Name: molecular profiling of the invasive tumor microenvironment in a 3-dimensional model of colorectal cancer cells and ex vivo fibroblasts
Uploaded: 2014-04-29T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts at JoVE.com

ويدعم MB بتمويل منحة زمالة من لجنة نهر الميكونج. معتمدة KP وAHM بتمويل منحة من يسيكس البحوث الطبية ومعهد أبحاث السرطان في المملكة المتحدة / RCS (انجلترا) (C28503/A10013). ونحن ممتنون للدعم من جامعة ساوثهامبتون حدة أبحاث كيمياء الأنسجة.

1. مؤسسة الثقافات الخلايا الليفية الأولية من القولون إإكسبلنتس <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول على عينات من الأنسجة الطبيعية القولون المخاطي الإنسان مباشرة من غرفة العمليات الجراحية، ووقف في 7-10 مل من برنامج تلفزيوني تستكمل مع 100 وحدة / مل الب...

<ol>
	<li>Nystrom, M. L., Thomas, G. J., Stone, M., Mackenzie, I. C., Hart, I. R., Marshall, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+quantitative+method+to+analyse+tumour+cell+invasion+in+organotypic+culture.">Development of a quantitative method to analyse tumour cell invasion in organotypic culture.</a> J Pathol. 205 (4), 468-475 (2005).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miR-153+supports+colorectal+cancer+progression+via+pleiotropic+effects+that+enhance+invasion+and+chemotherapeutic+resistance.">miR-153 supports colorectal cancer progression via pleiotropic effects that enhance invasion and chemotherapeutic resistance.</a> Cancer Res. , (2013).</li><li>Bullock, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pleiotropic+actions+of+miR-21+highlight+the+critical+role+of+deregulated+stromal+microRNAs+during+colorectal+cancer+progression.">Pleiotropic actions of miR-21 highlight the critical role of deregulated stromal microRNAs during colorectal cancer progression.</a> Cell Death Dis. 20 (4), (2013).</li><li>Jenei, V., Nystrom, M. L., Thomas, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+invasion+in+an+organotypic+model.">Measuring invasion in an organotypic model.</a> Methods Mol Biol. 769, 223-232 (2011).</li><li>De Wever, O., Demetter, P., Mareel, M., Bracke, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal+myofibroblasts+are+drivers+of+invasive+cancer+growth.">Stromal myofibroblasts are drivers of invasive cancer growth.</a> Int J Cancer. 123 (10), 2229-2238 (2008).</li><li>Fries, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+of+fibroblast+heterogeneity+and+the+role+of+fibroblast+subpopulations+in+fibrosis.">Evidence of fibroblast heterogeneity and the role of fibroblast subpopulations in fibrosis.</a> Clin Immunol Immunopathol. 72 (3), 283-292 (1994).</li><li>Moutasim, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Betel-derived+alkaloid+up-regulates+keratinocyte+alphavbeta6+integrin+expression+and+promotes+oral+submucous+fibrosis.">Betel-derived alkaloid up-regulates keratinocyte alphavbeta6 integrin expression and promotes oral submucous fibrosis.</a> J Pathol. 223 (3), 366-377 (2011).</li><li>Winter, J., Jung, S., Keller, S., Gregory, R. I., Diederichs, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Many+roads+to+maturity:+microRNA+biogenesis+pathways+and+their+regulation.">Many roads to maturity: microRNA biogenesis pathways and their regulation.</a> Nat Cell Biol. 11 (3), 228-234 (2009).</li><li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+miRNA+expression+patterns+using+total+RNA+extracted+from+matched+samples+of+formalin-fixed+paraffin-embedded+(FFPE)+cells+and+snap+frozen+cells.">Comparison of miRNA expression patterns using total RNA extracted from matched samples of formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) cells and snap frozen cells.</a> BMC Biotechnol. 7 (36), (2007).</li><li>Szafranska, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accurate+molecular+characterization+of+formalin-fixed,+paraffin-embedded+tissues+by+microRNA+expression+profiling.">Accurate molecular characterization of formalin-fixed, paraffin-embedded tissues by microRNA expression profiling.</a> J Mol Diagn. 10 (5), 415-423 (2008).</li></ol>

نحن هنا تصف طريقة لعزل وتوصيف تحديدا الخلايا السرطانية التي حصلت على القدرة على غزو السرطان المرتبطة سدى خلال المراحل الأولى من تطور المنتشر في 3 الابعاد بناء ثقافة مشتركة من الخلايا الظهارية واللحمية. واستخدمت نماذج التعاون ثق?...

