Name: the use of fluorescent target arrays for assessment of t cell responses in vivo
Uploaded: 2014-06-19T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo at JoVE.com

Эта работа была поддержана проекта грантов # 1010395 (BQ и СР) и # 525431 (CR), а также грантовой программы # 455395 (СР) из Национального здравоохранения и медицинских исследований Совета Австралии, австралийский Центра гепатита и ВИЧ вирусологии ВЗ 2012 грант (CR и RJJ) и грант от Гордона и Гретель Волопаса Foundation (BQ и CR). Мы хотели бы поблагодарить Harpreet Вохра и Майкл Devoy за отличную поддержания лаборатории JCSMR FACS, Фонд Австралии онкологический научный фонд Биомолекулярная ресурсов, JCSMR, АНУ, для синтеза пептидов, и д-р Дэвид Бойл, CSIRO животных лаборатории здоровья, Джилонг, Австралия для обеспечения запасов вакцин против ВИЧ родительские.

Примечание: Мыши, используемые в рамках этого протокола были обработаны в соответствии с рекомендациями австралийского Комитета по этике Национального университета экспериментов на животных и мышей умерщвляли путем смещения шейных позвонков. 1. Краситель и пептид Подг...

<ol>
	<li>Quah, B. J., Wijesundara, D. K., Ranasinghe, C., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+target+array+killing+assay:+A+multiplex+cytotoxic+T-cell+assay+to+measure+detailed+T-cell+antigen+specificity+and+avidity+in+vivo.">Fluorescent target array killing assay: A multiplex cytotoxic T-cell assay to measure detailed T-cell antigen specificity and avidity in vivo.</a> Cytometry A. 81, 679-690 (2012).</li><li>Quah, B. J., Wijesundara, D. K., Ranasinghe, C., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+target+array+T+helper+assay:+a+multiplex+flow+cytometry+assay+to+measure+antigen-specific+CD4++T+cell-mediated+B+cell+help+in+vivo.">Fluorescent target array T helper assay: a multiplex flow cytometry assay to measure antigen-specific CD4+ T cell-mediated B cell help in vivo.</a> J Immunol Methods. 387, 181-190 (2013).</li><li>Quah, B. J., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+and+improved+methods+for+measuring+lymphocyte+proliferation+in+vitro+and+in+vivo+using+CFSE-like+fluorescent+dyes.">New and improved methods for measuring lymphocyte proliferation in vitro and in vivo using CFSE-like fluorescent dyes.</a> J Immunol Methods. 379, 1-14 (2012).</li><li>Mata, M., Paterson, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Th1+T+cell+responses+to+HIV-1+Gag+protein+delivered+by+a+Listeria+monocytogenes+vaccine+are+similar+to+those+induced+by+endogenous+listerial+antigens.">Th1 T cell responses to HIV-1 Gag protein delivered by a Listeria monocytogenes vaccine are similar to those induced by endogenous listerial antigens.</a> J Immunol. 163, 1449-1456 (1999).</li><li>Earl, P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+and+evaluation+of+multi-gene,+multi-clade+HIV-1+MVA+vaccines.">Design and evaluation of multi-gene, multi-clade HIV-1 MVA vaccines.</a> Vaccine. 27, 5885-5895 (2009).</li><li>Wild, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+evaluation+of+the+immunogenicity+of+C-type+HIV-1-based+DNA+and+NYVAC+vaccines+in+the+Balb/C+mouse+model.">Preclinical evaluation of the immunogenicity of C-type HIV-1-based DNA and NYVAC vaccines in the Balb/C mouse model.</a> Viral Immunol. 22, 309-319 (2009).</li><li>Takeshita, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+analysis+of+the+same+HIV+peptide+functionally+binding+to+both+a+class+I+and+a+class+II+MHC+molecule.">Molecular analysis of the same HIV peptide functionally binding to both a class I and a class II MHC molecule.</a> J Immunol. 154, 1973-1986 (1995).</li><li>Krutzik, P. O., Nolan, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+cell+barcoding+in+flow+cytometry+allows+high-throughput+drug+screening+and+signaling+profiling.">Fluorescent cell barcoding in flow cytometry allows high-throughput drug screening and signaling profiling.