Name: the bovine lung in biomedical research: visually guided bronchoscopy, intrabronchial inoculation and in vivo sampling techniques
Uploaded: 2014-07-03T14:00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Bovine Lung in Biomedical Research: Visually Guided Bronchoscopy, Intrabronchial Inoculation and In Vivo Sampling Techniques at JoVE.com

The authors are very thankful to the Federal Ministry of Education and Research (BMBF) of Germany for the funding of their work. Also, the authors thank Ines Lemser, Sylke Stahlberg, Ingolf R&#252;cknagel and all the other colleagues working in the team of the animal house (FLI, Germany) for their technical assistance with the bronchoscopies. They are very thankful to Maria-Christina Haase (FLI, Germany) for her help in providing literature. Furthermore, the authors wish to express their gratitude to Dr. Angela Berndt (FLI, Germany) and Nicolette Bestul (University of Wisconsin-River Falls) for critical reading of the manuscript.

Заявление по этике Это исследование было проведено в строгом соответствии с европейской и национальной закона по уходу и использованию животных. Протокол был одобрен Комитетом по этике экспериментах на животных и защите животных в штате Тюрингии, Германия (номер разрешения: 04-004/11). Все эксперименты проводились под наблюдением уполномоченного институциональной Агент защиты животных. Бронхоскопия строго проводится под общим наркозом. В ходе исследования, было сделано все возможное, чтобы минимизировать дискомфорт или страдания. Общие замечания Описанные методы были разработаны для телят примерно 6-8 недель от роду, весом около 60-80 кг. Для использования в других крупных видов животных или телят разных по возрасту и веса тела, методы должны быть адаптированы в соответствии с размером и весом и учитывать легких анатомию конкретных видов животных. ВсеОборудование, используемое должны быть стерильными. Хламидиоз psittaci является зоонозных бактерия, которая может привести к дыхательной и общее заболевание у людей. Помимо птиц, С. psittaci штамм DC15 используется в настоящем протоколе должны быть обработаны в соответствии с уровнем биобезопасности 2. Вся работа с патогеном и с инфицированными животными должны выполняться носить средства индивидуальной защиты, такие как респиратор, брызгозащищенной комбинезон, резиновые сапоги и перчатки. Ношение подходящий респиратор имеет большое значение, так как естественным путем инфекции для С. psittaci является Aerogen. Упаковка и маркировка образцов должны быть дезинфицирующее доказательство, так как все вещи должны быть обработаны дезинфицирующим эффективен против хламидий в соответствии с инструкциями изготовителя, прежде чем покинуть жилищного животное блок. 1. Подготовка животных для Бронхоскопия <ol><li> Определите вес теленка для дозировки анестетиков. </li><li> Наведите внутривенного (IV) получить доступ кн левая яремную вену. </li><li> Во-первых, медленно вводят ксилазина (0,2 мг / кг массы тела) в течение приблизительно 30 сек, а затем, после возникновения седативный эффект, вводят кетамин (2,0 мг / кг массы тела). </li><li> Поднимите животное на стол и поместите его в правой боковой лежачее положение. После того, как животное адекватно позиционируется на стол, проверить, если доступ IV по-прежнему на месте и скорректировать его в случае необходимости. Во время наркоза, регулярно проверять век рефлекс для определения глубины анестезии. </li><li> После того, как животное постоянно дышит, кто-то вытащить язык и растянуть шею. Поместите металлическую трубку расширитель в рот животного, используя небольшие движения вращается. Нажмите расширитель вперед под контролем зрения, используя фонарик, пока гортань не видно. </li><li> Поддержание анестезии в течение всего эндоскопической процедуры путем инъекции болюса 7 мг ксилазина и 70 мг кетамина по мере необходимости. </li></ol> . 2 Прививка (Прививка сайты: Рисунок 1) </p&gt; <ol><li> Подготовка 3 шприцы с инокулята, содержащие 1, 2, и 5 мл инокулята. </li><li> Вставьте тефлоновую трубку в рабочем канале эндоскопа. Трубка не должна выступать из наконечника эндоскопа. </li><li> Вставьте эндоскоп через металлическую зеркалах. Незначительные перенастройка о зеркалах может быть необходимо для того, чтобы прохождение гортани. Бронха trachealis, которая ответвляется в правую сторону, помогает выровнять изображение на мониторе. </li><li> Присоединить шприц 5 мл инокулята в конце тефлоновой трубки. Перейдите трубку в филиалах, где посевной сдаются на хранение и применить нужную сумму (правого легкого: Лобус мышца: 0,5 мл, Лобус вспомогательный `орган: 0,5 мл, Лобус caudalis: 0,5 мл и 1,0 мл; Левое легкое: Lõbus cranialis, Pars