ونود أن نعترف الصندوق المشترك NIH - البروتين القبض على الكواشف برنامج لتمويل التنمية في اختيار الأجسام المضادة وتوصيف خط أنابيب المؤتلف الضد الشبكة والمؤسسة الكندية للإبداع للشراء التمويل من منصة اختيار الروبوتية.

1. مستضد الجيل ملاحظة: المجالات مستضد يمكن توليفها واستنساخ من قبل مجموعة متنوعة من الباعة التجارية إلى-IPTG محرض التعبير بناء المناسب. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحويل بنيات التعبير إلى المختص كيميائيا، T1-فج...

<ol>
	<li>Winter, G., Milstein, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Man-made+antibodies.">Man-made antibodies.</a> Nature. 349, 293-299 (1991).</li><li>Miersch, S., Sidhu, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthetic+antibodies:+concepts,+potential+and+practical+considerations.">Synthetic antibodies: concepts, potential and practical considerations.</a> Methods. 57, 486-498 (2012).</li><li>Schofield, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+phage+display+to+high+throughput+antibody+generation+and+characterization.">Application of phage display to high throughput antibody generation and characterization.</a> Genome Biol. 8, R254 (2007).</li><li>Hust, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+human+scFv+antibody+generation+pipeline+for+proteome+research.">A human scFv antibody generation pipeline for proteome research.</a> J. Biotechnol. 152, 159-170 (2011).</li><li>Colwill, K., Graslund, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+roadmap+to+generate+renewable+protein+binders+to+the+human+proteome.">A roadmap to generate renewable protein binders to the human proteome.</a> Nat. Methods. 8, 551-558 (2011).</li><li>Mersmann, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+proteome+scale+antibody+selections+using+phage+display.">Towards proteome scale antibody selections using phage display.</a> Nat. Biotechnol. 27, 118-128 (2010).</li><li>Pershad, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generating+a+panel+of+highly+specific+antibodies+to+20+human+SH2+domains+by+phage+display.">Generating a panel of highly specific antibodies to 20 human SH2 domains by phage display.</a> Protein Eng. Des. Sel. 23, 279-288 (2010).</li><li>Turunen, L., Takkinen, K., Soderlund, H., Pulli, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+panning+and+screening+procedure+on+microplates+for+antibody+generation+from+phage+display+libraries.">Automated panning and screening procedure on microplates for antibody generation from phage display libraries.</a> J Biomol. Screen. 14, 282-293 (2009).</li><li>Hughes, R. A., Miklos, A. E., Ellington, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+synthesis:+methods+and+applications.">Gene synthesis: methods and applications.</a> Methods Enzymol. 498, 277-309 (2011).</li><li>Boersma, Y. L., Pluckthun, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DARPins+and+other+repeat+protein+scaffolds:+advances+in+engineering+and+applications.">DARPins and other repeat protein scaffolds: advances in engineering and applications.</a> 22, 849-857 (2011).</li><li>Terpe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overview+of+tag+protein+fusions:+from+molecular+and+biochemical+fundamentals+to+commercial+systems.">Overview of tag protein fusions: from molecular and biochemical fundamentals to commercial systems.</a> Appl. Microbiol. Biotechnol. 60, 523-533 (2003).</li><li>Lichty, J. J., Malecki, J. L., Agnew, H. D., Michelson-Horowitz, D. J., Tan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+affinity+tags+for+protein+purification.">Comparison of affinity tags for protein purification.</a> Protein Expr. Purif. 41, 98-105 (2005).</li><li>Fellouse, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+generation+of+synthetic+antibodies+from+highly+functional+minimalist+phage-displayed+libraries.">High-throughput generation of synthetic antibodies from highly functional minimalist phage-displayed libraries.