Name: method for obtaining primary ovarian cancer cells from solid specimens
Uploaded: 2014-02-04T15:00:00
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Wir möchten uns für die Unterstützung bei Patienten Gewebeproben Sammlung danke den Mitarbeitern des Tissue Beschaffungsmöglichkeiten der Universität von Minnesota. Diese Arbeit wurde durch das Department of Defense Eierstockkrebs-Forschungsprogramm (OCRP) OC093424 zu MB, die von der Randy Shaver Krebsforschung und Gemeinschaftsfonds zur MB, von der Minnesota-Eierstockkrebs-Allianz zu MB und durch die Gynäkologische Onkologie Abteilungs Fonds MB. Die Geldgeber hatten keine Rolle in Studiendesign, Datenerfassung und Analyse, Entscheidung zur Veröffentlichung oder der Zubereitung des Manuskripts.

Ethikerklärung Feste Proben von Eierstockkrebs wurden von der Universität von Minnesota Tissue Beschaffung Facility (TPF) nach Institutional Review Board Committee erhalten: Human Betreff Board (IRB)-Zulassung. 1. Reagenz-Setup <ol><li> Vorbereitung komplettem DMEM Medium durch Hinzu DMEM mit 10% FBS und 100 Einheiten Penicillin-Streptomycin. Speichert das Medium bei 4 ° C und warm auf 37 ° C vor der Verwendung. </li><li> Aliquot Dispase II in separate Bände 5-...

<ol>
	<li>Kurman, R. J., Visvanathan, K., Roden, R., Wu, T. C., Ie M, S. h. i. h. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+detection+and+treatment+of+ovarian+cancer:+shifting+from+early+stage+to+minimal+volume+of+disease+based+on+a+new+model+of+carcinogenesis.">Early detection and treatment of ovarian cancer: shifting from early stage to minimal volume of disease based on a new model of carcinogenesis.</a> Am. J. Obstet. Gynecol. 198 (4), 351-356 (2008).</li><li>Kuhn, E., Kurman, R. J., Shih, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+Cancer+Is+an+Imported+Disease:+Fact+or+Fiction.">Ovarian Cancer Is an Imported Disease: Fact or Fiction.</a> Curr. Obstet. Gynecol. Rep. 1 (1), 1-9 (2012).</li><li>Sarojini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+detection+biomarkers+for+ovarian.">Early detection biomarkers for ovarian.</a> J. Oncol. , (2012).</li><li>Shepherd, T. G., Theriault, B. L., Campbell, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nachtigal+M.W.+Primary+culture+of+ovarian+surface+epithelial+cells+and+ascites-derived+ovarian+cancer+cells+from+patients.">Nachtigal M.W. Primary culture of ovarian surface epithelial cells and ascites-derived ovarian cancer cells from patients.</a> Nat. Protoc. 1 (6), 2643-2649 (2006).</li><li>Tsao, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+human+ovarian+surface+epithelial+cells+immortalized+by+human+papilloma+viral+oncogenes+(HPV-E6E7+ORFs).">Characterization of human ovarian surface epithelial cells immortalized by human papilloma viral oncogenes (HPV-E6E7 ORFs).</a> Exp. Cell. Res. 218 (2), 499-507 (1995).</li><li>Auersperg, N., Maines-Bandiera, S. L., Dyck, H. G., Kruk, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+cultured+human+ovarian+surface+epithelial+cells:+phenotypic+plasticity+and+premalignant+changes.">Characterization of cultured human ovarian surface epithelial cells: phenotypic plasticity and premalignant changes.</a> Lab. Invest. 71 (4), 510-518 (1994).</li><li>Brewer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+model+of+normal,+immortalized+ovarian+surface+epithelial+and+ovarian+cancer+cells+for+chemoprevention+of+ovarian+cancer.">In vitro model of normal, immortalized ovarian surface epithelial and ovarian cancer cells for chemoprevention of ovarian cancer.</a> Gynecol. Oncol. 98 (2), 182-192 (2005).</li><li>Sueblinvong, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment,+characterization+and+downstream+application+of+primary+ovarian+cancer+cells+derived+from+solid+tumors.">Establishment, characterization and downstream application of primary ovarian cancer cells derived from solid tumors.</a> PLoS One. 7 (11), (2012).</li><li>Rockwell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo-in+vitro+tumour+cell+lines:+characteristics+and+limitations+as+models+for+human+cancer.">In vivo-in vitro tumour cell lines: characteristics and limitations as models for human cancer.</a> Br. J. Cancer Suppl. 41 (4), 118-122 (1980).</li><li>Wong, C., Chen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development,+application+and+limitations+of+breast+cancer+cell+lines+to+study+tamoxifen+and+aromatase+inhibitor+resistance.">The development, application and limitations of breast cancer cell lines to study tamoxifen and aromatase inhibitor resistance.</a> J. Steroid. Biochem. Mol. Biol. 131 (3-5), 83-92 (2012).</li></ol>

