Name: surgical retrieval, isolation and in vitro expansion of human anterior cruciate ligament-derived cells for tissue engineering applications
Uploaded: 2014-04-30T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Surgical Retrieval, Isolation and In vitro Expansion of Human Anterior Cruciate Ligament-derived Cells for Tissue Engineering Applications at JoVE.com

Författarna vill tacka för den startfonden och avdelningen för kirurgi forskningsbidrag från Southern Illinois University, School of Medicine; och Memorial Medical Foundation.

1. Kirurgisk Retrieval Anm: En IRB godkännande erhölls för att samla ACL stubbe under främre korsbandsrekonstruktion kirurgi. IRB befrielse gavs som ACL stump används i allmänhet kastas som kirurgisk avfall. 20 patienter användes för att samla in ACL stubben. <ol><li> Administrera narkos och preoperativa antibiotika enligt institutionens protokoll till patienten. </li><li> Applicera tryckförband och blåsa upp 100 mg över systoliskt blodtryck. </li><li> Placera patienten i ryggl?...

<ol>
	<li>Johnson, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+anterior+cruciate+ligament:+A+dilemma+in+sports+medicine.">The anterior cruciate ligament: A dilemma in sports medicine.</a> Int J Sports Med. 3, 71-79 (1982).</li><li>Owings, M. F., Kozak, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ambulatory+and+inpatient+procedures+in+the+United+States,+1996.">Ambulatory and inpatient procedures in the United States, 1996.</a> Vital Health Stats. 13, 1-119 (1998).</li><li>Frank, C. B., Jackson, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+science+of+reconstruction+of+the+anterior+cruciate+ligament.">The science of reconstruction of the anterior cruciate ligament.</a> J Bone Joint Surg Am. 79, 1556-1576 (1997).</li><li>Miyasaka, K. C., Daniel, D. M., Stone, M. L., Hirshman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+incidence+of+knee+ligament+injuries+in+the+general+population.">The incidence of knee ligament injuries in the general population.</a> Am J Knee Surg. 4, 3-8 (1991).</li><li>Taylor, D. C., Posner, M., Curl, W. W., Feagin, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolated+tears+of+the+anterior+cruciate+ligament:+over+30+year+follow-up+of+patients+treated+with+arthrotomy+and+primary+repair.">Isolated tears of the anterior cruciate ligament: over 30 year follow-up of patients treated with arthrotomy and primary repair.</a> Am J Sports Med. 37 (1), 65-71 (2009).</li><li>Liljedahl, S. O., Lindvall, N., Wetterfors, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+diagnosis+and+treatment+of+acute+ruptures+of+the+anterior+cruciate+ligament:+a+clinical+and+arthrographic+study+of+forty-eight+cases.">Early diagnosis and treatment of acute ruptures of the anterior cruciate ligament: a clinical and arthrographic study of forty-eight cases.</a> J Bone Joint Surg Am. 47, 1503-1513 (1965).</li><li>Oensten, M., Lysholdm, J., Gillquist, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suture+of+fresh+ruptures+of+the+anterior+cruciate+ligament:+A+5+year+follow+up.">Suture of fresh ruptures of the anterior cruciate ligament: A 5 year follow up.</a> Acta Orthop Scan. 55, 270 (1984).</li><li>Buckley, S. L., Barrack, R. L., Alexander, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+natural+history+of+conservatively+treated+partial+anterior+cruciate+ligament+tears.">The natural history of conservatively treated partial anterior cruciate ligament tears.</a> Am J Sports Med. 17 (2), 221-225 (1989).</li><li>Noyes, F. R., Mooar, L. A., Moorman, C. T., McGinnis, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial+tears+of+the+anterior+cruciate+ligament.+Progression+to+complete+ligament+deficiency.">Partial tears of the anterior cruciate ligament. Progression to complete ligament deficiency.</a> J Bone Joint Surg Br. 71 (5), 825-833 (1989).