</a> J. Mol. Biol. 373, 924-940 (2007).</li><li>Paduch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generating+conformation-specific+synthetic+antibodies+to+trap+proteins+in+selected+functional+states.">Generating conformation-specific synthetic antibodies to trap proteins in selected functional states.</a> Methods. 60, 3-14 (2013).</li><li>Studier, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+production+by+auto-induction+in+high+density+shaking+cultures.">Protein production by auto-induction in high density shaking cultures.</a> Protein Expr. Purif. 41, 207-234 (2005).</li><li>Huang, H., Sidhu, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studying+binding+specificities+of+peptide+recognition+modules+by+high-throughput+phage+display+selections.">Studying binding specificities of peptide recognition modules by high-throughput phage display selections.</a> Methods Mol. Biol. 781, 87-97 (2011).</li><li>McLaughlin, M. E., Sidhu, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+and+analysis+of+peptide-recognition+domain+specificities+by+phage+display+and+deep+Sequencing.">Engineering and analysis of peptide-recognition domain specificities by phage display and deep Sequencing.</a> Methods Enzymol. 523, 327-349 (2013).</li><li>Bradford, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+and+sensitive+method+for+the+quantitation+of+microgram+quantities+of+protein+utilizing+the+principle+of+protein-dye+binding.">A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding.</a> Anal. Biochem. 72, 248-254 (1976).</li><li>den Engelsman, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+for+the+assessment+of+protein+aggregates+in+pharmaceutical+biotech+product+development.">Strategies for the assessment of protein aggregates in pharmaceutical biotech product development.</a> Pharm. Res. 28, 920-933 (2011).</li><li>Lavinder, J. J., Hari, S. B., Sullivan, B. J., Magliery, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+thermal+scanning:+a+general,+rapid+dye-binding+thermal+shift+screen+for+protein+engineering.">High-throughput thermal scanning: a general, rapid dye-binding thermal shift screen for protein engineering.</a> J. Am. Chem. Soc. 131, 3794-3795 (2009).</li><li>Fellouse, F. A., Sidhu, S. S., Howard, G. C., MR, K. a. s. e. r. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Making antibodies in bacteria. in Making and Using Antibodies: A Practical Handbook. , 151-172 (2013).</li><li>Acton, T. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+protein+samples+for+NMR+structure,+function,+and+small-molecule+screening+studies.">Preparation of protein samples for NMR structure, function, and small-molecule screening studies.</a> Methods in Enzymology. 483, 23-47 (2011).</li><li>Mahon, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+interrogation+of+a+minimalist+synthetic+CDR-H3+library+and+its+ability+to+generate+antibodies+with+therapeutic+potential.">Comprehensive interrogation of a minimalist synthetic CDR-H3 library and its ability to generate antibodies with therapeutic potential.</a> J. Mol. Biol. 425, 1712-1730 (2013).</li><li>Persson, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CDR-H3+diversity+is+not+required+for+antigen+recognition+by+synthetic+antibodies.">CDR-H3 diversity is not required for antigen recognition by synthetic antibodies.</a> J. Mol. Biol. 425, 803-811 (2013).</li><li>Bradbury, A. R., Sidhu, S., Dubel, S., McCafferty, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+natural+antibodies:+the+power+of+in+vitro+display+technologies.">Beyond natural antibodies: the power of in vitro display technologies.</a> Nat. Biotechnol. 29, 245-254 (2011).</li></ol>