Ein besseres Verständnis der Ätiologie und Eierstockkrebs-Entwicklung ist entscheidend für die Verbesserung der Ergebnisse der Frauen, die von dieser schweren Krankheit betroffen. In diesem Zusammenhang ist der Einsatz von etablierten und &quot;handelsüblichen&quot; Eierstockkrebs-Zelllinie ist zweifellos enorm nützlich. Doch heute wissen wir, dass Krebszelllinien sind nicht repräsentativ für den menschlichen Tumor sie aus in viele Aspekte, einschließlich der Mangel an Heterogenität 9,10 entstanden. ...

Trotz seiner relativ geringen Inzidenz, Eierstockkrebs ist die tödlichste der gynäkologischen Krankheiten und die fünfthäufigste Ursache für Todesfälle durch Krebs bei Frauen 1,2. Dies ist vor allem auf den Mangel an zuverlässigen Tools und Modelle, die treu zu rekapitulieren die Initiierung und Progression der Erkrankung 3. Die meisten unserer heutigen Wissen über Eierstockkrebs wurde durch die Verwendung von Eierstock verewigt Oberfläche Epithelzellen (IOSen), Eierstockkrebs-Zelllinien und primären Eierstockkrebszellen aus Aszites 4-7 gewonnen möglich. Leider hat die Verwendung mehrere Einschränkungen, einschließlich einer Reihe von genetischen und phänotypischen Änderungen Immortalisierung Verfahren oder in vitro-Durchgänge zugeordnet ist, und die Heterogenität der Population von Aszitesflüssigkeit Herstellung resultieren. Daher primären Eierstockkrebszellen aus identifizierbaren und spezifischen festen Proben von Eierstockkrebs abgeleitet sind eine unique Werkzeug für die Untersuchung Eierstockkrebs Progression. Die Hauptschwierigkeiten in den Erhalt dieser bösartigen Zellen beteiligt sind auf ein übermäßiges Wachstum von Stromazellen oder Fibroblasten mit Verlust der Lebensfähigkeit und vorzeitige fehlende Proliferationskapazität in der Kultur dieser Zellen EOC. Verschiedene Methoden zur Einzelzellsuspensionen aus soliden Tumoren zu erstellen derzeit existiert, durch mechanische Mittel oder enzymatische Dissoziation jedoch bestimmte Techniken ergeben eine größere Menge des bevorzugten Ergebnis 8. Hier zeigen wir, dass die enzymatische Verdauung mit Dispase II führt zu einer effektiven Wiederherstellung lebensfähiger, Fibroblasten frei EOC-Zellen. Die so erhaltenen Kulturen EOC sind sehr anfällig für genetische Manipulation und sind in Arzneimittel-Screening-Tests, was anzeigt, dass diese EOC Kulturen sind für viele Anwendungen abwärts.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="720">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:125px;">Company</td>
			<td style="width:155px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">REAGENTS:</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1X PBS, sterile&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:155px;">14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">&#160;Screw lid, polypropylene specimen container, sterile (Thermoscientific)</td>
			<td style="width:125px;">Thermoscientific</td>
			<td style="width:155px;">02 1090</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;DMEM medium, sterile&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:155px;">11995-065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">&#160;Fetal bovine serum, sterile</td>
			<td style="width:125px;">Thermo Scientific Hyclone</td>
			<td style="width:155px;">SH30396.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">&#160;100x penicillin-streptomycin, liquid (Invitrogen)</td>
			<td style="width:125px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:155px;">15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;Dispase II, sterile (Roche)</td>
			<td style="width:125px;">Roche</td>
			<td style="width:155px;">04942 078 001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">&#160;Small fine-tip forceps and scalpel blade, sterile</td>
			<td style="width:125px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:155px;">forceps: 08-953E, blades: 08-927-5D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;Small dissecting scissors, sterile</td>
			<td style="width:125px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:155px;">08-945</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">&#160;15 ml conical capped tubes, sterile (BD Falcon)</td>
			<td style="width:125px;">BD, Falcon</td>
			<td align="right" style="width:155px;">352097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">50 ml conical capped tubes, sterile (BD Falcon)</td>
			<td style="width:125px;">BD, Falcon</td>
			<td align="right" style="width:155px;">352027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;10 ml serological pipette, sterile&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Corning</td>
			<td style="width:155px;">13-678-11E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6 ml syringe plunger, sterile&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Tyco Healthcare</td>
			<td align="right" style="width:155px;">8881516911</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Nylon filter (70 &#956;m ) cell strainer, sterile (BD Falcon)</td>
			<td style="width:125px;">BD Falcon</td>
			<td align="right" style="width:155px;">352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5-cm Petri dish, sterile&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Corning</td>
			<td align="right" style="width:155px;">430166</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10-cm Petri dish, sterile&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Corning</td>
			<td align="right" style="width:155px;">430167</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