cranialis : 0,5 мл, Парс caudalis: 0,5 мл, Лобус caudalis: 1,5 мл). Прикрепите шприц с 1 &amp;# 160; мл посевной к трубке, затем перейдите к trachealis бронхов и хранение посевного (Lõbus cranialis, Pars caudalis: 1,0 мл). Это полезно, чтобы всегда подходить к локализации в том же порядке. </li><li> Удалить эндоскоп и расширитель. </li><li> Спрей 1 мл посевного материала в каждую ноздрю с приводом. </li><li> Принесите животное обратно в конюшню и поместить его в положении лежа для пробуждения. Не оставляйте животное без присмотра или в компании других животных, пока он не пришел в достаточной сознание поддерживать грудины лежачее положение. Восстановление стабильной должна быть с кондиционером, так как способность животного для терморегуляции снижается под общим наркозом. Примечание: первые клинические признаки должно происходить около 24-36 ч после инокуляции, в зависимости от патогена используется. </li></ol> . 3 Процедуры отбора проб (выборка сайты: Рисунок 2) <ol><li> Подготовьте животное, как описано в шагах 1.1-1.6. </li><li> Бронхоальвеолярный лаваж <ol><li> Поместите 5 шприцев каждый из которых содержит 20 мл стерильного изотонического солевого раствора, в водяной бане и дать им нагреться до приблизительно 38 ° С. </li><li> Вставьте промывание катетер в рабочем канале эндоскопа, а затем вставьте эндоскоп в металлическую зеркалах и перемещения вперед в главный бронх левого легкого, пока «Позиция клин&quot; не будет достигнуто, где эндоскоп не может быть выдвинут дальше вперед. </li><li> Один за другим, прикрепите шприцы с теплым раствором NaCl в промывной катетера, привить жидкость и аспирации его непосредственно. БАЛ должен храниться в силиконизированных стеклянные бутылки и поставить на лед сразу после восстановления, чтобы предотвратить альвеолярных макрофагов от прикрепляться к поверхности стекла. Обратите внимание, как количество физиологического раствора закапывают и количество извлеченного флюида. </li><li> Извлеките промывание катетера из рабочего канала. </li></ol></li><li> Бронхиальная чистка<ol><li> Перейдите эндоскоп в нужное место отбора проб, в описанном протоколе это Bifurcatio трахеи. </li><li> Накройте кисть с трубки, прежде чем вставлять его в рабочем канале эндоскопа до кончик кисти на мониторе не появится. </li><li> Нажмите на кисть с пластиковой трубки вперед примерно на 5 см и раскрыть его из пластиковой трубки, нажав на ручку, то перейти его в месте, которое должно быть щеткой. </li><li> Оботрите эпителиальные призывы мягко нажимать и вытягивать кисти вперед и назад во время навигации эндоскоп, чтобы обеспечить контакт между щеткой и стенкой бронха. Остановить потирая при возникновении кровотечения. Накройте кисть с трубкой чтобы вытянуть ее из рабочего канала. </li><li> Подготовить до пяти мазков на предметных стеклах, осторожно прокатки кисть на слайде. Зафиксируйте мазки в холодным метанолом в течение 10 минут, воздух сухой и хранить при температуре -20 ° С. </li><li> Кисть можно промыть вРазличные средства массовой информации, в зависимости от цели отобранных клеток. Если брать несколько проходов щеткой под одну гребенку, не забудьте только промыть его в средствах массовой информации, не раздражают слизистую оболочку. </li></ol></li><li> Трансбронхиальная биопсия легкого <ol><li> Перейдите эндоскоп в нужное место отбора проб, в описанном протоколе это Парс caudalis из cranialis Lõbus. Перед установкой щипцы биопсии в рабочий канал открытым и закрыть ему пару раз, чтобы убедиться, что он работает гладко. </li><li> Надавите на щипцы биопсии в хвостовую филиала бронха trachealis пока легкое сопротивление не происходит. Отойдите назад 2-3 см, открыть щипцы, продвигать примерно на 2 см, закройте щипцы, отступить и снять щипцы из рабочего канала. Это требует некоторой практики. </li><li> Осторожно снимите ткань с щипцы для биопсии, с помощью иглы или маленькие щипцы. В зависимости от дальнейшего использования ткани, хранить его в жидком NITRоген или подходящий фиксация среднего. Это должно произойти сразу после удаления, чтобы предотвратить автолитических процессы. </li></ol></li><li> Постабортных лечение <ol><li> Принесите животное обратно в конюшню и поместить его в положении лежа для пробуждения. Не оставляйте животное без присмотра или в компании других животных, пока он не пришел в достаточной сознание поддерживать грудины лежачее положение. Восстановление стабильной должна быть с кондиционером, так как способность животного для терморегуляции снижается под общим наркозом. </li><li> Мониторинг животного тесно признаков пневмоторакса в последующие 24 часов. Обеспечить подачу и пресную воду, когда животное восстановил полное сознание. </li></ol></li></ol>

