Name: hot biological catalysis: isothermal titration calorimetry to characterize enzymatic reactions
Uploaded: 2014-04-04T13:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Hot Biological Catalysis: Isothermal Titration Calorimetry to Characterize Enzymatic Reactions at JoVE.com

واعترفت شركة الأسمدة منتجات متميزة (SFP) لتوفير الأموال اللازمة لهذه الدراسة.

1. عينات إعداد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 2 مل من محلول أنزيم و 0.5 مل من محلول الركيزة لكل تشغيل تجريبي. تمييع الحلول الأسهم مركزة من الانزيم والركيزة في المحاليل وجود تركيبة متطابقة للحد من حرارة التخفيف والخلط خلال إضافة الركيزة. <ol sty...

<ol>
	<li>Leavitt, S., Freire, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+measurement+of+protein+binding+energetics+by+isothermal+titration+calorimetry.">Direct measurement of protein binding energetics by isothermal titration calorimetry.</a> Curr. Opin. Struct. Biol. 11, 560-566 (2001).</li><li>Ladbury, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+isothermal+titration+calorimetry+in+the+biological+sciences:+things+are+heating+up!+BioTechniques.">Application of isothermal titration calorimetry in the biological sciences: things are heating up! BioTechniques.</a> 37, 885-887 (2004).</li><li>Zambelli, B., Bellucci, M., Danielli, A., Scarlato, V., Ciurli, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Ni2++binding+properties+of+Helicobacter+pylori+NikR.">The Ni2+ binding properties of Helicobacter pylori NikR.</a> Chem. Commun. , 3649-3651 (2007).</li><li>Zambelli, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-affinity+Ni2++binding+selectively+promotes+binding+of+Helicobacter+pylori+NikR+to+its+target+urease+promoter.">High-affinity Ni2+ binding selectively promotes binding of Helicobacter pylori NikR to its target urease promoter.</a> J. Mol. Biol. 383, 1129-1143 (2008).</li><li>Duff, M. R., Grubbs, J., Howell, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isothermal+titration+calorimetry+for+measuring+macromolecule-ligand+affinity.">Isothermal titration calorimetry for measuring macromolecule-ligand affinity.</a> J. Vis. Exp. , (2011).</li><li>Ghai, R., Falconer, R. J., Collins, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+isothermal+titration+calorimetry+in+pure+and+applied+research--survey+of+the+literature+from+2010.">Applications of isothermal titration calorimetry in pure and applied research--survey of the literature from 2010.</a> J. Mol. Recognit. 25, 32-52 (2012).</li><li>Todd, M. J., Gomez, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enzyme+kinetics+determined+using+calorimetry:+a+general+assay+for+enzyme+activity.">Enzyme kinetics determined using calorimetry: a general assay for enzyme activity.</a> Anal. Biochem. 296, 179-187 (2001).</li><li>Bianconi, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calorimetry+of+enzyme-catalyzed+reactions.">Calorimetry of enzyme-catalyzed reactions.</a> Biophys. Chem. 126, 59-64 (2007).</li><li>Demarse, N. A., Killian, M. C., Hansen, L. D., Quinn, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determining+enzyme+kinetics+via+isothermal+titration+calorimetry.">Determining enzyme kinetics via isothermal titration calorimetry.</a> Methods Mol. Biol. 978, 21-30 (2013).</li><li>Michaelis, L., Menten, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Die+kinetik+der+invertinwirkung.">Die kinetik der invertinwirkung.</a> Biochem. Z. 49, 333-369 (1913).</li><li>Walker, J., Wilson, K., Walker, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Principle and techniques of practical biochemistry. , 312-356 (2000).</li><li>Ciurli, S., Sigel, A., Sigel, H., Sigel, R. K. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Nickel and its surprising impact in nature. 2, 241-278 (2007).</li><li>Zambelli, B., Musiani, F., Benini, S., Ciurli, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemistry+of+Ni2++in+urease:+sensing,+trafficking,+and+catalysis.">Chemistry of Ni2+ in urease: sensing, trafficking, and catalysis.