Name: hot biological catalysis: isothermal titration calorimetry to characterize enzymatic reactions
Uploaded: 2014-04-04T13:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Hot Biological Catalysis: Isothermal Titration Calorimetry to Characterize Enzymatic Reactions at JoVE.com

Den spesialgjødsel Company (SFP) er anerkjent for å gi de nødvendige midler til denne studien.

En. Forbereder Samples <ol><li> Forbered 2 ml enzymløsning og 0,5 ml av substrat-løsning for hver forsøkskjøring. Fortynn konsentrerte stamløsninger av enzym og substrat i bufferoppløsninger som har lik sammensetning for å redusere varmen av fortynning og blanding under substratet tilsetningen. <ol><li> Velg bufferbetingelser som er tilstrekkelig til å forhindre pH-endring i løpet av eksperimentet. For eksempel, i 20 mM HEPES pH 7 tilstrekkelig for målinger ved nøytral pH. MERK: Ved proton u...

<ol>
	<li>Leavitt, S., Freire, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+measurement+of+protein+binding+energetics+by+isothermal+titration+calorimetry.">Direct measurement of protein binding energetics by isothermal titration calorimetry.</a> Curr. Opin. Struct. Biol. 11, 560-566 (2001).</li><li>Ladbury, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+isothermal+titration+calorimetry+in+the+biological+sciences:+things+are+heating+up!+BioTechniques.">Application of isothermal titration calorimetry in the biological sciences: things are heating up! BioTechniques.</a> 37, 885-887 (2004).</li><li>Zambelli, B., Bellucci, M., Danielli, A., Scarlato, V., Ciurli, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Ni2++binding+properties+of+Helicobacter+pylori+NikR.">The Ni2+ binding properties of Helicobacter pylori NikR.</a> Chem. Commun. , 3649-3651 (2007).</li><li>Zambelli, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-affinity+Ni2++binding+selectively+promotes+binding+of+Helicobacter+pylori+NikR+to+its+target+urease+promoter.">High-affinity Ni2+ binding selectively promotes binding of Helicobacter pylori NikR to its target urease promoter.</a> J. Mol. Biol. 383, 1129-1143 (2008).</li><li>Duff, M. R., Grubbs, J., Howell, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isothermal+titration+calorimetry+for+measuring+macromolecule-ligand+affinity.">Isothermal titration calorimetry for measuring macromolecule-ligand affinity.</a> J. Vis. Exp. , (2011).</li><li>Ghai, R., Falconer, R. J., Collins, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+isothermal+titration+calorimetry+in+pure+and+applied+research--survey+of+the+literature+from+2010.">Applications of isothermal titration calorimetry in pure and applied research--survey of the literature from 2010.</a> J. Mol. Recognit. 25, 32-52 (2012).</li><li>Todd, M. J., Gomez, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enzyme+kinetics+determined+using+calorimetry:+a+general+assay+for+enzyme+activity.">Enzyme kinetics determined using calorimetry: a general assay for enzyme activity.</a> Anal. Biochem. 296, 179-187 (2001).</li><li>Bianconi, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calorimetry+of+enzyme-catalyzed+reactions.">Calorimetry of enzyme-catalyzed reactions.</a> Biophys. Chem. 126, 59-64 (2007).</li><li>Demarse, N. A., Killian, M. C., Hansen, L. D., Quinn, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determining+enzyme+kinetics+via+isothermal+titration+calorimetry.">Determining enzyme kinetics via isothermal titration calorimetry.</a> Methods Mol. Biol. 978, 21-30 (2013).</li><li>Michaelis, L., Menten, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Die+kinetik+der+invertinwirkung.">Die kinetik der invertinwirkung.</a> Biochem. Z. 49, 333-369 (1913).</li><li>Walker, J., Wilson, K., Walker, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Principle and techniques of practical biochemistry. , 312-356 (2000).</li><li>Ciurli, S., Sigel, A., Sigel, H., Sigel, R. K. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Nickel and its surprising impact in nature. 2, 241-278 (2007).</li><li>Zambelli, B., Musiani, F., Benini, S., Ciurli, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemistry+of+Ni2++in+urease:+sensing,+trafficking,+and+catalysis.">Chemistry of Ni2+ in urease: sensing, trafficking, and catalysis.