Name: the use of fluorescent target arrays for assessment of t cell responses in vivo
Uploaded: 2014-06-19T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo at JoVE.com

यह काम परियोजना अनुदान # 1010395 (BQ और सीपी) और # 525431 (सीआर), और ऑस्ट्रेलिया, हेपेटाइटिस और एचआईवी विषाणु विज्ञान ईओआई के लिए एक ऑस्ट्रेलियाई केन्द्र के राष्ट्रीय स्वास्थ्य और चिकित्सा अनुसंधान परिषद से एक कार्यक्रम अनुदान # 455395 (सीपी) द्वारा समर्थित किया गया 2012 अनुदान (सीआर और RJJ) और गॉर्डन और Gretel बूटेस फाउंडेशन (BQ और सीआर) से अनुदान. हम JCSMR FACS प्रयोगशाला की उनकी उत्कृष्ट रखरखाव के लिए हरप्रीत वोहरा और माइकल Devoy शुक्रिया अदा करना चाहता, पेप्टाइड संश्लेषण के लिए ऑस्ट्रेलियाई कैंसर रिसर्च फाउंडेशन Biomolecular संसाधन की सुविधा, JCSMR, अनु,, और डॉ. डेविड बॉयल, सीएसआईआरओ पशु स्वास्थ्य प्रयोगशालाओं, जिलॉन्ग, ऑस्ट्रेलिया माता - पिता एचआईवी टीके के शेयरों को उपलब्ध कराने के लिए.

नोट: इस प्रोटोकॉल के तहत इस्तेमाल चूहों आस्ट्रेलियन नेशनल यूनिवर्सिटी पशु प्रयोग आचार समिति के दिशा निर्देशों और चूहों के अनुसार संभाल रहे थे ग्रीवा अव्यवस्था से euthanized किया गया. 1. डाई और पेप्?...

