Name: assessing species-specific contributions to craniofacial development using quail-duck chimeras
Uploaded: 2014-05-31T14:00:00
Duration: 9 min 38 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing Species-specific Contributions To Craniofacial Development Using Quail-duck Chimeras at JoVE.com

Bu çalışma Diş Ulusal Enstitüsü ve Kranyofasyal Research (NIDCR) F32 hibe (DE021929) JLF ve RAS bir NIDCR R01 hibe DE016402 tarafından finanse edildi

1.. Tungsten iğneler hazırlayın <ol><li> Çubuk viraj değil ki tel kesiciler kullanarak yarısında bir tungsten çubuk kesti. </li><li> 5 borosilikat cam 3/4 Pasteur pipet konik ucundan çubuk geçirin. </li><li> Camdan dışarı çubuk yapışma yaklaşık 3/4 bırakarak, bir tutkal tabancası için kullanılan tutkal sopa &quot;sıcak eriyik yapışkan&quot; (HMA), küçük bir boncuk ile pipet için çubuk uygun. HMA hızlı bir şekilde tutkal yakmak ve siyah duman üretmek için özen gösterilerek, bir alkol alev eridi olmalıdır. </li><li> Forseps bir çift kullanarak, 45 ° &#39;lik açı ulaşana kadar (yaklaşık 1/4 üst ucundan olarak) tungsten çubuğunun uç viraj. </li><li> Pasteur pipeti tutarak, bir propan meşalesi alev içine tungsten çubuğun ucunun yaklaşık 1/8 yerleştirin. Ucu sabit ve aleve tam dik tutun. </li><li> Alevin dışarı iğne çekin an Tungs küçücük bir turuncu lekeiğne kapalı on sinekler. </li></ol> 2.. Spemann Pipetler hazırlayın <ol><li> Kısa konik ötesinde cam erimeye başlayana kadar bir Bunsen beki kullanarak, bir Pasteur pipet dar ucuna ısı. Alev çıkarın ve pipet mühürlü olana kadar ucu çekin. Yaklaşık 0.7-1.0 mm OD sahip şevli kısmının bir kısmı kalır emin olun. Konik yaklaşık 4 cm kapalı mühürlü ucunu kırın. </li><li> Pipet geniş (açık) ucuna lastik tüp yaklaşık 2 ft (60 cm) takın. Hava Pasteur pipet şevli kısmı ile geçiş sağlamak için kauçuk hortumun diğer ucunda darbe. </li><li> Bağlı bir kalem ile bir alev meşale propan yakıt silindir kullanarak, sadece konik başından altında pipet bir tarafında bir oval alan ısı. Basınç cüzi bir miktarı (lette başlangıcını söylemek için gerekli basınç yaklaşık miktarı ile kauçuk borular yoluyla, çok yavaşça ve sürekli üfleyinkonuşma düzeyinde r &quot;P&quot;). Cam bir tarafta yumuşak olur ve dışa toka başladığında, hızla alevden pipet kaldırmak ve lastik borular yoluyla sabit ve istikrarlı darbe. Bu ısıtılmış cam parçası ince olduğu, pop sosis şeklinde bir kabarcık oluşmasına neden olur. Kabarcık çok küçük ise, erime ve tekrar cam üfleme deneyin. Camda son açık pencere geniş uzun (12.7 mm) &#39;in 0,5 (6,35 mm), 0.25 civarında olmalıdır. </li><li> Sivri ucunu işaret yukarıya, yavaşça pipet girmesini cam parçaları önlemek için tüp yoluyla üflerken cam atık kabı içine balonu kazıyın. </li><li> Propan alev kullanarak, kabarcık ve yangın lehçe açık pencerenin kenarları arasında kalan kenarlarını yakmak. Pipet şaftı eritmek için özen gösterin. </li><li> Bir elmas nokta kalem kullanarak, penceresinden (30 mm) yaklaşık 1.25 pipet sivri ucunu puan ve ucu koparakforseps ile pipet açılış temiz (kırık veya düzensiz ipuçları ile ıskarta