</a> Acc. Chem. Res. 44, 520-530 (2011).</li><li>Zonia, L. E., Stebbins, N. E., Polacco, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Essential+role+of+urease+in+germination+of+nitrogen-limited+Arabidopsis+thaliana+seeds.">Essential role of urease in germination of nitrogen-limited Arabidopsis thaliana seeds.</a> Plant Physiol. 107, 1097-1103 (1995).</li><li>Follmer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insights+into+the+role+and+structure+of+plant+ureases.">Insights into the role and structure of plant ureases.</a> Phytochemistry. 69, 18-28 (2008).</li><li>Sumner, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolation+and+crystallization+of+the+enzyme+urease.">The isolation and crystallization of the enzyme urease.</a> J. Biol. Chem. 69, 435-441 (1926).</li><li>Krajewska, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ureases+I.+Functional,+catalytic+and+kinetic+properties:+A+review.">Ureases I. Functional, catalytic and kinetic properties: A review.</a> J. Mol. Cat. B. 59, 9-21 (2009).</li><li>Callahan, B. P., Yuan, Y., Wolfenden, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+burden+borne+by+urease.">The burden borne by urease.</a> J. Am. Chem. Soc. 127, 10828-10829 (2005).</li><li>Krajewska, B., van Eldik, R., Brindell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temperature-+and+pressure-dependent+stopped-flow+kinetic+studies+of+jack+bean+urease.+Implications+for+the+catalytic+mechanism.">Temperature- and pressure-dependent stopped-flow kinetic studies of jack bean urease. Implications for the catalytic mechanism.</a> J. Biol. Inorg. Chem. 17, 1123-1134 (2012).</li><li>Hausinger, R. P., Karplus, P. A., Huber, R., Poulos, T., Wieghardt, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Metalloproteins. , 867-879 (2001).</li><li>Goldberg, R., Kishore, N., Lennen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermodynamic+quantities+for+the+ionization+reactions+of+buffers.">Thermodynamic quantities for the ionization reactions of buffers.</a> J. Phys. Chem. Ref. Data. 31, 231-370 (2002).</li><li>Baumann, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advantages+of+isothermal+titration+calorimetry+for+xylanase+kinetics+in+comparison+to+chemical-reducing-end+assays.">Advantages of isothermal titration calorimetry for xylanase kinetics in comparison to chemical-reducing-end assays.</a> Anal. Biochem. 410, 19-26 (2011).</li><li>Noske, R., Cornelius, F., Clarke, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+the+enzymatic+activity+of+the+Na+,K+-ATPase+via+isothermal+titration+microcalorimetry.">Investigation of the enzymatic activity of the Na+,K+-ATPase via isothermal titration microcalorimetry.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1797, 1540-1545 (2010).</li><li>Harmon, K. M., Niemann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+competitive+inhibition+of+the+urease-catalyzed+hydrolysis+of+urea+by+phosphate.">The competitive inhibition of the urease-catalyzed hydrolysis of urea by phosphate.</a> J. Biol. Chem. 177, 601-605 (1949).</li><li>Benini, S., Rypniewski, W. R., Wilson, K. S., Ciurli, S., Mangani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure-based+rationalization+of+urease+inhibition+by+phosphate:+novel+insights+into+the+enzyme+mechanism.">Structure-based rationalization of urease inhibition by phosphate: novel insights into the enzyme mechanism.</a> J. Biol. Inorg. Chem. 6, 778-790 (2001).</li><li>Segel, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Enzyme kinetics: behavior and analysis of rapid equilibrium and steady-state enzyme systems. , (1993).</li></ol>

Betydningen av ITC å studere enzymatisk aktivitet med hensyn til eksisterende metoder I tillegg til sin klassiske programmer for å studere bindende likevekter, gir isoterm titrering kalorimetri en pålitelig og rask metode for å karakterisere enzymatiske reaksjoner i løsning ved hjelp av reaksjonsvarmen som en sonde, uten å kreve system modifikasjon eller merking. Den kinetiske parameterne k katt og K M blir vanligvis oppnådd gje...