</li><li>Bak, K., Scavenius, M., Hansen, S., Norring, K., Jensen, K. H., Jorgensen, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolated+partial+rupture+of+the+anterior+cruciate+ligament.+Long+term+followup+of+56+cases.">Isolated partial rupture of the anterior cruciate ligament. Long term followup of 56 cases.</a> Knee Surg Sports Traumatol Arthrosc. 5 (2), 66-71 (1997).</li><li>Fritschy, D., Panoussopoulos, A., Wallensten, R., Peter, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+we+predict+the+outcome+of+a+partial+rupture+of+the+anterior+cruciate+ligament?+A+prospective+study+of+43+cases.">Can we predict the outcome of a partial rupture of the anterior cruciate ligament? A prospective study of 43 cases.</a> Knee Surg Sports Traumatol Arthrosc. 5 (1), 2-5 (1997).</li><li>Sommerlath, K., Odensten, M., Lysholm, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+late+course+of+acute+partial+anterior+cruciate+ligament+tears.+A+nine+to+15+year+follow-up+evaluation.">The late course of acute partial anterior cruciate ligament tears. A nine to 15 year follow-up evaluation.</a> Clin Orthop. , 281-2152 (1992).</li><li>Barrack, R. L., Buckley, S. L., Bruckner, J. D., Kneisl, J. S., Alexander, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial+versus+complete+acute+anterior+cruciate+ligament+tears:+the+results+of+nonoperative+treatment.">Partial versus complete acute anterior cruciate ligament tears: the results of nonoperative treatment.</a> J Bone Joint Surg Br. 72 (4), 622-624 (1990).</li><li>Murray, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+status+and+potential+of+primary+ACL+repair.">Current status and potential of primary ACL repair.</a> Clin Sports Med. 28 (1), 51-61 (2009).</li><li>Gupta, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+walled+carbon+nanotube+composites+for+bone+tissue+engineering.">Single walled carbon nanotube composites for bone tissue engineering.</a> J Orthop Res. 9, 1374-1381 (2013).</li><li>Fruensgaard, S., Johannsen, H. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incomplete+ruptures+of+the+anterior+cruciate+ligament.">Incomplete ruptures of the anterior cruciate ligament.</a> J Bone Joint Surg Br. 71, 526-530 (1989).</li><li>Sandberg, R., Balkfors, B., Nilsson, B., Westlin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Operative+versus+non-operative+treatment+of+recent+injuries+to+the+ligaments+of+the+knee.+A+prospective+randomized+study.">Operative versus non-operative treatment of recent injuries to the ligaments of the knee. A prospective randomized study.</a> J Bone Joint Surg Am. 69, 1120-1126 (1987).</li><li>Lamar, D. S., Bartolozzi, A. R., Freedman, K. B., Nagda, S. H., Fawcett, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermal+modification+of+partial+tears+of+the+anterior+cruciate+ligament.">Thermal modification of partial tears of the anterior cruciate ligament.</a> Arthroscopy. 21 (7), 809-814 (2005).</li><li>Indelli, P. F., Dillingham, M. F., Fanton, G. S., Schurman, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monopolar+thermal+treatment+of+symptomatic+anterior+cruciate+ligament+instability.">Monopolar thermal treatment of symptomatic anterior cruciate ligament instability.</a> Clin Orthop. 407, 138-147 (2003).</li><li>Smith, D. B., Carter, T. R., Johnson, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+failure+rate+for+electrothermal+shrinkage+of+the+lax+anterior+cruciate+ligament:+a+multicenter+follow-up+past+2+years.">High failure rate for electrothermal shrinkage of the lax anterior cruciate ligament: a multicenter follow-up past 2 years.</a> Arthroscopy. 24 (6), 637-641 (2008).</li><li>Buda, R., Ferruzzi, A., Vannini, F., Zambelli, L., Di Caprio, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Augmentation+technique+with+semitendinosus+and+gracilis+tendons+in+chronic+partial+lesions+of+the+ACL:+clinical+and+arthrometric+analysis.">Augmentation technique with semitendinosus and gracilis tendons in chronic partial lesions of the ACL: clinical and arthrometric analysis.