Name: method for obtaining primary ovarian cancer cells from solid specimens
Uploaded: 2014-02-04T15:00:00
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우리는 환자의 조직 샘플 수집에 대한 지원은 미네소타 대학의 조직 조달 시설의 직원에게 감사의 말씀을 전합니다. 이 작품은 MB에 미네소타 난소 암 얼라이언스와 MB의 부인과 종양학 부서 기금에 의해, 랜디 면도기 암 연구 및 MB에 커뮤니티 기금, 국방부의 난소 암 연구 프로그램 (OCRP) MB에 OC093424에 의해 지원되었다. 출자자는 연구 설계, 데이터 수집 및 분석, 게시 할 수있는 결정 또는 원고의 준비에 역할을했다.

윤리 정책 난소 암의 고체 시료는 기관 심사위원회위원회 후 미네소타 대학의 조직 조달 시설 (TPF)으로 하였다 : 인간의 제목위원회 (IRB)의 승인을. 1. 시약 설치 <ol><li> 10 % FBS, 100 단위 페니실린 - 스트렙토 마이신과 DMEM을 보완하여 완전한 DMEM 매체를 준비합니다. 4 ° C에서 미디어를 저장하고 따뜻한 37 ° C는 사용하기 전에. </li><li> 다수의 동결을 방지하기 ...

<ol>
	<li>Kurman, R. J., Visvanathan, K., Roden, R., Wu, T. C., Ie M, S. h. i. h. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+detection+and+treatment+of+ovarian+cancer:+shifting+from+early+stage+to+minimal+volume+of+disease+based+on+a+new+model+of+carcinogenesis.">Early detection and treatment of ovarian cancer: shifting from early stage to minimal volume of disease based on a new model of carcinogenesis.</a> Am. J. Obstet. Gynecol. 198 (4), 351-356 (2008).</li><li>Kuhn, E., Kurman, R. J., Shih, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+Cancer+Is+an+Imported+Disease:+Fact+or+Fiction.">Ovarian Cancer Is an Imported Disease: Fact or Fiction.</a> Curr. Obstet. Gynecol. Rep. 1 (1), 1-9 (2012).</li><li>Sarojini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+detection+biomarkers+for+ovarian.">Early detection biomarkers for ovarian.</a> J. Oncol. , (2012).</li><li>Shepherd, T. G., Theriault, B. L., Campbell, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nachtigal+M.W.+Primary+culture+of+ovarian+surface+epithelial+cells+and+ascites-derived+ovarian+cancer+cells+from+patients.">Nachtigal M.W. Primary culture of ovarian surface epithelial cells and ascites-derived ovarian cancer cells from patients.</a> Nat. Protoc. 1 (6), 2643-2649 (2006).</li><li>Tsao, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+human+ovarian+surface+epithelial+cells+immortalized+by+human+papilloma+viral+oncogenes+(HPV-E6E7+ORFs).">Characterization of human ovarian surface epithelial cells immortalized by human papilloma viral oncogenes (HPV-E6E7 ORFs).</a> Exp. Cell. Res. 218 (2), 499-507 (1995).</li><li>Auersperg, N., Maines-Bandiera, S. L., Dyck, H. G., Kruk, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+cultured+human+ovarian+surface+epithelial+cells:+phenotypic+plasticity+and+premalignant+changes.">Characterization of cultured human ovarian surface epithelial cells: phenotypic plasticity and premalignant changes.</a> Lab. Invest. 71 (4), 510-518 (1994).</li><li>Brewer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+model+of+normal,+immortalized+ovarian+surface+epithelial+and+ovarian+cancer+cells+for+chemoprevention+of+ovarian+cancer.">In vitro model of normal, immortalized ovarian surface epithelial and ovarian cancer cells for chemoprevention of ovarian cancer.</a> Gynecol. Oncol. 98 (2), 182-192 (2005).</li><li>Sueblinvong, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment,+characterization+and+downstream+application+of+primary+ovarian+cancer+cells+derived+from+solid+tumors.">Establishment, characterization and downstream application of primary ovarian cancer cells derived from solid tumors.</a> PLoS One. 7 (11), (2012).</li><li>Rockwell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo-in+vitro+tumour+cell+lines:+characteristics+and+limitations+as+models+for+human+cancer.">In vivo-in vitro tumour cell lines: characteristics and limitations as models for human cancer.</a> Br. J. Cancer Suppl. 41 (4), 118-122 (1980).</li><li>Wong, C., Chen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development,+application+and+limitations+of+breast+cancer+cell+lines+to+study+tamoxifen+and+aromatase+inhibitor+resistance.">The development, application and limitations of breast cancer cell lines to study tamoxifen and aromatase inhibitor resistance.</a> J. Steroid. Biochem. Mol. Biol. 131 (3-5), 83-92 (2012).</li></ol>

난소 암의 병인학 및 개발의 더 나은 이해가이 파괴적인 질환에 의해 영향을 여성의 결과를 개선하기 위해 매우 중요하다. 이러한 상황에서의 사용은 설립 &quot;시판되는&quot;난소 암 세포주는 의심 할 여지없이 대단히 유용왔다. 그러나 오늘 우리는 암 세포 라인들은 이성 9,10의 부족 등 많은 측면에서 시작된 인간의 종양을 반영하지 않고 있다는 것도 알고있다. 여?...

