Name: molecular profiling of the invasive tumor microenvironment in a 3-dimensional model of colorectal cancer cells and ex vivo fibroblasts
Uploaded: 2014-04-29T14:00:00
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MB는 MRC의 교제에서 보조금에 의해 지원됩니다. KP와 AHM은 웨 섹스 의학 연구 및 암 연구 UK / RCS (영국) (C28503/A10013)에서 보조금에 의해 지원된다. 우리는 사우 샘프 턴 조직 화학 연구 단위의 대학의 지원에 대한 감사합니다.

대장의 Explants에서 주요 섬유 아세포 문화 1. 설립 <ol><li> 직접 수술 수술실에서 정상적인 인간의 대장 점막 조직의 샘플을 확보, 7 ~ 10에서 중단 PBS의 ML 100 단위 / ML 페니실린, 100 ㎍ / ml의 스트렙토 마이신, 및 / ㎖ Fungizone 0.25 μg로 보충. </li><li> 실험실에서, 10-cm 조직 배양 접시의 중앙에 시료를 배치하고 PBS / 펜 연쇄상 / Fungizone로 3 회 세척 하였다. 최종 세척 후 흡인하지 마십시오. </li><li> 멸균 ?...

<ol>
	<li>Nystrom, M. L., Thomas, G. J., Stone, M., Mackenzie, I. C., Hart, I. R., Marshall, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+quantitative+method+to+analyse+tumour+cell+invasion+in+organotypic+culture.">Development of a quantitative method to analyse tumour cell invasion in organotypic culture.</a> J Pathol. 205 (4), 468-475 (2005).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miR-153+supports+colorectal+cancer+progression+via+pleiotropic+effects+that+enhance+invasion+and+chemotherapeutic+resistance.">miR-153 supports colorectal cancer progression via pleiotropic effects that enhance invasion and chemotherapeutic resistance.</a> Cancer Res. , (2013).</li><li>Bullock, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pleiotropic+actions+of+miR-21+highlight+the+critical+role+of+deregulated+stromal+microRNAs+during+colorectal+cancer+progression.">Pleiotropic actions of miR-21 highlight the critical role of deregulated stromal microRNAs during colorectal cancer progression.</a> Cell Death Dis. 20 (4), (2013).</li><li>Jenei, V., Nystrom, M. L., Thomas, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+invasion+in+an+organotypic+model.">Measuring invasion in an organotypic model.</a> Methods Mol Biol. 769, 223-232 (2011).</li><li>De Wever, O., Demetter, P., Mareel, M., Bracke, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal+myofibroblasts+are+drivers+of+invasive+cancer+growth.">Stromal myofibroblasts are drivers of invasive cancer growth.</a> Int J Cancer. 123 (10), 2229-2238 (2008).</li><li>Fries, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+of+fibroblast+heterogeneity+and+the+role+of+fibroblast+subpopulations+in+fibrosis.">Evidence of fibroblast heterogeneity and the role of fibroblast subpopulations in fibrosis.</a> Clin Immunol Immunopathol. 72 (3), 283-292 (1994).</li><li>Moutasim, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Betel-derived+alkaloid+up-regulates+keratinocyte+alphavbeta6+integrin+expression+and+promotes+oral+submucous+fibrosis.">Betel-derived alkaloid up-regulates keratinocyte alphavbeta6 integrin expression and promotes oral submucous fibrosis.</a> J Pathol. 223 (3), 366-377 (2011).</li><li>Winter, J., Jung, S., Keller, S., Gregory, R. I., Diederichs, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Many+roads+to+maturity:+microRNA+biogenesis+pathways+and+their+regulation.">Many roads to maturity: microRNA biogenesis pathways and their regulation.</a> Nat Cell Biol. 11 (3), 228-234 (2009).</li><li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+miRNA+expression+patterns+using+total+RNA+extracted+from+matched+samples+of+formalin-fixed+paraffin-embedded+(FFPE)+cells+and+snap+frozen+cells.">Comparison of miRNA expression patterns using total RNA extracted from matched samples of formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) cells and snap frozen cells.</a> BMC Biotechnol. 7 (36), (2007).</li><li>Szafranska, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accurate+molecular+characterization+of+formalin-fixed,+paraffin-embedded+tissues+by+microRNA+expression+profiling.">Accurate molecular characterization of formalin-fixed, paraffin-embedded tissues by microRNA expression profiling.</a> J Mol Diagn. 10 (5), 415-423 (2008).</li></ol>