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	<li>Quah, B. J., Wijesundara, D. K., Ranasinghe, C., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+target+array+killing+assay:+A+multiplex+cytotoxic+T-cell+assay+to+measure+detailed+T-cell+antigen+specificity+and+avidity+in+vivo.">Fluorescent target array killing assay: A multiplex cytotoxic T-cell assay to measure detailed T-cell antigen specificity and avidity in vivo.</a> Cytometry A. 81, 679-690 (2012).</li><li>Quah, B. J., Wijesundara, D. K., Ranasinghe, C., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+target+array+T+helper+assay:+a+multiplex+flow+cytometry+assay+to+measure+antigen-specific+CD4++T+cell-mediated+B+cell+help+in+vivo.">Fluorescent target array T helper assay: a multiplex flow cytometry assay to measure antigen-specific CD4+ T cell-mediated B cell help in vivo.</a> J Immunol Methods. 387, 181-190 (2013).</li><li>Quah, B. J., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+and+improved+methods+for+measuring+lymphocyte+proliferation+in+vitro+and+in+vivo+using+CFSE-like+fluorescent+dyes.">New and improved methods for measuring lymphocyte proliferation in vitro and in vivo using CFSE-like fluorescent dyes.</a> J Immunol Methods. 379, 1-14 (2012).</li><li>Mata, M., Paterson, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Th1+T+cell+responses+to+HIV-1+Gag+protein+delivered+by+a+Listeria+monocytogenes+vaccine+are+similar+to+those+induced+by+endogenous+listerial+antigens.">Th1 T cell responses to HIV-1 Gag protein delivered by a Listeria monocytogenes vaccine are similar to those induced by endogenous listerial antigens.</a> J Immunol. 163, 1449-1456 (1999).</li><li>Earl, P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+and+evaluation+of+multi-gene,+multi-clade+HIV-1+MVA+vaccines.">Design and evaluation of multi-gene, multi-clade HIV-1 MVA vaccines.</a> Vaccine. 27, 5885-5895 (2009).</li><li>Wild, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+evaluation+of+the+immunogenicity+of+C-type+HIV-1-based+DNA+and+NYVAC+vaccines+in+the+Balb/C+mouse+model.">Preclinical evaluation of the immunogenicity of C-type HIV-1-based DNA and NYVAC vaccines in the Balb/C mouse model.</a> Viral Immunol. 22, 309-319 (2009).</li><li>Takeshita, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+analysis+of+the+same+HIV+peptide+functionally+binding+to+both+a+class+I+and+a+class+II+MHC+molecule.">Molecular analysis of the same HIV peptide functionally binding to both a class I and a class II MHC molecule.</a> J Immunol. 154, 1973-1986 (1995).</li><li>Krutzik, P. O., Nolan, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+cell+barcoding+in+flow+cytometry+allows+high-throughput+drug+screening+and+signaling+profiling.">Fluorescent cell barcoding in flow cytometry allows high-throughput drug screening and signaling profiling.</a> Nature Methods. 3, 361-368 (2006).</li><li>Gilbert, D. F., Wilson, J. C., Nink, V., Lynch, J. W., Osborne, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplexed+labeling+of+viable+cells+for+high-throughput+analysis+of+glycine+receptor+function+using+flow+cytometry.">Multiplexed labeling of viable cells for high-throughput analysis of glycine receptor function using flow cytometry.</a> Cytometry A. 75, 440-449 (2009).</li><li>Quah, B. J., Parish, C. 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R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+lymphocyte+proliferation+in+vitro+and+in+vivo+with+the+intracellular+fluorescent+dye+carboxyfluorescein+diacetate+succinimidyl+ester.">Monitoring lymphocyte proliferation in vitro and in vivo with the intracellular fluorescent dye carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester.</a> Nat Protoc. 2, 2049-2056 (2007).</li><li>Durward, M., Harms, J., Splitter, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen+specific+killing+assay+using+CFSE+labeled+target+cells.">Antigen specific killing assay using CFSE labeled target cells.</a> J Vis Exp. , (2010).</li><li>Hermans, I. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+VITAL+assay:+a+versatile+fluorometric+technique+for+assessing+CTL-+and+NKT-mediated+cytotoxicity+against+multiple+targets+in+vitro+and+in+vivo.">The VITAL assay: a versatile fluorometric technique for assessing CTL- and NKT-mediated cytotoxicity against multiple targets in vitro and in vivo.</a> J Immunol Methods. 285, 25-40 (2004).</li><li>Busch, D. H., Pamer, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell+affinity+maturation+by+selective+expansion+during+infection.">T cell affinity maturation by selective expansion during infection.</a> J Exp Med. 189, 701-710 (1999).</li><li>Savage, P. A., Boniface, J. J., Davis, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+kinetic+basis+for+T+cell+receptor+repertoire+selection+during+an+immune+response.">A kinetic basis for T cell receptor repertoire selection during an immune response.</a> Immunity. 10, 485-492 (1999).</li><li>Wang, X. L., Altman, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caveats+in+the+design+of+MHC+class+I+tetramer/antigen-specific+T+lymphocytes+dissociation+assays.">Caveats in the design of MHC class I tetramer/antigen-specific T lymphocytes dissociation assays.</a> J Immunol Methods. 280, 25-35 (2003).</li><li>von Essen, M. R., Kongsbak, M., Geisler, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+behind+functional+avidity+maturation+in+T+cells.">Mechanisms behind functional avidity maturation in T cells.</a> Clin Dev Immunol. , (2012).</li><li>Prussin, C., Metcalfe, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+intracytoplasmic+cytokine+using+flow+cytometry+and+directly+conjugated+anti-cytokine+antibodies.">Detection of intracytoplasmic cytokine using flow cytometry and directly conjugated anti-cytokine antibodies.</a> J Immunol Methods. 188, 117-128 (1995).</li><li>Foster, B., Prussin, C., Liu, F., Whitmire, J. K., Whitton, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+intracellular+cytokines+by+flow+cytometry.">Detection of intracellular cytokines by flow cytometry.</a> Curr Protoc Immunol. , (2007).</li><li>Czerkinsky, C. C., Nilsson, L. A., Nygren, H., Ouchterlony, O., Tarkowski, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+solid-phase+enzyme-linked+immunospot+(ELISPOT)+assay+for+enumeration+of+specific+antibody-secreting+cells.">A solid-phase enzyme-linked immunospot (ELISPOT) assay for enumeration of specific antibody-secreting cells.</a> J Immunol Methods. 65, 109-121 (1983).</li><li>Klinman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ELISPOT+assay+to+detect+cytokine-secreting+murine+and+human+cells.">ELISPOT assay to detect cytokine-secreting murine and human cells.</a> Curr Protoc Immunol. , (2008).</li><li>Yerly, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+cytotoxic+T-lymphocyte+epitope+variant+cross-recognition+and+functional+avidity+are+associated+with+hepatitis+C+virus+clearance.">Increased cytotoxic T-lymphocyte epitope variant cross-recognition and functional avidity are associated with hepatitis C virus clearance.</a> J Virol. 82, 3147-3153 (2008).</li></ol>