상대적으로 낮은 발병률에도 불구하고, 난소 암은 부인과 질환과 여성, 2 중 암 사망의 다섯 번째 주요 원인의 치명적인입니다. 이 충실히 질병 3의 개시 및 진행을 요점을 되풀이 신뢰할 수있는 도구와 모델의 부족에 주로 기인한다. 난소 암에 대한 우리의 지식 오늘날 대부분 ascitic 유체 4-7로부터 회수 불멸화 난소 표면 상피 세포 (잃었 지), 난소 암 세포주 및 일차 난소 암 세포의 사용을 통해 가능했습니다. 불행히도, 그들의 사용은 불멸화 과정 또는 체외 통로에 관련된 유전자와 표현형의 변화의 수와 ascitic 유체 준비로 인한 인구의 이질성 등 여러 가지 제한 사항이 있습니다. 따라서 난소 암의 식별과 특정한 고체 시료 유래 차 난소 암세포 UNIQU을 나타내는난소 암의 진행을 연구하는 전자 도구입니다. 획득이 악성 세포에 관련된 주요 문제는 생존의 손실이 EOC 세포의 배양에서 증식 능력의 조기 부족과 함께 간질 세포 또는 섬유 아세포의 증식에 기인한다. 고형 종양에서 단일 세포 현탁액을 만들 수있는 몇 가지 방법은 현재 기계적인 방법 또는 효소 분해를 통해, 그러나 특정 기술을 선호하는 결과 8의 큰 금액을 산출 존재한다. 여기, 우리는 표시가 가능한, 섬유 아세포 무료 EOC 세포의 효과적인 복구 디스 파제 II 결과에 소화 효소. 이렇게 얻어진 EOC의 문화 유전자 조작에 매우 민감하고 또한 약물 선별 검사에 유용하다, 이러한 EOC 문화가 다양한 다운 스트림 애플리케이션에 적합하다는 것을 나타낸다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="720">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:125px;">Company</td>
			<td style="width:155px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">REAGENTS:</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1X PBS, sterile&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:155px;">14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">&#160;Screw lid, polypropylene specimen container, sterile (Thermoscientific)</td>
			<td style="width:125px;">Thermoscientific</td>
			<td style="width:155px;">02 1090</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;DMEM medium, sterile&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:155px;">11995-065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">&#160;Fetal bovine serum, sterile</td>
			<td style="width:125px;">Thermo Scientific Hyclone</td>
			<td style="width:155px;">SH30396.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">&#160;100x penicillin-streptomycin, liquid (Invitrogen)</td>
			<td style="width:125px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:155px;">15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;Dispase II, sterile (Roche)</td>
			<td style="width:125px;">Roche</td>
			<td style="width:155px;">04942 078 001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">&#160;Small fine-tip forceps and scalpel blade, sterile</td>
			<td style="width:125px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:155px;">forceps: 08-953E, blades: 08-927-5D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;Small dissecting scissors, sterile</td>
			<td style="width:125px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:155px;">08-945</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">&#160;15 ml conical capped tubes, sterile (BD Falcon)</td>
			<td style="width:125px;">BD, Falcon</td>
			<td align="right" style="width:155px;">352097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">50 ml conical capped tubes, sterile (BD Falcon)</td>
			<td style="width:125px;">BD, Falcon</td>
			<td align="right" style="width:155px;">352027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;10 ml serological pipette, sterile&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Corning</td>
			<td style="width:155px;">13-678-11E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6 ml syringe plunger, sterile&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Tyco Healthcare</td>
			<td align="right" style="width:155px;">8881516911</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Nylon filter (70 &#956;m ) cell strainer, sterile (BD Falcon)</td>
			<td style="width:125px;">BD Falcon</td>
			<td align="right" style="width:155px;">352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5-cm Petri dish, sterile&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Corning</td>
			<td align="right" style="width:155px;">430166</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10-cm Petri dish, sterile&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Corning</td>
			<td align="right" style="width:155px;">430167</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

method for obtaining primary ovarian cancer cells from solid specimens

난소 암의 개시 및 진행을 조사하는 신뢰할 수있는 도구가 절실히 필요합니다. 난소 암 세포주의 사용이 난소 암을 이해하기위한 유용한 도구가 남아 있지만, 이들의 사용은 많은 제한이있다. 이러한 이질성의 부족 및 확장 체외 계대과 관련된 유전 변경의 과다 있습니다. 여기에서 우리는 기본 난소 암 세포의 빠른 구축을 허용하는 방법은 수술시에 수집 된 고체 임상 검체를 형성 기술한다. 상기 방법은 30 분 동안 효소 소화에 임상 검체를 행하여 이루어져있다. 격리 된 세포 현탁액을 성장시킨다 및 약물 스크리닝 하류 애플리케이션에 사용될 수있다. 설립 난소 암 세포주 이상의 일차 난소 암 세포주의 이점은 그들이 유래되고 다른 사이트 여부로부터 유도 될 수있는 일본어 특정 임상 검체의 대표 점이다 프리마공예 또는 전이성 난소 암.