عضوي النمط المشترك الثقافات نماذج الأنسجة المهندسة التي تساعد في إعادة بناء في الجسم الحي الورم المكروية في 3 أبعاد ازدواجية بواسطة الخلايا الظهارية الخبيثة والخلايا اللحمية في هلام الكولاجين تحتوي على مكونات المصفوفة خارج الخلية الأساسية 1-3. تصور أساسا كوسيلة لقياس غزو الورم، organotypics تقليل الاعتماد على النماذج الحيوانية في الجسم الحي، وتجنب أوجه القصور في غيرها من تقنيات في المختبر مثل فحوصات Transwell، التي يضطر فيها الخلايا الغازية بشكل مصطنع في حالة تشتت أحادية 2-4. إدراج الخلايا اللحمية في هذه النماذج، مثل الخلايا الليفية، ويعكس الدور الأساسي للالمكروية الورم الخبيث في تنظيم الغزو والانبثاث 3-4، ولكن عدم التجانس المظهري للسدى هو أن هذه من أجل تحقيق أقصى قدر من الأهمية الفسيولوجية للعضوي النمط نماذج، محددة الجهاز ودقيقة تشريحيا فيفو السابقينينبغي أن تدرج الخلايا الليفية حيثما كان ذلك ممكنا 3،6. Organotypics هي منصة متعددة لدراسة التفاعلات بين الورم والخلايا اللحمية وتستخدم بشكل متزايد في طرق جديدة لدراسة تأثير ذلك على غزو الورم من مثبطات الكيميائية والتعديلات الجين المستهدف 7،8. دراسة الهامش الورم الغازية هو احتمال مثيرة بشكل خاص. في النماذج عضوي النمط، سرطان القولون والمستقيم إنشاء (CRC) خطوط الخلايا عادة تنتج طبقة الطلائية الطبقية بشكل جيد، وفي المقطع العرضي، والخلايا التي اكتسبت القدرة على غزو المصفوفة خارج الخلية (ECM) يمكن تمييز بسهولة. في ضوء عدم التجانس الدقيقة الطبوغرافية أنشئت من الورم والأورام المرتبطة الخلايا اللحمية في الجسم الحي، واستخراج هذه الخلايا باستخدام الليزر تسليخ مجهري ودراستها في عزلة، قد تكشف عن رؤى البيولوجية الهامة المتعلقة أصول القولون والمستقيم ورم خبيث من السرطان وكيف يمكن أن تكون أكثر كفاءة المستهدفة. أنان المنهجية التالية، جميع المرضى الذين تبرعوا عينات الأنسجة قدمت موافقة خطية مستنيرة، والدراسة وتمت الموافقة من قبل المؤسسات جنة أخلاقيات البحوث الإقليمية.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="634">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Colorectal cancer cell lines - example shown SW480</td>
			<td style="width:132px;">ATCC</td>
			<td style="width:119px;">ATCC CCL-228</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Collagen</td>
			<td style="width:132px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">354265</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Matrigel</td>
			<td style="width:132px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">354234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Nylon membrane</td>
			<td style="width:132px;">Merck Millipore</td>
			<td style="width:119px;">VVLP01300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Metal grid</td>
			<td style="width:132px;">The Mesh Company</td>
			<td>WSS20-A4</td>
			<td>themeshcompany.com</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Laser microdissection platform</td>
			<td style="width:132px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:119px;">Leica AS LMD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Membrane mounted slides</td>
			<td style="width:132px;">Molecular devices</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Cresyl Violet</td>
			<td style="width:132px;">Merck Millipore</td>
			<td style="width:119px;">1052350025</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

molecular profiling of the invasive tumor microenvironment in a 3-dimensional model of colorectal cancer cells and ex vivo fibroblasts

غزو ​​سرطان القولون والمستقيم قد المكتسب (CRC) الخلايا القدرة على التحرر من الخلايا أختهم، اختراق سدى، ويعيد المصفوفة خارج الخلية (ECM). يمكن أن تميز بيولوجيا هذه المجموعة المتميزة ظاهريا من خلايا تحسين فهمنا بشكل كبير من الأحداث في وقت مبكر خلال تتالي النقيلي. غزو ​​الورم هو عملية ديناميكية سهلت التفاعلات ثنائية الاتجاه بين ظهارة الخبيثة والسرطان المرتبطة سدى. من أجل دراسة استجابات الخلايا المحددة في الورم سدى واجهة جمعنا بين عضوي النمط ثقافة مشتركة والتقنيات الدقيقة تشريح الليزر. نماذج عضوي النمط، الذي المكونات الرئيسية مثل انسجة الخلايا الليفية هي 3 dimentioanally شارك في تربيتها مع سرطان الخلايا الظهارية، هي أدوات تجريبية manipulatable للغاية التي تمكن الغزو والتفاعلات السرطان سدى لدراستها في شبه فتاهشروط ysiological. الليزر تسليخ مجهري (LMD) هو الأسلوب الذي ينطوي على تشريح الجراحي واستخراج الطبقات المختلفة داخل أنسجة الورم، مع مستوى الدقة ميكرون. من خلال الجمع بين هذه التقنيات مع التنميط الجيني، transcriptomic وجينية ونحن نهدف إلى تطوير فهم أعمق للخصائص الجزيئية لغزو الخلايا السرطانية والأنسجة المحيطة اللحمية، وبذلك يحتمل أن تكشف المؤشرات الحيوية والفرص المتاحة لتطوير الأدوية في CRC الرواية.