عند إجراء التحديدات في الأجسام المضادة في المختبر، وهما المحددات الأساسية لنجاح الاختيار هي 1) عزل أهداف المستضدات مطوية جيدا لاختيار عليه و2) توفر وظيفية مكتبة تنوع الأجسام المضادة عالية. في كثير من الحالات، وتوافر كميات كافية من مطوية جيدا، بروتين كامل طو...

مع بداية عصر ما بعد الجينوم، وتوافر الكواشف ملزمة عالية الجودة لتوصيف وتعدل البروتينات ضروري لفتح البحوث الجديدة والسبل العلاجية. تستمر الأجسام المضادة لتكون حاسمة لكلا الباحثين الأكاديميين والصناعية، والبحوث الأساسية وأدوات التشخيص والعلاجات المحتملة. ليس من المستغرب، فقد كان هناك نمو هائل من شركات تطوير الأجسام المضادة العقد، ومعظمها تعتمد على التقنيات التقليدية هجين لتوليد الأجسام المضادة مخصصة. ومع ذلك، في المختبر التحديد باستخدام مكتبات الضد-عرض فج أصبحت تكنولوجيا بديلة قوية يمكن أن توفر مزايا فريدة والنجاح حيث التقنيات التقليدية يمكن أن تواجه القيود 1 و 2. في ضوء طلب كبير على الأجسام المضادة ذات جودة عالية كما أدوات البحث، وهما التحديات الرئيسية لتوليد الأجسام المضادة المتجددة هي 1) الإنتاجية الاختيار و2) مركبات مستضدailability. ووصف عدد من الجماعات الآن في خطوط الأنابيب اختيار المختبر تهدف إلى زيادة الإنتاجية ومعدل تحديد الأجسام المضادة. هذه الأوصاف بالتفصيل مجموعة متنوعة من النهج قابلة للحياة أن تشمل اختيار إما على كامل طول تستهدف 3،4، أو هيكليا المجالات 5،6،7 ذات الصلة، سواء باستخدام 6،8 أو 3،4 مخططات مستضد تجميد لوحة المستندة على أساس حبة. وبالإضافة إلى ذلك، حققت تزايد اعتماد تقنيات التوليف الجيني 9 جيل مستضد المنهجي، ولا سيما من المجالات معزولة، معقول فعالة من حيث التكلفة، ويمكن أن يحتمل التخفيف من صعوبة في الحصول على كميات كافية من النقى كامل طول مستضد. باستخدام تقنيات اثنين جنبا إلى جنب، ولقد ابتكر خط أنابيب مكتفية ذاتيا وتوليد المستضدات تحجيم واختيار الأجسام المضادة التي من شأنها تمكين العزلة موازية من الأجسام المضادة لمجموعات كبيرة من المجالات المستضد أعرب وتسهيل تطوير الكاشف لتشاracterizing فئات كاملة من البروتينات المرتبطة هيكليا أو وظيفيا. من أجل تحقيق هذا الهدف، وهو خط أنابيب المتكاملة التي تم تطويرها من الأزواج في تحديد سيليكون والمجالات مستضد التعبير عنه، والتوليف الجيني والتعبير البكتيرية عالية الإنتاجية من المستضدات وعرض فج التحديدات الأجسام المضادة قابلة للتطوير. هذا الخط يتطلب البنية التحتية الأساسية الوحيدة المتاحة لمعظم مختبرات علوم الحياة (بما في ذلك المكتبات الأجسام المضادة التي تكون متاحة على نحو متزايد من خلال ترخيص أو اتفاق نقل المواد)، ولكن هو أيضا قابلة للالتشغيل الآلي للاستخدام على نطاق صناعي. باستخدام هذا البروتوكول، فمن الممكن لتوليد مئات من المجالات مستضد الموسومة تقارب، وعزل روتيني شظايا الأجسام المضادة محددة للغاية لكثير من هذه المستضدات. وقد أظهرت تكنولوجيا العرض فج التوافق تظاهر مع مجموعة واسعة من صيغ المؤتلف تقارب كاشف بما في ذلك القوات المسلحة البوروندية، scFv، والمجالات اناث مستقلة ومجموعة متزايدة من &quot;الأطر البديلة&quot; صغيرة (المصممة ankyrin تكرار البروتينات (DARPINS)، فبرونيكتين (الجبهة الوطنية)، وأكثر المجالات lipocalin 10). وتقتصر المناقشة في هذا المثال إلى عزل فاب شظايا الأجسام المضادة، على الرغم من أنه يفترض هذه الأساليب يمكن أن تتكيف مع أنواع أخرى من المكتبات. باستخدام هذه التكنولوجيا، فابز مع انخفاض nanomolar تقارب للمشاريع الصغيرة، الموسومة المجالات بما في ذلك المجالات بروتين عامل النسخ، المجالات SH2، وقد تم اختيار البروتينات وغيرها ملزم RNA بنجاح، وكثير منها ربط بروتين كامل طول ووظيفية في المناعية مثل المناعي ، مناعي والمناعية. الأهم من ذلك، استنساخ ملزمة المؤتلف قابلة للتجديد بالكامل ويمكن إعادة لدت-من التعبير يبني عبر البكتيرية طرح زيادة إنتاج الاتساق، استنساخ والفعالية من حيث التكلفة، وبالتالي تبرير حساب دقيق التحقق من صحة استنساخ. في هذا البروتوكول الاضافيocol والفيديو المصاحب، وأثبتت الأساليب الأساسية لاختيار الأجسام المضادة من المكتبات عرض فج باستخدام المجالات مستضد يجمد. هذه طريقة معينة توظف المجالات البروتين الموسومة GST ثبتوا عن طريق الامتزاز السلبي في لوحات microwell، على الرغم من علامات أخرى 11،12،13 وصيغ اختيار 13،14،2 كما تم استخدامها بنجاح. الاعتبارات الهامة لإعداد وإجراء التحديدات مع مراقبة مواز من المعلمات اختيار تهدف إلى تحديد وعزل أجسام مضادة نسيلي المخصب خصيصا من أجل التحقق مفصلة.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="470">
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td colspan="4" height="22" style="height:22px;width:471px;">MATERIALS</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td colspan="2" height="43" style="height:43px;width:249px;">Name</td>
			<td style="width:135px;">Company</td>
			<td style="width:87px;">Catalog Number</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td colspan="2" height="40" style="height:40px;width:249px;">New Brunswick Innova44 stackable incubator shaker</td>
			<td style="width:135px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:87px;">M1282-0004</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td colspan="2" height="40" style="height:40px;width:249px;">Liquidator 96 channel manual benchtop pipetting system</td>
			<td style="width:135px;">Anachem Ltd</td>
			<td style="width:87px;">LIQ-96-200</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td colspan="2" height="22" style="height:22px;width:249px;">Microplate shaker</td>
			<td style="width:135px;">VWR</td>