Kvantitativ måling av biokjemiske reaksjoner gir innsikt i de biologiske prosessene på grunnlag av livet. Kalorimetri tilbyr en etikett-fri metode for å kvantitativt karakterisere nesten enhver kjemisk reaksjon i løsningen. Denne teknikk måler varmen frigitt eller absorbert over tid, og er derfor en universell deteksjonssystem og en meget fordelaktig metode for å kvantifisere mengden av reagerende molekyler (det vil si bindingstermodynamikk), så vel som å måle reaksjonshastigheten (dvs. kinetikk). Spesielt har isoterm titrering kalorimetri (ITC) er vedtatt som metode for valg å karaktertermodynamikken for biomolekylære likevekter, som involverer protein-ligand, protein-protein, protein-metallioner og protein-DNA vekselvirkninger 1-6. I tillegg gjør evnen til ITC å gi kinetisk informasjon den en meget kraftig system for å måle enzymkatalyse, men potensialet i denne søknaden er fremdelesvurderes 7-9. Den Michaelis-Menten ligningen 10 er en kvantitativ beskrivelse av enzymatiske reaksjoner, da det gir et forhold mellom reaksjonshastighet og substratet konsentrasjon, avhengig av to kinetiske parametre: Michaelis konstant (K M), og den katalytiske hastighetskonstant (k katt) . Den k cat / K M-forhold er omtalt som den katalytiske effektiviteten av et enzym. I praksis bestemmelse av K M og k katt for en bestemt reaksjon gir en fullstendig beskrivelse av katalyse. I en typisk enzymreaksjon (figur 1), et substrat (S) kommuniserer med enzym (E) som danner det enzym-substrat (ES)-kompleks, som deretter aktiveres i overgangstilstand (ES *). Den sistnevnte omdannes til den enzymprodukt (EP)-kompleks som til slutt spaltes. Disse trinns er beskrevet ved den følgende reaksjon. <img fo:content-width="2in" src="/files/ftp_upload/51487/51487eq1.jpg" width="197" /> (1) hvor k er en hastighetskonstanten for dannelsen av ES-komplekset, k -1 er hastighetskonstanten for dissosiering av ES-komplekset, mens k katt er det katalytiske hastighetskonstant eller omsetning nummer. I henhold til Michaelis-Menten ligningen 10, kan reaksjonshastigheten beregnes som: <img fo:content-width="1.5in" src="/files/ftp_upload/51487/51487eq2.jpg" width="144" /> (2) hvori K M = (k -1 + k cat) / k 1 og k cat = v max / [E], med v max er den maksimale hastighet er nådd når alle enzymet er bundet til underlaget. Den isotermiske titrering kalorimeteret er instrumentet brukt i denne studie for å karakterisere den enzymatiske hydrolyse av urea. Dette instrumentet består av en adiabatisk skjold som inneholder to innførte formede celler (figur 1). Disse er koblet til utsiden med smale tilgangs rør. Prøvecellens (ca. 1,4 ml) blir lastet med enzym-oppløsningen, mens referansecelle er vanligvis fylt med vann eller med oppløsningsmidlet som brukes for analysen. En roterende sprøyte med en lang nål og en røre paddle festet, vanligvis inneholdende ca. 0,3 ml av substrat-løsning, er montert på prøvecellen. En termoelektrisk enhet måler forskjellen i temperatur mellom prøven og referansecellen og, ved hjelp av en &quot;celle tilbakekoblingsnettverk&quot;, opprettholder det denne forskjellen til null ved å legge til eller trekke varme. Under eksperimentet er substratet sprøytet inn i enzymløsning på en konstant valgt temperatur. Når det nozymatic reaksjon finner sted, hvor mye varme som frigis eller absorberes, er proporsjonal med antallet av substrat-molekyler som er omdannet til produkt-molekyler. I tillegg er hastigheten av varmestrømmen er direkte relatert til graden av reaksjonen. De målte data, som vises som et avvik av varme spor fra basislinje (figur 1), representerer den termiske effekt (μcal / sek) som leveres av apparatet til prøvecellen, som er proporsjonalt med varmestrømmen som forekommer i prøven cellen over tid. <img alt="Figur 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51487/51487fig1highres.jpg" width="500" /> Figur 1. Skjematisk fremstilling av isotermisk titrering kalorimeteret for å studere enzymatiske reaksjoner. An enzymatiske reaksjon oppstår ved titrering av substratet (i injeksjonssprøyten) inn i enzym-løsning (i prøvecellen) resulterer i en endring av den thermal kraft frigjøres av kalorimeteret, nødvendig for å holde forskjellen i temperatur mellom prøvecellen og referansecellen konstant. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51487/51487fig1highres.jpg" target="_blank">for å vise større bilde.</a> Totalt sett er den varmeendring (Q) proporsjonal med den molare entalpi av reaksjon (AH) og antall mol produkt ble generert (n), som i sin tur er gitt av det totale volumet ganger konsentrasjonen: <img fo:content-width="2in" src="/files/ftp_upload/51487/51487eq3.jpg" width="200" /> (3) Produktet dannelse over tid (dP / dt), som svarer til reaksjonshastigheten, kan således være relatert til mengden av varme som genereres i samme tid (dQ / dt) ved forholdet: <img fo:content-width="2in" src="/files/ftp_upload/51487/51487eq4.jpg" width="150" /> (4) I henhold til denne ligningen, for å oppnå en Michaelis-Menten plotte det er nødvendig å måle i) det totale molare entalpi AH, og ii) den varmestrøm dQ / dt på forskjellige substrat-konsentrasjoner. Vanligvis blir dette utført i to forskjellige eksperimenter: I det første eksperiment (metode 1, M1), blir substratet sprøytet inn i enzym-oppløsningen og varmen for fullstendig substrat omdanning blir målt; i det andre forsøk (metode 2, M2), er flere injeksjoner av substratet utføres, og graden av varmeproduksjonen blir målt ved forskjellige substrat-konsentrasjoner. Disse to sett med data er tilstrekkelig til å avlede de kinetiske parameterne K M og k katt. I denne artikkelen, er en generell protokoll for å bestemme kinetiske parametere for enzymatiske reaksjoner som utføres ved hjelp av ITC beskrevet. Vi brukt metoden til urea hydrolyse av Canavalia ensiformis urease, som et referansesystem. Den god overensstemmelse mellom resultatene oppnådd ved hjelp av denne fremgangsmåte og de data som er rapportert i litteraturen viser påliteligheten til denne fremgangsmåten.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="796">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">HEPES</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">H3375</td>
			<td style="width:323px;">dissolving in water and adjusting pH with NaOH</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">TRIZMA-Base</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">T1503</td>
			<td>dissolving in water and adjusting pH with HCl</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Sodium dihydrogen phosphate</td>
			<td style="width:111px;">Riedel-de-Haen</td>
			<td style="width:119px;">4270</td>
			<td>dissolving in water</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Sodium phosphate dibasic</td>
			<td style="width:111px;">Riedel-de-Haen</td>
			<td style="width:119px;">30427</td>
			<td>dissolving in water</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Urea</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">U4128</td>
			<td>dissolving in water at 40 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:245px;">Canavalia ensiformis urease (type C-3)</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">U0251</td>
			<td>dissolving in 20 mM HEPES pH 7 and stored at -80 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;"></td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:245px;">VP-ITC on Origin 7.0</td>
			<td style="width:111px;">MicroCal (GE Healthcare)</td>
			<td style="width:119px;">SYS13901</td>
			<td>instrument&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:245px;">VPViewer2000 1.30.00 on Origin 7.0</td>
			<td style="width:111px;">MicroCal (GE Healthcare)</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>data acquisition software supplied with the instrument</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