لقد طبقنا الأسلوب أعلاه إلى مجموعات متعددة من خطوط الخلايا اتفاقية حقوق الطفل والخلايا اللحمية. أحد الأمثلة المعروضة هنا هي خطوط الخلايا الظهارية SW480 جنة حقوق الطفل مع فيفو السابقين الخلايا الليفية القولون الإنسان الأساسية. هي التي شيدت 3 الابعاد المشترك الثقا?...

Watch this Scientific Journal Video about Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts at JoVE.com

Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

التنميط الجزيئي للخلايا الليزر microdissected وسدى من الاصطناعية، ونماذج سرطان القولون والمستقيم الأنسجة المهندسة يمثل الرواية والنهج manipulatable لتوصيف وتشريح الأحياء المتميزة في مجال التفاعل بين الخلايا السرطانية في الجبهة الغازية وسرطان الخلايا اللحمية المرتبطة.

التنميط الجزيئي للالمكروية ورم الغازية في نموذج 3 الأبعاد للخلايا سرطان القولون والمستقيم و<em&gt; خارج الحي</em&gt; الخلايا الليفية

Invading colorectal cancer (CRC) cells have acquired the capacity to break free from their sister cells, infiltrate the stroma, and remodel the ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

Modeling and Imaging 3-Dimensional Collective Cell Invasion

النمذجة والتصوير 3 الأبعاد غزو الخلية الجماعية

A defining characteristic of cancer malignancy is invasion and metastasis 1. In some cancers (e.g. glioma 2), local invasion into surrounding healthy ...

Screening for Melanoma Modifiers using a Zebrafish Autochthonous Tumor Model

الكشف عن سرطان الجلد باستخدام المعدلات اسماك الزرد الموديل ورم الأصليين

Genomic studies of  human cancers have yielded a wealth of information about genes that are altered  in tumors1,2,3. A challenge arising from these ...

Live Imaging of Drug Responses in the Tumor Microenvironment in Mouse Models of Breast Cancer

يعيش التصوير من الاستجابة للأدوية الأورام المكروية في في نماذج الماوس من سرطان الثدي

The tumor microenvironment plays a pivotal role in tumor initiation, progression, metastasis, and the response to anti-cancer therapies. Three-dimensional ...

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

رواية عالية الدقة<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; تقنية التصوير لدراسة الاستجابة الديناميكية للمنشآت داخل القحف لنمو الورم والتداوي

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a ...

Initiation of Metastatic Breast Carcinoma by Targeting of the Ductal Epithelium with Adenovirus-Cre: A Novel Transgenic Mouse Model of Breast Cancer

بدء النقيلي سرطان الثدي عن طريق استهداف ظهارة الأقنية مع اتش، لجنة المساواة العرقية: رواية المعدلة وراثيا نموذج الفأر من سرطان الثدي

Breast cancer is a heterogeneous disease involving complex cellular interactions between the developing tumor and immune system, eventually resulting in ...

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

ل<em&gt; السابقين فيفو</em&gt; نموذج لدراسة هرمون العمل في الثدي البشري

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...

Three-Dimensional (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Three-Dimensional 3D Tumor Spheroid Invasion Assay

ثلاثي الأبعاد (3D) ورم الجسم الشبه الكروي الغزو الفحص

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

دراسة سرطان البنكرياس الجذعية خصائص الخلايا لتطوير استراتيجيات علاجية جديدة

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Isolation and Propagation of Circulating Tumor Cells from a Mouse Cancer Model

العزلة ونشر تعميم الخلايا السرطانية من ماوس السرطان نموذج

Cancer metastasis is the foremost cause of cancer-associated deaths. Recent studies have shown that circulating tumor cells (CTCs) are important in cancer ...

A Brain Tumor/Organotypic Slice Co-culture System for Studying Tumor Microenvironment and Targeted Drug Therapies

ورم في المخ / شريحة عضوي النمط المشارك ثقافة النظام لدراسة ورم المكروية والمستهدفة المخدرات العلاجات

Brain tumors are a major cause of cancer-related morbidity and mortality. Developing new therapeutics for these cancers is difficult, as many of these ...