Name: vaccinia reporter viruses for quantifying viral function at all stages of gene expression
Uploaded: 2014-05-15T13:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Vaccinia Reporter Viruses for Quantifying Viral Function at All Stages of Gene Expression at JoVE.com

אנו מודים Siga טכנולוגיות (Corvallis, OR) למתן ST-246. DKR נתמכה על ידי מענק NIH אימונים באימונולוגיה באוניברסיטת בוסטון (5T32AI 7309). עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי P41 086,180, NIH RO1AI1096159-01, וRO3 (לJHC).

1. תאי פלייט <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתק את תאי הלה מהצלחת ולדלל בתקשורת צמיחה (DMEM, 2 L-שפע מ&quot;מ, 10% FBS) לכ 2.0 x 10 5 תאים / מיליליטר. לוותר 100 μl / גם בצלחת שחורה עם קירות, ברורה שטוחה תחתונה 96 היטב (20,000 תאים / טוב). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה...

<ol>
	<li>Yen, J., Golan, R., Rubins, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vaccinia+virus+infection+&amp;+temporal+analysis+of+virus+gene+expression:+part+1.">Vaccinia virus infection &amp; temporal analysis of virus gene expression: part 1.</a> J Vis Exp. 26 (26), (2009).</li><li>Hansen, S. G., Cope, T. A., Hruby, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BiZyme:+a+novel+fusion+protein-mediating+selection+of+vaccinia+virus+recombinants+by+fluorescence+and+antibiotic+resistance.">BiZyme: a novel fusion protein-mediating selection of vaccinia virus recombinants by fluorescence and antibiotic resistance.</a> BioTechniques. 32 (5), 1182-1187 (2002).</li><li>Popov, S., Mirshahidi, S., Essono, S., Song, R., Wang, X., Ruprecht, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+recombinant+vaccinia+viruses+via+green+fluorescent+protein+selection.">Generation of recombinant vaccinia viruses via green fluorescent protein selection.</a> DNA and Cell Biology. 28 (3), 103-108 (2009).</li><li>Bartee, E., Mohamed, M. R., Lopez, M. C., Baker, H. V., McFadden, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+addition+of+tumor+necrosis+factor+plus+beta+interferon+induces+a+novel+synergistic+antiviral+state+against+poxviruses+in+primary+human+fibroblasts.">The addition of tumor necrosis factor plus beta interferon induces a novel synergistic antiviral state against poxviruses in primary human fibroblasts.</a> Journal of Virology. 83 (2), 498-511 (2009).</li><li>Ward, B. M., Moss, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+intracellular+movement+of+vaccinia+virus+virions+containing+a+green+fluorescent+protein-B5R+membrane+protein+chimera.">Visualization of intracellular movement of vaccinia virus virions containing a green fluorescent protein-B5R membrane protein chimera.</a> Journal of Virology. 75 (10), 4802-4813 (2001).</li><li>Johnson, M. C., Damon, I. K., Karem, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid,+high-throughput+vaccinia+virus+neutralization+assay+for+testing+smallpox+vaccine+efficacy+based+on+detection+of+green+fluorescent+protein.">A rapid, high-throughput vaccinia virus neutralization assay for testing smallpox vaccine efficacy based on detection of green fluorescent protein.</a> Journal of Virological Methods. 150 (1-2), 14-20 (2008).</li><li>Dower, K., Rubins, K. H., Hensley, L. E., Connor, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+Vaccinia+reporter+viruses+for+rapid,+high+content+analysis+of+viral+function+at+all+stages+of+gene+expression.">Development of Vaccinia reporter viruses for rapid, high content analysis of viral function at all stages of gene expression.</a> Antiviral Research. 91 (1), 72-80 (2011).</li><li>Dower, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+pyridopyrimidinone+inhibitor+of+orthopoxviruses+from+a+diversity-oriented+synthesis+library.">Identification of a pyridopyrimidinone inhibitor of orthopoxviruses from a diversity-oriented synthesis library.</a> Journal of Virology. 86 (5), 2632-2640 (2012).</li><li>De Clercq, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+Potential+of+the+Acyclic+Nucleoside+Phosphonates+Cidofovir,+Adefovir,+and+Tenofovir+in+Treatment+of+DNA+Virus+and+Retrovirus+Infections.">Clinical Potential of the Acyclic Nucleoside Phosphonates Cidofovir, Adefovir, and Tenofovir in Treatment of DNA Virus and Retrovirus Infections.</a> Clinical Microbiology Reviews. 16 (4), 569-596 (2003).