hot biological catalysis: isothermal titration calorimetry to characterize enzymatic reactions

Isoterm titrering kalorimetri (ITC) er en godt beskrevet teknikk som måler varmen frigitt eller absorbert i løpet av en kjemisk reaksjon, ved hjelp av den som en indre sonde å karakterisere praktisk talt alle kjemisk prosess. I dag er denne teknikken mye brukt til å bestemme termodynamiske parametre for biomolekylære bindende likevekter. I tillegg har ITC blitt vist å være i stand til direkte å måle kinetiske og termodynamiske parametere (k, katt, K m, AH) av enzymatiske reaksjoner, selv om denne søknaden er fremdeles underutnyttet. Som varme endringer spontant forekomme under enzymatisk katalyse, betyr ITC krever noen modifikasjon eller merking av systemet under analysen og kan utføres i løsning. Videre krever fremgangsmåten lille mengde materiale. Disse egenskapene gjør ITC en uvurderlig, kraftig og unike verktøy for å studere enzymkinetikk i flere applikasjoner, slik som, for eksempel, drug discovery. <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; I dette arbeidet en eksperimentell ITC-basert metode for å kvantifisere kinetikk og termodynamikk av enzymatiske reaksjoner er grundig beskrevet. Denne metoden blir anvendt for å bestemme k katt og K M av den enzymatiske hydrolyse av urea ved Canavalia ensiformis (jack bean) urease. Beregning av iboende molar entalpi (AH int) av reaksjonen utføres. De verdier som således ble oppnådd er i overensstemmelse med tidligere data som er rapportert i litteraturen, noe som viser påliteligheten av metodikk.

Urease (EC 3.5.1.5; urea amidohydrolase) er en multisubunit nikkelholdig enzym som finnes i Archea, bakterier, encellede eukaryote og planter. Dette protein fungerer i det siste trinnet av organisk nitrogen minera, katalysering av hydrolyse av urea til ammoniakk og karbamat, som spontant spaltes til å gi et andre molekyl av ammoniakk og bikarbonat (Ligning 6) 12. <img fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/51487/51487eq6.jpg" width="450" /> (6) <p class...

Watch this Scientific Journal Video about Hot Biological Catalysis: Isothermal Titration Calorimetry to Characterize Enzymatic Reactions at JoVE.com

Hot Biological Catalysis: Isothermal Titration Calorimetry to Characterize Enzymatic Reactions

Isoterm titrering kalorimetri tiltak varmestrøm løslatt eller absorberes i kjemiske reaksjoner. Denne metoden kan brukes til å kvantifisere enzymkatalyse. I denne utredningen, protokollen for instrumental oppsett, eksperiment, og dataanalyse er generelt beskrevet, og brukes på karakterisering av enzymatisk urea hydrolyse av jack bønne urease.

Hot Biological Katalyse: Isotermisk Titrering Calorimetry å karakter enzymatiske reaksjoner

Isothermal titration calorimetry (ITC) is a well-described technique that measures the heat released or absorbed during a chemical reaction, using it as ...

Education

Research

JoVE Core

JoVE Journal

Organic Chemistry

Chemistry

Unit 1

Thermochemistry

Thermodynamics and Chemical Kinetics

SCIENTISTS IN ACTION

Preparation of Silica Nanoparticles Through Microwave-assisted Acid-catalysis

Microwave-assisted synthetic techniques were used to quickly and reproducibly produce silica nanoparticle sols using an acid catalyst with nanoparticle ...