			<td style="width:87px;">12620-926</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td colspan="2" height="40" style="height:40px;width:249px;">ThermoScientific Sorvall ST-40 benchtop centrifuge</td>
			<td style="width:135px;">Thermo Product</td>
			<td style="width:87px;">75004525</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td colspan="2" height="40" style="height:40px;width:249px;">ELx405 Select Deep Well Microplate Washer</td>
			<td style="width:135px;">Biotek</td>
			<td>ELX405USD</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td colspan="2" height="41" style="height:41px;width:249px;">Custom High Throughput Automated Phage Selection Robot</td>
			<td style="width:135px;">S&#38;P Robotics</td>
			<td style="width:87px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="2" height="21" style="height:21px;width:249px;">Plastic conical Falcon tube: 50 mL</td>
			<td style="width:135px;">VWR</td>
			<td style="width:87px;">21008-178</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="2" height="21" style="height:21px;width:249px;">Plastic conical Falcon tube: 15 mL</td>
			<td style="width:135px;">VWR</td>
			<td style="width:87px;">89039-668</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="2" height="21" style="height:21px;width:249px;">Axygen 1.7 mL microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:135px;">Corning</td>
			<td style="width:87px;">MCT-175-L-C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="2" height="21" style="height:21px;width:249px;">96-well/384-well Maxisorp plate</td>
			<td style="width:135px;">Sigma</td>
			<td style="width:87px;">M9410-1CS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="2" height="21" style="height:21px;width:249px;">Corning 96-well V-bottom deep-well block</td>
			<td style="width:135px;">Corning</td>
			<td style="width:87px;">3960</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="2" height="21" style="height:21px;width:249px;">Axygen Mini-tube 96-well sterile microplate blue box</td>
			<td style="width:135px;">Corning</td>
			<td style="width:87px;">AXY-MTS-06-C-R-S</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="2" height="21" style="height:21px;width:249px;">Breathable adhesive plate sealing film</td>
			<td style="width:135px;">VWR</td>
			<td style="width:87px;">60941-084</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td colspan="4" height="22" style="height:22px;width:471px;">REAGENTS</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td colspan="2" height="43" style="height:43px;width:249px;">Name</td>
			<td style="width:135px;">Company</td>
			<td style="width:87px;">Catalog Number</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td colspan="2" height="22" style="height:22px;width:249px;">polyethylene glycol</td>
			<td style="width:135px;">Bioshop</td>
			<td style="width:87px;">PEG800.1</td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td colspan="2" height="18" style="height:18px;">yeast extract</td>
			<td>Bioshop</td>
			<td>YEX401.1</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td colspan="2" height="22" style="height:22px;width:249px;">bio-tryptone</td>
			<td style="width:135px;">Bioshop</td>
			<td style="width:87px;">TRP402.1</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td colspan="2" height="22" style="height:22px;width:249px;">N-Z amine</td>
			<td style="width:135px;">Sigma</td>
			<td style="width:87px;">C7290</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td colspan="2" height="22" style="height:22px;width:249px;">glucose</td>
			<td style="width:135px;">Sigma</td>
			<td style="width:87px;">G8270-1KG</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td colspan="2" height="22" style="height:22px;width:249px;">lactose</td>
			<td style="width:135px;">Bioshop</td>
			<td style="width:87px;">LAC234</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td colspan="2" height="22" style="height:22px;width:249px;">glycerol</td>
			<td style="width:135px;">Bioshop</td>
			<td>GLY001.500</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td colspan="2" height="22" style="height:22px;width:249px;">carbenicillin&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Bioshop</td>
			<td style="width:87px;">CAR544.10</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td colspan="2" height="22" style="height:22px;width:249px;">kanamycin</td>
			<td style="width:135px;">Bioshop</td>
			<td style="width:87px;">KAN201.25</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td colspan="2" height="22" style="height:22px;width:249px;">tetracycline&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Bioshop</td>
			<td style="width:87px;">TET701.25</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td colspan="2" height="43" style="height:43px;width:249px;">Tween 20</td>
			<td style="width:135px;">Bioshop</td>
			<td style="width:87px;">TWN510.500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="2" height="21" style="height:21px;width:249px;">monobasic potassium phophate</td>
			<td style="width:135px;">Bioshop</td>