Авторы не имеют ничего раскрывать.

Способ бронхоскопическая прививки были разработаны и различные бронхоскопические методы отбора проб были адаптированы для использования в крупных животных в экспериментальных условиях. Описанные методы легко узнать, даже для экспертов с небольшим опытом в эндоскопии. Процесс бронхоскопии является минимально инвазивной и никаких негативных последствий, связанных с методами прививки, а также описанных методов отбора проб (БАЛ, трансбронхиальная биопсии легких, бронхиальная щеточных), не были когда-либо видел в любом из животных. Осложнения, связанные с трансбронхиальной биопсии легких у человека кровоточат и пневмоторакс 48, ни один из них были замечены в икрах, прошедших эту процедуру. Трансбронхиальная биопсия легкого занимает больше времени и требует больше оборудования, чем транскутанной метода, но это менее инвазивных и не несут риск раневой инфекции. Визуальный контроль, эндоскопическая метод inoculatионный позволяет отложение определенного количества возбудителя в определенных местах легких. Таким образом, это приводит к очень последовательных клинических и патологических во всех привитых животных 32-34. Тем не менее, она не похожа все особенности естественной инфекции у телят. В модели респираторного С. psittaci инфекции, Описанная методика прививки привели к поражения легких, связанных с сайтами размещения возбудителя 34, тогда как в естественно инфекций телят обычно развивается пневмония из верхушечных долях. Этот факт должен быть принят во внимание при толковании актуальность экспериментальных данных в контексте природных приобретенных легочных инфекций в крупного рогатого скота. Видеоэндоскопических БАЛ позволяет выборки определенной сферой легких. Для экспериментальных целей, это является преимуществом по сравнению с использованием носовой катетер под вслепую. Из-за анатомии легких крупного рогатого скота, вслепую вставлен катетер будет толкатьред в нужное диафрагмальной доли в большинстве случаев 53,54 и экзаменатор не имеет никакого влияния на области легких, который лаважу. Еще одно преимущество эндоскопической БАЛ наркозом телят в боковой лежачее положение является высокая средняя скорость восстановления привила жидкости более чем на 80%. Сравнение с другими исследованиями, показывает, что, стоя, седации телят, восстановлением 133,3 ± 1,6 мл 46 и 127,13 ± 3,53 мл 45 после закапывания 240 мл жидкости в хвостовую доли сообщается. В седации телят в грудины лежачее положение 51% от привила жидкости может быть извлечен из черепной доли и 62% от хвостового доли 43. Это означает, что приблизительно половина привили жидкости могут быть восстановлены в вертикальном положении теленка. В зависимости от количества БАЛ, необходимой для дальнейшей подготовки образца, это не могло оставить достаточно материала, чтобы выполнять все необходимые эксперименты. БАЛ у крупного рогатого скота был использован многих исследовательских групп, и многиеразличные параметры были исследованы в различных условиях. Большинство авторов выполняется промывание базальных долей 43,45,46, но количество жидкости, используемой для промывания отличается между исследовательскими группами. Это приводит к несогласованности в разведении выделенных клеток, белков и других веществ, что делает его трудно сравнивать результаты из разных изданий. Таким образом, для использования в крупного рогатого скота рекомендуется промывание с пятью фракциями по 20 мл (т.е. полного объема 100 мл) тела теплой, изотонический солевой раствор, которые восстановленных сразу после закапывания. При использовании промывание катетера большого диаметра (т.е.&gt; 2 мм), объем каждой фракции должен быть немного увеличен, в зависимости от количества жидкости, которая останется в катетере. Высоко сегментирован анатомия легких крупного рогатого скота приводит к методической ограничение; Результаты, полученные из одной части легких не может быть верно для остальной части легких. не так как нетзрелище контроль всей площади легких зондируются трансбронхиальной биопсии и промывания, эксперт не может знать, является ли выборочные районы были здоровы или больны. Таким образом, очень важно, чтобы попробовать места, где патоген инокулировали до того, чтобы иметь более высокую скорость восстановления патогена и иметь более высокую возможность отбора проб больные участки легких. Другим ограничением является увеличение анестетик риск у животных плохого клинического состояния. Описанные методы должны быть использованы только в моделях мягкой и умеренной болезнью держать бремя для животных как можно ниже. Общая анестезия в жвачных животных следует всегда иметь как можно более коротким, как выделение газа в рубце увеличивает обезболивающий риск у этих видов. Животные должны быть помещены в положении лежа сразу после бронхоскопии, чтобы позволить истечение разработанной газа и должна быть тщательно следить, пока они не полностью извлечен из анестезии. Кроме того, описанные методы не SuitaBLE для отбора проб интервалы менее 24 часов. Описанный протокол может быть адаптирован к других инфекционных агентов. Эндоскопическое прививка различных патогенов было описано, например, C. psittaci 32-34, Pasteurella haemolytica 38-40,42, Haemophilus Somni 55, и вирус бычьей вирусной диареи 44. Кроме того, участки патогена депозита в легких могут быть адаптированы к желаемой модели. При выборе участков отбора проб, некоторые важные факты должны быть приняты во внимание: (я) отбора проб сайты должны быть выбраны на основе мест прививки и на ожидаемых патологических. (II) При аутопсии должны быть выполнены, то должны быть приняты, чтобы оставить достаточно unsampled области легких для экс естественных условиях выборки. (III) места отбора проб должны быть выбраны таким образом они могут быть достигнуты с оборудованием. Специально для трансбронхиальной биопсии легких, существуют ограничения, связанные с длиной щипцы для биопсии. (IV) Tон порядок отбора проб важно, бронхиальная щеткой и трансбронхиальная биопсия легкого может привести к незначительных кровотечений, которые бы загрязнить БАЛ. Таким образом, БАЛ всегда должно быть получено в первую очередь. При использовании протокола в других видах, видоспецифические легких анатомия должны быть приняты во внимание.