Retropinacol/Cross-pinacol Coupling Reactions - A Catalytic Access to 1,2-Unsymmetrical Diols

Retropinacol / Cross-pinacol kobling reaksjoner - En Catalytic Tilgang til 1,2-usymmetriske toverdige

Unsymmetrical 1,2-diols are hardly accessible by reductive pinacol coupling processes. A successful execution of such a transformation is bound to a clear ...

Mizoroki-Heck Cross-coupling Reactions Catalyzed by Dichloro{bis[1,1',1''-(phosphinetriyl)tripiperidine]}palladium Under Mild Reaction Conditions

Mizoroki-Heck Cross-coupling Reactions Catalyzed by Dichloro{bis[1,1',1''-phosphinetriyltripiperidine]}palladium Under Mild Reaction Conditions

Mizoroki-Heck Cross-kobling reaksjoner katalysert av Dichloro {bis [1,1 &#39;, en&#39;&#39; - (phosphinetriyl) tripiperidine]} palladium Under mild reaksjon betingelser

Dichloro-bis(aminophosphine) complexes of palladium with the general formula of [(P{(NC5H10)3-n(C6H11)n})2Pd(Cl)2] (where n = 0-2), belong to a new family ...

Light-driven Enzymatic Decarboxylation

Lys-drevet Enzymatisk dekarboksylering

Oxidoreductases belong to the most-applied industrial enzymes. Nevertheless, they need external electrons whose supply is often costly and challenging. ...

Dissolution Dynamic Nuclear Polarization Instrumentation for Real-time Enzymatic Reaction Rate Measurements by NMR

Oppløsning Dynamic Nuclear Polarisering Instrumentering for Real-time enzymatiske reaksjonen rate målinger av NMR

The main limitation of NMR-based investigations is low sensitivity. This prompts for long acquisition times, thus preventing real-time NMR measurements of ...

A Protocol for Safe Lithiation Reactions Using Organolithium Reagents

En protokoll for sikker litium Reaksjoner Bruke organolitiumreagenser

Organolithium reagents are powerful tools in the synthetic chemist&#39;s toolbox. However, the extreme pyrophoric nature of the most reactive reagents ...

Enzymatic Cascade Reactions for the Synthesis of Chiral Amino Alcohols from L-lysine

Enzymatisk Cascade reaksjoner for syntese av Chiral Amino alkoholer fra L-lysine

Amino alcohols are versatile compounds with a wide range of applications. For instance, they have been used as chiral scaffolds in organic synthesis. ...

Employing Pressurized Hot Water Extraction (PHWE) to Explore Natural Products Chemistry in the Undergraduate Laboratory

Employing Pressurized Hot Water Extraction PHWE to Explore Natural Products Chemistry in the Undergraduate Laboratory

Ansette trykksatt varmtvann utvinning (PHWE) for utforske naturprodukter kjemi i Undergraduate laboratoriet

A recently developed pressurized hot water extraction (PHWE) method which utilizes an unmodified household espresso machine to facilitate natural products ...

Imine Metathesis by Silica-Supported Catalysts Using the Methodology of Surface Organometallic Chemistry

Iminfunksjon Metathesis av silica-støttede katalysatorer ved hjelp av metoder for overflate organometalliske kjemi

With this protocol, a well-defined singlesite silica-supported heterogeneous catalyst [(&#8801;Si-O-)Hf(=NMe)(&#951;1-NMe2)] is designed and prepared ...

Enzymatic Synthesis of Epoxidized Metabolites of Docosahexaenoic, Eicosapentaenoic, and Arachidonic Acids

Enzymatisk syntese av Epoxidized metabolitter av dokosaheksaensyre, eikosapentaensyre, og arachidonic syrer

The epoxidized metabolites of various polyunsaturated fatty acids (PUFAs), termed epoxy fatty acids, have a wide range of roles in human physiology. These ...