Name: method for obtaining primary ovarian cancer cells from solid specimens
Uploaded: 2014-02-04T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Method for Obtaining Primary Ovarian Cancer Cells From Solid Specimens at JoVE.com

ברצוננו להודות לצוות של מתקן רכש רקמות של אוניברסיטת מינסוטה לקבלת סיוע באיסוף דגימות רקמת מטופל. עבודה זו נתמכה על ידי תכנית משרד ההגנה חקר סרטן השחלות (OCRP) OC093424 לMB, על ידי מחקר רנדי מכונת גילוח למלחמה בסרטן והקרן הקהילתית לMB, על ידי השחלות הברית למלחמה בסרטן מינסוטה לMB ועל ידי הקרן לגינקולוגיה אונקולוגיה המחלקתית לייט. היו הממנים שום תפקיד בעיצוב מחקר, איסוף נתונים וניתוח, החלטה לפרסם או הכנה של כתב היד.

הצהרת אתיקה דגימות מוצקות של סרטן השחלות התקבלו ממתקן אוניברסיטת מינסוטה רכש רקמות (TPF) לאחר מוסדי מועצה לביקורת הוועדה: אישור דירקטוריון הסובייקט אנושי (IRB). 1. התקנה מגיב <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;directio...

<ol>
	<li>Kurman, R. J., Visvanathan, K., Roden, R., Wu, T. C., Ie M, S. h. i. h. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+detection+and+treatment+of+ovarian+cancer:+shifting+from+early+stage+to+minimal+volume+of+disease+based+on+a+new+model+of+carcinogenesis.">Early detection and treatment of ovarian cancer: shifting from early stage to minimal volume of disease based on a new model of carcinogenesis.</a> Am. J. Obstet. Gynecol. 198 (4), 351-356 (2008).</li><li>Kuhn, E., Kurman, R. J., Shih, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+Cancer+Is+an+Imported+Disease:+Fact+or+Fiction.">Ovarian Cancer Is an Imported Disease: Fact or Fiction.</a> Curr. Obstet. Gynecol. Rep. 1 (1), 1-9 (2012).</li><li>Sarojini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+detection+biomarkers+for+ovarian.">Early detection biomarkers for ovarian.</a> J. Oncol. , (2012).</li><li>Shepherd, T. G., Theriault, B. L., Campbell, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nachtigal+M.W.+Primary+culture+of+ovarian+surface+epithelial+cells+and+ascites-derived+ovarian+cancer+cells+from+patients.">Nachtigal M.W. Primary culture of ovarian surface epithelial cells and ascites-derived ovarian cancer cells from patients.</a> Nat. Protoc. 1 (6), 2643-2649 (2006).</li><li>Tsao, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+human+ovarian+surface+epithelial+cells+immortalized+by+human+papilloma+viral+oncogenes+(HPV-E6E7+ORFs).">Characterization of human ovarian surface epithelial cells immortalized by human papilloma viral oncogenes (HPV-E6E7 ORFs).</a> Exp. Cell. Res. 218 (2), 499-507 (1995).</li><li>Auersperg, N., Maines-Bandiera, S. L., Dyck, H. G., Kruk, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+cultured+human+ovarian+surface+epithelial+cells:+phenotypic+plasticity+and+premalignant+changes.">Characterization of cultured human ovarian surface epithelial cells: phenotypic plasticity and premalignant changes.</a> Lab. Invest. 71 (4), 510-518 (1994).</li><li>Brewer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+model+of+normal,+immortalized+ovarian+surface+epithelial+and+ovarian+cancer+cells+for+chemoprevention+of+ovarian+cancer.">In vitro model of normal, immortalized ovarian surface epithelial and ovarian cancer cells for chemoprevention of ovarian cancer.</a> Gynecol. Oncol. 98 (2), 182-192 (2005).</li><li>Sueblinvong, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment,+characterization+and+downstream+application+of+primary+ovarian+cancer+cells+derived+from+solid+tumors.">Establishment, characterization and downstream application of primary ovarian cancer cells derived from solid tumors.</a> PLoS One. 7 (11), (2012).</li><li>Rockwell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo-in+vitro+tumour+cell+lines:+characteristics+and+limitations+as+models+for+human+cancer.">In vivo-in vitro tumour cell lines: characteristics and limitations as models for human cancer.</a> Br. J. Cancer Suppl. 41 (4), 118-122 (1980).</li><li>Wong, C., Chen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development,+application+and+limitations+of+breast+cancer+cell+lines+to+study+tamoxifen+and+aromatase+inhibitor+resistance.">The development, application and limitations of breast cancer cell lines to study tamoxifen and aromatase inhibitor resistance.</a> J. Steroid. Biochem. Mol. Biol. 131 (3-5), 83-92 (2012).</li></ol>

הבנה טובה יותר של האטיולוגיה סרטן השחלות ופיתוח היא חיונית לשיפור התוצאות של נשים מושפעות מהמחלה ההרסנית הזאת. בהקשר זה, השימוש בהוקם ו&quot; זמין מסחרי &quot;שורת תאי סרטן השחלות הייתה ללא ספק שימושית מאוד. עם זאת, היום אנחנו יודעים ששורות תאי הסרטן אינן נציג של הגידול הא?...

