Name: method for obtaining primary ovarian cancer cells from solid specimens
Uploaded: 2014-02-04T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Method for Obtaining Primary Ovarian Cancer Cells From Solid Specimens at JoVE.com

Vi ønsker å takke de ansatte på Tissue Procurement Facility ved University of Minnesota for å få hjelp med pasient vevsprøver samling. Dette arbeidet ble støttet av det amerikanske forsvarsdepartementet Ovarian Cancer Research Program (OCRP) OC093424 til MB, av Randy Shaver kreftforskning og samfunn Fondet til MB, ved Minnesota Ovarian Cancer Alliance til MB og ved gynekologisk onkologi Avdelings fond til MB. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere eller utarbeidelse av manuskriptet.

Etikk Erklæring Solid eksemplarer av eggstokkreft ble innhentet fra University of Minnesota Tissue Procurement Facility (TPF) etter Institutional Review Board Committee: Human Subject Board (IRB) godkjennelse. En. Reagens Setup <ol><li> Forbered Komplett DMEM medium ved å supplere DMEM med 10% FBS, og 100 enheter penicillin-streptomycin. Oppbevar medium ved 4 ° C og varm til 37 ° C før bruk. </li><li> Delmengde dispase II i separate volumer av 5-10 ml for å un...

<ol>
	<li>Kurman, R. J., Visvanathan, K., Roden, R., Wu, T. C., Ie M, S. h. i. h. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+detection+and+treatment+of+ovarian+cancer:+shifting+from+early+stage+to+minimal+volume+of+disease+based+on+a+new+model+of+carcinogenesis.">Early detection and treatment of ovarian cancer: shifting from early stage to minimal volume of disease based on a new model of carcinogenesis.</a> Am. J. Obstet. Gynecol. 198 (4), 351-356 (2008).</li><li>Kuhn, E., Kurman, R. J., Shih, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+Cancer+Is+an+Imported+Disease:+Fact+or+Fiction.">Ovarian Cancer Is an Imported Disease: Fact or Fiction.</a> Curr. Obstet. Gynecol. Rep. 1 (1), 1-9 (2012).</li><li>Sarojini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+detection+biomarkers+for+ovarian.">Early detection biomarkers for ovarian.</a> J. Oncol. , (2012).</li><li>Shepherd, T. G., Theriault, B. L., Campbell, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nachtigal+M.W.+Primary+culture+of+ovarian+surface+epithelial+cells+and+ascites-derived+ovarian+cancer+cells+from+patients.">Nachtigal M.W. Primary culture of ovarian surface epithelial cells and ascites-derived ovarian cancer cells from patients.</a> Nat. Protoc. 1 (6), 2643-2649 (2006).</li><li>Tsao, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+human+ovarian+surface+epithelial+cells+immortalized+by+human+papilloma+viral+oncogenes+(HPV-E6E7+ORFs).">Characterization of human ovarian surface epithelial cells immortalized by human papilloma viral oncogenes (HPV-E6E7 ORFs).</a> Exp. Cell. Res. 218 (2), 499-507 (1995).</li><li>Auersperg, N., Maines-Bandiera, S. L., Dyck, H. G., Kruk, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+cultured+human+ovarian+surface+epithelial+cells:+phenotypic+plasticity+and+premalignant+changes.">Characterization of cultured human ovarian surface epithelial cells: phenotypic plasticity and premalignant changes.</a> Lab. Invest. 71 (4), 510-518 (1994).</li><li>Brewer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+model+of+normal,+immortalized+ovarian+surface+epithelial+and+ovarian+cancer+cells+for+chemoprevention+of+ovarian+cancer.">In vitro model of normal, immortalized ovarian surface epithelial and ovarian cancer cells for chemoprevention of ovarian cancer.</a> Gynecol. Oncol. 98 (2), 182-192 (2005).</li><li>Sueblinvong, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment,+characterization+and+downstream+application+of+primary+ovarian+cancer+cells+derived+from+solid+tumors.">Establishment, characterization and downstream application of primary ovarian cancer cells derived from solid tumors.</a> PLoS One. 7 (11), (2012).</li><li>Rockwell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo-in+vitro+tumour+cell+lines:+characteristics+and+limitations+as+models+for+human+cancer.">In vivo-in vitro tumour cell lines: characteristics and limitations as models for human cancer.</a> Br. J. Cancer Suppl. 41 (4), 118-122 (1980).</li><li>Wong, C., Chen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development,+application+and+limitations+of+breast+cancer+cell+lines+to+study+tamoxifen+and+aromatase+inhibitor+resistance.">The development, application and limitations of breast cancer cell lines to study tamoxifen and aromatase inhibitor resistance.</a> J. Steroid. Biochem. Mol. Biol. 131 (3-5), 83-92 (2012).</li></ol>

En bedre forståelse av eggstokkreft etiologi og utvikling er viktig for å bedre utfallet av kvinner rammet av denne ødeleggende sykdommen. I denne sammenheng, bruk av etablerte og &quot;kommersielt tilgjengelig&quot; eggstokkreft cellelinje har utvilsomt vært enormt nyttig. Men i dag vet vi at kreftcellelinjer ikke er representative for den menneskelige svulst de stammer fra i mange aspekter, inkludert mangel på heterogenitet 9,10. Her rapporterer vi en rask og pålitelig met...

