteocyte liknande MLO-Y4-cellinjen. Metoden som beskrivs här hänvisar till användningen av vitamin A-syra för att alstra en homogen population av förgrenade celler med morfologiska och molekylära osteocyte funktioner. Efter isolering av osteoblaster från mus-kalvaria, är all-trans-retinoinsyra (ATRA) sattes till cellmediet och cellövervakning genomföres dagligen under ett inverterat mikroskop. Första morfologiska förändringar kan detekteras efter 2 dagars behandling och differentiering är vanligen avslutad inom 5 dagar, med gradvisa utvecklingen av dendriter, förlust av förmågan att producera extracellulära matrix, nedreglering av osteoblast markörer och uppreglering av osteocyte specifika molekyler. innehåll &quot;&gt; Daily cellövervakning är nödvändig på grund av den inneboende variationen av galvaniska element, och protokollet kan anpassas med minimal variation på celler från olika stammar mus och tillämpas på transgena modeller. Metoden är enkel att utföra och kräver ingen speciell instrumentering, det är mycket reproducerbar och snabbt genererar en mogen osteocyte befolkningen i fullständig frånvaro av extracellulär matris, som medger användning av dessa celler för obegränsade biologiska tillämpningar.

Resultat erhölls från 5 till 10 oberoende experiment. Cellmorfologin AA / GP behandlade primära celler har mestadels kullerstensliknande egenskaper, kännetecken av mogna osteoblaster. Varvat förgrenade celler (som indikeras med röda pilar i figur 1 A) kan hittas, som sannolikt utgör en del osteocyter. Med ATRA behandling, celler börjar snabbt visar förgreningar, som vanligtvis observeras efter 2 dagar. Som visas i ...

Watch this Scientific Journal Video about Application of Retinoic Acid to Obtain Osteocytes Cultures from Primary Mouse Osteoblasts at JoVE.com

Application of Retinoic Acid to Obtain Osteocytes Cultures from Primary Mouse Osteoblasts

Tillämpning av retinsyra Skaffa osteocyter kulturer från Primary Mus Osteoblaster

Behandling av primära mus-osteoblaster med retinsyra producerar en homogen population av förgrenade celler som bär morfologiska och molekylära egenskaper hos osteocyter. Metoden övervinner svårigheterna att erhålla och bibehålla primär osteocyter i kultur, och kan vara en fördel att studera celler som härrör från transgena modeller.

The need for osteocyte cultures is well known to the community of bone researchers; isolation of primary osteocytes is difficult and produces low cell ...

Research

JoVE Journal

Biology

Primary Neuronal Cultures from the Brains of Late Stage Drosophila Pupae

Primär Neuronal kulturer från hjärnan hos sent stadium Drosophila puppor

In this video, we demonstrate the preparation of primary neuronal cultures from the brains of late stage Drosophila pupae. The procedure begins with the ...

Primary Dissociated Midbrain Dopamine Cell Cultures from Rodent Neonates

Primär dissocierade mitthjärnan Dopamin cellkulturer från Gnagare Nyfödda

The ability to create primary cell cultures of dopamine neurons allows for the study of the presynaptic characteristics of dopamine neurons in isolation ...

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

Beredningen av primära hematopoietisk cell kulturer från Murine Bone Marrow för elektroporation

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents

Etablera primärkulturer Vuxen Fibroblast från gnagare

The importance of using primary cells, rather than cancer cell lines, for biological studies is becoming widely recognized.  Primary cells are preferred ...

Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos

Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos

Primära cellkulturer från Drosophila Gastrula Embryon

Here we describe a method for preparing and culturing primary cells dissociated from Drosophila gastrula embryos.   In brief, a large amount of staged ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

Generering av möss härledda från inducerade pluripotenta stamceller

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Isolating Primary Melanocyte-like Cells from the Mouse Heart

Isolera Primära melanocyt liknande celler från mus Heart

We identified a novel population of melanocyte-like cells (also known as cardiac melanocytes) in the hearts of mice and humans that contribute to atrial ...

Na&iuml;ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

Naiv Vuxna stamceller Isolering från primära humana fibroblastkulturer

Over the last decade, several adult stem cell  populations have been identified in human skin 1-4.  The isolation of multipotent adult dermal precursors ...

Isolation of Primary Myofibroblasts from Mouse and Human Colon Tissue

Isolering av primära Myofibroblaster från mus och Human Colon Tissue

The myofibroblast is  a stromal cell of the gastrointestinal (GI) tract that has been gaining  considerable attention for its critical role in many GI ...

Preparation of Primary Myogenic Precursor Cell/Myoblast Cultures from Basal Vertebrate Lineages

Beredning av primär Myogenic prekursorcell / myoblast kulturer från Basal Ryggradsdjur härstamningar

Due to the inherent difficulty and time involved with studying the myogenic program in vivo, primary culture systems derived from the resident adult stem ...