Name: hot biological catalysis: isothermal titration calorimetry to characterize enzymatic reactions
Uploaded: 2014-04-04T13:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Hot Biological Catalysis: Isothermal Titration Calorimetry to Characterize Enzymatic Reactions at JoVE.com

Den specielle Gødning Products Company (SFP) er anerkendt for at levere de nødvendige midler til denne undersøgelse.

1.. Forberedelse Prøver <ol><li> Forbered 2 ml enzymopløsning og 0,5 ml substratopløsning for hver forsøgskørsel. Fortyndes koncentrerede stamopløsninger af enzym og substrat i pufferopløsninger med identisk sammensætning for at minimere den varme fortynding og blanding under substrattilsætning. <ol><li> Vælg pufferbetingelserne forhold, der er tilstrækkelig til at forhindre pH-ændring i løbet af eksperimentet. For eksempel, 20 mM HEPES pH 7 er tilstrækkelig til målinger ved neutral pH. ...

<ol>
	<li>Leavitt, S., Freire, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+measurement+of+protein+binding+energetics+by+isothermal+titration+calorimetry.">Direct measurement of protein binding energetics by isothermal titration calorimetry.</a> Curr. Opin. Struct. Biol. 11, 560-566 (2001).</li><li>Ladbury, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+isothermal+titration+calorimetry+in+the+biological+sciences:+things+are+heating+up!+BioTechniques.">Application of isothermal titration calorimetry in the biological sciences: things are heating up! BioTechniques.</a> 37, 885-887 (2004).</li><li>Zambelli, B., Bellucci, M., Danielli, A., Scarlato, V., Ciurli, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Ni2++binding+properties+of+Helicobacter+pylori+NikR.">The Ni2+ binding properties of Helicobacter pylori NikR.</a> Chem. Commun. , 3649-3651 (2007).</li><li>Zambelli, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-affinity+Ni2++binding+selectively+promotes+binding+of+Helicobacter+pylori+NikR+to+its+target+urease+promoter.">High-affinity Ni2+ binding selectively promotes binding of Helicobacter pylori NikR to its target urease promoter.</a> J. Mol. Biol. 383, 1129-1143 (2008).</li><li>Duff, M. R., Grubbs, J., Howell, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isothermal+titration+calorimetry+for+measuring+macromolecule-ligand+affinity.">Isothermal titration calorimetry for measuring macromolecule-ligand affinity.</a> J. Vis. Exp. , (2011).</li><li>Ghai, R., Falconer, R. J., Collins, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+isothermal+titration+calorimetry+in+pure+and+applied+research--survey+of+the+literature+from+2010.">Applications of isothermal titration calorimetry in pure and applied research--survey of the literature from 2010.</a> J. Mol. Recognit. 25, 32-52 (2012).</li><li>Todd, M. J., Gomez, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enzyme+kinetics+determined+using+calorimetry:+a+general+assay+for+enzyme+activity.">Enzyme kinetics determined using calorimetry: a general assay for enzyme activity.</a> Anal. Biochem. 296, 179-187 (2001).</li><li>Bianconi, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calorimetry+of+enzyme-catalyzed+reactions.">Calorimetry of enzyme-catalyzed reactions.</a> Biophys. Chem. 126, 59-64 (2007).</li><li>Demarse, N. A., Killian, M. C., Hansen, L. D., Quinn, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determining+enzyme+kinetics+via+isothermal+titration+calorimetry.">Determining enzyme kinetics via isothermal titration calorimetry.</a> Methods Mol. Biol. 978, 21-30 (2013).</li><li>Michaelis, L., Menten, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Die+kinetik+der+invertinwirkung.">Die kinetik der invertinwirkung.</a> Biochem. Z. 49, 333-369 (1913).</li><li>Walker, J., Wilson, K., Walker, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Principle and techniques of practical biochemistry. , 312-356 (2000).</li><li>Ciurli, S., Sigel, A., Sigel, H., Sigel, R. K. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Nickel and its surprising impact in nature. 2, 241-278 (2007).</li><li>Zambelli, B., Musiani, F., Benini, S., Ciurli, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemistry+of+Ni2++in+urease:+sensing,+trafficking,+and+catalysis.">Chemistry of Ni2+ in urease: sensing, trafficking, and catalysis.