			<td style="width:87px;">PPM302.1</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="2" height="21" style="height:21px;width:249px;">dibasic sodium phosphate</td>
			<td style="width:135px;">Anachemia</td>
			<td style="width:87px;">84486-440</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="2" height="21" style="height:21px;width:249px;">sodium chloride</td>
			<td style="width:135px;">Bioshop</td>
			<td style="width:87px;">SOD001.10</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="2" height="21" style="height:21px;width:249px;">potassium chloride</td>
			<td style="width:135px;">Bioshop</td>
			<td style="width:87px;">POC308.1</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td colspan="2" height="20" style="height:20px;width:249px;">calcium chloride</td>
			<td style="width:135px;">Bioshop</td>
			<td style="width:87px;">CCL302.500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="2" height="21" style="height:21px;width:249px;">magnesium sulphate</td>
			<td style="width:135px;">EMD</td>
			<td style="width:87px;">MX0070-1</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="2" height="21" style="height:21px;width:249px;">magnesium chloride</td>
			<td style="width:135px;">Bioshop</td>
			<td style="width:87px;">MAG510.500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="2" height="21" style="height:21px;width:249px;">NH4Cl</td>
			<td style="width:135px;">Amresco</td>
			<td style="width:87px;">0621-1KG</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="2" height="21" style="height:21px;width:249px;">Na2SO4</td>
			<td style="width:135px;">Bioshop</td>
			<td style="width:87px;">SOS513.500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="2" height="21" style="height:21px;width:249px;">agar</td>
			<td style="width:135px;">Bioshop</td>
			<td style="width:87px;">AGR001.500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="2" height="21" style="height:21px;width:249px;">SybrSafe DNA gel stain</td>
			<td style="width:135px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:87px;">S33102</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="2" height="21" style="height:21px;width:249px;">phosphoric acid</td>
			<td style="width:135px;">Acros Organics</td>
			<td style="width:87px;">201140010</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="2" height="21" style="height:21px;width:249px;">lysozyme</td>
			<td style="width:135px;">Bioshop</td>
			<td style="width:87px;">LYS702.25</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="2" height="21" style="height:21px;width:249px;">benzonase</td>
			<td style="width:135px;">Novagen</td>
			<td style="width:87px;">71205</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:139px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:135px;">Bioshop</td>
			<td style="width:87px;">TRX506.500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="2" height="21" style="height:21px;width:249px;">protease inhibitor cocktail tablets</td>
			<td style="width:135px;">Roche</td>
			<td style="width:87px;">11 836 170 001</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td colspan="2" height="22" style="height:22px;width:249px;">Ni-NTA resin&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Qiagen</td>
			<td style="width:87px;">1018240</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td colspan="2" height="42" style="height:43px;width:249px;">1000x helper phage (M13K07) stock (1013 phage per mL)</td>
			<td style="width:135px;">NEB</td>
			<td style="width:87px;">N0315S</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="2" height="39" rowspan="2" style="height:40px;width:249px;">HRP conjugated M13-specific antibody (anti-M13-HRP).</td>
			<td rowspan="2" style="width:135px;">GE Healthcare</td>
			<td rowspan="2" style="width:87px;">27-9241-01</td>
		</tr>
		<tr height="18">
		</tr>
		<tr height="44">
			<td colspan="2" height="44" style="height:44px;width:249px;">TMB substrate: mix equal volumes of TMB and H2O2 peroxidase substrate&#160;</td>
			<td style="width:135px;">KPL</td>
			<td style="width:87px;">50-76-00</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td colspan="2" height="22" style="height:22px;width:249px;">dNTPs</td>
			<td style="width:135px;">Biobasic</td>
			<td style="width:87px;">DD0056</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td colspan="2" height="22" style="height:22px;width:249px;">Taq polymerase</td>
			<td style="width:135px;">Genscript</td>
			<td style="width:87px;">E00007</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td colspan="2" height="22" style="height:22px;width:249px;">Exonuclease</td>
			<td style="width:135px;">GE Healthcare&#160;</td>
			<td style="width:87px;">EZ0073X-EZ</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td colspan="2" height="22" style="height:22px;width:249px;">Shrimp alkaline phosphatase</td>
			<td style="width:135px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:87px;">E70092Z-EZ</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