pipet) kesilir böylece. </li><li> Forseps kullanılarak ve bükük kısmı dikey bir düzlemde olacak şekilde, bir alkol, bir brülör ile alev kenar, yaklaşık 60 ° &#39;lik bir açı için ucundan (9.5 mm)&#39; de pipet 0.375 dar kısmını viraj sırasında pencere açma solak kullanım için sağ-elli kullanım ve 11:00 için 01:00 pozisyondadır. Bu adım en bir taslak serbest muhafaza yapılır. </li><li> Yangın lehçe bir mikroskop altında alkol alev kullanarak ucu. Ucunu kapatmak değil yuvarlak açılış tutmak ve herhangi bir daralma olmadan düzeltmek için değil emin olun. </li><li> , Kauçuk borudan yapılmış bir 1 (25 mm) parça kesin% 70 etanol ile boru parça sprey ve pencere açıklığı tamamen kapalı kadar pipet milin üzerine boru kaydırın. Bu Spemann pipet &quot;diyafram&quot; olarak çalışır. </li><li> Bir lateks kauçuk 2 ml ampul yerleştirinpipet açık alt bitti. Ampul Spemann pipet negatif basıncı korur. </li><li> , Spemann bir pipet kullanarak uygulama, bir mikroskop altında bir başka belirgin bir noktaya bir Petri kabındaki belirgin bir nokta çapı, yaklaşık 100-200 um&#39;lik kromatografisi boncuk aktarın. </li><li> Spemann pipet temizlemek için, alt pamuk veya gazlı bez ile kaplı ve distile su ve cam deterjan ile dolu uzun bir beher içinde, aşağı ucu, kauçuk ampulü ve yer pipet kaldırmak. </li></ol> 3.. Yumurta Sterilize ve inkübe <ol><li> % 70 etanol ile yumurta silin ve plastik yumurta tepsiler üzerinde yumurta yerleştirin. </li><li> 37.5 ° C ve 85-87% ısıtılmış bir inkübatör yumurta ayarlayın. </li><li> Onlar HH9.5, bıldırcın ve ördek için 48 saat boyunca yaklaşık 26 saat ulaşana kadar kuluçkaya. </li></ol> 4. Pencere Yumurta <ol><li> Iç kabuk m ponksiyon için özen, forseps ile yumurtanın üst dış kabuk küçük bir parça kaldırmazarı böylesine. </li><li> 1 inç iğne ile bir 18 G ile bir şırınga kullanarak, yumurta en dar ucunda bir delik açmak ve albümin yaklaşık 1-2 ml geri. </li><li> Kabuğunda delik ve delinme işareti üzerinde şeffaf bant yerleştirin. </li><li> Kavisli makas kullanılarak (saydam bant üzerinden) yumurtanın üst yüzeyi boyunca bir &quot;pencere&quot; kes. </li></ol> 5.. Embriyolar canlandırın ve Cerrahi hazırlanın <ol><li> Bir cam çubuk kullanılarak, yavaşça embriyo üzerinde Nötr Kırmızı küçük bir miktar (Hank BSS içerisinde 0.02 g / ml) fırça. </li><li> Vitellin membran kesin ve bir alev bilenmiş tungsten iğne kullanılarak embriyo üzerinden çekin. </li><li> Pencere üzerinde saydam bant koyarak yumurtayı yeniden mühürlemek. </li></ol> 6.. Donör Embriyo gelen Donör Doku ayırın <ol><li> Donör embriyo yumurtanın üzerinde penceresinden bandı çıkarın. </li><li> Donör embriyo komşu ektodermden sinir kat kesmek için, sid hem yarıklar yapmak(yukarıda tarif edildiği gibi imal edilmiştir) bir alev keskinleştirilmiş tungsten iğne kullanılarak nöral tüp es. </li><li> Daha sonra, greft istenilen ön ve arka seviyede nöral tüpü boyunca kesilmiş ve nöral tüpün geri kalanından ayrı greft. </li><li> Bir Spemann pipet veya mikropipet diğer türlerinden birini kullanarak donör embriyo sinir kat çıkarın. </li><li> Sonra, ev