</li><li>Prichard, M. N., Kern, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthopoxvirus+Targets+for+the+Development+of+New+Antiviral+Agents.">Orthopoxvirus Targets for the Development of New Antiviral Agents.</a> Antiviral Research. 10, (2012).</li><li>Fenner, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+successful+eradication+campaign.+Global+eradication+of+smallpox.">A successful eradication campaign. Global eradication of smallpox.</a> Reviews of Infectious Diseases. 4 (5), 916-930 (1982).</li><li>Breman, J. G., Henderson, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Poxvirus+dilemmas--monkeypox,+smallpox,+and+biologic+terrorism.+The+New+England.">Poxvirus dilemmas--monkeypox, smallpox, and biologic terrorism. The New England.</a> Journal of Medicine. 339 (8), 556-559 (1998).</li><li>Baker, R. O., Bray, M., Huggins, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+antiviral+therapeutics+for+smallpox,+monkeypox+and+other+orthopoxvirus+infections.">Potential antiviral therapeutics for smallpox, monkeypox and other orthopoxvirus infections.</a> Antiviral Research. 57, 1-2 (2003).</li><li>Rimoin, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Major+increase+in+human+monkeypox+incidence+30+years+after+smallpox+vaccination+campaigns+cease+in+the+Democratic+Republic+of+Congo.">Major increase in human monkeypox incidence 30 years after smallpox vaccination campaigns cease in the Democratic Republic of Congo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the U S A. 107 (37), 16262-167 (2010).</li><li>Sodeik, B., Griffiths, G., Ericsson, M., Moss, B., Doms, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assembly+of+vaccinia+virus:+effects+of+rifampin+on+the+intracellular+distribution+of+viral+protein+p65.">Assembly of vaccinia virus: effects of rifampin on the intracellular distribution of viral protein p65.</a> Journal of Virology. 68 (2), 1103-1114 (1994).</li><li>Grosenbach, D. W., Jordan, R., Hruby, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+small-molecule+antiviral+ST-246+as+a+smallpox+therapeutic.">Development of the small-molecule antiviral ST-246 as a smallpox therapeutic.</a> Future Virology. 6 (5), 653-671 (2011).</li><li>Broyles, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vaccinia+virus+transcription.">Vaccinia virus transcription.</a> Journal of General Virology. 84 (9), 2293-2303 (2003).</li><li>Condit, R. C., Niles, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+viral+transcription+elongation+and+termination+during+vaccinia+virus+infection.">Regulation of viral transcription elongation and termination during vaccinia virus infection.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Gene Structure and Expression. 1577 (2), 325-336 (2002).</li><li>D&#237;az-Guerra, M., Rivas, C., Esteban, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducible+expression+of+the+2-5A+synthetase/RNase+L+system+results+in+inhibition+of+vaccinia+virus+replication.">Inducible expression of the 2-5A synthetase/RNase L system results in inhibition of vaccinia virus replication.</a> Virology. 227 (1), 220-228 (1997).</li><li>Cohrs, R. J., Condit, R. C., Pacha, R. F., Thompson, C. L., Sharma, O. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+ppp(A2&#8217;p)nA-dependent+RNase+by+a+temperature-sensitive+mutant+of+vaccinia+virus.">Modulation of ppp(A2&#8217;p)nA-dependent RNase by a temperature-sensitive mutant of vaccinia virus.</a> Journal of Virology. 63 (2), 948-951 (1989).</li><li>S&#225;nchez-Puig, J. M., S&#225;nchez, L., Roy, G., Blasco, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Susceptibility+of+different+leukocyte+cell+types+to+Vaccinia+virus+infection.">Susceptibility of different leukocyte cell types to Vaccinia virus infection.</a> Virology Journal. 1 (1), (2004).</li><li>Bengali, Z., Satheshkumar, P. S., Yang, Z., Weisberg, A. S., Paran, N., Moss, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+S2+cells+are+non-permissive+for+vaccinia+virus+DNA+replication+following+entry+via+low+pH-dependent+endocytosis+and+early+transcription.">Drosophila S2 cells are non-permissive for vaccinia virus DNA replication following entry via low pH-dependent endocytosis and early transcription.</a> PLoS One. 6 (2), (2011).</li></ol>