scalable high throughput selection from  phage-displayed synthetic antibody libraries

الطلب على الأجسام المضادة التي تلبي احتياجات كل من تطبيقات البحوث الأساسية والسريرية عالية، وسوف تزيد بشكل كبير في المستقبل. ومع ذلك، فمن الواضح أن التقنيات التقليدية ليست وحيدة النسيلة وحدها تصل إلى هذه المهمة. وقد أدى ذلك إلى تطوير أساليب بديلة لتلبية الطلب على جودة عالية والكواشف تقارب المتجددة لجميع العناصر يمكن الوصول إليها من بروتيوم. ولتحقيق هذه الغاية، وقد وضعت أساليب إنتاجية عالية لإجراء مختارات من المكتبات الأجسام المضادة الاصطناعية عرض فج للتطبيقات التي تنطوي على مستضدات متنوعة والأمثل لإنتاجية السريع والنجاح. هنا، يتم وصف بروتوكول في التفاصيل التي توضح مع مظاهرة الفيديو اختيار موازية من الحيوانات المستنسخة فاب-فج من المكتبات التنوع عالية ضد مئات الأهداف باستخدام معالج السائل اليدوي 96 قناة أو النظام الآلي الروبوتات. باستخدام هذا البروتوكول، يمكن لمستخدم واحد تولد المئات من مولدات المضادات،تحديد الأجسام المضادة لهم بالتوازي والتحقق من صحة الأجسام المضادة ملزمة في غضون 6-8 أسابيع. يسلط عليها الضوء هي: ط) شكل مستضد قابلة للحياة، والثاني) توصيف مستضد الاختيار، الثالث) الخطوات الحاسمة التي تؤثر في اختيار من الحيوانات المستنسخة محددة وعالية تقارب، والرابع) سبل فعالية اختيار رصد ومرحلة مبكرة الأجسام المضادة استنساخ التوصيف. مع هذا النهج، لقد حصلنا على شظايا الأجسام المضادة الاصطناعية (فابز) إلى العديد من الفئات المستهدفة بما في ذلك مستقبلات غشاء مسار واحد، الهرمونات تفرز بروتين، والبروتينات داخل الخلايا متعددة المجالات. يتم تحويل هذه الشظايا بسهولة إلى الأجسام المضادة كامل طول وتم التحقق من صحة لعرض تقارب عالية وخصوصية. وعلاوة على ذلك، فقد ثبت لتكون وظيفية في مجموعة متنوعة من المناعية القياسية بما في ذلك غرب النشاف، ELISA، المناعي الخلوي، مناعي وفحوصات ذات الصلة. وهذه المنهجية تسريع اكتشاف الأجسام المضادة، وفي نهاية المطاف يقربنا من تحقيق هدف سو توليد الطاقة المتجددة، والأجسام المضادة ذات جودة عالية للبروتيوم.