Ценности крупное животное Моделей в биомедицинских исследований В современной междисциплинарной медико-биологических исследований, животные модели по-прежнему необходимы для выяснения сложных взаимодействий - связаны со здоровьем или статуса заболевания - в течение организмов млекопитающих. Несмотря +17 Нобелевских премий к присуждению ученых, которые изучали крупный рогатый скот, лошадей, овец или птицы в качестве моделей для биомедицинских исследований 1, в настоящее время подавляющее большинство экспериментов на животных проводятся с грызунами, а менее 1% исследований работают с домашними животными или животноводства. Мелкие животные предлагают много практических преимуществ (то есть дешевые, генетическая пластичность, высокую пропускную способность, наличии многочисленных генетических и иммунологических инструменты и наборы), и генетически модифицированных мышиные модели, как правило, принимаются для выполнения механистические исследования обнаруживают, особые молекулярные пути. В медико-биологических исследований сложных систем, тон биологическое значение и клиническая эффективность моделей мышей становится все более и более сомнительной. Они могут вводить в заблуждение и несут риск упрощение биологического сложности 2-9. Из-за особенностей межвидовых, ни один вид животных не будет полностью отражать человеческую ситуацию, а также использование более чем одной модели, кажется, быть полезным в междисциплинарной биомедицинских исследований подхода. В контексте трансляционной медицины, крупные животные предлагаем возможность служить сравнительные модели предоставления результатов с высокой биологической значимости двойного применения для здоровья человека и животных 1. Примечательно, что геном человека скорее напоминали по бычьей генома, чем геном лабораторных грызунов. Кроме того, недавно было подтверждено, что, по сравнению с других таксонов, геном мышей гораздо более переставить 10-12. В комплексе дизайна исследования, использование скота предлагает Uniqие возможность внутри отдельных долгосрочных исследованиях повторного сбора различных образцов в естественных условиях от одно-и-в-же индивида без ущерба для животного. Таким образом, функциональные, воспалительные и морфологические изменения можно отслеживать в этой же теме в течение определенного периода времени 13. Легких крупного рогатого скота в качестве подходящего Респиратор модели В связи с большим количеством существенных различий в легких анатомии, физиологии дыхания и легочной иммунологии, мыши не размножаются многие важные патофизиологические аспекты болезни легких человека. Это должно быть принято во внимание при использовании их в качестве моделей животных респираторных заболеваний 2,9,14-16. Хотя особенности анатомии и структуры существуют для каждого легкого млекопитающих, функциональные характеристики (т.е. объемы легких, воздушных потоков и дыхательных механика) лучше сопоставимы между взрослыми людьми и телят из-за подобных массы тела(50-100 кг). Видоспецифических характеристик легких крупного рогатого скота можно резюмировать следующим образом: левое легкое состоит из двух долей (Lõbus cranialis, который разделен на два сегмента, и Лобус caudalis), в то время как правое легкое состоит из четырех лепестков (Лобус cranialis, Лобус мышца, Лобус caudalis и Лобус вспомогательный `орган). В отличие от легких анатомии большинства других млекопитающих, бронхов правых ветвей черепных лепестков непосредственно из правой боковой стороне трахеи. По отношению к subgross анатомии, легких крупного рогатого скота представляет высокую степень дольчатость и высокий процент интерстициальной ткани 17,18, ведущих к относительно низкой удельной податливости легких и более высокое сопротивление легочной ткани 19. Таким образом, требуется дыхание активность достаточно высока по сравнению с другими видами 20,21. Высокая степень дольчатость приводит к сильному независимости сегментов. Таким образом, инфlammatory процессы ограничивается соединительной ткани перегородками, и больные и здоровые сегменты часто лежат в пределах одной доли. В связи с отсутствием залоговых дыхательных путей, легких крупного рогатого скота особенно подходит для зеркалирования обструктивной дисфункции 13. Что касается сосудистой в легких крупного рогатого скота, маленькие легочные артерии показывают очень видных слоев гладких мышц. Таким образом, теленок может также служить солидной животной модели легочной гипертензии или ремоделирования сосудов 22-24. В отношении респираторных инфекций, встречающиеся в природе заболевания существуют в животноводстве, что много общего со сравнимой заболеваний человека. Типичными примерами являются туберкулез крупного рогатого скота 25, респираторно-синцитиальный вирус (RSV) инфекций у телят 26-28, или естественно приобретенные Chlamydia инфекции 29. Таким образом, крупные животные модели действительно очень напоминают ситуацию в естественной хозяина. Таким образом, они являются наиболее USEFул изучения хост-патогенных взаимодействия и сложную патофизиологию соответствующего заболевания людьми 30,31. В биологически соответствующем модели респираторной инфекции Chlamydia psittaci, телята были выбраны, так как крупного рогатого скота представляют собой естественные хозяев за этого патогена 32-35. Информация, полученная из этой модели, по отношению к патогенезе заболевания или возможных путей передачи между животными и людьми, поможет расширить наши знания с ударом для обоих крупного рогатого скота и человека. Модель также может помочь проверить общепринятые и альтернативные терапевтические возможности для ликвидации легочной C. psittaci инфекции, которые, опять же, из интереса как к ветеринарному и медицине. Методы, применяемые к и образцы получены из бычьего дыхательной системы Эта статья описывает и иллюстрирует методы и методы диагностики applicablе в легких крупного рогатого скота и использовали в нашей модели для оценки обоих эффектов патогена на легких млекопитающих и эффективности терапевтического вмешательства. Бронхоскопия была выполнена в медицине с 1960 года и считается безопасной