הנה, יש לנו תיארתי את השימוש המעשי של וירוס רב שלבית כתב vaccinia (TrpV), המספק אמצעים לשחזור, בזמן אמת משוב של שכפול נגיף. על ידי שימוש במעכבי poxvirus מוגדר היטב, הצלחנו להראות כי TrpV מגיב באופן עקבי עם המנגנון הבין פעולה עבור כל מעכבי. בעוד וירוס TrpV מספק את המידע המקיף ביותר על הת...

באופן מסורתי, ביטוי וירוס הוא למד תוך שימוש בטכניקות ביולוגיה מולקולריות (סופג למשל צפוני, מערבי סופג, הכלאה microarray, וכו &#39;) 1. בעוד שיטות אלה מסוגלים לספק מידע מפורט ביחס לסיווג שינויי ביטוי של mRNAs או חלבונים הבודדים, הם בדרך כלל לא ניתנים לתהליכים בזמן אמת ותפוקה גבוהה. גישות אלטרנטיביים באמצעות כתבי הקרינה מבוססת יושמו בעבר בעבודה עם poxviruses; עם זאת, הפיתוח והשימוש שלהם כבר מונעים על ידי מטרות מגוונות. מספר שיטות כגון נועדו לבחירה של וירוסי רקומביננטי 2,3. טכניקות אלה מבטאים EGFP על התאגדות וביטוי של ה-DNA אקסוגני משיבוטי vaccinia רקומביננטי מתאימים. באופן דומה, מספר זני vaccinia יציבות להביע EGFP מסיס או חלבוני GFP-tagged הביעו תחת אמרגן vaccinia ילידים היו בשימוש נרחב. אלה typically משמש לכמת כניסת וירוס ושכפול במהלך מבחני נטרול מבוסס נוגדנים, עיכוב כימי, או השוואה של יעילות אנטי 4-6. בעוד וירוסים אלה הוכיחו שימושיים, הם מוגבלים ביכולתם כדי לספק מידע מפורט על הנקודה של עיכוב עקב שימושם של אמרגן מוקדם / מאוחר משמעי אחת נגיפי. גם שיטות קודמות עשו שימוש בחלבון EGFP עם מאפייני אות לרעש שאינו אופטימליים. בשל המורכבות של שכפול poxvirus והמחסור בכלים קיימים לרשות assay שינויים בזמן אמת בביטוי גנים נגיפי, פיתחנו חבילה של וירוסי כתב במה יחיד ורב 7,8. כפי שמתואר בפרסומים קודמים, וירוסים אלה מבטאים אחד, שתיים, או שלושה חלבוני ניאון ספקטרלית להבדיל מיזמי vaccinia ילידים במהלך מוקדם, שלבי ביניים, או מאוחר בזיהום. וירוסים אלה יכולים להיות לנוed כסמן להתקדמות שכפול נגיף באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי והם באותה מידה גם מתאימים למבחני צלחת וקורא המבוסס על תפוקה גבוהה. וירוסים אלה הם קלים לשימוש במקום של סוג בר וירוס, הולך וגדל עם קינטיקה דומה כדי להגיע לכותרות שווה ערך 7. במהלך התכנון וההקמה של הווירוסים הללו, הרבה טיפול נלקח בבחירת fluorophores שיש להם מאפייני אות לרקע גבוהים עם יעילות קיפול מעולה כדי להקל על כימות אמין עם משוב מהיר לשינויים בביטוי (ונוס, mCherry וTagBFP). בנוסף, שילובים של יזמים ויראלי נבחרו אשר מייצרים באיכות גבוהה, ביטוי בשלב מסוים חד משמעי, המספק מידע על מגוון רחב של מוקדם (אמרגן C11R), (אמרגן G8R) ביניים וביטוי גנים (אמרגן F17R) באיחור, בניגוד למעורפל יזמים מוקדם / מאוחר. וירוסים אלה יכולים לשמש ככלי לinvestigating את מחזור החיים של poxvirus, וירוס vaccinia הטיפוסי. הרבה עדיין לא ידוע על האינטראקציה מארח וירוס למרות ההיסטוריה הארוכה של מחקר. Vaccinia הוא מורכב, לייצר מעל 200 חלבונים ייחודיים, אשר רבים מהם המערכת החיסונית ולארח עוינים. לאחר ההדבקה, וירוס vaccinia מתחיל מייד שעתוק mRNA המוקדם. זה הקל על ידי גורמי RNA פולימראז ותעתיק שהועמסו על הגנום הנגיפי במהלך אריזת virion והחזיקו במצב מושהה עד זיהום שלאחר מכן. ביטוי מוקדם זה בעיקר מייצר חלבונים הנדרשים לדיכוי של מערכת חיסון המארח (decapping-mRNA, תפיסת dsRNA, וחלבונים הקולטן דמה כמו גם מעכבים של אפופטוזיס, תגובת לחץ, ושיחה, אילינוי, ואיתות NF-κB) ושכפול הגנום. ביטוי מוקדם מייצר גם גורמי שעתוק הכרחיים לביטוי ביניים. ביטוי ביניים כולל את הביטוי של גורמי שעתוק בשלב מאוחר. זהמפל ביטוי מוביל לייצור של חלבוני נגיף מבניים והאנזימטית בשלבים מאוחרים של זיהום, אשר נחוצים להרכבה של virion vaccinia הבוגרת מלאה. הקבוצה של וירוסי כתב ניאון שלנו מאפשרת להתקדמות מהירה שעשתה בהבנה של הביולוגיה poxvirus. אחת השיטות הנפוצות וזמן רב ביותר בתחום וירולוגיה הוא assay הצמיחה. זה בדרך כלל כרוך בהדבקה של תאים, לחוקק שורה של טיפולים, וירוס קצירה ידי lysing תאים נגועים, וכימות כייל נגיף וכתוצאה מכך על ידי assay פלאק. שימוש בוירוסי הכתב המתואר כאן מאפשר מדידה בזמן אמת של צמיחת וירוס שיכול להיות assayed בקלות ובהשוואה בין מספר רב של טיפולים שבוצעו במקביל. אנו צופים זו קבוצה של חומרים כימיים אשר תשמש בפרוטוקולים שונים לזיהוי שינויים בביטוי הגנים נגיפי בתגובה לטיפול תרופתי, RNAi knockdown, או הגבלת טווח