وقد تم استخدام بروتوكول الموصوفة هنا لعزل شظايا الأجسام المضادة لمجموعة متنوعة من كلا structurally- والمتعلقة ظيفيا المجالات مستضد من اندماجي-عرض فج المكتبات فاب بشكل متواز. القضايا المتعلقة توافر مستضد يمكن التحايل، في كثير من الحالات، من خلال تحديد سيليكون في المجالات ...

Watch this Scientific Journal Video about Scalable High Throughput Selection From  Phage-displayed Synthetic Antibody Libraries at JoVE.com

Scalable High Throughput Selection From  Phage-displayed Synthetic Antibody Libraries

تحجيم إنتاجية عالية التحديد من المكتبات الأجسام المضادة الاصطناعية-عرض فاجي

ووصف الأسلوب مع مرافقة البصرية لإجراء قابلة لل، التحديدات إنتاجية عالية من اندماجي المكتبات الأجسام المضادة الاصطناعية عرض فج ضد المئات من مولدات المضادات في وقت واحد. باستخدام هذا النهج الموازي، ونحن قد عزل شظايا الأجسام المضادة التي تظهر تقارب عالية وخصوصية لمستضدات المتنوعة التي وظيفية في المناعية القياسية.

The demand for antibodies that fulfill the needs of both basic and clinical research applications is high and will dramatically increase in the future. ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Separation of Single-stranded DNA, Double-stranded DNA and RNA from an Environmental Viral Community Using Hydroxyapatite Chromatography

فصل واحدة الذين تقطعت بهم السبل الحمض النووي ، والحمض النووي المزدوج تقطعت بهم السبل ، والحمض النووي الريبي من جالية الفيروسية البيئة باستخدام الكروماتوغرافيا هيدروكسيباتيت

Viruses, particularly bacteriophages (phages), are the most numerous biological entities on Earth1,2.  Viruses modulate host cell abundance and diversity, ...

High-throughput Detection Method for Influenza Virus

الإنتاجية العالية لطريقة الكشف عن فيروس الإنفلونزا

Influenza virus is a respiratory pathogen that causes a high degree of morbidity and mortality every year in multiple parts of the world. Therefore, ...

Quantitative High-throughput Single-cell Cytotoxicity Assay For T Cells

الكمية عالي الإنتاجية الفحص السمسة وحيدة الخلية لخلايا T

Cancer immunotherapy can harness the specificity of  immune response to target and eliminate tumors. Adoptive cell therapy (ACT)  based on the adoptive ...

High-throughput Screening for Broad-spectrum Chemical Inhibitors of RNA Viruses

الإنتاجية العالية للفحص واسع الطيف الكيميائية مثبطات الحمض النووي الريبي الفيروسات

RNA viruses are responsible for major human diseases such as flu, bronchitis, dengue, Hepatitis C or measles. They also represent an emerging threat ...

ScanLag: High-throughput Quantification of Colony Growth and Lag Time

ScanLag: عالية الإنتاجية الكمي لمستعمرة النمو والفارق الزمني

Growth dynamics are fundamental characteristics of microorganisms. Quantifying growth precisely is an important goal in microbiology. Growth dynamics are ...

High-throughput Gene Tagging in Trypanosoma brucei

High-throughput Gene Tagging in Trypanosoma brucei

الإنتاجية العالية جين توصيف في<em&gt; المثقبية البروسية</em

Improvements in mass spectrometry, sequencing and bioinformatics have generated large datasets of potentially interesting genes. Tagging these proteins ...

Construction of Synthetic Phage Displayed Fab Library with Tailored Diversity

بناء بالعاثية الاصطناعية عرض مكتبة القوات المسلحة البوروندية مع التنوع مصممة

Demand for monoclonal antibodies (mAbs) in basic research and medicine is increasing yearly. Hybridoma technology has been the dominant method for mAb ...

A High-throughput, High-content, Liquid-based C. elegans Pathosystem

A High-throughput, High-content, Liquid-based C. elegans Pathosystem

الفائق، والمحتوى السامي، المستندة إلى سائل C. ايليجانس باثوسيستيم

The number of new drugs identified by traditional, in vitro screens has waned, reducing the success of this approach in the search for new weapons to ...

A High-throughput Shigella-specific Bactericidal Assay

A High-throughput Shigella-specific Bactericidal Assay

الفائق دوسنتاريا-مقايسة جراثيم معينة

Serum bactericidal assays (SBAs) measure the functional activity of antibodies and have been used for many decades. SBAs directly measure antibody killing ...

Targeted Antibody Blocking by a Dual-Functional Conjugate of Antigenic Peptide and Fc-III Mimetics (DCAF)

Targeted Antibody Blocking by a Dual-Functional Conjugate of Antigenic Peptide and Fc-III Mimetics DCAF

حجب الأجسام المضادة المستهدفة بواسطة متقارن مزدوج الوظائف من الببتيد المضاد للجينات وFc-III Mimetics (DCAF)

Elimination of harmful antibodies from organisms is a valuable approach for the intervention of antibody-associated diseases, such as Dengue hemorrhagic ...