</a> Acc. Chem. Res. 44, 520-530 (2011).</li><li>Zonia, L. E., Stebbins, N. E., Polacco, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Essential+role+of+urease+in+germination+of+nitrogen-limited+Arabidopsis+thaliana+seeds.">Essential role of urease in germination of nitrogen-limited Arabidopsis thaliana seeds.</a> Plant Physiol. 107, 1097-1103 (1995).</li><li>Follmer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insights+into+the+role+and+structure+of+plant+ureases.">Insights into the role and structure of plant ureases.</a> Phytochemistry. 69, 18-28 (2008).</li><li>Sumner, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolation+and+crystallization+of+the+enzyme+urease.">The isolation and crystallization of the enzyme urease.</a> J. Biol. Chem. 69, 435-441 (1926).</li><li>Krajewska, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ureases+I.+Functional,+catalytic+and+kinetic+properties:+A+review.">Ureases I. Functional, catalytic and kinetic properties: A review.</a> J. Mol. Cat. B. 59, 9-21 (2009).</li><li>Callahan, B. P., Yuan, Y., Wolfenden, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+burden+borne+by+urease.">The burden borne by urease.</a> J. Am. Chem. Soc. 127, 10828-10829 (2005).</li><li>Krajewska, B., van Eldik, R., Brindell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temperature-+and+pressure-dependent+stopped-flow+kinetic+studies+of+jack+bean+urease.+Implications+for+the+catalytic+mechanism.">Temperature- and pressure-dependent stopped-flow kinetic studies of jack bean urease. Implications for the catalytic mechanism.</a> J. Biol. Inorg. Chem. 17, 1123-1134 (2012).</li><li>Hausinger, R. P., Karplus, P. A., Huber, R., Poulos, T., Wieghardt, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Metalloproteins. , 867-879 (2001).</li><li>Goldberg, R., Kishore, N., Lennen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermodynamic+quantities+for+the+ionization+reactions+of+buffers.">Thermodynamic quantities for the ionization reactions of buffers.</a> J. Phys. Chem. Ref. Data. 31, 231-370 (2002).</li><li>Baumann, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advantages+of+isothermal+titration+calorimetry+for+xylanase+kinetics+in+comparison+to+chemical-reducing-end+assays.">Advantages of isothermal titration calorimetry for xylanase kinetics in comparison to chemical-reducing-end assays.</a> Anal. Biochem. 410, 19-26 (2011).</li><li>Noske, R., Cornelius, F., Clarke, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+the+enzymatic+activity+of+the+Na+,K+-ATPase+via+isothermal+titration+microcalorimetry.">Investigation of the enzymatic activity of the Na+,K+-ATPase via isothermal titration microcalorimetry.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1797, 1540-1545 (2010).</li><li>Harmon, K. M., Niemann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+competitive+inhibition+of+the+urease-catalyzed+hydrolysis+of+urea+by+phosphate.">The competitive inhibition of the urease-catalyzed hydrolysis of urea by phosphate.</a> J. Biol. Chem. 177, 601-605 (1949).</li><li>Benini, S., Rypniewski, W. R., Wilson, K. S., Ciurli, S., Mangani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure-based+rationalization+of+urease+inhibition+by+phosphate:+novel+insights+into+the+enzyme+mechanism.">Structure-based rationalization of urease inhibition by phosphate: novel insights into the enzyme mechanism.</a> J. Biol. Inorg. Chem. 6, 778-790 (2001).</li><li>Segel, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Enzyme kinetics: behavior and analysis of rapid equilibrium and steady-state enzyme systems. , (1993).</li></ol>

أهمية المركز لدراسة النشاط الأنزيمي فيما يتعلق بأساليب القائمة بالإضافة إلى التطبيقات الكلاسيكية لدراسة التوازنات ملزمة، متساوي الكالوري المعايرة يوفر طريقة موثوقة وسريعة لتوصيف التفاعلات الإنزيمية في حل باستخدام ح...