여기에 우리가 특별히 분리하고 상피와 기질 세포의 3 차원 공동 문화 구조의 전이성 진행의 초기 단계에서 암 관련 기질을 공격 할 수있는 능력을 획득 한 종양 세포의 특성을하는 방법을 설명합니다. 생체 인간의 대장 섬유 아 세포를 포함하는 합성 기질과 나란히 CRC 상피 세포로 구성된 공동 문화 모델은 3 차원에서 CRC의 침략을 연구하는 데 사용되었습니다. 생?...

의 Organotypic 공동 배양하는 중요한 세포 외 기질 구성 요소 1-3를 포함하는 콜라겐 겔에 악성 상피 세포와 기질 세포를 병치하여 3 차원 생체 내 종양 미세 환경을 재구성에 도움 조직 공학적 모델입니다. 주로 종양의 침략을 측정하는 방법으로 잉태, organotypics 생체 내 동물 모델에 대한 의존도를 줄이고, 이러한 침입 세포가 단 분산 상태 2-4로 인위적으로 강제되는없이 Transwell 분석과 같은 다른 생체 기술의 단점을 피할 수 있습니다. 이러한 섬유 아세포와 같은 이러한 모델에서 기질 세포의 포함은, 악성 침윤과 전이 3-4 조절에 종양 미세 환경의 필수적인 역할을 반영하지만 기질의 표현형 이질성은하다의 Organotypic의 생리 학적 관련성을 최대화하기 위해 모델, 장기 별, 해부학 적으로 정확한 생체가능하면 3,6 섬유 아 세포가 포함되어야한다. Organotypics 종양 및 간질 세포 사이의 상호 작용을 연구 할 수있는 다양한 플랫폼이며, 점점 화학 억제제의 종양 침윤에 미치는 영향 및 표적 유전자 변경 7,8를 검사하는 새로운 방법으로 사용된다. 침략 종양 마진을 공부하는 것은 특히 흥미로운 전망이다. 의 Organotypic 모델 확립 결장암 (CRC) 세포주는 일반적으로 잘 성층 상피 층을 생산하고, 단면에서, 세포 외 기질 (ECM)를 침입 할 수있는 능력을 획득 한 세포가 쉽게 식별 할 수있다. 레이저 미세 절제를 사용하여 분리를 공부하고이 세포를 추출 종양 및 생체 내에서 종양 관련 기질 세포의 설립 마이크로 지형 이성의 빛으로, 대장 암 전이의 기원에 관한 중요한 생물 학적 통찰력을 보여줄 수 있습니다, 어떻게보다 효율적으로 될 수있다 대상. 나는N 다음과 같은 방법론은 조직의 동의서를 작성 샘플을 제공하고, 연구를 기증 한 모든 환자는 지역 연구 윤리위원회 기관에 의해 승인되었습니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="634">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Colorectal cancer cell lines - example shown SW480</td>
			<td style="width:132px;">ATCC</td>
			<td style="width:119px;">ATCC CCL-228</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Collagen</td>
			<td style="width:132px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">354265</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Matrigel</td>
			<td style="width:132px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">354234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Nylon membrane</td>
			<td style="width:132px;">Merck Millipore</td>
			<td style="width:119px;">VVLP01300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Metal grid</td>
			<td style="width:132px;">The Mesh Company</td>
			<td>WSS20-A4</td>
			<td>themeshcompany.com</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Laser microdissection platform</td>
			<td style="width:132px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:119px;">Leica AS LMD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Membrane mounted slides</td>
			<td style="width:132px;">Molecular devices</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Cresyl Violet</td>
			<td style="width:132px;">Merck Millipore</td>
			<td style="width:119px;">1052350025</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

molecular profiling of the invasive tumor microenvironment in a 3-dimensional model of colorectal cancer cells and ex vivo fibroblasts

