Name: microrna expression profiles of human ips cells, retinal pigment epithelium derived from ips, and fetal retinal pigment epithelium
Uploaded: 2014-06-24T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about MicroRNA Expression Profiles of Human iPS Cells, Retinal Pigment Epithelium Derived From iPS, and Fetal Retinal Pigment Epithelium at JoVE.com

Мнения или утверждения, содержащиеся здесь, являются частные взгляды авторов и не должны быть истолкованы в качестве официальной или в качестве точки зрения Департамента армии или министерства обороны. Это исследование было проведено в то время как авторы Уитни А. Грин, Альберто Мунис, и Рамеш Р. Kaini провел Национальный исследовательский совет докторской научный Associateship на USAISR. Microarray анализы проводили по Greehey Детской научно-исследовательский институт рака микрочипов основной комплекс и биоинформатика Департамента в UT Health Science Center Сан-Антонио. Эта работа была поддержана армии США программы Клиническая восстановительная медицина исследований (CRMRP) и военной программе Оперативный медицины Научно-исследовательский (MOMRP).

1. Подготовка культуры Реагенты и культуры Плиты <ol><li> mTeSR1 СМИ: Подготовка mTeSR1 СМИ в соответствии с инструкциями изготовителя. Оттепель 100 мл mTeSR1 5x дополнения в течение ночи при 4 ° С. Добавьте 100 мл mTeSR1 5x дополнение к 400 мл mTeSR1 базальных СМИ и хорошо перемешать. Этот носитель является стаби...