процедурой 36. В телят, экспериментальный бронхоскопии был описан в 1968 году впервые 37. Внутрибронхиального применение патогенов была предложена Potgieter соавт., Как надежный способ вызвать заболевание нижних дыхательных путей у телят 38 и в настоящее время является распространенным методом в коровьем исследования 34,39,40. Внутрибронхиального прививка определенного количества патогена под контролем видеоэндоскопических позволяет для селективного размещения инфекционного агента в легких. Это приводит к последовательной клинических и патологических у всех животных 34 и позволяет целевой выборки регионов легких, как ожидается, будут изменены из-за воздействия болезнетворных микроорганизмов. <pкласс = &quot;jove_content&quot;&gt; жидкости бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ) является хорошо описано показателем присутствия и тяжести воспаления легких. Бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ) является стандартной процедурой в медицине для диагностики различных заболеваний органов дыхания 41. В живой скот, БАЛ был введен Уилки и Маркхэм в конце семидесятых годов прошлого века 42. Считалось безопасным и повторяемые методика исследования нижних дыхательных путей крупного рогатого скота. В связи с отсутствием достаточных данных о параметрах БАЛ у здоровых животных, в 1988 Прингл и др.. Выполняемой БАЛ на здоровых телят с гибкий волоконно-оптический бронхоскоп. Авторы также отметили необходимость стандартизировать протоколы БАЛ в экспериментальных условиях на приобретение сопоставимые результаты 43. БАЛ до сих пор используется в качестве в естественных условиях выборочного метода у телят 44-46. Бронхиальная щеткой обычно используется в медицине какдиагностический инструмент, чтобы пробовать опухолевые поражения или для микробиологического анализа 36. Для исследовательских целей, первичных клеточных культур из эпителиальных клеток, полученных путем цитологического щеткой можно получить 47. У крупного рогатого скота, использование бронхиальных втулками для микробиологического анализа было описано охарактеризовать микробную среду легких 43. Трансбронхиальная биопсия легкого предоставляет образцы легочной ткани и является ценным диагностическим инструментом для диффузного заболевания легких у людей. Ятрогенная пневмоторакс и порядок связанных кровоизлияния являются осложнения, связанные с этой техникой. Их частота, как сообщается, менее одного процента в человеческих пациентов 48. Трансбронхиальная биопсия легкого не является общим методом для использования в крупного рогатого скота, из-за высокой стоимости оборудования, необходимого и времени, необходимого для получения биопсии. Вместо этого, чрескожные биопсии легких более удобны в полевых условиях 49-51.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1174">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:192px;">Veterinary Video Endoscope</td>
			<td style="width:419px;">Karl Storz GmbH &#38; Co. KG, Tuttlingen, Germany</td>
			<td style="width:121px;">PV-SG 22&#8211;140</td>
			<td style="width:443px;">diameter: 9 mm, working channel: 2,2 mm, working length 140 cm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">lavage catheter&#160;</td>
			<td>Karl Storz GmbH &#38; Co. KG, Tuttlingen, Germany</td>
			<td></td>
			<td>diameter: 2 mm; length: 180 cm, Luer-lock-adapter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">acuator</td>
			<td>WEPA Apothekenbedarf GmbH &#38; Co KG, Hillscheid, Germany</td>
			<td>32660</td>
			<td>length: 60 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">biopsy forceps</td>
			<td>Karl Storz GmbH &#38; Co. KG, Tuttlingen, Germany</td>
			<td>REF 60180LT</td>
			<td>1.8 mm, serrated, oval</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Omnifix 20 ml, Luer-Lock</td>
			<td>B. Braun Melsungen AG, Melsungen, Germany</td>
			<td>4617207V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">cytology brush</td>
			<td>mtp GmbH, Neuhausen ob Eck, Germany</td>
			<td>110240-10&#160;</td>
			<td>working length 180 cm, brush length: 15 mm, diameter 1.8 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">iv acess&#160;</td>
			<td>Henry Schein Vet GmbH, Hamburg, Germany</td>
			<td>370-211</td>
			<td>diameter 1.2 mm, length 43 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rompun 2% (xylazin)</td>
			<td>Bayer Vital GmbH, Leverkusen, Germany</td>
			<td></td>
			<td>0.2 mg/kg bodyweight</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ketamin 10% (ketamine)</td>
			<td>bela-pharm GmbH &#38; Co. KG, Vechta, Germany</td>
			<td></td>
			<td>2.0 mg/kg bodyweight</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">isotonic saline solution</td>
			<td>B. Braun Melsungen AG, Melsungen, Germany</td>
			<td>3200950</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SUB 6 waterbath</td>
			<td>CLF analytische Laborger&#228;te GmbH, Emersacker, Germany</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">metal tube speculum&#160;</td>
			<td>n/a</td>
			<td>n/a</td>
			<td>diameter: 3.5 cm, length: 35 cm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">flashlight</td>
			<td>n/a</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">siliconized glass bottles</td>
			<td>n/a</td>
			<td>n/a</td>
			<td>siliconize with Sigmacote (Sigma-Aldrich Co. LLC)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Omnifix Luer 3 ml</td>
			<td>B. Braun Melsungen AG, Melsungen, Germany</td>
			<td>4616025V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Omnifix Luer 5 ml</td>
			<td>B. Braun Melsungen AG, Melsungen, Germany</td>
			<td>4616057V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">sealing plugs</td>
			<td>Henry Schein Vet GmbH, Hamburg, Germany</td>
			<td>900-3057</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">inoculum</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>dilute pathogen in 8mL buffer</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the bovine lung in biomedical research: visually guided bronchoscopy, intrabronchial inoculation and in vivo sampling techniques

