Name: modeling spontaneous metastatic renal cell carcinoma (mrcc) in mice following nephrectomy
Uploaded: 2014-04-29T15:00:00
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Nous sommes reconnaissants au laboratoire du Dr Robert S. Kerbel (Université de Toronto, l&#39;Institut de recherche Sunnybrook, Toronto, Canada) pour l&#39;aide technique et l&#39;expertise dans le développement de cette procédure. Nous tenons également à remercier le Dr Sandra Sexton et le Roswell Park Cancer Institute Département de Laboratory Animal Resources. Ce travail a été soutenu par une bourse de la Fondation Alliance Roswell Park (à JMLE).

1. Orthotopique tumeur du rein Implantation <ol><li> Culture cellulaire <ol><li> Avant l&#39;implantation orthotopique, cultiver des cellules de souris RENCA LUC comme une monocouche à 75% de confluence. </li><li> À la suite de traitement à la trypsine et de la remise en suspension dans des milieux contenant du FBS à 5%, les cellules de centrifugation à 1000 tpm, 4 ° C pendant 5 minutes, en répétant trois fois pour laver dans du PBS. Puis remettre en suspension les cellules dans des milieux sans sé...

<ol>
	<li>Francia, G., Cruz-Munoz, W., Man, S., Xu, P., Kerbel, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+advanced+spontaneous+metastasis+for+experimental+therapeutics.">Mouse models of advanced spontaneous metastasis for experimental therapeutics.</a> Nat. Rev. Cancer. 11, 135-141 (2011).</li><li>Souza, B. M., Chaves, K. B., Chammas, R., Schor, N., Bellini, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endostatin+neoadjuvant+gene+therapy+extends+survival+in+an+orthotopic+metastatic+mouse+model+of+renal+cell+carcinoma.">Endostatin neoadjuvant gene therapy extends survival in an orthotopic metastatic mouse model of renal cell carcinoma.</a> Biomed. Pharmacother. 66, 237-241 (2012).</li><li>Amagai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+therapy+of+interleukin-2+and+sorafenib+improves+survival+benefits+and+prevents+spontaneous+pulmonary+metastasis+in+murine+renal+cell+carcinoma+models.">Combination therapy of interleukin-2 and sorafenib improves survival benefits and prevents spontaneous pulmonary metastasis in murine renal cell carcinoma models.</a> Jpn. J. Clin. Oncol. 40, 503-507 (2010).</li><li>Steeg, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+Drug+Development+Must+Consider+the+Impact+on+Metastasis.">Preclinical Drug Development Must Consider the Impact on Metastasis.</a> Clin. Cancer Res. 15, 4529-4530 (2009).</li><li>Guerin, E., Man, S., Xu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+postsurgical+advanced+metastatic+breast+cancer+more+accurately+replicates+the+clinical+efficacy+of+antiangiogenic+drugs.">A model of postsurgical advanced metastatic breast cancer more accurately replicates the clinical efficacy of antiangiogenic drugs.</a> Cancer Res. 73, 2743-2748 (2013).</li><li>Day, C. P., Carter, J., Bonomi, C., Hollingshead, M., Merlino, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+therapeutic+response+of+residual+metastatic+disease+is+distinct+from+its+primary+tumor+of+origin.">Preclinical therapeutic response of residual metastatic disease is distinct from its primary tumor of origin.</a> Int. J. Cancer. 130, 190-199 (2012).</li><li>Ebos, J. M., Kerbel, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiangiogenic+therapy:+impact+on+invasion,+disease+progression,+and+metastasis.">Antiangiogenic therapy: impact on invasion, disease progression, and metastasis.</a> Nat. Rev. Clin. Oncol. 8, 210-221 (2011).</li><li>Naito, S., Walker, S. M., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+selection+of+human+renal+cell+carcinoma+cells+with+high+metastatic+potential+in+nude+mice.">In vivo selection of human renal cell carcinoma cells with high metastatic potential in nude mice.</a> Clin. Exp. Metastasis. 7, 381-389 (1989).</li><li>Fidler, I. J., Naito, S., Pathak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+implantation+in+essential+for+the+selection,+growth+and+metastasis+of+human+renal+cell+cancer+in+nude+mice.">Orthotopic implantation in essential for the selection, growth and metastasis of human renal cell cancer in nude mice.</a> Cancer Metastasis Rev. 9, 145-165 (1990).</li><li>Saiki, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+invasive+and+metastatic+phenotype+in+human+renal+cell+carcinoma.">Characterization of the invasive and metastatic phenotype in human renal cell carcinoma.</a> Clin. Exp. Metastasis. 9, 551-566 (1991).</li><li>Mohanty, S., Xu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+metastasis+assay.">Experimental metastasis assay.</a> J. Vis. Exp. 42 (1942), (2010).</li><li>Nunez-Cruz, S., Connolly, D. C., Scholler, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+model+of+serous+ovarian+cancer+in+immunocompetent+mice+for+in+vivo+tumor+imaging+and+monitoring+of+tumor+immune+responses.">An orthotopic model of serous ovarian cancer in immunocompetent mice for in vivo tumor imaging and monitoring of tumor immune responses.</a> J. Vis. Exp. (45), (2010).</li><li>Ebos, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+metastasis+after+short-term+treatment+with+a+potent+inhibitor+of+tumor+angiogenesis.">Accelerated metastasis after short-term treatment with a potent inhibitor of tumor angiogenesis.</a> Cancer Cell. 15, 232-239 (2009).</li><li>Yang, O. C., Maxwell, P. H., Pollard, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+cell+carcinoma:+translational+aspects+of+metabolism+and+therapeutic+consequences.">Renal cell carcinoma: translational aspects of metabolism and therapeutic consequences.</a> Kidney Int. 84 (4), 667-681 (2013).</li></ol>