تقرير الكمي من التفاعلات الكيميائية الحيوية يوفر نظرة ثاقبة العمليات البيولوجية في أساس الحياة. الكالوري يقدم منهجية خالية من التسمية لوصف كميا كل تفاعل كيميائي تقريبا في الحل. يقيس هذا الأسلوب الحرارة المنطلقة أو الممتصة مع مرور الوقت، وبالتالي فهو نظام الكشف الشامل ومنهجية مريحة للغاية لقياس كمية من رد فعل جزيئات (أي الديناميكا الحرارية ملزمة)، وكذلك لقياس معدل التفاعل (أي حركية). على وجه الخصوص، اعتمد متساوي الكالوري المعايرة (ITC) وطريقة الاختيار لتوصيف الديناميكا الحرارية من التوازنات الجزيئية البيولوجية، التي تنطوي على البروتين يجند، البروتين البروتين، البروتين أيونات المعادن والتفاعلات الحمض النووي البروتين 1-6. بالإضافة إلى ذلك، قدرة المركز على توفير المعلومات الحركية يجعل من نظام قوي جدا لقياس انزيم الحفز، على الرغم من أن إمكانات هذا التطبيق لا يزالالتقليل 7-9. المعادلة ميكايليس-مينتن 10 هو الوصف الكمي من التفاعلات الإنزيمية، كما أنها توفر علاقة بين معدل التفاعل وتركيز الركيزة، اعتمادا على معلمتين الحركية: ثابت ميخائيل (K M) وثابت معدل الحفاز (ك القط) . القط ك / يشار نسبة K M كما كفاءة الحفاز للانزيم. في الممارسة العملية، وتحديد K M وك القط لردة فعل معينة ويقدم وصفا كاملا للالحفز. في رد فعل الأنزيمية نموذجي (الشكل 1)، وهي الركيزة (S) يتفاعل مع انزيم (E) تشكيل مجمع انزيم الركيزة (ES)، والتي يتم تفعيلها لاحقا في الحالة الانتقالية (ES *). يتم تحويل هذا الأخير إلى الإنزيم المنتج (EP) المعقدة التي تنأى في نهاية المطاف. هذه الخطوةموصوفة و من رد الفعل التالية. <img fo:content-width="2in" src="/files/ftp_upload/51487/51487eq1.jpg" width="197" /> (1) حيث ك 1 هو ثابت معدل لتشكيل مجمع ES، ك -1 هو ثابت معدل لتفكك المجمع ES، في حين ك القط هو ثابت معدل الحفاز أو عدد دوران. وفقا للمعادلة ميكايليس-مينتن 10، ومعدل التفاعل يمكن أن تحسب على النحو التالي: <img fo:content-width="1.5in" src="/files/ftp_upload/51487/51487eq2.jpg" width="144" /> (2) التي K M = (ك + ك -1 القط) / ك 1 ك والقط = V ماكس / [E]، مع V ماكس كونها السرعة القصوى عندما وصلت كل انزيم منضما إلى الركيزة. المعايرة المسعر متساوي هو الأداة المستخدمة في هذه الدراسة لوصف الإنزيمية من اليوريا. يرصد هذا الصك من درع ثابت الحرارة التي تحتوي على اثنين صاغ شكل خلايا (الشكل 1). وترتبط هذه إلى الخارج مع أنابيب الوصول الضيقة. يتم تحميل خلية العينة (حوالي 1.4 مل) مع الحل الانزيم، في حين يتم تعبئة الخلية المرجعية عموما مع الماء أو مع المذيبات المستخدمة في التحليل. A حقنة بالتناوب مع إبرة طويلة ومجداف ضجة المرفقة، التي تحتوي عادة كاليفورنيا. 0.3 مل من محلول الركيزة، هي التي شنت على الخلية العينة. يقيس جهاز الحرارية الفرق في درجة الحرارة بين العينة والخلية المرجعية و، وذلك باستخدام &quot;شبكة ردود الفعل الخلية&quot;، فإنه يحافظ على هذا الفارق في صفر عن طريق إضافة أو طرح الحرارة. أثناء التجربة، يتم حقن الركيزة في حل الانزيم عند درجة حرارة اختار ثابتة. عندما ENيأخذ رد فعل zymatic مكان، وكمية الحرارة المنطلقة أو الممتصة يتناسب مع عدد جزيئات الركيزة التي يتم تحويلها إلى جزيئات المنتج. بالإضافة إلى ذلك، فإن معدل تدفق الحرارة ويرتبط مباشرة إلى معدل التفاعل. البيانات المقاسة، والتي تظهر على أنها انحراف من أثر الحرارة من خط الأساس الأولي (الشكل 1)، وتمثل الطاقة الحرارية (μcal / ثانية) التي قدمتها الصك إلى الخلية عينة، والتي تتناسب مع تدفق الحرارة التي تحدث في الخلية عينة مع مرور الوقت. <img alt="الشكل 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51487/51487fig1highres.jpg" width="500" /> الشكل 1. التمثيل التخطيطي من المسعر المعايرة متساوي لدراسة التفاعلات الإنزيمية. رد الفعل الأنزيمية التي تحدث عند المعايرة الركيزة (في حقن حقنة) في حل انزيم (في الخلية العينة) النتائج في تغيير ذرقوة القانون النموذجي للتحكيم صادر عن مسعر، اللازمة للحفاظ على الفرق في درجة الحرارة بين الخلية عينة وثابت مرجع الخلية. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51487/51487fig1highres.jpg" target="_blank">اضغط هنا لمشاهدة صورة أكبر.</a> وعموما، فإن تغير الحرارة (س) يتناسب مع المحتوى الحراري المولي للتفاعل (ΔH) وعدد الشامات من الناتج لدت (ن)، والتي بدورها تعطى من قبل مجموع مرات حجم تركيز: <img fo:content-width="2in" src="/files/ftp_upload/51487/51487eq3.jpg" width="200" /> (3) تشكيل المنتج مع مرور الوقت (DP / دينارا)، والتي تتطابق مع معدل التفاعل، وبالتالي يمكن أن تكون ذات صلة لكمية من الحرارة المتولدة مقارنة بنفس الفترة من (DQ / ت) من خلال العلاقة: <img fo:content-width="2in" src="/files/ftp_upload/51487/51487eq4.jpg" width="150" /> (4) وفقا لهذه المعادلة، من أجل الحصول على ميكايليس-منتن مؤامرة فمن الضروري لقياس ط) مجموع المحتوى الحراري ΔH الرحى، والثاني) الحرارة تدفق DQ / دينارا بتركيزات الركيزة مختلفة. عادة، هذه تتم في تجربتين مختلفتين: في التجربة الأولى (الطريقة 1، M1)، يتم حقن الركيزة في حل الانزيم ويتم قياس الحرارة لاستكمال تحويل الركيزة؛ في التجربة الثانية (الطريقة 2، M2)، يتم تنفيذ الحقن متعددة من الركيزة ويقاس معدل إنتاج الحرارة في تركيزات الركيزة مختلفة. هاتين المجموعتين من المعطيات كافية لاستخلاص المعلمات الحركية K M وك القط. في هذه المادة، يتم وصف بروتوكول العامة لتحديد معالم الحركية للتفاعلات الأنزيمية تنفيذها باستخدام مركز التجارة الدولية. طبقنا طريقة لاليوريا التحلل بواسطة Canavalia الخنجري اليورياحد ذاتها، ونظام مرجعي. اتفاق جيد بين النتائج التي تم الحصول عليها باستخدام هذه الطريقة والبيانات المبلغ عنها في الأدب يدل على موثوقية هذا النهج.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="796">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">HEPES</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">H3375</td>
			<td style="width:323px;">dissolving in water and adjusting pH with NaOH</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">TRIZMA-Base</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">T1503</td>
			<td>dissolving in water and adjusting pH with HCl</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Sodium dihydrogen phosphate</td>
			<td style="width:111px;">Riedel-de-Haen</td>
			<td style="width:119px;">4270</td>
			<td>dissolving in water</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Sodium phosphate dibasic</td>
			<td style="width:111px;">Riedel-de-Haen</td>
			<td style="width:119px;">30427</td>
			<td>dissolving in water</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Urea</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">U4128</td>
			<td>dissolving in water at 40 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:245px;">Canavalia ensiformis urease (type C-3)</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">U0251</td>
			<td>dissolving in 20 mM HEPES pH 7 and stored at -80 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;"></td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:245px;">VP-ITC on Origin 7.0</td>
			<td style="width:111px;">MicroCal (GE Healthcare)</td>
			<td style="width:119px;">SYS13901</td>
			<td>instrument&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:245px;">VPViewer2000 1.30.00 on Origin 7.0</td>
			<td style="width:111px;">MicroCal (GE Healthcare)</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>data acquisition software supplied with the instrument</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