</a> Knee Surg Sports Traumatol Arthrosc. 14 (11), 1101-1107 (2006).</li><li>Sekiya, J. K., Golladay, G. J., Wojtys, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autodigestion+of+a+hamstring+anterior+cruciate+ligament+autograft+following+thermal+shrinkage:+a+case+report+and+sentinel+of+concern.">Autodigestion of a hamstring anterior cruciate ligament autograft following thermal shrinkage: a case report and sentinel of concern.</a> J Bone Joint Surg Am. 82 (10), 1454-1457 (2000).</li><li>Farquharson-Roberts, M. A., Osborne, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial+rupture+of+the+anterior+cruciate+ligament+of+the+knee.">Partial rupture of the anterior cruciate ligament of the knee.</a> J Bone Joint Surg Br. 65, 32-34 (1983).</li><li>Rue, J. P., Ghodadra, N., Bach, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Femoral+tunnel+placement+in+single-bundle+anterior+cruciate+ligament+reconstruction:+a+cadaveric+study+relating+transtibial+lateralized+femoral+tunnel+position+to+the+anteromedial+and+posterolateral+bundle+femoral+origins+of+the+anterior+cruciate+ligament.">Femoral tunnel placement in single-bundle anterior cruciate ligament reconstruction: a cadaveric study relating transtibial lateralized femoral tunnel position to the anteromedial and posterolateral bundle femoral origins of the anterior cruciate ligament.</a> Am J Sports Med. 36, 73-79 (2008).</li><li>Carey, J. L., Dunn, W. R., Dahm, D. L., Zege, S. L., Spindler, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systematic+review+of+anterior+cruciate+ligament+reconstruction+with+autograft+compared+with+allograft.">A systematic review of anterior cruciate ligament reconstruction with autograft compared with allograft.</a> J Bone Joint Surg. 91, 2242-2450 (2009).</li><li>Murray, M. M., Martin, S. D., Martin, T. L., Spector, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histological+changes+in+the+human+anterior+cruciate+ligament+after+rupture.">Histological changes in the human anterior cruciate ligament after rupture.</a> J Bone Joint Surg Am. 82, 1387-1397 (2000).</li><li>Andrish, J., Holmes, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+synovial+fluid+on+fibroblasts+in+tissue+culture.">Effects of synovial fluid on fibroblasts in tissue culture.</a> Clin Orthop Relat Res. (138), 279-283 (1979).</li><li>Murray, M. M., Spindler, K. P., Ballard, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+histologic+repair+in+a+central+wound+in+the+anterior+cruciate+ligamentwith+a+collagen-platelet-rich+plasma+scaffold.">Enhanced histologic repair in a central wound in the anterior cruciate ligamentwith a collagen-platelet-rich plasma scaffold.</a> J Orthop Res. 25, 1007-1017 (2007).</li><li>Carter, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterior+cruciate+ligament+thermal+shrinkage.">Anterior cruciate ligament thermal shrinkage.</a> Clin Sports Med. 21, 693-700 (2002).</li><li>Perry, J. J., Higgins, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterior+and+posterior+cruciate+ligament+rupture+after+thermal+treatment.">Anterior and posterior cruciate ligament rupture after thermal treatment.</a> Arthroscopy. 16, 732-736 (2000).</li><li>Cheng, M. T., Yang, H. W., Chen, T. H., Lee, O. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+multipotent+stem+cells+from+human+cruciate+ligaments.">Isolation and characterization of multipotent stem cells from human cruciate ligaments.</a> Cell Prolif. 42 (4), 448-460 (2009).</li><li>Matsumoto, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+human+anterior+cruciate+ligament-derived+vascular+stem+cells.">Isolation and characterization of human anterior cruciate ligament-derived vascular stem cells.</a> Stem Cells Dev. 21 (6), 859-872 (2012).</li></ol>