למרות השכיחות הנמוכה יחסית שלה, סרטן השחלות הוא הקטלני ביותר של מחלות גינקולוגיות והגורם המובילים החמישי של מקרי מוות מסרטן בקרב נשים 1,2. זאת, בעיקר בשל המחסור בכלים אמינים ומודלים שנאמנו לסכם ייזום והתקדמות המחלה 3. רוב הידע שלנו היום על סרטן השחלות היה אפשרי באמצעות השימוש בתאים הונצחו השחלות אפיתל פני השטח (IOSEs), שורות תאי סרטן השחלות וסרטן השחלות תאים ראשוניים התאוששו מ4-7 הנוזלים הרעיל. למרבה הצער, יש לו השימוש בם מספר מגבלות, כולל מספר השינויים הגנטיים ופנוטיפי הקשורים בתהליך הנצחה או במעברי מבחנה וההטרוגניות של האוכלוסייה כתוצאה מהכנת נוזלים רעילה. לכן, תאי סרטן השחלות עיקריים הנגזרים מדגימות מוצקות לזיהוי והספציפיים של סרטן השחלות מייצגים uniquכלי דואר לחקר התפתחות סרטן השחלות. הקשיים העיקריים המעורבים בתאים הממאירים אלה קבלת הם תוצאה של צמיחת יתר של תאי סטרומה או fibroblasts יחד עם הפסד של כדאיות וחוסר המוקדם של יכולת שגשוג בתרבות של תאי EOC אלה. כמה שיטות ליצירת תא בודד השעיות מגידולים מוצקים קיימות כיום, באמצעים מכאניים או ניתוק האנזימטית, לעומת זאת טכניקות מסוימות להניב כמות גדולה יותר של התוצאה המועדפת 8. כאן, אנו מראים כי עיכול אנזימטי עם dispase השני תוצאות בהתאוששות יעילה של תאי EOC קיימא, ללא פיברובלסטים. תרבויות EOC מה שהושגו הן רגישות מאוד למניפולציה גנטית ושימושיות גם בבדיקות סמים, מצביעים על כך שתרבויות EOC אלה מתאימות ליישומים רבים במורד הזרם.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="720">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:125px;">Company</td>
			<td style="width:155px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">REAGENTS:</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1X PBS, sterile&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:155px;">14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">&#160;Screw lid, polypropylene specimen container, sterile (Thermoscientific)</td>
			<td style="width:125px;">Thermoscientific</td>
			<td style="width:155px;">02 1090</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;DMEM medium, sterile&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:155px;">11995-065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">&#160;Fetal bovine serum, sterile</td>
			<td style="width:125px;">Thermo Scientific Hyclone</td>
			<td style="width:155px;">SH30396.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">&#160;100x penicillin-streptomycin, liquid (Invitrogen)</td>
			<td style="width:125px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:155px;">15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;Dispase II, sterile (Roche)</td>
			<td style="width:125px;">Roche</td>
			<td style="width:155px;">04942 078 001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">&#160;Small fine-tip forceps and scalpel blade, sterile</td>
			<td style="width:125px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:155px;">forceps: 08-953E, blades: 08-927-5D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;Small dissecting scissors, sterile</td>
			<td style="width:125px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:155px;">08-945</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">&#160;15 ml conical capped tubes, sterile (BD Falcon)</td>
			<td style="width:125px;">BD, Falcon</td>
			<td align="right" style="width:155px;">352097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">50 ml conical capped tubes, sterile (BD Falcon)</td>
			<td style="width:125px;">BD, Falcon</td>
			<td align="right" style="width:155px;">352027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;10 ml serological pipette, sterile&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Corning</td>
			<td style="width:155px;">13-678-11E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6 ml syringe plunger, sterile&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Tyco Healthcare</td>
			<td align="right" style="width:155px;">8881516911</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Nylon filter (70 &#956;m ) cell strainer, sterile (BD Falcon)</td>
			<td style="width:125px;">BD Falcon</td>
			<td align="right" style="width:155px;">352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5-cm Petri dish, sterile&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Corning</td>
			<td align="right" style="width:155px;">430166</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10-cm Petri dish, sterile&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Corning</td>
			<td align="right" style="width:155px;">430167</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

method for obtaining primary ovarian cancer cells from solid specimens

כלים אמינים לחקירת ייזום סרטן השחלות ואת ההתקדמות נחוצים בדחיפות. בעוד שהשימוש בשורות תאי סרטן השחלות נשאר כלי רב ערך להבנת סרטן השחלות, יש השימוש בם מגבלות רבות. אלה כוללים את חוסר ההטרוגניות והשפע של שינויים גנטיים הקשורים passaging הממושך במבחנה. כאן אנו מתארים שיטה המאפשרת להקמה מהירה של תאי סרטן שחלות ראשוניים ליצור דגימות קליניות מוצקות שנאספו בזמן הניתוח. השיטה מורכבת מהכפפת דגימות קליניות לעיכול אנזימטי ל30 דקות. ההשעיה התא בודדת מותרת לגדול ויכולה לשמש ליישומים במורד הזרם, כולל הקרנת סמים. היתרון של שורות תאי סרטן השחלות עיקריות על שורות תאי סרטן השחלות הוקמו הוא שהם מייצגים את הדגימות הקליניות הספציפיות המקוריות הם נגזרים וניתן להפיק מן האתרים שונים אם פרימהסרטן השחלות ר&quot;י או גרורתי.