hot biological catalysis: isothermal titration calorimetry to characterize enzymatic reactions

<html> متساوي الكالوري المعايرة (ITC) هو أسلوب وصفها جيدا أن يقيس الحرارة المنطلقة أو الممتصة خلال تفاعل كيميائي، وذلك باستخدام مسبار على أنها جوهرية لتوصيف الواقع كل عملية كيميائية. في الوقت الحاضر، يتم تطبيق هذه التقنية على نطاق واسع لتحديد المعلمات الحرارية من التوازنات ملزمة الجزيئية البيولوجية. بالإضافة إلى ذلك، فقد ثبت ITC لتكون قادرة على قياس حركية مباشرة والمعلمات الحرارية (ك القط، K M، ΔH) من التفاعلات الإنزيمية، حتى وإن كان هذا التطبيق لا يزال غير مستغلة. كما تحدث تغيرات الحرارة بشكل عفوي خلال الحفز الأنزيمي ومركز التجارة الدولية لا يتطلب أي تعديل أو وسم نظام قيد التحليل ويمكن أن يؤديها في الحل. وعلاوة على ذلك، فإن هذه الطريقة تحتاج كمية قليلة من المواد. هذه الخصائص تجعل ITC أداة لا تقدر بثمن، قوية وفريدة من نوعها لدراسة حركية الانزيم في العديد من التطبيقات، مثل، على سبيل المثال، واكتشاف المخدرات. معشوقة = &quot;jove_content&quot;&gt; في هذا العمل أسلوب التجريبي القائم ITC-لقياس حركية والديناميكا الحرارية من التفاعلات الإنزيمية يوصف بدقة. يتم تطبيق هذا الأسلوب لتحديد ك القط وK M من الإنزيمية من اليوريا التي كتبها الخنجري Canavalia (جاك الفول) اليورياز. يتم إجراء حساب المحتوى الحراري المولي الجوهرية (ΔH كثافة) من رد الفعل. القيم التي تم الحصول عليها وبالتالي تتفق مع البيانات السابقة التي أعلن عنها في الأدب، مما يدل على موثوقية المنهجية.

اليورياز (EC 3.5.1.5؛ اليوريا amidohydrolase) هو انزيم multisubunit المحتوية على النيكل وجدت في archea والبكتيريا وحقيقيات النوى وحيدة الخلية والنباتات. أعمال هذا البروتين في الخطوة الأخيرة من العضوية تمعدن النتروجين، تحفيز التحلل من اليوريا إلى الأمونيا وكاربامات، والتي تتحلل تلقائي...

Watch this Scientific Journal Video about Hot Biological Catalysis: Isothermal Titration Calorimetry to Characterize Enzymatic Reactions at JoVE.com

Hot Biological Catalysis: Isothermal Titration Calorimetry to Characterize Enzymatic Reactions

متساوي التدابير الكالوري المعايرة تدفق الحرارة المنطلقة أو الممتصة في التفاعلات الكيميائية. هذه الطريقة يمكن استخدامها لقياس انزيم الحفز. في هذه الورقة، وبروتوكول لإعداد مفيدة، يوصف عموما تجربة تشغيل، وتحليل البيانات، وتطبيقها على توصيف الأنزيمية اليوريا التحلل بواسطة جاك الفول اليورياز.

الساخنة البيولوجية الحفز: متساوي الكالوري المعايرة لوصف التفاعلات الإنزيمية

Isothermal titration calorimetry (ITC) is a well-described technique that measures the heat released or absorbed during a chemical reaction, using it as ...

Education

Research

JoVE Core

JoVE Journal

Organic Chemistry

Chemistry

Unit 1

Thermochemistry

Thermodynamics and Chemical Kinetics

SCIENTISTS IN ACTION

Preparation of Silica Nanoparticles Through Microwave-assisted Acid-catalysis

Microwave-assisted synthetic techniques were used to quickly and reproducibly produce silica nanoparticle sols using an acid catalyst with nanoparticle ...