sahibi yumurta üzerine penceresinden bandı çıkarın ve nakli alacak nöral tüp bölgeye bitişik ev sahibi embriyo yanında donör sinir kat yerleştirmek için Spemann pipet kullanın. </li></ol> 7. Ana Doku ayırın ve Donör doku nakli <ol><li> Donör ile yapıldığı gibi, ev sahibi embriyo nöral tüp sinir kat ayırın. Donör doku olarak eşit büyüklükte bir greft çıkarmak için özen. </li><li> Yavaşça uzak embriyo bu konak doku itin. </li><li> Daha sonra, kör bir iğne veya bir tungsten mi yuvarlatılmış ucu ilecropipette, yavaşça uygun ön-arka ve ön-ventral yönelimleri bakımı, donör sinir konak nöral tüp içine kat taşıyın. Greft kenarlarında sıkışmış olduğundan emin olun, ancak karıştırmak veya alttaki dokulara zarar değil emin olun. Orijinal yönü notun Nötr Kırmızı gelen donör doku veya diferansiyel boyama herhangi bir asimetri izlemenize yardımcı olmak için. Biz de fotoğraf-belge eşlik kesilmiş doku yanı sıra kimerasıyla donör embriyo hemen ameliyatı takiben. </li><li> Ev sahibi embriyo kuruma belirtileri gösteriyorsa, steril tuzlu yumurta ilave edilmelidir. </li><li> Şimdi, dikkatle yeniden mühür ve yumurta etiket ve yavaşça kimerik embriyo analizi için istenilen aşamaya gelişebilir bir yüksek nem inkübatör (% 70-80) iade. </li></ol> Kimeralar 8. Koleksiyonu <ol><li> Taze yapılmış soğuk Serra&#39;nın sabitleştirici kimerik embriyolar toplamak ve hemen bir ro üzerine koyun emin olunBir O / N tespit boyunca 4 ° C&#39;de cker. Bu, anti-bıldırcın antikoru ile bıldırcın hücrelerin daha hassas bir şekilde tespit sağlayacaktır. </li><li> Gen ifadesi RT-QPCR ile analiz için, önceden RNA ekstre sıvı azot içinde doğrudan embriyolar dondurma. </li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Nöral krest embriyo boyunca yoğun göç ve kraniofasiyal iskeletine katkıda kondrosit ve osteoblast dahil olmak üzere çeşitli hücre tipleri, içine ayırır geçici embriyonik hücre popülasyonu. Bıldırcın-ördek kimerik sisteminde nöral kret nakli kraniofasiyal iskelet gelişimini düzenleyen doku etkileşimleri ve sinyal yollarının anlayışımıza büyük katkıda bulunmuştur. Ancak, düz kas hücreleri, adipositleri, melanosit, Schwann hücreleri ve nöronlar oluşturmak için nöral büyük potansiyeli göz önüne alındığında, bıldırcın-ördek kimera sistem özellikle kök hücre biyolojisi hızlı ilerlemesi ile birlikte gelecek uygulamaları için muazzam bir potansiyele sahiptir ve rejeneratif tıp. Bıldırcın ve ördek hem ticari yetiştirilen türler olduğu için, nispeten ucuz döllenmiş yumurta hazır bir tedarik Çiftliklerin çeşitli edinilebilir. Böylece, bu teknik araştır erişilebilir olmalıdıronun bütçeleri ve tesis alanı geniş bir aralıkta faaliyet göstermektedir. Bu teknik çok güçlü olmasına rağmen, bazı sınırlamalar da kalır. Diğer cerrahi teknikleri gibi, bıldırcın-ördek kimeralarının kalitesi ve canlılığı araştırmacı cerrahi beceri güveniyor, ve bu nedenle, bu tür olanlar kullanan fare gibi diğer modellere kıyasla gibi deneyler arasında daha arası ve içi bireysel farklılıklar olacaktır genetik. Ayrıca, yeniden üretilebilirlik ve her nakli başarısına katkıda