Le but de ce protocole est d&#39;évaluer la maladie métastatique spontanée cliniquement pertinente en utilisant un modèle de souris de tumeur syngénique à décrire les techniques d&#39;implantation / de résection. Actuellement, la majorité des études précliniques évaluant de nouveaux traitements expérimentaux ne comprend pas l&#39;étude de la maladie métastatique et seulement quelques-uns récapituler les étapes de la croissance de la tumeur primaire, la résection chirurgicale, et une éventuelle dissém...

La principale cause de mortalité chez les patients atteints de carcinome à cellules rénales (RCC) est une maladie métastatique systémique qui se produit généralement après l&#39;élimination chirurgicale d&#39;une tumeur primaire de plus en plus dans le rein. Cependant, très peu de modèles précliniques de tumeurs évaluation thérapeutique expérimentale chez la souris incluent la maladie métastatique, et encore moins récapitulent fidèlement les stades cliniques de croissance localisée, la chirurgie et l&#39;initiation et la progression 1-3 micro-métastatique spontanée. Cet écart dans les tests est devenu de plus en plus important dans l&#39;évaluation de nouvelles thérapies car parfois saisissants effets anti-tumeurs observés chez des modèles animaux ne sont pas toujours traduits dans le traitement similaire de patients avec succès 4. Ces différences de résultats peuvent provenir d&#39;efficacités de drogue différentiels entre les modèles extra-utérines ou orthotopiques localisées tumeur primaire et à un stade avancé métastatique 5-7. Dans le cas de RCC, seules quelques études ont établi un employéNimal protocoles qui incluent la maladie récurrente spontanée qui imite les patients qui ont eu généralement reins porteuses de tumeurs retirées totalement ou partiellement de 2,3. Les raisons de cette pénurie dans les tests de modèle de souris varient. Tout d&#39;abord, il est le coût élevé des animaux et de la variabilité inhérente à la sélection de cellules de tumeur et son potentiel métastatique. Par exemple, des lignées de cellules de rein humain ont tendance à former des métastases rarement, et doivent être choisis sur des cycles multiples de l&#39;implantation primaire orthotopique et sélection métastatique de dériver des variants qui diffusent de manière cohérente et forment des lésions éloignés (voir la description d&#39;un tel dérivé de lignée cellulaire humaine 8-10) . A l&#39;inverse, des cellules de souris dans des modèles immunocompétents ont tendance à se comporter de manière agressive, et un faible nombre de cellules doivent être injectés avec matrigel à réduire la propagation systémique immédiate 3. Deuxièmement, des difficultés techniques dans l&#39;exécution de l&#39;implantation proprement dite, la résection chirurgicale (néphrectomie), et suivi (et quantification) metastati spontanéela croissance c peut être difficile et plusieurs variables critiques besoin considération lors de l&#39;utilisation de cette technique (voir discussion pour plus de détails). Le but de ce protocole est de décrire les étapes essentielles (ainsi que les pièges potentiels) d&#39;implantation orthotopique, la résection (néphrectomie), et la surveillance de la maladie spontanée RCC métastatique et d&#39;offrir une ligne directrice pour standardisée (et plus largement) utiliser les laboratoires scientifiques qui évaluent l&#39;efficacité des traitements expérimentaux.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="830">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">DMEM-high glucose with Pyr. And L-Glutamine</td>
			<td style="width:147px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">10-013-CV</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">FBS</td>
			<td style="width:147px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">10437-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">0.25% Trypsin EDTA</td>
			<td style="width:147px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">25-053-CL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">1x DPBS without Calcium &#38; Magnesium</td>
			<td style="width:147px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">21-031-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">Matrigel</td>
			<td style="width:147px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">354234</td>
			<td>must be kept on ice</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">Artifical tears-lubricant opthalmic ointment</td>
			<td style="width:147px;">Akorn Animal Health</td>
			<td style="width:119px;">17478-162-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">Pocket pro pet trimmer</td>
			<td style="width:147px;">Braintree scientific</td>
			<td style="width:119px;">CLP9931B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:397px;">Alcohol swab</td>
			<td style="width:147px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">326895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">Betadine solution swab</td>
			<td style="width:147px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">67618-152-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MICRO DISSECTING sissors straight,blunt - 25mm blades - 4.5&#34;&#160;</td>
			<td style="width:147px;">Southpointe surgical</td>
			<td style="width:119px;">RS-5982</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">Iris Forceps, serrated, curved, 10cm long</td>
			<td style="width:147px;">Kent scientific</td>
			<td style="width:119px;">INS15915</td>
			<td>need two of these</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">10&#181;l Hamilton syringe</td>
			<td style="width:147px;">Hamilton</td>
			<td style="width:119px;">7635-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">30G, 45 degree, RN needle</td>
			<td style="width:147px;">Hamilton</td>
			<td style="width:119px;">7803-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:397px;">Sterile cotton tipped appicator</td>
			<td style="width:147px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">10805-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">High temperature cautery kit</td>
			<td style="width:147px;">Kent scientific</td>
			<td style="width:119px;">INS500392</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">5-0 coated Vicryl, conventional cutting needle&#160;</td>
			<td style="width:147px;">Ethicon</td>
			<td style="width:119px;">J834</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">Reflex clip applier for 7mm clips</td>
			<td style="width:147px;">Kent scientific</td>
			<td style="width:119px;">INS500343</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">Reflex clips, 7mm, non-sterile</td>
			<td style="width:147px;">Kent scientific</td>
			<td style="width:119px;">INS500344</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">Removing forceps, 12cm lone</td>
			<td style="width:147px;">Kent scientific</td>
			<td style="width:119px;">INS500347</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">0.9% Sodium Chloride</td>
			<td style="width:147px;">Baxter Healthcare</td>
			<td style="width:119px;">2B1322</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">Buprenorphine 0.01mg/mL</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">25G 5/8&#34; needle</td>
			<td style="width:147px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">BD305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">1mL syringe w/out needle</td>
			<td style="width:147px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">BD309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">D-Luciferin</td>
			<td style="width:147px;">Gold Bio technology</td>
			<td style="width:119px;">LUCK-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling spontaneous metastatic renal cell carcinoma (mrcc) in mice following nephrectomy