एफटीए आधारित assays का लाभ वे प्रवाह cytometry द्वारा एक भी मेजबान जानवर से&gt; 250 व्यवहार्य और पूरी तरह कार्यात्मक लक्ष्य सेल आबादी के भेदभाव की अनुमति है. इस से पहले संभव नहीं हो पाया है कि vivo में फ्लो आधारित assays क...

टी कोशिकाओं अनुकूली प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया में एक केंद्रीय भूमिका निभाते हैं और अक्सर immunotherapy में हेरफेर के लिए लक्षित कर रहे हैं. सीडी 4 + effector टी कोशिकाओं प्रतिरक्षा के कई पहलुओं को विनियमित और भी सीधे एंटीबॉडी का निर्माण करने के लिए बी कोशिकाओं की मदद कर सकते हैं कि साइटोकिन्स स्रावित द्वारा विदेशी प्रतिजन का जवाब. सीडी 8 + साइटोटोक्सिक टी कोशिकाओं (CTLs) भी साइटोकिन्स स्रावित करने के साथ ही सीधे एक विदेशी प्रतिजन व्यक्त कोशिकाओं को मारने में एक केंद्रीय भूमिका निभाने से विदेशी प्रतिजन का जवाब कर सकते हैं. इन टी सेल प्रेरक कार्यों को शुरू करता है मौलिक बातचीत कोशिकाओं की सतह पर MHC अणुओं पर प्रदर्शित विदेशी पेप्टाइड्स के साथ टी सेल रिसेप्टर (TCR) की बातचीत शामिल है. सीडी 4 + टी कोशिकाओं आम तौर पर सूक्ष्म जीव संक्रमित कोशिकाओं पर प्रदर्शित कर रहे हैं कि MHC वर्ग मैं अणुओं पर प्रदर्शित पेप्टाइड्स पहचान प्रतिजन कोशिकाओं और सीडी 8 + टी कोशिकाओं पर MHC वर्ग द्वितीय अणुओं पर प्रदर्शित पेप्टाइड्स पहचान. आदेश मेंटी कोशिकाओं एक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया में खेलने की भूमिका का आकलन करने के लिए, यह उनके प्रेरक कार्यों विश्वसनीय और संवेदनशील तकनीक से मापा जाता है कि आवश्यक है. टी सेल प्रतिक्रिया के मूल्यांकन के लिए आम तरीकों में शामिल हैं; MHC class-I/II/peptide टेट्रामर जेट; ELISPOT और intracellular साइटोकाइन धुंधला द्वारा cytokine उत्पादन; और 51 करोड़ रिलीज assays के द्वारा क्षमता मौत हो गई. ये assays, हालांकि, आम तौर पर इन विट्रो उत्तेजना के साथ पूर्व vivo प्रदर्शन किया, या टी सेल समारोह में सीमित अंतर्दृष्टि प्रदान कर रहे हैं. टी सेल प्रतिक्रिया को मापने जब ​​इन विट्रो उत्तेजना के माध्यम से हो सकता है कि कार्यात्मक मापदंडों में परिवर्तन से बचने के लिए वे टी कोशिकाओं की कोई हेरफेर के साथ होते हैं, के रूप में आदर्श रूप में, यह vivo में, बगल में उन्हें मूल्यांकन करने के लिए लाभप्रद होगा. सबसे अधिक विवो टी सेल कार्यात्मक assays में इस्तेमाल के कुछ विवो में enumerated हैं कि MHC वर्ग मैं बाध्यकारी पेप्टाइड्स के साथ स्पंदित लक्ष्य कोशिकाओं की सीटीएल मध्यस्थता हत्या, मापने पर आधारित हैंऐसे CFSE के रूप में महत्वपूर्ण रंगों के साथ फ्लोरोसेंट लेबलिंग के माध्यम से उनकी पहचान के माध्यम से. वे विवो में हुआ जब assays के इन प्रकार के लक्ष्य का सीटीएल मध्यस्थता हत्या की निगरानी कर सकते हैं, वे पहले से गुणात्मक पैरामीटर ऐसी अनुमति देने के लिए आवश्यक है जो अलग सांद्रता और पेप्टाइड epitopes के विभिन्न प्रकार, पेश कई लक्ष्यों की हत्या का आकलन करने के लिए एक अपेक्षाकृत सीमित क्षमता पड़ा है के रूप में कार्य उत्सुकता और मिलान संस्करण पार जेट मूल्यांकन किया जाना है. ये assays भी सीडी 4 + टी सेल की मध्यस्थता प्रतिक्रियाओं पर कोई जानकारी उपलब्ध नहीं है. हमने हाल ही में से एक जानवर में एक साथ&gt; 250 लक्ष्य कोशिकाओं के खिलाफ टी सेल प्रतिक्रिया की निगरानी की अनुमति देता है जो फ्लोरोसेंट लक्ष्य सरणियों (एफटीए) पर आधारित एक मल्टीप्लेक्स परख विकसित किया है, टी सेल प्रतिक्रिया का आकलन करने के लिए इस्तेमाल मौजूदा तरीकों के साथ सीमाओं के कई दूर करने के लिए 1, 2 प्रवाह cytometry. एफटीए सेव साथ लेबल लिम्फोसाइटों के शामिल हैंअद्वितीय प्रतिदीप्ति की&gt; 250 सेल समूहों उत्पन्न करने की अनुमति CFSE, रंगीन टीवी और सीपीडी जैसे महत्वपूर्ण रंगों के आम सांद्रता और संयोजन. इन कोशिकाओं व्यवहार्य और पूरी तरह कार्यात्मक रहते हैं, वे इन विवो 3 में effector टी कोशिकाओं के साथ उनकी बातचीत की निगरानी की अनुमति के लिए पशुओं में इंजेक्ट किया जा सकता है. उदाहरण के लिए, मुक्त व्यापार समझौते सेल समूहों लक्ष्य कोशिकाओं 1 के प्रतिजन विशेष सीटीएल मध्यस्थता हत्या के आकलन की अनुमति के लिए MHC वर्ग मैं बाध्यकारी पेप्टाइड्स के साथ स्पंदित किया जा सकता है. इसके अलावा, मुक्त व्यापार समझौते सेल समूहों को भी अनुमति देता है, MHC वर्ग द्वितीय बाध्यकारी पेप्टाइड्स के साथ स्पंदित किया जा सकता है प्रतिजन विशेष टी सहायक सेल ऐसे CD69, CD44 और / या के रूप में सक्रियण मार्कर के आकलन से (सक्रियण का आकलन करने से (टी एच) गतिविधि का आकलन आत्मीय पेप्टाइड 2 असर एफटीए के भीतर बी कोशिकाओं की CD62L). 