gelişimi ve bireysel embriyolar aşamalarının oranlarında varyasyon da vardır. Avian embriyoları, aynı zamanda su kaybı çok duyarlıdır ve ameliyat sırasında bu nedenle önemli bir adım minimuma mikroskop altında, düşük zaman ışık seviyelerini tutmak arasında, mümkün olduğu kadar çok yumurta bantla kapatılır, ve ameliyat sonrası inkübatör içinde yüksek nem kurumayı önlemek. Kimeralar canlılığı, u açısındanbu oranlar eski toplama aşamasını azaltabilirsiniz rağmen sually arasında% 50-75, hayatta. Cerrahi tipik 4-6 saat oturumda, deneyimli bir cerrah 10-15 kuruntulardan üretebilir. Nakli başarısı da araçların kalitesine büyük ölçüde bağlıdır. İyi araçları daha tutarlı, tekrarlanabilir sonuçlara yol. Tungsten iğne yapmak için bir propan meşale kullanarak son derece keskin iğneler yapılmasını sağlar. Bu alevin boyutunu denetler, çünkü kullanılan meşale türü büyük bir fark yaratıyor. Elektrolitik bileme da kullanılabilir, ancak bu yaklaşım bile keskin iğneler üreten yakın gelmiyor. Iğneler düz yapılabilir böylece yerine biriktirilen tel tungsten çubuklar kullanın. Spemann mikropipet, zaman alıcı ve yapmak zor, doku transferi için ideal bir araç iken. Pipet, farklı büyüklükte açıklıkları ile özelleştirilebilir, ve tekrar tekrar kullanılabilir. Istimal için kritik bir faktörga Spemann mikropipet embriyo yüzeyine ucu dokunmadan önce pipet bazı sıvı sahip olmaktır. Iletişim embriyo üzerinde menisküs ile yapıldığında sıvı bir kısmı her zaman dışarı akar. Biraz diyafram kadar izin yavaşça pipet içine donör greft dokusu berbat ise diyafram basılması, sıvı ve greft dokusu çok hassas dışarı sağlar. Diyafram pozitif basınç biraz bakımı aktarımı sırasında pipet ucu da verici aşı doku tutar ve diyafram küçük bir ek basınç verici doku grefti kasıtlı olarak konakta yerleştirilmesini sağlar. Depolama ve sterilizasyon sırasında Spemann pipet korunması için, geniş ucundan ampulü çıkarın ve dikkatli ampul içine konik ucu takın. Alüminyum folyo ile üst kapak ve ameliyat öncesi, otoklav, bir cam test tüpünde Spemann pipet yerleştirin. Birden pipetler yeniden olduktan sonraAmeliyat için yeniden sterilize edilecek Ady, pipetler ters damıtılmış su ve cam deterjan aynı çözelti içinde kaynamaya yaklaşık onları ısı ve daha sonra damıtılmış su ile tekrar tekrar yıkanır. Bireysel tüplerin Otoklav pipetler. Bunlar karanlık ve sert olunca diyafram ve kauçuk ampulü oluşturan kauçuk boru birkaç sterilizasyonlarda sonra değiştirilmesi veya gerekir. Bu protokolün bileşenleri çok tehlikeli ekipmanları içerir. Örneğin, Spemann Mikropipet yapmak için Prosedür üç alev tipleri hem de ısıtma, üfleme çekme, bükme, kesme, parlatma ve cam içerir. Bu nedenle, uygun kişisel koruyucu ekipman (KKE) giyen gözlük gibi güvenliği artırır ve bir laboratuvar önlüğü kritik olduğunu. Ayrıca, birçok kişi muzdarip, ya, yumurta alerji gelişebilir yumurta tutarken her zaman eldiven kullanmak için potansiyel var çünkü. Akılda bu önlemler, bıldırcın-ördek kimerik sistemi ile iBirçok gelecek uygulamalar vardır sa, güvenli, verimli, ve nispeten ulaşılabilir bir yöntemdir.