method for obtaining primary ovarian cancer cells from solid specimens

Zuverlässige Werkzeuge für die Untersuchung von Eierstockkrebs Initiierung und Progression sind dringend erforderlich. Während die Verwendung von Eierstock-Krebszelllinien bleibt ein wertvolles Werkzeug für das Verständnis von Eierstock-Krebs hat ihr Einsatz viele Einschränkungen. Dazu gehören der Mangel an Heterogenität und die Fülle von genetischen Veränderungen mit erweiterten In-vitro-Passage verbunden. Hier beschreiben wir eine Methode, die für eine schnelle Einrichtung der primären Eierstockkrebszellen bilden können feste klinischen Proben zum Zeitpunkt der Operation gesammelt. Das Verfahren besteht aus der klinischen Proben zur enzymatischen Verdau für 30 min. Die isolierten Zellsuspension wird erlaubt, zu wachsen und kann für Folgeanwendungen einschließlich Arzneimittel-Screening verwendet werden. Der Vorteil der primären Eierstockkrebszelllinien gegenüber etablierten Eierstock-Krebszelllinien ist, dass sie repräsentativ für die ursprünglichen spezifischen klinischen Proben sie von abgeleitet und kann von verschiedenen Stellen abgeleitet werden, ob es primary oder metastasierenden Eierstockkrebs.

Frische klinischen Proben von Eierstockkrebs werden nach der Operation gesammelt (Abbildung 1) und in kleine Stücke (2A und 2B), die Zellaufschlämmung bilden geschnitten. Dies erlaubt eine optimale Belichtung der Proben in der enzymatischen Behandlung. Zelle Aufschlämmung einer enzymatischen Verdauung ausgesetzt und bei 37 ° C für 30 min inkubiert. Während der Inkubationszeit der Schlamm wird zunehmend bewölkt (vor allem nach jeder Bewegung), und dies ist ein Zei...