250 से अधिक लक्ष्यों को एक साथ पता लगाया जा सकता है, यह एन के साथ स्पंदित कई लक्ष्य सेल समूहों के खिलाफ सीटीएल और टी एच प्रतिक्रियाओं को मापने के लिए संभव हैअलग सांद्रता और कई replicates के शामिल किए जाने पर umerous पेप्टाइड्स. एफटीए परख इसलिए vivo में टी सेल प्रेरक प्रतिक्रिया के मूल्यांकन के लिए एक अभूतपूर्व स्तर प्रदान करता है. यहाँ हम विस्तार में एक मुक्त व्यापार समझौते के निर्माण का वर्णन है और वे इन विवो में टी सेल प्रतिक्रिया का आकलन करने के लिए लागू किया जा सकता है कि कैसे दिखा. प्रक्रिया MHC वर्ग मैं और द्वितीय बाध्यकारी पेप्टाइड्स के साथ स्पंदित 42 सेल समूहों के 6 दोहराता के शामिल तीन महत्वपूर्ण रंगों के उपयोग के माध्यम से 252 से discernable सेल समूहों के शामिल एक मुक्त व्यापार समझौते के निर्माण का वर्णन करता है. लेबलिंग की राशि को कम करने के लिए आवश्यक के रूप में 42 सेल समूहों की लेबलिंग ट्यूब तली 10 मिलीलीटर शंक्वाकार में होता है और यह 1 टेबल में दर्शाया के रूप में एक ट्यूब रैक में इन बाहर रखना करने के लिए सहायक है. इस विधि से discernable समूहों की छोटी संख्या के लिए समायोजित किया जा सकता है का हर रंग 1 का प्रदर्शन किया. हम यह respons उपाय कर सकते हैं कि कैसे दिखाकर परख की उपयोगिता पर प्रकाश डालाचूहों के एक छोटे पलटन में कई epitopes के खिलाफ पुनः संयोजक चेचक वायरस टीकाकरण द्वारा उत्पन्न तों. यह मुक्त व्यापार समझौते परख, क्रमशः, के माध्यम से वक्र (नीलामी) के मूल्यांकन और आधा अधिक से अधिक प्रतिक्रियाओं (ईसी 50) उत्पन्न करने के लिए आवश्यक प्रभावी पेप्टाइड एकाग्रता की माप के तहत क्षेत्र के उपयोग संचयी प्रतिक्रियाओं और कार्यात्मक उत्सुकता को मापने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है कि कैसे पता चलता है.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">RPMI</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">R8758</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Fetal calf serum</td>
			<td style="width:71px;">Serana</td>
			<td style="width:119px;">FCS-500</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">CTV</td>
			<td style="width:71px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">C34557</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">CFDA, SE</td>
			<td style="width:71px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">C1157</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">CPD</td>
			<td style="width:71px;">eBioscience</td>
			<td style="width:119px;">65-0840-90</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">anti-B220 PerCp-Cy5.5</td>
			<td style="width:71px;">eBioscience</td>
			<td style="width:119px;">110730</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">anti-CD69 brilliant violet 605</td>
			<td style="width:71px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">104529</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">PKH-26</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">PKH26GL-1KT</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">EQUIPMENT:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Material Name</td>
			<td style="width:71px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalogue Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments (optional)</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Vortex</td>
			<td style="width:71px;">Scientific Industries Inc&#160;</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:71px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Flow cytometer (Fortessa or equivalent with blue, red and violet laser source)</td>
			<td style="width:71px;">BD Bioscience</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the use of fluorescent target arrays for assessment of t cell responses in vivo