<ol>
	<li>Yu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miRNAs+regulate+stem+cell+self-renewal+and+differentiation.">miRNAs regulate stem cell self-renewal and differentiation.</a> Front Genet. 3, 191 (2012).</li><li>Romano, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+commentary+on+iPS+cell+biology:+Potential+applications+in+autologous+tissue+and+cell+transplantation,+development+of+new+models+for+the+study+of+human+pathological+conditions+and+drug+screening.">A commentary on iPS cell biology: Potential applications in autologous tissue and cell transplantation, development of new models for the study of human pathological conditions and drug screening.</a> J Cell Physiol. 229, 148-152 (2014).</li><li>Almeida, P. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunogenicity+of+pluripotent+stem+cells+and+their+derivatives.">Immunogenicity of pluripotent stem cells and their derivatives.</a> Circ Res. 112, 549-561 (2013).</li><li>Buchholz, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+functional+retinal+pigmented+epithelium+from+induced+pluripotent+stem+cells.">Derivation of functional retinal pigmented epithelium from induced pluripotent stem cells.</a> Stem Cells. 27, 2427-2434 (2009).</li><li>Kokkinaki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+induced+pluripotent+stem-derived+retinal+pigment+epithelium+(RPE)+cells+exhibit+ion+transport,+membrane+potential,+polarized+vascular+endothelial+growth+factor+secretion,+and+gene+expression+pattern+similar+to+native+RPE.">Human induced pluripotent stem-derived retinal pigment epithelium (RPE) cells exhibit ion transport, membrane potential, polarized vascular endothelial growth factor secretion, and gene expression pattern similar to native RPE.</a> Stem Cells. 29, 825-835 (2011).</li><li>Bharti, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+new+paradigm:+retinal+pigment+epithelium+cells+generated+from+embryonic+or+induced+pluripotent+stem+cells.">The new paradigm: retinal pigment epithelium cells generated from embryonic or induced pluripotent stem cells.</a> Pigment Cell Melanoma Res. 24, 21-34 (2011).</li><li>Park, I. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reprogramming+of+human+somatic+cells+to+pluripotency+with+defined+factors.">Reprogramming of human somatic cells to pluripotency with defined factors.</a> Nature. 451, 141-146 (2008).</li><li>Pera, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells.+A+new+year+and+a+new+era.">Stem cells. A new year and a new era.</a> Nature. 451, 135-136 (2008).</li><li>Subba Rao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thinking+outside+the+liver:+Induced+pluripotent+stem+cells+for+hepatic+applications.">Thinking outside the liver: Induced pluripotent stem cells for hepatic applications.</a> World J Gastroenterol. 19, 3385-3396 (2013).</li><li>Yoshida, Y., Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=iPS+cells:+a+source+of+cardiac+regeneration.">iPS cells: a source of cardiac regeneration.</a> J Mol Cell Cardiol. 50, 327-332 (2011).</li><li>Lee, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+sensory+neurons+derived+from+induced+pluripotent+stem+cells+support+varicella-zoster+virus+infection.">Human sensory neurons derived from induced pluripotent stem cells support varicella-zoster virus infection.</a> PLoS One. 7, (2012).</li><li>Alipio, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversal+of+hyperglycemia+in+diabetic+mouse+models+using+induced-pluripotent+stem+(iPS)-derived+pancreatic+beta-like+cells.">Reversal of hyperglycemia in diabetic mouse models using induced-pluripotent stem (iPS)-derived pancreatic beta-like cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107, 13426-13431 (2010).</li><li>la Cour, M., Tezel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+retinal+pigment+epithelium.">The retinal pigment epithelium.</a> Adv Organ Biol. 10, 253-272 (2005).</li><li>Carr, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effects+of+human+iPS-derived+retinal+pigment+epithelium+cell+transplantation+in+the+retinal+dystrophic+rat.">Protective effects of human iPS-derived retinal pigment epithelium cell transplantation in the retinal dystrophic rat.</a> PLoS One. 4, (2009).