</a> Acc. Chem. Res. 44, 520-530 (2011).</li><li>Zonia, L. E., Stebbins, N. E., Polacco, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Essential+role+of+urease+in+germination+of+nitrogen-limited+Arabidopsis+thaliana+seeds.">Essential role of urease in germination of nitrogen-limited Arabidopsis thaliana seeds.</a> Plant Physiol. 107, 1097-1103 (1995).</li><li>Follmer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insights+into+the+role+and+structure+of+plant+ureases.">Insights into the role and structure of plant ureases.</a> Phytochemistry. 69, 18-28 (2008).</li><li>Sumner, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolation+and+crystallization+of+the+enzyme+urease.">The isolation and crystallization of the enzyme urease.</a> J. Biol. Chem. 69, 435-441 (1926).</li><li>Krajewska, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ureases+I.+Functional,+catalytic+and+kinetic+properties:+A+review.">Ureases I. Functional, catalytic and kinetic properties: A review.</a> J. Mol. Cat. B. 59, 9-21 (2009).</li><li>Callahan, B. P., Yuan, Y., Wolfenden, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+burden+borne+by+urease.">The burden borne by urease.</a> J. Am. Chem. Soc. 127, 10828-10829 (2005).</li><li>Krajewska, B., van Eldik, R., Brindell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temperature-+and+pressure-dependent+stopped-flow+kinetic+studies+of+jack+bean+urease.+Implications+for+the+catalytic+mechanism.">Temperature- and pressure-dependent stopped-flow kinetic studies of jack bean urease. Implications for the catalytic mechanism.</a> J. Biol. Inorg. Chem. 17, 1123-1134 (2012).</li><li>Hausinger, R. P., Karplus, P. A., Huber, R., Poulos, T., Wieghardt, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Metalloproteins. , 867-879 (2001).</li><li>Goldberg, R., Kishore, N., Lennen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermodynamic+quantities+for+the+ionization+reactions+of+buffers.">Thermodynamic quantities for the ionization reactions of buffers.</a> J. Phys. Chem. Ref. Data. 31, 231-370 (2002).</li><li>Baumann, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advantages+of+isothermal+titration+calorimetry+for+xylanase+kinetics+in+comparison+to+chemical-reducing-end+assays.">Advantages of isothermal titration calorimetry for xylanase kinetics in comparison to chemical-reducing-end assays.</a> Anal. Biochem. 410, 19-26 (2011).</li><li>Noske, R., Cornelius, F., Clarke, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+the+enzymatic+activity+of+the+Na+,K+-ATPase+via+isothermal+titration+microcalorimetry.">Investigation of the enzymatic activity of the Na+,K+-ATPase via isothermal titration microcalorimetry.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1797, 1540-1545 (2010).</li><li>Harmon, K. M., Niemann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+competitive+inhibition+of+the+urease-catalyzed+hydrolysis+of+urea+by+phosphate.">The competitive inhibition of the urease-catalyzed hydrolysis of urea by phosphate.</a> J. Biol. Chem. 177, 601-605 (1949).</li><li>Benini, S., Rypniewski, W. R., Wilson, K. S., Ciurli, S., Mangani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure-based+rationalization+of+urease+inhibition+by+phosphate:+novel+insights+into+the+enzyme+mechanism.">Structure-based rationalization of urease inhibition by phosphate: novel insights into the enzyme mechanism.</a> J. Biol. Inorg. Chem. 6, 778-790 (2001).</li><li>Segel, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Enzyme kinetics: behavior and analysis of rapid equilibrium and steady-state enzyme systems. , (1993).</li></ol>

Betydningen af ITC at studere enzymatisk aktivitet med hensyn til de eksisterende metoder Ud over sin klassiske applikationer for at studere bindende ligevægte, isotermiske titrering kalorimetri giver en pålidelig og hurtig metode til at karakterisere enzymatiske reaktioner i opløsning ved hjælp af varmen fra reaktionen som en sonde, uden at det kræver systemet ændring eller mærkning. De kinetiske parametre kcat og K M opnås s?...