विवो में टी सेल प्रतिक्रिया की निगरानी करने की क्षमता के लिए प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के बारे में हमारी समझ के विकास और immunotherapies के डिजाइन के लिए महत्वपूर्ण है. और लाल लेजर उत्तेजनीय रंजक (सेल प्रसार डाई eFluor 670: यहाँ हम ऐसे carboxyfluorescein succinimidyl एस्टर (CFSE), बैंगनी लेजर उत्तेजनीय रंजक (केबल टीवी CellTrace वायलेट): के रूप में महत्वपूर्ण रंगों का इस्तेमाल करता है जो फ्लोरोसेंट लक्ष्य सरणी (एफटीए) तकनीक के उपयोग का वर्णन सीपीडी )&gt; 250 discernable फ्लोरोसेंट सेल समूहों में लेबल माउस लिम्फोसाइटों combinatorially लिए. इन एफटीए के भीतर सेल समूहों प्रमुख उतक अनुरूपता (MHC) वर्ग मैं और MHC वर्ग द्वितीय बाध्यकारी पेप्टाइड्स के साथ स्पंदित और इस तरह क्रमश: सीडी 8 + और ​​सीडी 4 + टी कोशिकाओं, के लिए लक्ष्य कोशिकाओं के रूप में कार्य किया जा सकता है. ये एफटीए कोशिकाओं व्यवहार्य और पूरी तरह कार्यात्मक रहते हैं, और इसलिए एफटीए लक्ष्य कोशिकाओं और सीडी 4 + टी सेल तप हेल की सीडी 8 + टी सेल की मध्यस्थता हत्या के आकलन की अनुमति के लिए चूहों में प्रशासित किया जा सकता हैफ्लो द्वारा vivo में वास्तविक समय में मुक्त व्यापार समझौते बी सेल लक्ष्य कोशिकाओं के पी. &gt; 250 लक्ष्य कोशिकाओं को एक बार में मूल्यांकन किया जा सकता है, तकनीक कई सांद्रता में और कई replicates में कई प्रतिजन epitopes के खिलाफ टी सेल प्रतिक्रिया की निगरानी की अनुमति देता है. जैसे, तकनीक एक मात्रात्मक (प्रतिक्रिया की जैसे संचयी परिमाण) और एक गुणात्मक (जैसे. कार्यात्मक उत्सुकता और प्रतिक्रिया का मिलान पार जेट) दोनों स्तर पर टी सेल प्रतिक्रिया उपाय कर सकते हैं. इस के साथ साथ, हम इन एफटीए का निर्माण किया है और वे एक पुनः संयोजक चेचक वायरस वैक्सीन से प्रेरित टी सेल प्रतिक्रिया का आकलन करने के लिए लागू किया जा सकता है की एक उदाहरण दे रहे हैं क्या करते हैं.