</li><li>Schwartz, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+stem+cell+trials+for+macular+degeneration:+a+preliminary+report.">Embryonic stem cell trials for macular degeneration: a preliminary report.</a> Lancet. 379, 713-720 (2012).</li><li>Muniz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinoid+uptake,+processing+and+secretion+in+human+iPS-RPE+support+the+visual+cycle.">Retinoid uptake, processing and secretion in human iPS-RPE support the visual cycle.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 55, 198-209 (2014).</li><li>Leonardo, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+functions+of+microRNAs+in+pluripotency+and+reprogramming.">The functions of microRNAs in pluripotency and reprogramming.</a> Nat Cell Biol. 14, 1114-1121 (2012).</li><li>Arora, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prediction+of+microRNAs+affecting+mRNA+expression+during+retinal+development.">Prediction of microRNAs affecting mRNA expression during retinal development.</a> BMC Dev Biol. 10, (2010).</li><li>Huntzinger, E., Izaurralde, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+silencing+by+microRNAs:+contributions+of+translational+repression+and+mRNA+decay.">Gene silencing by microRNAs: contributions of translational repression and mRNA decay.</a> Nat Rev Genet. 12, 99-110 (2011).</li><li>Mallanna, S. K., Rizzino, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+roles+of+microRNAs+in+the+control+of+embryonic+stem+cells+and+the+generation+of+induced+pluripotent+stem+cells.">Emerging roles of microRNAs in the control of embryonic stem cells and the generation of induced pluripotent stem cells.</a> Dev Biol. 344, 16-25 (2010).</li><li>Guo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammalian+microRNAs+predominantly+act+to+decrease+target+mRNA+levels.">Mammalian microRNAs predominantly act to decrease target mRNA levels.</a> Nature. 466, 835-840 (2010).</li><li>Adijanto, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microphthalmia-associated+transcription+factor+(MITF)+promotes+differentiation+of+human+retinal+pigment+epithelium+(RPE)+by+regulating+microRNAs-204/211+expression.">Microphthalmia-associated transcription factor (MITF) promotes differentiation of human retinal pigment epithelium (RPE) by regulating microRNAs-204/211 expression.</a> J Biol Chem. 287, 20491-20503 (2012).</li><li>Hu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+miRNA+signatures+during+the+differentiation+of+hESCs+into+retinal+pigment+epithelial+cells.">Identification of miRNA signatures during the differentiation of hESCs into retinal pigment epithelial cells.</a> PLoS One. 7, (2012).</li><li>Wilson, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNA+profiling+of+human-induced+pluripotent+stem+cells.">MicroRNA profiling of human-induced pluripotent stem cells.</a> Stem Cells Dev. 18, 749-758 (2009).</li><li>Neveu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNA+profiling+reveals+two+distinct+p53-related+human+pluripotent+stem+cell+states.">MicroRNA profiling reveals two distinct p53-related human pluripotent stem cell states.</a> Cell Stem Cell. 7, 671-681 (2010).</li><li>Maminishkis, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Confluent+monolayers+of+cultured+human+fetal+retinal+pigment+epithelium+exhibit+morphology+and+physiology+of+native+tissue.">Confluent monolayers of cultured human fetal retinal pigment epithelium exhibit morphology and physiology of native tissue.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 47, 3612-3624 (2006).</li><li>Qiagen, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miRNeasy+Mini+Handbook.">miRNeasy Mini Handbook.</a> Sample and Assay Technologies. , (2013).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microarray+System+with+miRNA+Complete+Labeling+and+Hyb+Kit.">Microarray System with miRNA Complete Labeling and Hyb Kit.</a> Agilent Technologies. , (2011).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+hESCs+and+hiPSCs+in+mTESR1+and+mTESR2.">Maintenance of hESCs and hiPSCs in mTESR1 and mTESR2.</a> Stem Cell Technologies. , (2010).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Analysis+of+DNA+or+RNA+using+its+wavelengths:+230+nm,+260+nm,+280+nm.">The Analysis of DNA or RNA using its wavelengths: 230 nm, 260 nm, 280 nm.</a> About Biotechnology. , (2013).</li></ol>