Yüz iskelet ektodermal ve Endodermal epitel katmanları 1-11 çevrili nöral ve mezodermal mezenşimden oluşan birden fazla yüz süreçlerin büyüme ve füzyon gelişir. Her süreçte morfojenetik olaylar mezenşimin ve çevresindeki epitelya 12-16 arasında belirgin sinyal etkileşimler tarafından yönetilir. Bu sinyal etkileşimleri ve / veya onların aşağı efektörlere değişiklikler hastalık fenotipleri katkıda bulunmak ve aynı zamanda kraniofasiyal iskelet 17, 18 evrimi ile ilgili olabilir. Bu nedenle, doku etkileşiminin zamanlamasını ve niteliğini durulaştırmada yüz iskeletinin gelişimsel ve evrimsel biyoloji anlayışımızı arttırmak için büyük bir potansiyele sahiptir. Doku etkileşimleri araştırmak için kimerik embriyoların kullanılması gelişimsel biyoloji içinde uzun bir geçmişi vardır. Bu yaklaşım Hans Spemann ve onun laboratuar tarafından öncülük edilmiştirFarklı amfibi türlerin embriyolarının arasındaki dokuların nakli ile embriyonik &quot;organizatörleri&quot; keşfetti. Spemann el becerileri özel araçlar, özellikle Spemann pipet yaptığı kalkınma tarafından tamamlanmaktadır mikro-cerrahi teknikleri bir usta oldu. Viktor Hamburger Spemann Nobel ödülünü neden orijinal nakli deneyler yapıldı, hangi zaman, 1920&#39;lerde Freiburg Hans Spemann laboratuvarında bir yüksek lisans öğrencisi oldu. Hamburger 1935 yılında St Louis Washington Üniversitesi taşındı, o Deneysel Embriyoloji 19 onun Kılavuzunda bir Spemann mikropipet yapma sürecini ayrıntılı. Drew Noden Massachusetts, Amherst Üniversitesi ve daha sonra Cornell Üniversitesi taşındıktan sonra, Noden imalatı ve bıldırcın-civciv kuruntulardan ilgili yaptığı cerrahi nakli için Spemann mikropipetler kullanmaya devam etti. 1972&#39;ye kadar Washington Üniversitesi&#39;nde Hamburger laboratuvarında bir yüksek lisans öğrencisi oldu. &amp;# 160;. Bir yüksek lisans öğrencisi, 1995-1998 Cornell Drew Nodén eğitimli yazarlar (Rich Schneider) biri Spemann mikropipet yapmak için aşağıdaki protokol Hamburger ve Nodén tarafından yazılı açıklamalara göre, ve sonradan yaptığınız değişiklikleri içerir iken Schneider tarafından. Kraniofasiyal geliştirme çalışmaları için ve özellikle nöral krest hücrelerinin katkılarını anlamak için bıldırcın-civciv kimeralarının kullanımı Le Douarin ark 20 yorumlanan 1970&#39;lerin başında Nodén tarafından ve Le DOUARIN tarafından öncülük edilmiştir. Bu yaklaşım genel olarak birçok çalışma ve çok sayıda diğer araştırmacılar 1, 4, 5, 21-38 tarafından kabul edilmiştir. Büyüme ve bıldırcın ve civciv morfolojisi eşdeğer oranları hücre kaderinin ve soy izleme çalışması için içlerinde nakli idealdir. Ancak, bıldırcın ve civciv arasındaki benzerlikler, morfolojik değişimler inddonor hücreler tarafından uced deşifre etmek zordur. Buna karşılık, diğer kuş kimerik sistemleri 39-50 embriyolar anatomik olarak farklı yapmak mekanizmaları incelemek için bir yol olarak yerli ördek dahil ettik. Daha spesifik olarak, bıldırcın-ördek kimerik sistemi ev sahibi, ve tersi üzerinde donörün etkilerini sezmek için birden çok yarar sağlar. İlk olarak, bıldırcın ve ördek embriyolar gen ekspresyonu (Şekil 1 A ve B) &#39;nin diferansiyel etki için tahlil ile oluşum arasında verici veya konak-spesifik mekanizmaları keşfetmek için doğrudan bir yol sağlar vücut boyutu ve şekli, içinde farklıdır. İkincisi, bıldırcın ve ördek embriyo bıldırcın 17 günde çıkım ve ördek 28 gün içinde kuluçka ile, olgunlaşma oldukça farklı fiyatlar var. Nakledilen sinir ucu ana ortam içindeki iç olgunlaşma oranını muhafaza eder ve bu nedenle, geçici gen ekspresyonunda değişiklikler, doku etkileşimlerinin, histogenez ve morfojenezinin tanımlanması mümkündür51-57. Son olarak, anti-bıldırcın nükleer antikor (PN ¢ Q) verici ve ev sahibi hücresel katılım her yerde bulunan bir bıldırcın hücrelerinde ifade ancak ördek hücrelerinde bulunmaz bir proteini tanıma ile birbirinden ayırt kalıcı olmasını sağlar.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="746">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:169px;">1x PBS</td>
			<td style="width:180px;">TEK</td>
			<td style="width:145px;">TEKZR114</td>