Kvantitativ bestemmelse af biokemiske reaktioner giver indsigt i de biologiske processer på basis af livet. Kalorimetri tilbyder en etiket-fri metode til kvantitativt karakterisere næsten enhver kemisk reaktion i opløsning. Denne teknik måler den varme, der frigøres eller absorberes over tid, og derfor er et universelt system til påvisning og en meget praktisk metode til at kvantificere mængden af reagerende molekyler (dvs. bindende termodynamik), samt til at måle reaktionshastigheden (dvs. kinetik). Især har isoterm titrering kalorimetri (ITC) er blevet vedtaget som den foretrukne metode til at karakterisere termodynamik biomolekylære ligevægte, der involverer protein-ligand protein-protein, protein-metalioner og protein-DNA interaktioner 1-6. Desuden evne ITC at tilvejebringe kinetisk information gør det til en meget kraftfuld system til at måle enzymkatalyse, selv om potentialet i denne ansøgning er stadigundervurderet 7-9. Michaelis-Menten-ligningen 10 er en kvantitativ beskrivelse af enzymatiske reaktioner, da det giver en sammenhæng mellem reaktionshastighed og substratkoncentrationen, afhængigt af to kinetiske parametre: Michaelis konstant (K M), og den katalytiske hastighedskonstant (kcat) . The kcat / KM-forholdet er nævnt som den katalytiske effektivitet af et enzym. I praksis, bestemmelse af K M og K kat for en specifik reaktion giver en komplet beskrivelse af katalyse. I en typisk enzymatisk reaktion (figur 1) et substrat (S) interagerer med enzymet (E), der danner enzym-substrat (ES)-komplekset, der efterfølgende aktiveres i transition state (ES *). Sidstnævnte omdannes til enzym-produkt (EP) kompleks, der i sidste ende dissocierer. Disse skridts er beskrevet ved den følgende reaktion. <img fo:content-width="2in" src="/files/ftp_upload/51487/51487eq1.jpg" width="197" /> (1) hvor k 1 er hastighedskonstanten for dannelsen af ES-kompleks, k -1 er hastighedskonstanten for dissociation af ES-kompleks, mens kcat er den katalytiske hastighedskonstant eller omsætning nummer. Ifølge Michaelis-Menten ligningen 10, kan hastigheden af reaktionen beregnes som: <img fo:content-width="1.5in" src="/files/ftp_upload/51487/51487eq2.jpg" width="144" /> (2) hvor K M = (k -1 + k cat) / k 1 og k cat = v max / [E], og v max er den maksimale hastighed nås, når alt enzym er bundet til substratet. Den isotermiske titrering kalorimeter er det instrument, der anvendes i denne undersøgelse for at karakterisere den enzymatiske hydrolyse af urinstof. Dette instrument består af en adiabatisk skjold indeholder to opfundet-formede celler (fig. 1). Disse er forbundet til ydersiden med smalle adgang rør. Prøvecellen (ca. 1,4 ml) er fyldt med enzymopløsningen, mens Cellereferencen generelt er fyldt med vand eller med opløsningsmidlet, der anvendes til analysen. En roterende sprøjte med en lang nål og en mixeren tilknyttet, der sædvanligvis indeholder ca. 0,3 ml substratopløsning er monteret på prøvecellen. En termoelektrisk anordning måler forskellen i temperatur mellem prøven og referencen celle og ved hjælp af en &quot;celle-feedback netværk&quot;, det fastholder denne forskel på nul ved at tilføje eller fratrække varme. Under eksperimentet substratet sprøjtes ind enzymopløsningen ved en konstant valgte temperatur. Når enzymatic reaktion finder sted, den mængde varme, der frigøres eller absorberes er proportional med antallet af substratmolekyler, der omdannes til produkt-molekyler. Desuden er hastigheden af ​​varmestrømmen direkte relateret til hastigheden af ​​reaktionen. De målte data, der optræder som en afvigelse af varme spor fra den indledende baseline (figur 1), repræsenterer den termiske effekt (μcal / sek) leveres af instrumentet til prøven celle, der er proportional med varmestrøm forekommer i prøven celle over tid. <img alt="Figur 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51487/51487fig1highres.jpg" width="500" /> Figur 1. Skematisk repræsentation af isotermisk titrering-kalorimeter at undersøge enzymatiske reaktioner. En enzymatisk reaktion under titrering af substratet (i injektionssprøjten) i enzymopløsning (i prøvecellen) resulterer i en ændring af den thermal effekt frigivet af kalorimeteret, nødvendig for at holde forskellen i temperatur mellem prøven celle og cellereferencen konstant. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51487/51487fig1highres.jpg" target="_blank">Klik her for at se større billede.</a> Samlet set varmeændring (Q) er proportional med den molære enthalpi af reaktionen (AH) og antallet af mol-produkt genereret (n), som igen er givet ved den samlede volumen gange koncentrationen: <img fo:content-width="2in" src="/files/ftp_upload/51487/51487eq3.jpg" width="200" /> (3) Produktet formation over tid (dP / dt), der svarer til den reaktionshastighed, kan således være relateret til mængden af ​​varme, der genereres i løbet af samme tid (dQ / dt) gennem relationen: <img fo:content-width="2in" src="/files/ftp_upload/51487/51487eq4.jpg" width="150" /> (4) Ifølge denne ligning med henblik på at opnå en Michaelis-Menten plot det er nødvendigt at måle i) den samlede molære enthalpi AH, og ii) varmestrøm dQ / dt ved forskellige substratkoncentrationer. Normalt er denne udført i to forskellige eksperimenter: i det første eksperiment (metode 1 M1) substratet injiceres i enzymopløsningen og varmen for komplet substrat omdannelse måles; i det andet eksperiment (Metode 2, M2), er flere injektioner af substrat udføres, og hastigheden af varmeproduktion måles ved forskellige substratkoncentrationer. Disse to sæt af data er tilstrækkelige til at udlede de kinetiske parametre K M og k kat. I denne artikel er en generel protokol til at bestemme de kinetiske parametre for enzymatiske reaktioner udført ved hjælp af ITC beskrevet. Vi har anvendt den metode til at urea hydrolyse af Canavalia ensiformis ureaselv som et referencesystem. Den gode aftale mellem de opnåede ved hjælp af denne metode resultater og de rapporterede data i litteraturen viser pålideligheden af ​​denne fremgangsmåde.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="796">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">HEPES</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">H3375</td>
			<td style="width:323px;">dissolving in water and adjusting pH with NaOH</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">TRIZMA-Base</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">T1503</td>
			<td>dissolving in water and adjusting pH with HCl</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Sodium dihydrogen phosphate</td>
			<td style="width:111px;">Riedel-de-Haen</td>
			<td style="width:119px;">4270</td>
			<td>dissolving in water</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Sodium phosphate dibasic</td>
			<td style="width:111px;">Riedel-de-Haen</td>
			<td style="width:119px;">30427</td>
			<td>dissolving in water</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Urea</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">U4128</td>
			<td>dissolving in water at 40 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:245px;">Canavalia ensiformis urease (type C-3)</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">U0251</td>
			<td>dissolving in 20 mM HEPES pH 7 and stored at -80 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;"></td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:245px;">VP-ITC on Origin 7.0</td>
			<td style="width:111px;">MicroCal (GE Healthcare)</td>
			<td style="width:119px;">SYS13901</td>
			<td>instrument&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:245px;">VPViewer2000 1.30.00 on Origin 7.0</td>
			<td style="width:111px;">MicroCal (GE Healthcare)</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>data acquisition software supplied with the instrument</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