В заключение, этот доклад описывает методы, используемые для культивирования плюрипотентных клеток, IPS-РПЭ и плода НПП. НПП происходит от IPS морфологически и функционально похож на плода РПЭ. IPS-НПП также выражает характерные гены РПЭ включая RPE65, CRALBP, PEDF и ТАПБР 16. Для дальнейшего х?...

Стволовые клетки обладают способностью к репликации без ограничения и потенциал дифференцироваться в любой соматической типа клеток. Развитие методов перепрограммировать соматические клетки в плюрипотентные стволовые клетки уже вызвали большой ажиотаж в научно-исследовательского сообщества и среди врачей, так как появление персонализированной регенерации тканей на горизонте 1. Индуцированные-плюрипотентные стволовые (IPS) клетки обладают теми же функциями неограниченного репликативного потенциала и плюрипотентности, как эмбриональных стволовых (ES) клетки ограниченной этическими дилеммами, связанные с ЭСК. Кроме того, пациент стволовые клетки не будут стимулировать иммунный ответ, что значительно увеличивает вероятность успешных терапевтических применений 2-3. При определенных условиях культивирования, плюрипотентных клеток, как было показано дифференцироваться в нескольких различных типов клеток в пробирке, в том числе кардиомиоцитов, нейронов, панкреатических бета-клеток, гепатоцитов и пигментного эпителия сетчатки (RPЕ) 4-12. RPE является специализированным слой пигментных эпителиальных клеток, расположенных в задней части сетчатки, которая выполняет несколько функций, которые необходимы для здоровья глаз и функции, такие как поглощение рассеянного света, фагоцитоз из наружных сегментов фоторецепторов, и обработка ретиноидов для производства визуального хромофора. Дисфункция ПЭС из-за повреждения или болезни глубоко влияет на здоровье фоторецепторов и зрительные функции, о чем свидетельствует, слепящих глаза болезней, которые являются результатом основного НПП патологии, такие как возрастной макулярной дегенерации (ВМД), болезни Штаргардта, и пигментный ретинит (RP) 13. Действительно эффективные методы лечения, которые могут восстановить зрение, не были достигнуты, и замена больного ПЭС со здоровой РПЭ может быть лучшим вариантом, чтобы предотвратить потерю зрения 14-15. НПП происходит от IPS (IPS-РПЭ) является возможным источником клеток для замены поврежденного НПП. IPS-НПП выражает характик белки ПЭС LRAT, CRALBP, PEDF и RPE65; отображает классический высоко пигментированные гексагональную НПП морфологию; и выполняет RPE функции, такие как фагоцитоз, ретиноидов обработки и секреции 11 - цис-ретиналь 5,16. Однако, прежде чем IPS-НПП может использоваться в терапевтических целях, IPS-НПП должны быть тщательно описаны. Понимание факторов, которые регулируют НПП дифференциацию необходимо улучшить выход и чистоту клеток, который будет использоваться для клинических применений. Дифференциация Cell является результатом высокой регулируемой экспрессии генов. Эпигенетическая реконструкция генома и координации транскрипционных факторов, необходимых для клеточных судеб решений, которые происходят во время дифференцировки и развития 17. Регулирование сообщения РНК (мРНК) перевод на микроРНК (микроРНК) представляет еще один уровень регулирования, который влияет клеток судьбу 1. MiRNAs короткие, ~ 22 нт, длины нуклеотидов, которые либо подавляют переводсвязывание с 3 &#39;UTR мРНК или целевой мРНК деградации. MiRNAs были обнаружены практически во всех тканях и на сегодняшний день более 2000 уникальных человека микроРНК были зарегистрированы в базе данных miRBase. С микроРНК требуют только частичное взаимодополняемости для привязки к мРНК-мишени, одна микроРНК может потенциально связываются с десятков или сотен целей, и наоборот, т.е. один мРНК могут быть направлены на несколько различных микроРНК. Это беспорядочный связывания характерно резко повышает уровень сложности регулирования, а также уровень сложности определения функций отдельных микроРНК и роль каждый из них играет в клеточных функций 18-21. Тем не менее, исследования показали, что микроРНК уточняет экспрессию генов в процессе дифференцировки, влияя статус метилирования ДНК 17. В исследовании, более конкретной, чтобы ПЭС, miR-204/211 было показано, чтобы способствовать эпителиальный фенотип ПЭС 22. Другая группа проанализировала профиля микроРНКНПП во время дифференцировки из ЭС клеток и показали различные наборы микроРНК экспрессируются в процессе дифференцировки 23. На самом деле, профили микроРНК можно однозначно отличить типы клеток, в том числе ЭС клеток, клеток-предшественников, и терминально дифференцированных клеток 24,25. Более 250 микроРНК экспрессируются в сетчатке. На основе этих исследований, мы предполагаем, что микроРНК играют важную роль в дифференциации ПЭС от IPS. Цель данного доклада является описание протоколов для дифференциации ПЭС от IMR90-4 IPS клетки, коллекция РНК для анализа микрочипов, а также анализ данных микрочипов для выявления микроРНК, которые разному экспрессируются среди трех типов клеток, иПСК , IPS-НПП и плода НПП. Суммарную РНК экстрагировали из культур каждого типа клеток и гибридизовали с микрочипов микроРНК, содержащий зонды, специфичные для человека микроРНК 1205 и 144 вирусных микроРНК. Результаты микрочипов были сравнитьD, чтобы определить, которые были дифференциально экспрессируются микроРНК среди различных типов клеток. были выбраны микроРНК с 2 раза или более кратное изменение в выражении для дальнейшего анализа. Программа, анализ микроРНК был использован для выявления потенциальных целей в дифференциально выраженных микроРНК и генерировать сотовых сетей регулируются выбранных микроРНК.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="676">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">mTeSR1 media + 5X supplement</td>