מארח. שיטה זו גם מאפשרת ניתוח גבוה תוכן בקנה מידה גדולה יותר מאשר היו זמין בעבר, מה שמאפשר למסכי תרופה אנטי ויראלית תפוקה גבוהה לשלבים יעד ספציפי מוגדרים של עניין. בעוד טיפולים פוטנציאליים רבים כדי להילחם בזיהום poxvirus זוהו, ה-FDA אישרה רק טיפולים יעילים לטיפול בזיהום poxvirus הם נוקלאוזידים אציקליות פוספונאט, cidofovir, וטיפול עם 9,10 גלובולין חיסוניים vaccinia. למרות מיגור האבעבועות השחורות בשנת 1977 11, poxviruses יישאר איום משמעותי על בריאות אדם 12. הפסקת חיסון רחב היקף נגד וירוס אבעבועות הובילה לרגישות מוגברת לpoxviruses האחר 13. לדוגמא, האזורים של מרכז אפריקה המוגן בעבר על ידי חיסון חווים עלייה חדה בנגיף Monkeypox 14. גם דאגה משמעותית כברהועלה בנוגע הרגישות הסמויה לשחרור מכוון של נגיף אבעבועות. בשל הטיפולים מוגבלים הזמינים כרגע, יש צורך דחוף בפיתוח של טיפולים חדשניים. וירוסי כתב אלה מאפשרים הקרנת מעכבי מולקולה קטנות מהירה ותפוקה גבוהה לעיכוב של שלב מסוים בשכפול נגיף. זיהוי של מעכבים כי יעד שלבי ביטוי ויראלי כרגע לא היעד של עיכוב יהיה להקל על פיתוח של טיפולים משולבים עם עוצמה מוגברת. ניתן ללמוד הרבה על ביולוגיה של תא vaccinia על ידי התבוננות שינויים בביטוי הגנים של כל שלב. הנחתה על ידי כימי או מניפולציה גנטית של תא מארח נגוע מתבטאת בדרך כלל במונחים של כותרות ויראלי מופחתות. עם זאת, על ידי השוואת שינויים בכל שלב של מפל ביטוי ויראלי, ניתן לקבל הבנה של איך כושר וירוס הוא השפעה שלמה יותרed על ידי טיפול מסוים. נתונים אלו הוכחו לתאם גם עם פלט כייל נגיף המסורתי, אלא לספק מידע מכניסטית מפורט יותר, כמו גם יכולות תפוקה גבוהה 7.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1249">
	<tbody>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:747px;">Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium (DMEM)</td>
			<td style="width:231px;">Gibco</td>
			<td style="width:104px;">11995-065</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Fetal Bovine Serum - Optima, Heat Inactivated (FBS)</td>
			<td>Atlanta Biologicals</td>
			<td>S12450H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">200 mM L-Glutamine, (L-glut)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25030-081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">96 Well Flat Clear Bottom Black Polystyrene TC-Treated Microplates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3603</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">384 Well Flat Clear Bottom Black Polystyrene TC-Treated Microplates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3712</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Trypsin, 2X, Sterile, Irradiated</td>
			<td>Worthington Biochemical Corp.</td>
			<td>TRLVMF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Phosphate-Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Dimethyl Sulfoxide, Cell Culture (DMSO)</td>
			<td>American Bioanalytical</td>
			<td>AB03091</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">1-&#946;-D-Arabinofuranosylcytosine&#160; (AraC), MW= 280 g/mol</td>
			<td>SigmaAldrich Co</td>
			<td>C6645</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">isatin &#946; -thiosemicarbazone (IBT), MW= 234 g/mol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC9075202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Rifampicin, MW= 823 g/mol</td>
			<td>SigmaAldrich Co</td>
			<td>R3501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">ST-246, MW= 376 g/mol</td>
			<td>SIGA Labs, Corvallis, OR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">8% Paraformaldehyde (formaldehyde) aqueous solution</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>157-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">TempPlate RT optically clear film</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>2978-2700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Opti-MEM Reduced Serum Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31985-070</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