			<td style="width:252px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:169px;">Hank&#8217;s BSS w/o Phenol Red</td>
			<td style="width:180px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:145px;">14025-092</td>
			<td style="width:252px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:169px;">Neutral Red</td>
			<td style="width:180px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:145px;">N4638-5G</td>
			<td style="width:252px;">.22&#181;m filter-sterilized</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:169px;">18G Needles</td>
			<td style="width:180px;">BD</td>
			<td style="width:145px;">305195</td>
			<td style="width:252px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:169px;">5 ml syringe</td>
			<td style="width:180px;">BD</td>
			<td style="width:145px;">309646</td>
			<td style="width:252px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:169px;">No. 5 Dumont forceps</td>
			<td style="width:180px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:145px;">11252-20</td>
			<td style="width:252px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:169px;">Straight Scissors</td>
			<td style="width:180px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:145px;">14028-10</td>
			<td style="width:252px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:169px;">Curved Scissors</td>
			<td style="width:180px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:145px;">14029-10</td>
			<td style="width:252px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:169px;">Spemann Pipet</td>
			<td style="width:180px;"></td>
			<td style="width:145px;"></td>
			<td style="width:252px;">Hand-made in lab</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:169px;">Egg holder</td>
			<td style="width:180px;"></td>
			<td style="width:145px;"></td>
			<td style="width:252px;">Glass ashtray and modeling clay</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:169px;">Alcohol burner</td>
			<td style="width:180px;">Fisher</td>
			<td style="width:145px;">04-245-1</td>
			<td style="width:252px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:169px;">Transparent tape</td>
			<td style="width:180px;">3M Scotch</td>
			<td style="width:145px;">600</td>
			<td style="width:252px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:169px;">Glass Stirring Rod</td>
			<td style="width:180px;">Fisher</td>
			<td style="width:145px;">11-380C</td>
			<td style="width:252px;">Tip is narrowed and rounded using a flame</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:169px;">Tungston wire (.004 x 3 inches)</td>
			<td style="width:180px;">A-M Systems</td>
			<td style="width:145px;">7190</td>
			<td style="width:252px;">Tip is flame-sharpened in a propane torch</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bunsun burner</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>&#160;S49117</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pasteur pipette</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>&#160;22-183-632</td>
			<td>9-inch (229 mm)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="81">
			<td height="81" style="height:81px;width:169px;">rubber tubing</td>
			<td>Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>14-178C</td>
			<td style="width:252px;">amber, thin wall natural rubber; wall thickness: 0.0625 inches/1.6 mm; O.D.: 0.375 inches/9.5 mm; I.D.: 0.25 inches/6.4mm</td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;">&#160;Propane fuel cylinder</td>
			<td>BernzOmatic</td>
			<td>UL2317</td>
			<td style="width:252px;">&#160;TX-9 with torch style &#34;A&#34; with a screw-on brass &#34;pencil flame&#34; torch&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Diamond point pencil</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>&#160;22-268912</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rubber bulbs</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>S32325</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing species-specific contributions to craniofacial development using quail-duck chimeras