			<td style="width:156px;">Stem Cell Technologies</td>
			<td style="width:119px;">5850</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM/F12</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11330-032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2-Mercaptoethanol</td>
			<td style="width:156px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">M-7154</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:18px;width:235px;">Non essential amino acids</td>
			<td style="width:156px;">Hyclone(Fisher)</td>
			<td>SH30853.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Knockout serum replacement</td>
			<td style="width:156px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">10828-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Gentamicin&#160;</td>
			<td style="width:156px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">15750-060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">MEM media</td>
			<td style="width:156px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">10370-021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">N1 supplement</td>
			<td style="width:156px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">N-6530-5ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Taurine</td>
			<td style="width:156px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">T-8691-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Hydrocortisone</td>
			<td style="width:156px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">H0888-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Fetal bovine serum</td>
			<td style="width:156px;">Hyclone(Fisher)</td>
			<td>SH3008803HI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Triiodo-l-thyronine sodium salt</td>
			<td style="width:156px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">T6397</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Sodium hydroxide</td>
			<td style="width:156px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">S5881</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal RPE media RTEGM kit</td>
			<td style="width:156px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">195406</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Dispase</td>
			<td style="width:156px;">Life Technologies</td>
			<td>17105-041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Matrigel</td>
			<td style="width:156px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">354277</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Phosphate buffered saline</td>
			<td style="width:156px;">Hyclone(Fisher)</td>
			<td>10010-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Trypsin</td>
			<td style="width:156px;">Hyclone(Fisher)</td>
			<td style="width:119px;">25200-072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Miltenyi Biotec washing buffer</td>
			<td style="width:156px;">StemGent</td>
			<td style="width:119px;">130-092-987</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Miltenyi Biotec rinsing buffer</td>
			<td style="width:156px;">StemGent</td>
			<td style="width:119px;">130-092-222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Anti-TRA-1-60 microbead kit</td>
			<td style="width:156px;">StemGent</td>
			<td style="width:119px;">130-095-816</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Miltenyi Biotec cell sorter column</td>
			<td style="width:156px;">StemGent</td>
			<td style="width:119px;">130-021-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">RNeasy micro kit</td>
			<td style="width:156px;">Qiagen</td>
			<td style="width:119px;">74004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">QIA shredder</td>
			<td style="width:156px;">Qiagen</td>
			<td style="width:119px;">79654</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">RNA 6000 Pico LabChip kit</td>
			<td style="width:156px;">Agilent</td>
			<td style="width:119px;">G2938-90046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Human miRNA microarray v16</td>
			<td style="width:156px;">Agilent</td>
			<td style="width:119px;">G4471A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microrna expression profiles of human ips cells, retinal pigment epithelium derived from ips, and fetal retinal pigment epithelium