Существует постоянная поиск альтернативных моделях животных в исследовании респираторной медицины. В зависимости от цели исследования, крупные животные как модели болезни легких часто напоминают ситуацию легких человека гораздо лучше, чем мыши сделать. Работа с большими животных также предлагает возможность попробовать то же самое животное неоднократно в течение определенного течением времени, что позволяет долгосрочные исследования без ущерба для животных. Цель состояла в том, чтобы установить в естественных условиях методы отбора проб для использования в бычьей модели респираторного Chlamydia psittaci инфекции. Отбор проб следует проводить в различные моменты времени у каждого животного во время исследования, и образцы должны быть пригодными для изучения реакцию хозяина, а также патоген в экспериментальных условиях. Бронхоскопия является ценным диагностическим инструментом в медицине и ветеринарии. Это безопасный и минимально инвазивная процедура. Этот арктическийле описывает внутрибронхиального прививку телят, а также методы отбора проб для нижних дыхательных путей. Видеоэндоскопических, внутрибронхиального прививка приводит к очень последовательные клинические и патологические результаты во всех привитых животных и, следовательно, хорошо подходит для использования в моделях инфекционных заболеваний легких. Методы отбора проб описанные бронхоальвеолярного лаважа, бронхиальная щеткой и трансбронхиальная биопсия легкого. Все эти ценные диагностические инструменты в медицине, и могут быть адаптированы для экспериментальных целей в телят в возрасте 6-8 недель. Полученные образцы были пригодны как для обнаружения патогенов и характеристика тяжести воспаления легких у хозяина.