Til tross for sin relativt lav forekomst, er eggstokkreft den dødeligste av de gynekologiske sykdommer og den femte største årsaken til kreft dødsfall blant kvinner 1,2. Dette er hovedsakelig på grunn av mangel på pålitelige verktøy og modeller som trofast rekapitulere initiering og progresjon av sykdommen tre. Mesteparten av kunnskapen i dag om eggstokkreft har vært mulig gjennom bruk av udødelig eggstokkene overflaten epitelceller (IOSEs), eggstokkreft cellelinjer og primære eggstokkreft celler utvinnes fra ascitesvæske 4-7. Dessverre har bruken av flere begrensninger, inkludert et antall genetiske og fenotypiske forandringer forbundet med immortalization prosess eller in vitro passasjer og heterogeniteten av befolkningen som skyldes ascitesvæske preparat. Derfor primære eggstokkreft celler avledet fra identifiserbare og spesifikke solide eksemplarer av eggstokkreft representerer en unie verktøy for å studere eggstokkreft progresjon. De største vanskeligheter som er involvert i å skaffe disse ondartede celler er på grunn av en overvekst av stromale celler eller fibroblaster sammen med tap av levedyktighet og for tidlig mangel på proliferative kapasitet i en kultur av disse cellene EOC. Flere metoder for å lage enkeltcellesuspensjoner av faste tumorer for tiden eksisterer, ved mekaniske midler eller enzymatisk dissosiasjon imidlertid visse teknikker gir en større mengde av den foretrukne utfall 8. Her kan vi vise at enzymatisk oppslutning med dispase II resulterer i en effektiv utvinning av levedyktige, fibroblast-fri EOC celler. De således erholdte EOC kulturer er svært utsatt for genetisk manipulasjon og er også anvendelige ved medikamentscreeningtester for å vise at disse EOC kulturer er egnet for mange nedstrøms applikasjoner.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="720">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:125px;">Company</td>
			<td style="width:155px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">REAGENTS:</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1X PBS, sterile&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:155px;">14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">&#160;Screw lid, polypropylene specimen container, sterile (Thermoscientific)</td>
			<td style="width:125px;">Thermoscientific</td>
			<td style="width:155px;">02 1090</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;DMEM medium, sterile&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:155px;">11995-065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">&#160;Fetal bovine serum, sterile</td>
			<td style="width:125px;">Thermo Scientific Hyclone</td>
			<td style="width:155px;">SH30396.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">&#160;100x penicillin-streptomycin, liquid (Invitrogen)</td>
			<td style="width:125px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:155px;">15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;Dispase II, sterile (Roche)</td>
			<td style="width:125px;">Roche</td>
			<td style="width:155px;">04942 078 001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">&#160;Small fine-tip forceps and scalpel blade, sterile</td>
			<td style="width:125px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:155px;">forceps: 08-953E, blades: 08-927-5D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;Small dissecting scissors, sterile</td>
			<td style="width:125px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:155px;">08-945</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">&#160;15 ml conical capped tubes, sterile (BD Falcon)</td>
			<td style="width:125px;">BD, Falcon</td>
			<td align="right" style="width:155px;">352097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">50 ml conical capped tubes, sterile (BD Falcon)</td>
			<td style="width:125px;">BD, Falcon</td>
			<td align="right" style="width:155px;">352027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;10 ml serological pipette, sterile&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Corning</td>
			<td style="width:155px;">13-678-11E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6 ml syringe plunger, sterile&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Tyco Healthcare</td>
			<td align="right" style="width:155px;">8881516911</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Nylon filter (70 &#956;m ) cell strainer, sterile (BD Falcon)</td>
			<td style="width:125px;">BD Falcon</td>
			<td align="right" style="width:155px;">352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5-cm Petri dish, sterile&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Corning</td>
			<td align="right" style="width:155px;">430166</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10-cm Petri dish, sterile&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Corning</td>
			<td align="right" style="width:155px;">430167</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

method for obtaining primary ovarian cancer cells from solid specimens

Pålitelige verktøy for å undersøke eggstokkreft initiering og progresjon er sterkt behov. Mens bruken av eggstokkreft cellelinjer er fortsatt et verdifullt verktøy for å forstå eggstokkreft, har deres bruk mange begrensninger. Disse inkluderer mangel på heterogenitet og overfloden av genetiske forandringer i forbindelse med utvidet in vitro aging. Her beskriver vi en fremgangsmåte som gjør det mulig for rask etablering av primære eggstokkreft celler danne faste kliniske prøver innsamlet ved tidspunktet for kirurgi. Metoden består i å underkaste kliniske prøver til enzymatisk fordøyelse i 30 min. Det isolerte cellesuspensjonen tillates å vokse og kan brukes til nedstrøms anvendelse inkludert medikament-screening. Fordelen med primære ovarian cancer cellelinjer med etablerte ovarian cancer-cellelinjer er at de er representative for de originale spesifikke kliniske prøver som de er avledet fra og kan være avledet fra forskjellige områder enten primary eller metastatisk eggstokkreft.