Цель данного доклада является описание протоколов для сравнения микроРНК (микроРНК) профили из стебля антропогенного-плюрипотентные (IPS) клеток, пигментный эпителий сетчатки (ПЭС), полученных от человека плюрипотентных клеток (IPS-РПЭ) и плода РПЭ. Протоколы включают коллекцию РНК для анализа методом микрочипов, а также анализ данных микрочипов для выявления микроРНК, которые разному экспрессируются среди трех типов клеток. Методы культуры плюрипотентных клеток и плода ПЭС объясняются. Протокол, используемый для дифференциации ПЭС от человека IPS также описывается. Методика экстракции РНК мы описываем была выбрана, чтобы позволить максимальное восстановление очень малых РНК для использования в микрочипов микроРНК. Наконец, сотовой пути и сеть анализ микрочипов данных объясняется. Эти методы будут способствовать сравнение профилей микроРНК трех различных типов клеток.

плюрипотентных клеток (фиг.1А) выращивали в условиях дифференцировки для индукции дифференцировки в IPS-RPE клеток. IPS-НПП выставлены классические НПП фенотип гексагональной пигментного морфологии клеток (рис. 1В) похож на плода ПЭС (рис. 1в). Чтобы...

Watch this Scientific Journal Video about MicroRNA Expression Profiles of Human iPS Cells, Retinal Pigment Epithelium Derived From iPS, and Fetal Retinal Pigment Epithelium at JoVE.com

MicroRNA Expression Profiles of Human iPS Cells, Retinal Pigment Epithelium Derived From iPS, and Fetal Retinal Pigment Epithelium

МикроРНК (микроРНК) профили антропогенного-плюрипотентных стволовых (плюрипотентных) клеток, пигментный эпителий сетчатки (ПЭС), полученные из стебля антропогенного-плюрипотентные (IPS) клеток (IPS-ПЭС), и плода ПЭС, были сопоставлены.

Профили микроРНК выражение человеческой плюрипотентных клеток, пигментного эпителия сетчатки, полученных из IPS, и плода пигментного эпителия сетчатки

The objective of this report is to describe the protocols for comparing the microRNA (miRNA) profiles of human induced-pluripotent stem (iPS) cells, ...

Research

JoVE Journal

Biology

Subretinal Transplantation of Human Embryonic Stem Cell Derived-retinal Pigment Epithelial Cells into a Large-eyed Model of Geographic Atrophy

Субретинальное трансплантации эмбриональных стволовых клеток человека производные сетчатки пигментного эпителиальных клеток в большой eyed модель географической атрофии

Geographic atrophy (GA), the late stage of dry age-related macular degeneration is characterized by loss of the retinal pigment epithelial (RPE) layer, ...

Primary Cell Cultures from the Mouse Retinal Pigment Epithelium

Культуры главной ячейки от мыши пигментный эпителий сетчатки

The retinal pigment epithelium (RPE) is a highly polarized multi-functional epithelium that is located between the neural retina and the choroid of the ...

Efficient Dissection and Culture of Primary Mouse Retinal Pigment Epithelial Cells

Эффективное рассечение и культура первичной мыши сетчатки Пигмент эпителиальных клеток

Eye disorders affect millions of people worldwide, but the limited availability of human tissues hinders their study. Mouse models are powerful tools to ...

Nitroreductase/Metronidazole-Mediated Ablation and a MATLAB Platform (RpEGEN) for Studying Regeneration of the Zebrafish Retinal Pigment Epithelium

Nitroreductase/Metronidazole-Mediated Ablation and a MATLAB Platform RpEGEN for Studying Regeneration of the Zebrafish Retinal Pigment Epithelium

Нитроредуктаза/метронидазол-опосредованная абляция и платформа MATLAB (RpEGEN) для изучения регенерации пигментного эпителия сетчатки рыбок данио

The retinal pigment epithelium (RPE) resides at the back of the eye and performs functions essential for maintaining the health and integrity of adjacent ...

Primary Culture of Porcine Retinal Pigment Epithelial Cells

Первичная культура пигментных эпителиальных клеток свиньи свиней

The retinal pigment epithelium (RPE) is a monolayer of polarized pigmented epithelial cells, located between the choroid and neuroretina in the retina. ...

Isolation of Primary Mouse Retinal Pigmented Epithelium Cells

Выделение первичных пигментированных клеток эпителия сетчатки мыши

The retinal pigmented epithelium (RPE) layer lies immediately behind the photoreceptors and harbors a complex metabolic system that plays several critical ...

Efficient and Consistent Generation of Retinal Pigment Epithelium/Choroid Flatmounts from Human Eyes for Histological Analysis

Эффективная и последовательная генерация пигментных эпителиев сетчатки / плоских гор сосудистой оболочки из глаз человека для гистологического анализа

The retinal pigment epithelium (RPE) and retina are functionally and structurally connected tissues that work together to regulate light perception and ...

Real-Time Analysis of Bioenergetics in Primary Human Retinal Pigment Epithelial Cells Using High-Resolution Respirometry

Анализ биоэнергетики в первичных пигментных эпителиальных клетках сетчатки человека в режиме реального времени с использованием респирометрии высокого разрешения

Metabolic dysfunction of retinal pigment epithelial cells (RPE) is a key pathogenic driver of retinal diseases such as age-related macular degeneration ...