Курс болезни Эффект от патогена на здоровье животных можно оценить с помощью клиническом обследовании. В наших моделях респираторной инфекции, животные были рассмотрены два раза в день и клинические наблюдения были записаны с использованием балльной системы. Дополнительная информация была захвачена выполнении других Vivo методы в выборки, например, сбора крови и мазки или измерение функции легких. Патологические исследования проводились в различные моменты времени после инокуляции, чтобы описать ход инфекции 32-34. БАЛ скорость восстановления Скорость восстановления в привила жидкости было 83.05 ± 4.58% (среднее ± SD). Определение патогенных микроорганизмов Рекультивация возбудителя могут быть выполнены из бронхов втулками. Кроме того, ПЦР скрининг различных образцов можно обнаружить возбудителя, например тиСГУП биопсия, образец цитология кисть, БАЛ-клетки 52 или глотки мазков. Визуализация возбудителя можно, выполняя иммуногистохимию замороженных участков биопсии легких и осаждения препаратов в БАЛ-клеток (рис. 3). В предыдущих экспериментах, ПЦР из проб крови и тампоны (конъюнктивы, кала, носовых) были выполнены для характеристики распространения и осыпание возбудителя 32. Маркеры местное воспаление легочной ткани В БАЛ, различные параметры воспаление легких могут быть изучены. Общее количество клеток, а доля нейтрофилов обычно увеличивается, когда воспаление легких присутствует. Для дифференциации клеток, отстойники препараты БАЛ-клеток могут быть окрашены в соответствии с Giemsa и дифференцировке, используя масла погружение (рис. 4). Сотовые и жидкие пропорции БАЛ отделены центрифугированием (300 мкг, 20 мин). БАЛ-Супернатант содержит различные маркеры, которые изменяются в течение воспалительных процессов в легких и могут быть изучены в экспериментальных условиях. Примерами являются общий белок и эйкозаноиды 29,34. Схематический общий вид возможного дальнейшего использования описанных образцов показана на рисунке 5. <img alt="Рисунок 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51557/51557fig1highres.jpg" width="500" /> Рисунок 1. Схема легких крупного рогатого скота с прививки сайтов (желтый). Цифры указывают порядок, в котором посевной вводят в другом бронхов. П: правый; L: левый. Правое легкое: 1 Лобус мышца: 0,5 мл, 2 Лобус вспомогательный `орган: 0,5 мл, 3 Lõbus caudalis: 0,5 мл и 4 1,0 мл; Левое легкое: Lõbus cranialis, <strong&gt; 5 Парс cranialis: 0,5 мл, 6 Парс caudalis: 0,5 мл, 7 Лобус caudalis: 1,5 мл, 8 Lõbus cranialis, Парс caudalis: 1,0 мл. <img alt="Рисунок 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51557/51557fig2highres.jpg" width="500" /> . Рисунок 2 Схема легких крупного рогатого скота с прививки сайтов (желтый) и участков отбора проб:. Бронхоальвеолярного лаважа (синий), бронхиальная щеточных (зеленый), и биопсии легких (оранжевый) Обратите внимание, что все образцы получены из регионов, где возбудитель был депонированных раньше. R: правый, L: левый. <img alt="Рисунок 3" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51557/51557fig3highres.jpg" width="500" /> Рисунок 3.) Биопсия легких от теленка инокулированного Хл<html> amydia psittaci 4 дня после прививки (точек на дюйм), б) сотовой осадок БАЛ теленка засевают С. psittaci 9 точек на дюйм. Иммуногистохимический маркировка хламидий. Хламидийные включений (стрелки) присутствуют в легких (а) и в альвеолярных макрофагов (б). Гематоксилин контрастирующая. <img alt="Рисунок 4" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51557/51557fig4highres.jpg" width="500" /> Рисунок 4. Сотовый осадок БАЛ теленка инокулированного С. psittaci 9 точек на дюйм. Альвеолярные макрофаги (#) являются преобладающим типом клеток в БАЛ. Количество нейтрофильных гранулоцитов (*) возрастает при воспалительных процессах присутствуют. Изменения Паппенхайм окрашивание. ES.jpg &quot;ширина =&quot; 600 &quot;/&gt; Рисунок 5. Возможные методы пробоподготовки. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51557/51557fig5highres.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.</a>