Det primära syftet med denna hACL/2D byggnadsställning studie var att använda de erhållna cellerna i en patch för att öka primär reparation av partiell ACL tårar. Ej verksam hantering av partiella ACL tårar kan innehålla en kort period av immobilisering, stagning, en progressiv rehabiliteringsprogram, och regelbundna uppföljningsutvärderingar 13,16,17. Men många studier visar att konservativ behandling hos idrottare har associerats med dåliga resultat och misslyckande. Buckley et al. Ut...

Den främre korsband (ACL) är ett vanligt skadade intraartikulär ligament i knäet. Cirka 200.000 (ACL) skador rapporteras årligen i USA. Över 75% av patienterna upplever främre korsbandsskada opt för ortopedisk rekonstruktiv kirurgi 1,2,3,4. Kirurgiska ingrepp är ofta anges på grund av en i sig dålig läkningspotential 3. ACL-rekonstruktion åstadkoms typiskt med hjälp av ett autograft eller allograft senan. Autograft och allograft representerar den gyllene standarden för återuppbyggnad som de skryter höga andelen framgångsrika och primär sutur reparation, den andra behandlingsalternativ har visat fel på upp till 94% 5,6,7. Partiell tårar av ACL utgör 10% till 28% av alla ACL tårar 8. I en prospektiv studie, Noyes et al. Uppskattas att 50% av patienter med partiella tårar som påverkar mer än hälften av ACL gått att slutföra ACL insufficiens efter icke-operativ behandling 9. Andra studier rapporterar ihållande instabilitet och minskad funktion med färre än 30% av patienterna som kan återgå till sin före skadeaktivitetsnivå 9,10,11,12,13. Behandlingsalternativ är begränsade och inkluderar konservativa metoder, termisk krympning av återstående ACL eller främre korsbandsrekonstruktion. Nyligen har det varit ett ökat intresse i augmented primär reparation. Dessa tekniker använder biologiska läkemedel för att förbättra primär sutur reparationer 14. Ny forskning har försökt att skörda mesenkymala liknande hACL härrör stamceller för att kringgå begränsningar transplantat, 31,32 men giltigheten och effektiviteten av dessa celler är fortfarande okänd. Den ideala cellkälla för vävnadstekniska tillämpningar verkar vara icke-mesechymal hACL härledda fibroblastceller. Aktuell forskning är inriktad på att identifiera ett lämpligt matrismaterial och cellkälla för den manipulerade schavotten. Det är standardförfarande för en sönderriven ACL kasseras som surgical avfall under rekonstruktion kirurgi kan dock här skadat ligament vara en kvalitetskälla för förvärv av celler som behövs för att utveckla och förbättra en idealisk vävnadstekniska ACL ersättare. Vårt labb har utvecklat ett protokoll för en utvidgning av dessa skördade hACL härledda celler in vitro. Med hjälp av en konstruerad 2D matris infunderas med hACL härledda celler, har vi utformat en patch som skulle kunna öka partiell ACL reparation och stärka trasiga ligament.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1004px;" width="1003">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:139px;">Company</td>
			<td style="width:143px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:507px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Petri-dish</td>
			<td style="width:139px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:143px;">08-757-103C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:216px;">Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td style="width:139px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:143px;">BP3994</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:216px;">Collagenase</td>
			<td style="width:139px;">Gibco</td>
			<td style="width:143px;">17018-029</td>
			<td>Store at 40C</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:216px;">DMEM/F-12</td>
			<td style="width:139px;">Cellgro</td>
			<td style="width:143px;">10-092-CV</td>
			<td>Store at 40C. Warm in 370C water bath before use.</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:216px;">Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td style="width:139px;">Gibco</td>
			<td style="width:143px;">10082</td>
			<td>Store at -800C</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:216px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:139px;">Lonza</td>
			<td style="width:143px;">17-602E</td>
			<td>Store at 40C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Centrifuge Tubes- 15 ml</td>
			<td style="width:139px;">Corning</td>
			<td style="width:143px;">430790</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">T-25 flasks</td>
			<td style="width:139px;">BD Falcon</td>
			<td style="width:143px;">3013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:216px;">Trypsin-Versene mixture</td>
			<td style="width:139px;">Lonza</td>
			<td style="width:143px;">17-161E</td>
			<td>Store at 40C. Warm in 370C water bath before use.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">DMSO</td>
			<td style="width:139px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:143px;">BP231-100</td>
			<td>Combustible liquid. Can cause skin, eye and respiratory tract irritation.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Cryogenic vials</td>
			<td style="width:139px;">Corning</td>
			<td style="width:143px;">430489</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:216px;">PLAGA</td>
			<td style="width:139px;">Purac Biomaterials</td>
			<td style="width:143px;">Purasorb PLG8523</td>
			<td>Store at -800C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">TCPS disks</td>