hot biological catalysis: isothermal titration calorimetry to characterize enzymatic reactions

Isotermisk titrering kalorimetri (ITC) er et velbeskrevet teknik, der måler varmeafgivelse eller absorberes i løbet af en kemisk reaktion, bruge det som en iboende sonde til at karakterisere næsten enhver kemisk proces. I dag er denne teknik vid udstrækning anvendes til at bestemme termodynamiske parametre for biomolekylær bindende ligevægte. Desuden har ITC vist sig at være i stand til direkte at måle kinetik og termodynamiske parametre (k kat, K M, AH) af enzymatiske reaktioner, selv om denne ansøgning er stadig underudnyttet. Som spontant opstår varme ændringer i løbet af enzymatisk katalyse, er ITC ikke kræver nogen ændring eller mærkning af systemet under analyse og kan udføres i opløsning. Desuden fremgangsmåden brug lille mængde materiale. Disse egenskaber gør ITC et uvurderligt, kraftfuld og unikt værktøj til at studere enzymkinetik i flere programmer, såsom, for eksempel lægemiddelforskning. <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; I dette arbejde et eksperimentelt ITC-baserede metode til at kvantificere kinetik og termodynamik enzymatiske reaktioner er grundigt beskrevet. Denne metode anvendes til at bestemme kcat og K M af den enzymatiske hydrolyse af urinstof ved Canavalia ensiformis (jack bean) urease. Beregning af indre molære enthalpi (AH int) i reaktionen udføres. De således opnåede værdier er i overensstemmelse med tidligere data rapporteret i litteraturen, viser pålideligheden af ​​metoden.

Urease (EC 3.5.1.5, urea amidohydrolase) er en multisubunit nikkel-holdige enzym i Archea, bakterier, encellede eukaryoter og planter. Dette protein virker i det sidste trin af organisk kvælstof mineralisering, katalyserer hydrolyse af urea til ammoniak og carbamat, som spontant nedbrydes til at give et andet molekyle af ammoniak og bikarbonat (ligning 6) 12. <img fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/51487/51487eq6.jpg" width="450" /> (6) <p class="jo...

Watch this Scientific Journal Video about Hot Biological Catalysis: Isothermal Titration Calorimetry to Characterize Enzymatic Reactions at JoVE.com

Hot Biological Catalysis: Isothermal Titration Calorimetry to Characterize Enzymatic Reactions

Isotermisk titrering kalorimetri foranstaltninger varmestrøm frigivet eller absorberet i kemiske reaktioner. Denne metode kan anvendes til at kvantificere enzym-katalyse. I dette papir, protokol for instrumental opsætning, eksperiment kører, og dataanalyse beskrives generelt, og anvendes til karakterisering af enzymatisk urea hydrolyse ved sværdbønne urease.

Hot Biologisk katalyse: Isothermal Titrering kalorimetri at karakterisere enzymatiske reaktioner

Isothermal titration calorimetry (ITC) is a well-described technique that measures the heat released or absorbed during a chemical reaction, using it as ...

Education

Research

JoVE Core

JoVE Journal

Organic Chemistry

Chemistry

Unit 1

Thermochemistry

Thermodynamics and Chemical Kinetics

SCIENTISTS IN ACTION

Preparation of Silica Nanoparticles Through Microwave-assisted Acid-catalysis

Microwave-assisted synthetic techniques were used to quickly and reproducibly produce silica nanoparticle sols using an acid catalyst with nanoparticle ...