Watch this Scientific Journal Video about The Bovine Lung in Biomedical Research: Visually Guided Bronchoscopy, Intrabronchial Inoculation and In Vivo Sampling Techniques at JoVE.com

The Bovine Lung in Biomedical Research: Visually Guided Bronchoscopy, Intrabronchial Inoculation and In Vivo Sampling Techniques

В этой статье описывается бронхоскопических методы в легких крупного рогатого скота в условиях эксперимента, т.е. bronchoscopically руководствуясь прививку, бронхоальвеолярный промывание, бронхиальной щеткой и трансбронхиальную биопсию легкого.

Легких крупного рогатого скота в биомедицинских исследований: Визуально Руководствуясь Бронхоскопия, внутрибронхиального Прививка и<em&gt; В Vivo</em&gt; Методы отбора проб

There is an ongoing search for alternative animal models in research of respiratory medicine. Depending on the goal of the research, large animals as ...

Research

JoVE Journal

Medicine

The Bovine Lung in Biomedical Research: Visually Guided Bronchoscopy, Intrabronchial Inoculation and In Vivo Sampling Techniques

Making Sense of Listening: The IMAP Test Battery

Оправдание Аудирование: Аккумулятор IMAP испытаний

The ability to hear is only the first step towards making sense of the range of information contained in an auditory signal. Of equal importance are the ...

MRI-guided Disruption of the Blood-brain Barrier using Transcranial Focused Ultrasound in a Rat Model

МРТ наведением Нарушение гематоэнцефалический барьер использованием транскраниальной сфокусированным ультразвуком в крысиной модели

Focused ultrasound (FUS) disruption of the blood-brain barrier (BBB) is an increasingly investigated technique for circumventing the BBB1-5. The BBB is a ...

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

В естественных условиях 19 F МРТ для отслеживания сотовых

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

Метод Изолированные<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Легких перфузии в крысиной модели: уроки, извлеченные из Разработка EVLP программы Rat

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed ...

Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research

Закапывания и фиксация методы полезны в мышь легких исследования рака

The ability to instill live agents, cells, or chemicals directly into the lung without injuring or killing the mice is an important tool in lung cancer ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

Истощение мышиных клеток из ксенотрансплантатов опухолей человека значительно улучшает Downstream Анализ клеток-мишеней

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

Фосфор-31 спектроскопии магнитного резонанса: Прибор для измерения<em&gt; В Vivo</em&gt; Митохондриальной окислительное фосфорилирование потенциала в скелетных мышцах человека

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo ...

Sampling Strategies and Processing of Biobank Tissue Samples from Porcine Biomedical Models

Стратегий выборки и обработки образцов ткани биобанка из свинины биомедицинской модели

In translational medical research, porcine models have steadily become more popular. Considering the high value of individual animals, particularly of ...

Direct Intrabronchial Administration to Improve the Selective Agent Deposition Within the Mouse Lung

Прямая интрабронхиальная администрация для улучшения селективного осаждения агента в мышь легких

Intratracheal (IT) administration of experimental agents is an essential technique in murine models of diffuse lung diseases, such as bleomycin-induced ...

On-Site Sampling and Extraction of Brain Tumors for Metabolomics and Lipidomics Analysis

Выборка и удаление опухолей головного мозга для метаболомики и липидомического анализа

Despite the variety of tools available for cancer diagnosis and classification, methods that enable fast and simple characterization of tumors are still ...