			<td style="width:139px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:143px;">12-545-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:216px;">Dichloromethane</td>
			<td style="width:139px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:143px;">AC36423-0010</td>
			<td>Possible cancer hazard. Store in a dry, cool place.</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Bytac paper</td>
			<td style="width:139px;">Saint gobin performance plastics</td>
			<td style="width:143px;">1420652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Scintillation vial</td>
			<td style="width:139px;">Fisher Scientific</td>
			<td>03-339-21G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:216px;">Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td style="width:139px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:143px;">A7906</td>
			<td>Store at 40C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Tween</td>
			<td style="width:139px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:143px;">BP337-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:216px;">mouse Anti-&#946;-actin antibody (10 Ab)</td>
			<td style="width:139px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:143px;">A5441</td>
			<td>Store at -200C</td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:216px;">goat-anti-mouse antibody (20 Ab)</td>
			<td style="width:139px;">Cell Signaling</td>
			<td style="width:143px;">4408</td>
			<td>Store at -200C</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:216px;">Hoechst dye</td>
			<td style="width:139px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:143px;">14530</td>
			<td>Store at -200C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Glycerol</td>
			<td style="width:139px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:143px;">BP229-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Glutaraldehyde</td>
			<td style="width:139px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:143px;">BP2547-1</td>
			<td>Toxic by inhalation and if swallowed. Causes burns by all exposure routes.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Hexamethyldisilazane</td>
			<td style="width:139px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:143px;">AC43085-1000</td>
			<td>Flammable liquid and vapor. Causes burns by all exposure routes.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sterile Scissors</td>
			<td style="width:139px;">McKesson</td>
			<td style="width:143px;">25-716</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:139px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:143px;">5804R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Light Microscope</td>
			<td style="width:139px;">Olympus</td>
			<td style="width:143px;">CK40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Water Bath</td>
			<td style="width:139px;">Thermo scientific</td>
			<td style="width:143px;">2845</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Vortex</td>
			<td style="width:139px;">Labnet&#160;</td>
			<td style="width:143px;">VX-200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Glass Petri plates</td>
			<td style="width:139px;">fisher Scientific</td>
			<td style="width:143px;">S31473</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Acu-Punch</td>
			<td style="width:139px;">Acuderm Inc.</td>
			<td style="width:143px;">P1225</td>
			<td>Acu-Punch was used to cut 12mm disks</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Cacodylate buffer</td>
			<td style="width:139px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:143px;">97068</td>
			<td>Flammable liquid, carcinogen and irritant.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Osmium tetraoxide</td>
			<td style="width:139px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:143px;">201030</td>
			<td>Highly toxic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:139px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:143px;">T8787</td>
			<td>Harmful if swallowed</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ethanol</td>
			<td style="width:139px;">Decon Labs</td>
			<td style="width:143px;">2705</td>
			<td>Keep away from heat, sparks, flame and other form of ignition.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">General/regional Anesthesia</td>
			<td style="width:139px;">Amphastar pharmaceuticals</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td>1% Lidocaine, 0.25% Bupivacaine,Anesthetic agents for induction and maintenance</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Antibiotics</td>
			<td style="width:139px;">Hospira</td>
			<td>0409-0805-01</td>
			<td>Ancef 1g i.v.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Arthroscopy trocar</td>
			<td style="width:139px;">Smith and Nephew</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Arthroscopy Camera</td>
			<td style="width:139px;">Smith and Nephew</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Arthroscopic grasper and bitter</td>
			<td style="width:139px;">Arthrex&#160;</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">4.5mm shaver</td>
			<td style="width:139px;">Arthrex&#160;</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Interference Screws</td>
			<td style="width:139px;">Arthrex&#160;</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td>stainless steel screws</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sputter Coater</td>
			<td style="width:139px;">Polaron</td>
			<td style="width:143px;">E5400</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