대장 암에 침입 (CRC) 세포는 자신의 여동생 세포에서 무료로 휴식 기질에 침투하고, 세포 외 기질 (ECM)를 개조 할 수있는 능력을 획득했다. 세포의 표현형이 서로 다른 그룹의 생물학을 특성화하는 것은 실질적으로 전이 놓기 동안 초기 사건에 대한 우리의 이해를 향상시킬 수 있습니다. 종양의 침략 악성 상피 암 관련 기질 사이의 양방향 상호 작용에 의해 촉진 역동적 인 과정이다. 우리는 공동의 문화와 레이저 마이크로 해부 기술의 Organotypic을 결합했다 종양의 기질 인터페이스에서 세포 고유의 반응을 조사하기 위해. 이러한 섬유 아세포와 같은 주요 기질 성분 3 dimentioanally 암 상피 세포와 공동 배양 된의 Organotypic 모델, 가까운 산도에서 공부하는 침략과 암 - 기질 상호 작용을 가능하게 높은 처리 가능한 실험 도구입니다ysiological 조건. 레이저 미세 절제 (LMD)는 미크론 수준의 정밀도를 가진 종양 조직 내에서 다양한 계층의 외과 절개 및 추출을 수반하는 기술입니다. 게놈 transcriptomic과 성적인 프로파일과 이러한 기술을 결합함으로써 우리는 종양 세포를 침입 및 간질 조직을 주변의 분자 특성에 대한 깊은 이해를 개발하고, 그렇게함으로써 잠재적으로 새로운 바이오 마커 및 CRC에있는 약물 개발을위한 기회를 공개하는 것을 목표로하고 있습니다.

우리는 CRC 세포주 및 간질 세포의 여러 조합에 상기 방법을 적용했다. 여기에 제시 한 예는 인간의 기본 생체 대장 섬유 아세포와 상피 CRC SW480 세포주이다. 3 차원의 공동 문화는 침략 종양 전면 세포 사이의 차등 발현의 miRNAs의 비교 현미경과 레이저 캡처 미세 절제 (그림 2)을 실시한다 (그림 1), 건설 및 마이크로 RNA (miRNA의) 프로파일 (그림 3)에 의해 ?...

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Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

합성, 조직 공학 대장 암 모델에서 레이저 microdissected 세포 및 기질의 분자 프로파일은 침습적 전방 및 암 관련 기질 세포에서 종양 세포 간의 계면에서 독특한 생물학을 특성화하고 해부 소설과 같은 처리 방식을 나타낸다.

분자 대장 암 세포의 3 차원 모델의 침윤성 종양 미세 환경의 프로파일 및<em&gt; 예 생체 내</em&gt; 섬유 아세포

Invading colorectal cancer (CRC) cells have acquired the capacity to break free from their sister cells, infiltrate the stroma, and remodel the ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

Modeling and Imaging 3-Dimensional Collective Cell Invasion

모델링 및 3 차원 이미징 단체 셀 침략

A defining characteristic of cancer malignancy is invasion and metastasis 1. In some cancers (e.g. glioma 2), local invasion into surrounding healthy ...

연구

의학

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Genomic studies of  human cancers have yielded a wealth of information about genes that are altered  in tumors1,2,3. A challenge arising from these ...

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유방암의 마우스 모델에서 종양 Microenvironment에 약물 응답의 영상을 라​​이브

The tumor microenvironment plays a pivotal role in tumor initiation, progression, metastasis, and the response to anti-cancer therapies. Three-dimensional ...

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소설 고해상도<em&gt; 생체 내</em종양의 성장과 치료학에 두개 내 구조물의 동적 응답을 공부하기&gt; 이미징 기술

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<em&gt; 생체 내</em&gt; 모델은 인간의 유방암에서 호르몬 행동을 연구하기 위해

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...

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Brain tumors are a major cause of cancer-related morbidity and mortality. Developing new therapeutics for these cancers is difficult, as many of these ...