Retropinacol/Cross-pinacol Coupling Reactions - A Catalytic Access to 1,2-Unsymmetrical Diols

Retropinacol / Cross-pinacol koblingsreaktioner - en katalytisk Adgang til 1,2-usymmetriske Dioler

Unsymmetrical 1,2-diols are hardly accessible by reductive pinacol coupling processes. A successful execution of such a transformation is bound to a clear ...

Mizoroki-Heck Cross-coupling Reactions Catalyzed by Dichloro{bis[1,1',1''-(phosphinetriyl)tripiperidine]}palladium Under Mild Reaction Conditions

Mizoroki-Heck Cross-coupling Reactions Catalyzed by Dichloro{bis[1,1',1''-phosphinetriyltripiperidine]}palladium Under Mild Reaction Conditions

Mizoroki-Heck krydskoblingsreaktioner katalyseret af dichlor {bis [1,1 &#39;, 1&#39;&#39; - (phosphinetriyl) tripiperidine]} palladium Under milde reaktionsbetingelser

Dichloro-bis(aminophosphine) complexes of palladium with the general formula of [(P{(NC5H10)3-n(C6H11)n})2Pd(Cl)2] (where n = 0-2), belong to a new family ...

Light-driven Enzymatic Decarboxylation

Light-driven Enzymatisk Decarboxylering

Oxidoreductases belong to the most-applied industrial enzymes. Nevertheless, they need external electrons whose supply is often costly and challenging. ...

Dissolution Dynamic Nuclear Polarization Instrumentation for Real-time Enzymatic Reaction Rate Measurements by NMR

Opløsning Dynamic Nuclear Polarisering Instrumentation for Real-time enzymatisk reaktion Rate Målinger ved NMR

The main limitation of NMR-based investigations is low sensitivity. This prompts for long acquisition times, thus preventing real-time NMR measurements of ...

A Protocol for Safe Lithiation Reactions Using Organolithium Reagents

En protokol for sikker lithiering Reaktioner Brug organolithiumreagenser

Organolithium reagents are powerful tools in the synthetic chemist&#39;s toolbox. However, the extreme pyrophoric nature of the most reactive reagents ...

Enzymatic Cascade Reactions for the Synthesis of Chiral Amino Alcohols from L-lysine

Enzymatisk Cascade reaktioner til syntese af Chiral Amino alkoholer fra L-lysin

Amino alcohols are versatile compounds with a wide range of applications. For instance, they have been used as chiral scaffolds in organic synthesis. ...

Employing Pressurized Hot Water Extraction (PHWE) to Explore Natural Products Chemistry in the Undergraduate Laboratory

Employing Pressurized Hot Water Extraction PHWE to Explore Natural Products Chemistry in the Undergraduate Laboratory

Ansætte trykisoleret varmt vand udvinding (PHWE) til at udforske naturprodukter kemi på bachelor laboratorium

A recently developed pressurized hot water extraction (PHWE) method which utilizes an unmodified household espresso machine to facilitate natural products ...

Imine Metathesis by Silica-Supported Catalysts Using the Methodology of Surface Organometallic Chemistry

Imine-meta afhandling af silica-støttede katalysatorer ved hjælp af metodologien for overflade Organometallisk kemi

With this protocol, a well-defined singlesite silica-supported heterogeneous catalyst [(&#8801;Si-O-)Hf(=NMe)(&#951;1-NMe2)] is designed and prepared ...

Enzymatic Synthesis of Epoxidized Metabolites of Docosahexaenoic, Eicosapentaenoic, and Arachidonic Acids

Enzymatisk syntese af Epoxidiserede metabolitter af Docosahexaenoic, Eicosapentaenoic og arachidonsyre

The epoxidized metabolites of various polyunsaturated fatty acids (PUFAs), termed epoxy fatty acids, have a wide range of roles in human physiology. These ...