surgical retrieval, isolation and in vitro expansion of human anterior cruciate ligament-derived cells for tissue engineering applications

Skador på ACL är ett vanligt förekommande problem i aktiva individer. Även partiella tårar av denna intraartikulär knä ligament leder till biomekaniska brister som försämrar funktionen och stabiliteten. Aktuella alternativ för behandling av partiella ACL tårar allt från ej verksam, konservativ ledning till flera kirurgiska alternativ, till exempel: termisk modifiering, single-bundle reparation, fullständig återuppbyggnad och rekonstruktion av den skadade delen av infödda ligament. Få studier, om några, har visat någon enskild metod för ledningen att vara konsekvent överlägsen, och i många fall patienter fortsätter att visa ihållande instabilitet och andra sjukdomstillstånd. Målet med denna studie är att identifiera en potentiell cellkälla för användning i utvecklingen av en vävnadsteknisk lapp som kunde genomföras i reparation av en delvis sönderriven ACL. Ett nytt protokoll som utvecklades för expansion av celler från patients genomgår ACL rekonstruktion. För att isolera cellerna maldes hACL vävnad erhålls vid ACL-rekonstruktion spjälkades i en kollagenaslösning. Expansionen genomfördes med användning DMEM/F12 medium kompletterat med 10% fetalt bovint serum (FBS) och 1% penicillin / streptomycin (P / S). Cellerna lagrades sedan vid -80 ° C eller i flytande kväve i en frysmedium som består av DMSO, FBS och expansionsmediet. Efter upptining var hACL härledda celler såddes sedan på en vävnadsutvecklad scaffold, PLAGA (Poly mjölksyra-sam-glykolsyra) och kontroll vävnadskulturpolystyren (TCPS). Efter 7 dagar var SEM utfördes för att jämföra cellulär vidhäftning till PLAGA kontra kontroll TCPS. Cellulär morfologi utvärderades med hjälp av immunfluorescensfärgning. SEM (svepelektronmikroskop)-mikrofotografier visade att cellerna växte och vidhäftas på båda Plaga och TCPS ytor och var sammanflytande under de hela ytorna vid dag 7. Immunofluorescens färgning uppvisade normalt, icke-stressade morfologiskal mönster på båda ytorna. Denna teknik är lovande för applikationer i ACL förnyelse och återuppbyggnad.

Arbetsmodellen för kirurgisk hämtning, vävnad digestion och isolering av den humana främre korsband (hACL) härledda celler visas i Figur 1. De celler som migrerat från explantaten och vidhäftade till de T-25-kolvar. Dessa celler odlades under 3 dagar och sedan synliggjordes under ett ljusmikroskop (figur 2). Ett sammanflytande monoskikt erhölls vid dag 7. Närvaron av friska, livsdugliga celler indikerade framgångsrik hämtning och kultur av hACL härledda celler. <p class=...

Watch this Scientific Journal Video about Surgical Retrieval, Isolation and In vitro Expansion of Human Anterior Cruciate Ligament-derived Cells for Tissue Engineering Applications at JoVE.com

Surgical Retrieval, Isolation and In vitro Expansion of Human Anterior Cruciate Ligament-derived Cells for Tissue Engineering Applications

Kirurgisk Retrieval, isolering och<em&gt; In vitro</em&gt; Utbyggnad av mänskliga Främre korsband-härledda celler för Tissue Engineering Applications

För framtida tillämpningar som en patch för att reparera partiella tårar av främre korsband (ACL), var mänsklig ACL härledda celler som isolerats från vävnad som erhållits under rekonstruktiv förfaranden, expanderade in vitro och odlas på vävnadstekniska byggnadsställningar. Cellulär adhesion och morfologi utfördes sedan för att bekräfta biokompatibilitet på schavotten yta.