דגימות קליניות טריות של סרטן השחלות נאספות לאחר הניתוח (איור 1) וחותכים לחתיכות קטנות (2A דמויות ו2B) המהוות את תרחיף התא. זה מאפשר חשיפה אופטימלית של הדגימות לטיפול אנזימטי. תרחיף תא חשוף לעיכול אנזימטי וטופחו על C ° 37 ל30 דקות. במהלך זמן הדגירה slurry הופך ...

Watch this Scientific Journal Video about Method for Obtaining Primary Ovarian Cancer Cells From Solid Specimens at JoVE.com

Method for Obtaining Primary Ovarian Cancer Cells From Solid Specimens

שיטה לקבלת תאי סרטן השחלות ראשיים מתוך דגימות מוצקים

מחקר זה מתאר שיטה מפורטת לבידוד ואפיון של תאי סרטן שחלות ראשוניים מדגימות קליניות מוצקות. דגימות קליניות בסרטן השחלות חשופים לעיכול אנזימטי לקבל סרטן קיימא, ללא פיברובלסטים אפיתל השחלות תאים (EOC) מתאים במיוחד עבור יישומים במורד הזרם.

Reliable tools for investigating ovarian cancer initiation and progression are urgently needed. While the use of ovarian cancer cell lines remains a ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Method for Novel Anti-Cancer Drug Development using Tumor Explants of Surgical Specimens

שיטה לפיתוח נגד סרטן רומן והתרופות באמצעות Explants גידול של דגימות כירורגי


The current therapies for malignant glioma have only palliative effect. For therapeutic development, one hurdle is the discrepancy of efficacy determined ...

Time-lapse Imaging of Primary Preneoplastic Mammary Epithelial Cells Derived from Genetically Engineered Mouse Models of Breast Cancer

הדמית זמן לשגות של תאי אפיתל חלב Preneoplastic ראשוניים הנגזרת ממודלי עכבר מהונדס גנטי של סרטן השד

Time-lapse  imaging can be used to compare behavior of cultured primary preneoplastic  mammary epithelial cells derived from different genetically ...

A Sensitive Method to Quantify Senescent Cancer Cells

שיטה רגישה לכמת תאי סרטן senescent

Human cells do not indefinitely proliferate. Upon external and/or intrinsic  cues, cells might die or enter a stable cell cycle arrest called senescence. ...

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

בידוד של תאי גזע סרטני מדגימות אדם סרטן הערמונית

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Two Methods for Establishing Primary Human Endometrial Stromal Cells from Hysterectomy Specimens

שתי שיטות לקביעת אדם תאי רירית הרחם סטרומה ראשיים מדוגמאות כריתת הרחם

Many efforts have been devoted to establish in vitro cell culture systems. These systems are designed to model a vast number of in vivo processes. Cell ...

Assessment of Ovarian Cancer Spheroid Attachment and Invasion of Mesothelial Cells in Real Time

הערכה של קובץ מצורף סרטן השחלות אליפטית ופלישה של תאי mesothelial בזמן אמת

Ovarian cancers metastasize by shedding into the peritoneal fluid and dispersing to distal sites within the peritoneum. Monolayer cultures do not ...

Murine Model for Non-invasive Imaging to Detect and Monitor Ovarian Cancer Recurrence

דגם Murine הדמיה בלתי פולשנית לזיהוי ומעקב סרטן השחלות הישנות

Epithelial ovarian cancer is the most lethal gynecologic malignancy in the United States. Although patients initially respond to the current standard of ...

Enrichment for Chemoresistant Ovarian Cancer Stem Cells from Human Cell Lines

העשרה לתאי גזע Chemoresistant סרטן השחלות משורות תאים אנושיות

Cancer stem cells (CSCs) are defined as a subset of slow cycling and undifferentiated cells that divide asymmetrically to generate highly proliferative, ...

Quantitative Mass Spectrometric Profiling of Cancer-cell Proteomes Derived From Liquid and Solid Tumors

Mass כמותי spectrometric פרופיל של Proteomes סרטן התאים נגזרים מנוזלים וגידולים מוצקים

In-depth analyses of cancer cell proteomes are needed to elucidate oncogenic pathomechanisms, as well as to identify potential drug targets and diagnostic ...

In vitro Enrichment of Ovarian Cancer Tumor-initiating Cells

In vitro Enrichment of Ovarian Cancer Tumor-initiating Cells

בהעשרת מבחנה של תאי ייזום-גידול סרטן השחלות

Evidence suggests that small subpopulations of tumor cells maintain a unique self-renewing and differentiation capacity and may be responsible for tumor ...