Kimerik embriyoların nesil cep kaderlerini, doku etkileşimleri ve histolojik ve omurgalı embriyolarının morfolojik gelişimine türe özgü katkılarını araştırmak için yaygın ve güçlü bir yaklaşımdır. Özellikle, kimerik embriyo kullanımı kraniofasiyal kompleksinin türe spesifik bir morfolojiye yönlendirilmesinde nöral önemini oluşturmuştur. Burada tarif edilen yöntem, oldukça farklı kraniofasiyal morfolojiye sahip, iki kuş türleri, ördek, bıldırcın ve kullanır. Bu yöntem büyük ölçüde kraniofasiyal kompleksi türe özgü desen moleküler ve hücresel düzenleme soruşturma kolaylaştırır. Bıldırcın ve ördek kimerik embriyolar deneyler zaten nöral krest aracılı doku etkileşimleri ve kraniofasiyal iskelet, kas, ve kabuklarıyla türe özgü desen düzenleyen hücre özerk davranışlar ortaya koymuştur. Nöral krest türevlerinin büyük çeşitlilik önemli bir potansiyele işaretomurgalı geliştirme, hastalık ve evrimini anlamak için bıldırcın-ördek kimerik sisteminin gelecekteki uygulamalar için.

Önce, daha fazla analiz için, transplantın etkinliği test edilmesi gerekmektedir. Histolojik için, morfolojik, veya gen ekspresyon doku örneklerinin analizleri, bıldırcın hücreleri 36 anlatıldığı gibi Q ¢ PN antikoru kullanılarak immunohistokimyasal tarafından tespit edilmelidir. RNA analizleri için, ilgi konusu dokulara türe özgü katkılar, PCR tabanlı bir strateji 58 kullanılarak hesaplanabilir. Nakli etkinliği doğrulandıktan sonra, bundan başka morfolojik veya moleküler parametreler kimeralar olarak değerlendirilebilir. Donör nöral krest hücreleri ve uygun histogenezi ve kraniofasiyal kompleksinin morfogenetiğine altında yatan çevreleyen konak-kaynaklı dokular arasındaki etkileşim, önceden yoğun çalışmalar yapılmıştır. Özellikle, nöral tepe mezenşimin yüzün türe özel bir morfoloji 7, 13, 51, 59, tüy model 52, kas model 56 yönlendirir </s<html> kadar&gt; ve kıkırdak 53, konak gen ifadesinin düzenlenmesi yoluyla 57. Örneğin, nöral krest mesenkimi zamansal BMP4 ifadeyi 55 düzenleyerek mandibulada zaman kemik formları belirler. Son zamanlarda, araştırmalar çok erken kraniofasiyal gelişiminde meydana gelen doku etkileşimleri üzerinde yoğunlaşmış. Bu bağlamda, bıldırcın-ördek kimeralar kullanan deneyler, ev sahibi embriyolar morfolojik sınırları saptanmasıyla sinir ucu değiştirmeye etki göstermiştir. Bu kimerik quck embriyolarda, donör bıldırcın nöral krest hücrelerinin bir ördek gibi kalıp (Şekil 1D) olarak konak ördek çene kavisi içine göç vardır. Nöral krest nüfusun büyüklüğüne bu konak katkısına rağmen, donör nöral krest bıldırcın gibi boyut ve şekil (Şekil 1E) olan bir alt çene iskeleti üretmeye devam etmektedir. e 1 &quot;fo: İçerik-width =&quot; &quot;fo: src =&quot; 6in / files/ftp_upload/51534/51534fig1highres.jpg &quot;src =&quot; / files/ftp_upload/51534/51534fig1.jpg &quot;/&gt; Şekil 1. Bıldırcın-Duck Chimeric Sistemi. Oluşturmak için (A) ve Quail (B) ördek kafatası boyutu ve şekli önemli ölçüde farklılıklar gösterebilir ve bu şekilde, en iyisi (Tokia et al. 56 değiştirilerek) kraniofasiyal gelişimini incelemek için bir kimerik sistemi kullanmak için uygundur. (C) Deney tasarımı evre-uyumlu HH9.5 bıldırcın ve ördek embriyolar tek taraflı kimerik quck embriyolar. Nöral kat bıldırcın embriyo bir taraftan uzaklaştırılır ve ördek embriyolara nakledilen sinir kıvrımın eşdeğer bir parça sonra kaldırıldı. (D) Quail verici hücreler (yeşil), bir anti-bıldırcın antikoru (Q kimeralar ile takip edilebilir HH12 kimerik embriyo ventral görünümünde gösterildiği gibi) PN ¢. (F) HH38 de quck çeneleriyle olarak, bıldırcın Meckel verici türetilmiş7, s kıkırdak daha büyük ve eğri olan karşı taraftaki ördek ev sahibi türevli Meckel kıkırdak için gözlenenden daha kısa ve daha düz olduğunu. Yayımlanmaktadır Tokita et al., Dev. Bio. 306, 377 (2007) Elsevier izni ile.