Injury to the ACL is a commonly encountered problem in active individuals. Even partial tears of this intra-articular knee ligament lead to biomechanical ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Surgical Retrieval, Isolation and In vitro Expansion of Human Anterior Cruciate Ligament-derived Cells for Tissue Engineering Applications

Tissue Engineering of a Human 3D in vitro Tumor Test System

Tissue Engineering of a Human 3D in vitro Tumor Test System

Tissue Engineering av en Human 3D<em&gt; In vitro</em&gt; Tumör Test System

Cancer is one of the leading causes of death worldwide.  Current therapeutic strategies are predominantly developed in 2D culture  systems, which ...

Athymic Rat Model for Evaluation of Engineered Anterior Cruciate Ligament Grafts

Athymiska Rat modell för utvärdering av Engineered främre korsband Grafts

Anterior cruciate ligament (ACL) rupture is a common ligamentous injury that often requires surgery because the ACL does not heal well without ...

Eye Irritation Test (EIT) for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial (RhCE) Tissue Model

Eye Irritation Test EIT for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial RhCE Tissue Model

Ögonirritationstest (EIT) för Hazard Identifiering av Eye irriterande kemikalier med hjälp av rekonstruerad Human Cornea liknande Epithelial (RHCE) Tissue Modell

To comply with the Seventh Amendment to the EU Cosmetics Directive and EU REACH legislation, validated non-animal alternative methods for reliable and ...

Applications of In Vivo Functional Testing of the Rat Tibialis Anterior for Evaluating Tissue Engineered Skeletal Muscle Repair

Applications of In Vivo Functional Testing of the Rat Tibialis Anterior for Evaluating Tissue Engineered Skeletal Muscle Repair

tillämpningar av<em&gt; In Vivo</em&gt; Provning av Rat tibialis anterior för utvärdering vävnadstekniska skelettmuskulatur Repair

Despite the regenerative capacity of skeletal muscle, permanent functional and/or cosmetic deficits (e.g., volumetric muscle loss (VML) resulting from ...

Melt Electrospinning Writing of Three-dimensional Poly(&#949;-caprolactone) Scaffolds with Controllable Morphologies for Tissue Engineering Applications

Melt Electrospinning Writing of Three-dimensional PolyÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Âµ-caprolactone Scaffolds with Controllable Morphologies for Tissue Engineering Applications

Smälta Electrospinning handstil av tredimensionella Poly(ε-caprolactone) ställningar med kontrollerbar morfologier för Tissue Engineering program

This tutorial reflects on the fundamental principles and guidelines for electrospinning writing with polymer melts, an additive manufacturing technology ...

Isolation of Mesenchymal Stem Cells from Human Alveolar Periosteum and Effects of Vitamin D on Osteogenic Activity of Periosteum-derived Cells

Isolering av mesenkymala stamceller från mänskliga alveolära periostet och effekter av D-Vitamin på osteogent aktivitet av periostet-derived celler

Mesenchymal stem cells (MSCs) are present in a variety of tissues and can be differentiated into numerous cell types, including osteoblasts. Among the ...

Two Methods for Decellularization of Plant Tissues for Tissue Engineering Applications

Två metoder för Decellularization av växt vävnader för Tissue Engineering program

The autologous, synthetic, and animal-derived grafts currently used as scaffolds for tissue replacement have limitations due to low availability, poor ...

Production of Autologous Platelet-Rich Plasma for Boosting In Vitro Human Fibroblast Expansion

Produktion av autolog trombocytrik plasma för att öka in vitro human fibroblastexpansion

There is currently great clinical interest in the use of autologous fibroblasts for skin repair. In most cases, culture of skin cells in vitro is ...

Anterior Segment Organ Culture Platform for Tracking Open Globe Injuries and Therapeutic Performance

Främre segment organkulturplattform för spårning av Open Globe-skador och terapeutisk prestanda

Open globe injuries have poor visual outcomes, often resulting in permanent loss of vision. This is partly due to an extended delay between injury and ...

Fibroblast Derived Human Engineered Connective Tissue for Screening Applications

Fibroblast härledd mänsklig konstruerad bindväv för screeningapplikationer

Fibroblasts are phenotypically highly dynamic cells, which quickly transdifferentiate into myofibroblasts in response to biochemical and biomechanical ...