난소 암의 임상 검체는 신선한 (도 1)는 수술 후 수거하고, 세포 슬러리를 구성하는 작은 조각 (도 2a 및 2b)에서 절단된다. 이 효소 치료에 대한 표본의 최적의 노출을 할 수 있습니다. 셀룰라 슬러리 소화 효소에 노출하고, 30 분간 37 ℃에서 배양된다. 배양 시간 동안 슬러리 (특히 각 교반 후) 점차 구름이되고이 조직 세분화의 표시이다. 배양 시간의 끝에서, 슬...

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Method for Obtaining Primary Ovarian Cancer Cells From Solid Specimens

고체 시편에서 기본 난소 암 세포를 얻는 방법

이 연구는 고체 임상 검체에서 기본 난소 암 세포의 분리 및 특성에 대한 자세한 방법을 설명합니다. 난소 암 임상 검체는 다운 스트림 애플리케이션에 매우 적합 가능한, 섬유 아세포없는 상피 난소 암 (EOC) 세포를 얻기 위해 소화 효소를 실시하고 있습니다.

Reliable tools for investigating ovarian cancer initiation and progression are urgently needed. While the use of ovarian cancer cell lines remains a ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Method for Novel Anti-Cancer Drug Development using Tumor Explants of Surgical Specimens

외과 종양 표본의 Explants를 사용하여 소설 안티 - 암 의약품 개발을위한 방법


The current therapies for malignant glioma have only palliative effect. For therapeutic development, one hurdle is the discrepancy of efficacy determined ...

연구

의학

Time-lapse Imaging of Primary Preneoplastic Mammary Epithelial Cells Derived from Genetically Engineered Mouse Models of Breast Cancer

기본 Preneoplastic 유방 상피 세포의 시간 경과 영상은 유방암의 유전자 변형 마우스 모델에서 파생

Time-lapse  imaging can be used to compare behavior of cultured primary preneoplastic  mammary epithelial cells derived from different genetically ...

A Sensitive Method to Quantify Senescent Cancer Cells

노화 암 세포를 정량화하는 민감한 방법

Human cells do not indefinitely proliferate. Upon external and/or intrinsic  cues, cells might die or enter a stable cell cycle arrest called senescence. ...

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

인간의 전립선 암 샘플에서 암 줄기 세포의 분리

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Two Methods for Establishing Primary Human Endometrial Stromal Cells from Hysterectomy Specimens

자궁 적출술 검체에서 차 인간의 자궁 내막 기질 세포를 구축하는 두 가지 방법

Many efforts have been devoted to establish in vitro cell culture systems. These systems are designed to model a vast number of in vivo processes. Cell ...

Assessment of Ovarian Cancer Spheroid Attachment and Invasion of Mesothelial Cells in Real Time

실시간으로 중피 세포의 난소 암 회전 타원체의 부착과 침략의 평가

Ovarian cancers metastasize by shedding into the peritoneal fluid and dispersing to distal sites within the peritoneum. Monolayer cultures do not ...

Murine Model for Non-invasive Imaging to Detect and Monitor Ovarian Cancer Recurrence

비 침습적 영상에 대한 생쥐 모델 검색 및 모니터 난소 암 재발

Epithelial ovarian cancer is the most lethal gynecologic malignancy in the United States. Although patients initially respond to the current standard of ...

Enrichment for Chemoresistant Ovarian Cancer Stem Cells from Human Cell Lines

인간 세포주에서 Chemoresistant 난소 암 줄기 세포에 대한 심화 학습

Cancer stem cells (CSCs) are defined as a subset of slow cycling and undifferentiated cells that divide asymmetrically to generate highly proliferative, ...

Quantitative Mass Spectrometric Profiling of Cancer-cell Proteomes Derived From Liquid and Solid Tumors

액체 및 고체 종양 유래의 암세포 프로테옴 정량적 질량 분석 프로파일

In-depth analyses of cancer cell proteomes are needed to elucidate oncogenic pathomechanisms, as well as to identify potential drug targets and diagnostic ...

In vitro Enrichment of Ovarian Cancer Tumor-initiating Cells

In vitro Enrichment of Ovarian Cancer Tumor-initiating Cells

난소 암 종양 시작 세포의 생체 농축에

Evidence suggests that small subpopulations of tumor cells maintain a unique self-renewing and differentiation capacity and may be responsible for tumor ...