Retropinacol/Cross-pinacol Coupling Reactions - A Catalytic Access to 1,2-Unsymmetrical Diols

Retropinacol / عبر بيناكولون ردود الفعل اقتران - A الوصول إلى التحفيز 1،2-ثنائيات البوليثيرات كاملة غير متماثل

Unsymmetrical 1,2-diols are hardly accessible by reductive pinacol coupling processes. A successful execution of such a transformation is bound to a clear ...

Mizoroki-Heck Cross-coupling Reactions Catalyzed by Dichloro{bis[1,1',1''-(phosphinetriyl)tripiperidine]}palladium Under Mild Reaction Conditions

Mizoroki-Heck Cross-coupling Reactions Catalyzed by Dichloro{bis[1,1',1''-phosphinetriyltripiperidine]}palladium Under Mild Reaction Conditions

Mizoroki-هيك ردود الفعل عبر اقتران يحفزه ديكلورو {مكرر [1،1 &#39;،&#39;&#39; 1 - (phosphinetriyl) tripiperidine]} البلاديوم تحت ظروف التفاعل معتدل

Dichloro-bis(aminophosphine) complexes of palladium with the general formula of [(P{(NC5H10)3-n(C6H11)n})2Pd(Cl)2] (where n = 0-2), belong to a new family ...

Light-driven Enzymatic Decarboxylation

مدفوعة خفيفة الأنزيمية نزع الكربوكسيل

Oxidoreductases belong to the most-applied industrial enzymes. Nevertheless, they need external electrons whose supply is often costly and challenging. ...

Dissolution Dynamic Nuclear Polarization Instrumentation for Real-time Enzymatic Reaction Rate Measurements by NMR

حل الحيوي النووية الاستقطاب الأجهزة لفي الوقت الحقيقي القياسات الأنزيمية ردود الفعل قيم وNMR

The main limitation of NMR-based investigations is low sensitivity. This prompts for long acquisition times, thus preventing real-time NMR measurements of ...

A Protocol for Safe Lithiation Reactions Using Organolithium Reagents

بروتوكول لردود الفعل الآمن Lithiation عن طريق Organolithium الكواشف

Organolithium reagents are powerful tools in the synthetic chemist&#39;s toolbox. However, the extreme pyrophoric nature of the most reactive reagents ...

Enzymatic Cascade Reactions for the Synthesis of Chiral Amino Alcohols from L-lysine

تتالي الانزيمية ردود لتوليف الكحوليات الأمينية مراوان L-يسين

Amino alcohols are versatile compounds with a wide range of applications. For instance, they have been used as chiral scaffolds in organic synthesis. ...

Employing Pressurized Hot Water Extraction (PHWE) to Explore Natural Products Chemistry in the Undergraduate Laboratory

Employing Pressurized Hot Water Extraction PHWE to Explore Natural Products Chemistry in the Undergraduate Laboratory

استخدام الماء الساخن المضغوط استخراج (فو) استكشاف كيمياء المنتجات الطبيعية في المختبرات الجامعية

A recently developed pressurized hot water extraction (PHWE) method which utilizes an unmodified household espresso machine to facilitate natural products ...

Imine Metathesis by Silica-Supported Catalysts Using the Methodology of Surface Organometallic Chemistry

Imine Metathesis بواسطة المحفزات المدعومة من السيليكا باستخدام منهجيه الكيمياء فلزي السطحية

With this protocol, a well-defined singlesite silica-supported heterogeneous catalyst [(&#8801;Si-O-)Hf(=NMe)(&#951;1-NMe2)] is designed and prepared ...

Enzymatic Synthesis of Epoxidized Metabolites of Docosahexaenoic, Eicosapentaenoic, and Arachidonic Acids

التوليف الأنزيمي للميتابوليت الأيبسيدية من الدوكوساهيكسانويك، إيكوسابنتانويك، وحمض الأراكيدونية

The epoxidized metabolites of various polyunsaturated fatty acids (PUFAs), termed epoxy fatty acids, have a wide range of roles in human physiology. These ...