एफटीए परख के उपयोग का एक उदाहरण के रूप में, एक BALB / ग माउस एचआईवी मैं सीटीएल epitopes को एचआईवी मैं epitopes (वी.वी. एचआईवी) और प्रतिक्रियाओं को व्यक्त पुनः संयोजक चेचक वायरस (वी.वी.) के साथ प्रतिरक्षित किया गया था, झूठ, ?...

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The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

टी सेल प्रतिक्रिया के मूल्यांकन के लिए फ्लोरोसेंट लक्ष्य सारणियों का प्रयोग करें<em&gt; में विवो</em

विवो में विस्तार से टी सेल प्रतिक्रिया की निगरानी करने की क्षमता के लिए प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के बारे में हमारी समझ के विकास के लिए महत्वपूर्ण है. यहाँ हम फ्लो द्वारा एक साथ&gt; 250 मापदंडों का आकलन है कि एक Vivo में टी सेल परख में फ्लोरोसेंट लक्ष्य सरणियों (एफटीए) के उपयोग का वर्णन.

The ability to monitor T cell responses in vivo is important for the development of our understanding of the immune response and the design of ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

माउस टी कोशिकाओं में टी सेल रिसेप्टर्स की रेट्रोवायरल transduction

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Preparation and Use of HIV-1 Infected Primary CD4+ T-Cells as Target Cells in Natural Killer Cell Cytotoxic Assays

तैयारी और प्रयोग करें एचआईवी 1 संक्रमित प्राथमिक + प्राकृतिक खूनी सेल साइटोटोक्सिक Assays में लक्ष्य कोशिकाओं के रूप में सीडी 4 टी कोशिकाओं

 Natural killer (NK) cells are a vital component of the innate immune response to virus-infected cells. It is important to understand the ability of NK ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

बैक्टीरियल आसंजन के अध्ययन में कतरें तनाव का परिचय

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

भ्रष्टाचार बनाम मेजबान रोग के प्रेरण और<em&gt; Vivo में</em&gt; टी सेल निगरानी एक MHC-मिलान murine मॉडल का उपयोग

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

चूहे में allogeneic सीडी 4 टी सेल प्रतिक्रिया का अध्ययन करने के लिए तेल त्वचा का प्रत्यारोपण

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

इन विट्रो में और टी, बी और माइलॉयड कोशिकाओं की दमन गतिविधि और प्रत्यारोपण प्राप्तकर्ताओं से विनोदी प्रतिक्रियाओं के Vivo आकलन में

The main concern in transplantation is to achieve specific tolerance through induction of regulatory cells. The understanding of tolerance mechanisms ...

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

Vivo में एक टीकाकरण मॉडल का उपयोग कर प्रतिजन-विशिष्ट टी-सेल Cytolytic फ़ंक्शन का पता लगाने के लिए परख

Current methodologies for antigen-specific killing are limited to in vitro use or utilized in infectious disease models. However, there is not a protocol ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

अलगाव साल्मोनेला typhimurium-मैक्रोफेज से युक्त Phagosomes का

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

Vivo में मानव टी सेल याद प्रतिक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए एक चूषण छाला प्रोटोकॉल

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

संक्रमित Ifnar1 के Immunoprivileged अंगों में Zika वायरस-विशिष्ट टी-सेल प्रतिक्रियाओं का मूल्यांकन-चूहों/

The Zika virus (ZIKV) can induce inflammation in immunoprivileged organs (e.g., the brain and testis), leading to the Guillain-Barr&#233; syndrome and ...