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Method for Obtaining Primary Ovarian Cancer Cells From Solid Specimens

Verfahren zur Gewinnung von Primäreierstockkrebszellen von Solid Proben

Diese Studie beschreibt eine detaillierte Methode zur Isolierung und Charakterisierung von primären Eierstockkrebszellen aus soliden klinischen Proben. Eierstockkrebs klinischen Proben werden enzymatische Verdauung unterzogen, um lebensfähig, Fibroblasten frei epithelialen Eierstockkrebs (EOC) Zellen sehr gut für Downstream-Anwendungen zu erhalten.

Reliable tools for investigating ovarian cancer initiation and progression are urgently needed. While the use of ovarian cancer cell lines remains a ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Method for Novel Anti-Cancer Drug Development using Tumor Explants of Surgical Specimens

Verfahren zur Novel Anti-Cancer Drug Development mit Tumor Explantate von chirurgischen Proben


The current therapies for malignant glioma have only palliative effect. For therapeutic development, one hurdle is the discrepancy of efficacy determined ...

Forschung

Medizin

Time-lapse Imaging of Primary Preneoplastic Mammary Epithelial Cells Derived from Genetically Engineered Mouse Models of Breast Cancer

Zeitraffer-Imaging of Primary Präkanzeröse Brustepithelzellen aus gentechnisch veränderten Mausmodellen der Breast Cancer Abgeleitet

Time-lapse  imaging can be used to compare behavior of cultured primary preneoplastic  mammary epithelial cells derived from different genetically ...

A Sensitive Method to Quantify Senescent Cancer Cells

Eine empfindliche Methode zur Quantifizierung Seneszente Cancer Cells

Human cells do not indefinitely proliferate. Upon external and/or intrinsic  cues, cells might die or enter a stable cell cycle arrest called senescence. ...

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

Isolierung von Krebs Stammzellen aus menschlichen Prostatakrebs-Proben

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Two Methods for Establishing Primary Human Endometrial Stromal Cells from Hysterectomy Specimens

Zwei Methoden zur Festlegung von primären humanen Endometrium Stromazellen aus Hysterektomie Proben

Many efforts have been devoted to establish in vitro cell culture systems. These systems are designed to model a vast number of in vivo processes. Cell ...

Assessment of Ovarian Cancer Spheroid Attachment and Invasion of Mesothelial Cells in Real Time

Beurteilung von Eierstockkrebs Sphäroid Bindung und Invasion von Mesothelzellen in Echtzeit

Ovarian cancers metastasize by shedding into the peritoneal fluid and dispersing to distal sites within the peritoneum. Monolayer cultures do not ...

Murine Model for Non-invasive Imaging to Detect and Monitor Ovarian Cancer Recurrence

Mausmodell für nicht-invasive Bildgebungs zu erfassen und zu überwachen Eierstockkrebs Rezidiv

Epithelial ovarian cancer is the most lethal gynecologic malignancy in the United States. Although patients initially respond to the current standard of ...

Enrichment for Chemoresistant Ovarian Cancer Stem Cells from Human Cell Lines

Bereicherung für chemoresistenten Eierstockkrebs Stammzellen aus menschlichen Zelllinien

Cancer stem cells (CSCs) are defined as a subset of slow cycling and undifferentiated cells that divide asymmetrically to generate highly proliferative, ...

Quantitative Mass Spectrometric Profiling of Cancer-cell Proteomes Derived From Liquid and Solid Tumors

Quantitative massenspektrometrische Analyse von Krebs-Zellen-Proteome Abgeleitet von Liquid und soliden Tumoren

In-depth analyses of cancer cell proteomes are needed to elucidate oncogenic pathomechanisms, as well as to identify potential drug targets and diagnostic ...

In vitro Enrichment of Ovarian Cancer Tumor-initiating Cells

In vitro Enrichment of Ovarian Cancer Tumor-initiating Cells

In vitro Anreicherung des Eierstockkrebs Tumor-initiierenden Zellen

Evidence suggests that small subpopulations of tumor cells maintain a unique self-renewing and differentiation capacity and may be responsible for tumor ...