vaccinia reporter viruses for quantifying viral function at all stages of gene expression

Poxviruses הוא משפחה של וירוסי DNA גדילים כפולים הכוללים פתוגנים פעילים אדם כגון קוף, contagiousum molluscum, ווירוס Contagalo. המשפחה כוללת גם את נגיף האבעבועות השחורות, אבעבועות. בשל המורכבות של שכפול poxvirus, שאלות רבות עדיין נותרו לגבי אסטרטגית ביטוי הגנים שלהם. במאמר זה אנו מתארים את המשגה והשימוש בוירוסי vaccinia רקומביננטי המאפשרים מדידה של שלבי יחיד המרובים של ביטוי גנים נגיפי בפורמט תפוקה גבוהה בזמן אמת. זו מופעלת באמצעות השימוש בחלבוני ניאון ספקטרלית להבדיל כתבים לכל אחד משלושה שלבים בשכפול נגיף. וירוסים אלה מספקים יחס אות לרעש גבוה, תוך שמירה על דפוסי שלב ספציפיים ביטוי, מבחני מבוססי צלחת מאפשרים ותצפיות מיקרוסקופיות של התפשטות נגיף ושכפול. כלים אלה שימושים לגילוי נגיפים, מחקרים של האינטראקציה מארח וירוס, וביו אבולוציוניתמשעמם.

כדוגמא לשימוש האופייני של הווירוסים הללו, וירוס הקרינה-כתב המשולש שימש להשוות את הנקודה של עיכוב של כמה מעכבי poxvirus מוגדרים היטב. תאי הלה היו מצופים ברקמת תרבות מטופלים בעלי קירות שחורות ברור צלחות 96 היטב שטוחות תחתונה וטופחו במש?...

Watch this Scientific Journal Video about Vaccinia Reporter Viruses for Quantifying Viral Function at All Stages of Gene Expression at JoVE.com

Vaccinia Reporter Viruses for Quantifying Viral Function at All Stages of Gene Expression

אנו מתארים את השימוש של וירוס vaccinia כתב ניאון המאפשר מדידה של infectivity הנגיפי וביטוי גנים בזמן אמת דרך הביטוי בשלב מסוים של fluorophores כתב ספקטרלית שונה. אנחנו פירוט שיטה המבוססת על צלחת לזיהוי מדויק השלב שבו שכפול נגיף מושפע בתגובה לעיכוב מולקולה קטן.