Friske kliniske prøver på eggstokkreft oppsamles etter operasjonen (figur 1) og kuttet i små biter (figurene 2A og 2B) som danner celle oppslemning. Dette gir mulighet for optimal eksponering av prøvene for den enzymatiske behandling. Cell oppslemming utsettes for enzymatisk fordøyelse og inkubert ved 37 ° C i 30 min. Under inkubasjonstiden slurryen stadig uklar (spesielt etter hvert agitering), og dette er et tegn på vev dekomponering. På slutten av inkubasjons...

Watch this Scientific Journal Video about Method for Obtaining Primary Ovarian Cancer Cells From Solid Specimens at JoVE.com

Method for Obtaining Primary Ovarian Cancer Cells From Solid Specimens

Metode for Innhenting av primær eggstokkreft celler fra solide Prøver

Denne studien beskriver en detaljert metode for isolering og karakterisering av primære eggstokkreft celler fra solide kliniske prøver. Eggstokkreft kliniske prøver er utsatt for enzymatisk fordøyelse å få levedyktig, fibroblast-fri ovarialcancer (EOC) celler svært egnet for nedstrømsapplikasjoner.

Reliable tools for investigating ovarian cancer initiation and progression are urgently needed. While the use of ovarian cancer cell lines remains a ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Method for Novel Anti-Cancer Drug Development using Tumor Explants of Surgical Specimens


The current therapies for malignant glioma have only palliative effect. For therapeutic development, one hurdle is the discrepancy of efficacy determined ...

Time-lapse Imaging of Primary Preneoplastic Mammary Epithelial Cells Derived from Genetically Engineered Mouse Models of Breast Cancer

Time-lapse Imaging av Primary Preneoplastic mammary epitelceller Avledet fra genmodifisert mus modeller av Breast Cancer

Time-lapse  imaging can be used to compare behavior of cultured primary preneoplastic  mammary epithelial cells derived from different genetically ...

A Sensitive Method to Quantify Senescent Cancer Cells

En følsom metode for å kvantifisere senescent kreftceller

Human cells do not indefinitely proliferate. Upon external and/or intrinsic  cues, cells might die or enter a stable cell cycle arrest called senescence. ...

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

Isolering av kreft stamceller fra menneskelige prostata kreft Samples

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Two Methods for Establishing Primary Human Endometrial Stromal Cells from Hysterectomy Specimens

To metoder for å etablere primær Menneskelig Livmor stromale celler fra Hysterektomi Prøver

Many efforts have been devoted to establish in vitro cell culture systems. These systems are designed to model a vast number of in vivo processes. Cell ...

Assessment of Ovarian Cancer Spheroid Attachment and Invasion of Mesothelial Cells in Real Time

Vurdering av Ovarian Cancer Spheroid Vedlegg og invasjon av mesothelial celler i sanntid

Ovarian cancers metastasize by shedding into the peritoneal fluid and dispersing to distal sites within the peritoneum. Monolayer cultures do not ...

Murine Model for Non-invasive Imaging to Detect and Monitor Ovarian Cancer Recurrence

Murine modell for ikke-invasiv Imaging å oppdage og Monitor Ovarian Cancer Regelmessighet

Epithelial ovarian cancer is the most lethal gynecologic malignancy in the United States. Although patients initially respond to the current standard of ...

Enrichment for Chemoresistant Ovarian Cancer Stem Cells from Human Cell Lines

Berikelse for kjemoresistent eggstokkreft stamceller fra humane cellelinjer

Cancer stem cells (CSCs) are defined as a subset of slow cycling and undifferentiated cells that divide asymmetrically to generate highly proliferative, ...

Quantitative Mass Spectrometric Profiling of Cancer-cell Proteomes Derived From Liquid and Solid Tumors

Kvantitativ Massespektrometrisk Profilering av kreft-celle proteom Derived From Flytende og solide tumorer

In-depth analyses of cancer cell proteomes are needed to elucidate oncogenic pathomechanisms, as well as to identify potential drug targets and diagnostic ...

In vitro Enrichment of Ovarian Cancer Tumor-initiating Cells

In vitro Enrichment of Ovarian Cancer Tumor-initiating Cells

In vitro berikelse for eggstokkreft Tumor-initiere Cells

Evidence suggests that small subpopulations of tumor cells maintain a unique self-renewing and differentiation capacity and may be responsible for tumor ...