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Species-specific Contributions To Craniofacial Development Using Quail-duck Chimeras at JoVE.com

Assessing Species-specific Contributions To Craniofacial Development Using Quail-duck Chimeras

Bıldırcın-ördek Chimeras kullanma Kraniyofasiyal Kalkınma için Türlere özgü Katılımlar değerlendirilmesi

Bu makalede, kraniofasiyal gelişimine nöral ve / veya diğer dokuların türe özgü katkılar test etmek için tasarlanmıştır kimerik embriyolar oluşturmak için bir yöntemi tarif etmektedir.

The generation of chimeric embryos is a widespread and powerful approach to study cell fates, tissue interactions, and species-specific contributions to ...

Research

JoVE Journal

Biology

Development of New Therapeutic Applications Using Microfluidics

Mikroakiskan kullanarak Yeni Tedavi Uygulamaları Geliştirme

In vivo Bioluminescent Imaging of Mammary Tumors Using IVIS Spectrum

In vivo Bioluminescent Imaging of Mammary Tumors Using IVIS Spectrum

Meme Tümörleri IVIS Spektrum kullanarak in vivo Bioluminescent Görüntüleme

4T1 mouse mammary tumor cells can be implanted sub-cutaneously in nu/nu mice to form palpable tumors in 15 to 20 days. This xenograft tumor model system ...

Tissue Targeted Embryonic Chimeras: Zebrafish Gastrula Cell Transplantation

Doku Hedeflenen Embriyonik Chimeras: Zebra balığı Gastrula Hücre Nakli

Certain fundamental questions in the field of developmental biology can only be answered when cells are placed in novel environments or when small groups ...

Using the GELFREE 8100 Fractionation System for Molecular Weight-Based Fractionation with Liquid Phase Recovery

Sıvı Faz Kurtarma Moleküler Ağırlık Tabanlı Fraksiyonu GELFREE 8100 Fraksiyonu Sisteminin Kullanılması

The GELFREE 8100 Fractionation System is a novel protein fractionation system designed to maximize protein recovery during molecular weight based ...

Assessing Signaling Properties of Ectodermal Epithelia During Craniofacial Development

Kraniofasial Geliştirme sırasında Ektodermal Epiteli Sinyal Özellikleri değerlendirilmesi

The accessibility of avian embryos has helped experimental embryologists understand the fates of cells during development and the role of tissue ...

Electroporation of Craniofacial Mesenchyme

Kraniofasial mezenşimin, Elektroporasyon

Electroporation is an efficient method of delivering DNA and other charged macromolecules into tissues at precise time points and in precise locations. ...

A Semi-quantitative Approach to Assess Biofilm Formation Using Wrinkled Colony Development

Buruşuk Koloni Gelişimi kullanarak Biyofilm Oluşumu değerlendirin Bir Yarı-kantitatif Yaklaşım

Biofilms, or surface-attached communities of cells encapsulated in an extracellular matrix, represent a common lifestyle for many bacteria. Within a ...

Conversion of a Capture ELISA to a Luminex xMAP Assay using a Multiplex Antibody Screening Method

Bir Multiplex Antikor Tarama Yöntemi kullanılarak bir Luminex xMAP Tahlil için bir Capture ELISA Dönüşüm

The enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) has long been the primary tool for detection of analytes of interest in biological samples for both life ...

Cell Tracking Using Photoconvertible Proteins During Zebrafish Development

Zebra balığı Geliştirme Sırasında Photoconvertible Proteinler kullanma Cep Takip

Embryogenesis is a dynamic process that is best studied by using techniques that allow the documentation of developmental changes in vivo. The use of ...

Assessing Murine Resistance Artery Function Using Pressure Myography

Basınç kasılmaların kâğıda çizilmesi kullanarak Murine Direnç Arter Fonksiyon değerlendirilmesi

Pressure myograph systems are  exquisitely useful in the functional assessment of small arteries, pressurized  to a suitable transmural pressure. The  ...