וירוסי כתב Vaccinia לכימות פונקציה ויראלי בכל השלבים של ביטוי גנים

Poxviruses are a family of double stranded DNA viruses that include active human pathogens such as monkeypox, molluscum contagiousum, and Contagalo virus. ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Generation of Multivirus-specific T Cells to Prevent/treat Viral Infections after Allogeneic Hematopoietic Stem Cell Transplant

דור Multivirus ספציפיים תאים T כדי למנוע / לטפל זיהומים נגיפיים לאחר השתלת allogeneic תא גזע hematopoietic

Viral infections cause morbidity and mortality in allogeneic hematopoietic stem cell transplant (HSCT) recipients. We and others have successfully ...

'Bioluminescent' Reporter Phage for the Detection of Category A Bacterial Pathogens

&quot;Bioluminescent&quot; כתב phage לצורך זיהוי של קטגוריה פתוגנים חיידקיים

Yersinia pestis and Bacillus anthracis are Category A bacterial pathogens that are the causative agents of the plague and anthrax, respectively 1. ...

Quantitative Analyses of all Influenza Type A Viral Hemagglutinins and Neuraminidases using Universal Antibodies in Simple Slot Blot Assays

ניתוח כמותי של השפעת כל סוג Hemagglutinins ויראלי ו Neuraminidases באמצעות נוגדנים יוניברסל מבחני כתם פשוט חריץ

Hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA) are two surface proteins of influenza viruses which are known to play important roles in the viral life cycle ...

Cost-effective Method for Microbial Source Tracking Using Specific Human and Animal Viruses

חסכונית שיטת מעקב אחר מקור מיקרוביאלית באמצעות וירוסים אדם ובעלי חיים ספציפיים

Microbial contamination of the environment represents a significant health risk. Classical bacterial fecal indicators have shown to have significant ...

Isolation of Fidelity Variants of RNA Viruses and Characterization of Virus Mutation Frequency

בידוד של פידליטי גרסאות של וירוסים RNA ו אפיון תדירות המוטציה וירוס

RNA viruses use RNA dependent RNA polymerases to replicate their genomes. The intrinsically high error rate of these enzymes is a large contributor to the ...

Amplifying and Quantifying HIV-1 RNA in HIV Infected Individuals with Viral Loads Below the Limit of Detection by Standard Clinical Assays

הגברה וכימות HIV-1 RNA אצל אנשים שנדבקו ב-HIV עם המון ויראלי מתחת לגבול של זיהוי על ידי מבחני קלינית רגילה

Amplifying viral genes and quantifying HIV-1 RNA in HIV-1 infected individuals with viral loads below the limit of detection by standard assays (below ...

Establishing a Liquid-covered Culture of Polarized Human Airway Epithelial Calu-3 Cells to Study Host Cell Response to Respiratory Pathogens In vitro

Establishing a Liquid-covered Culture of Polarized Human Airway Epithelial Calu-3 Cells to Study Host Cell Response to Respiratory Pathogens In vitro

הקמת תרבות הנוזלית מכוסית של Airway האנושי המקוטב-3 Calu תאי אפיתל ללמוד תגובת תא מארחת לפתוגנים נשימה<em&gt; במבחנה</em

The  apical and basolateral surfaces of airway epithelial cells demonstrate  directional responses to pathogen exposure in  vivo. Thus, ideal in vitro ...

Mouse Fetal Liver Culture System to Dissect Target Gene Functions at the Early and Late Stages of Terminal Erythropoiesis

עכבר עוברי כבד מערכת התרבות לנתח פונקציות היעד ג&#39;ין בשלבים המוקדמים ומאוחרים של המסוף erythropoiesis

Erythropoiesis involves a dynamic process that begins with committed erythroid burst forming units (BFU-Es) followed by rapidly dividing erythroid colony ...

Intranasal Administration of Recombinant Influenza Vaccines in Chimeric Mouse Models to Study Mucosal Immunity

Intranasal המינהל של החיסונים שפעת רקומביננטי במודלי כימרי עכבר ללמוד חסינות רירית

Vaccines are one of the greatest achievements of mankind, and have saved millions of lives over the last century. Paradoxically, little is known about the ...