L&#39;un des principaux obstacles à l&#39;amélioration de l&#39;essai de nouveaux traitements expérimentaux dans le carcinome à cellules rénales (RCC) est le développement de modèles qui récapitulent fidèlement la progression de la maladie métastatique précoce et à un stade avancé. Des modèles d&#39;implantation de la tumeur typiques utilisent implantation de la tumeur primaire ectopique ou orthotopique, mais peu comprennent la maladie métastatique spontanée systémique qui imite l&#39;environnement clinique. Ce protocole décrit les principales étapes pour développer la progression de la maladie RCC met en scène similaire aux patients. En premier lieu, il utilise une lignée de cellules de tumeur de souris hautement métastatique dans un modèle orthotopique syngénique pour montrer l&#39;implantation des cellules tumorales. Les méthodes comprennent l&#39;implantation superficielle et interne dans l&#39;espace sous-capsulaire avec des cellules associées à matrigel pour éviter les fuites et la propagation rapide. Ensuite, il décrit les procédures pour l&#39;excision de la tumeur portant rein (néphrectomie), les soins de la souris pré-et post-opératoire critique. Enfin, il décrit les étapes nécessaires pour surveiller et évaluermicro-et macro progression de la maladie métastatique, y compris l&#39;imagerie de bioluminescence ainsi fournit un guide détaillé de l&#39;autopsie visuelle de marquer distribution de la maladie systémique. Le but de cette description du protocole est de faciliter l&#39;utilisation généralisée de modèles de CCR métastatiques cliniquement pertinentes pour améliorer la valeur prédictive du test thérapeutique futur.

La figure 1A montre un schéma décrivant les procédures décrites dans ce résumé du protocole. Plusieurs facteurs importants doivent être pris en considération à chaque étape. Par exemple, dans l&#39;étape 1, on montre deux méthodes pour l&#39;implantation des cellules tumorales sous-capsulaire dans le rein. Les cellules tumorales peuvent être implantés dans l&#39;espace sous-capsulaire avec un petit blanc-bulle confirmant le placement localisée des cellules avec fuite empêché par l&#39;?...

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Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma mRCC in Mice Following Nephrectomy

Les modèles de métastases de carcinome à cellules rénales (RCC), la progression de la maladie spontanée peuvent être utilisées pour l&#39;évaluation des traitements dans un cadre clinique. Ce protocole illustre différentes procédures d&#39;implantation orthotopique de cellules de tumeur du rein, une néphrectomie proprement dit, et présente enfin un guide de notation visuelle de l&#39;autopsie et bioluminescent de charge métastatique et de la localisation.

Modélisation spontanée carcinome rénal métastatique (MRCC) chez des souris après néphrectomie

One of the key challenges to improved testing of new experimental therapeutics in renal cell carcinoma (RCC) is the development of models that faithfully ...

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