</a> Nature Methods. 3, 361-368 (2006).</li><li>Gilbert, D. F., Wilson, J. C., Nink, V., Lynch, J. W., Osborne, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplexed+labeling+of+viable+cells+for+high-throughput+analysis+of+glycine+receptor+function+using+flow+cytometry.">Multiplexed labeling of viable cells for high-throughput analysis of glycine receptor function using flow cytometry.</a> Cytometry A. 75, 440-449 (2009).</li><li>Quah, B. J., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+carboxyfluorescein+diacetate+succinimidyl+ester+(CFSE)+to+monitor+lymphocyte+proliferation.">The use of carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE) to monitor lymphocyte proliferation.</a> J Vis Exp. , (2010).</li><li>Quah, B. J., Warren, H. S., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+lymphocyte+proliferation+in+vitro+and+in+vivo+with+the+intracellular+fluorescent+dye+carboxyfluorescein+diacetate+succinimidyl+ester.">Monitoring lymphocyte proliferation in vitro and in vivo with the intracellular fluorescent dye carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester.</a> Nat Protoc. 2, 2049-2056 (2007).</li><li>Durward, M., Harms, J., Splitter, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen+specific+killing+assay+using+CFSE+labeled+target+cells.">Antigen specific killing assay using CFSE labeled target cells.</a> J Vis Exp. , (2010).</li><li>Hermans, I. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+VITAL+assay:+a+versatile+fluorometric+technique+for+assessing+CTL-+and+NKT-mediated+cytotoxicity+against+multiple+targets+in+vitro+and+in+vivo.">The VITAL assay: a versatile fluorometric technique for assessing CTL- and NKT-mediated cytotoxicity against multiple targets in vitro and in vivo.</a> J Immunol Methods. 285, 25-40 (2004).</li><li>Busch, D. H., Pamer, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell+affinity+maturation+by+selective+expansion+during+infection.">T cell affinity maturation by selective expansion during infection.</a> J Exp Med. 189, 701-710 (1999).</li><li>Savage, P. A., Boniface, J. J., Davis, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+kinetic+basis+for+T+cell+receptor+repertoire+selection+during+an+immune+response.">A kinetic basis for T cell receptor repertoire selection during an immune response.</a> Immunity. 10, 485-492 (1999).</li><li>Wang, X. L., Altman, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caveats+in+the+design+of+MHC+class+I+tetramer/antigen-specific+T+lymphocytes+dissociation+assays.">Caveats in the design of MHC class I tetramer/antigen-specific T lymphocytes dissociation assays.</a> J Immunol Methods. 280, 25-35 (2003).</li><li>von Essen, M. R., Kongsbak, M., Geisler, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+behind+functional+avidity+maturation+in+T+cells.">Mechanisms behind functional avidity maturation in T cells.</a> Clin Dev Immunol. , (2012).</li><li>Prussin, C., Metcalfe, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+intracytoplasmic+cytokine+using+flow+cytometry+and+directly+conjugated+anti-cytokine+antibodies.">Detection of intracytoplasmic cytokine using flow cytometry and directly conjugated anti-cytokine antibodies.</a> J Immunol Methods. 188, 117-128 (1995).</li><li>Foster, B., Prussin, C., Liu, F., Whitmire, J. K., Whitton, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+intracellular+cytokines+by+flow+cytometry.">Detection of intracellular cytokines by flow cytometry.</a> Curr Protoc Immunol. , (2007).</li><li>Czerkinsky, C. C., Nilsson, L. A., Nygren, H., Ouchterlony, O., Tarkowski, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+solid-phase+enzyme-linked+immunospot+(ELISPOT)+assay+for+enumeration+of+specific+antibody-secreting+cells.">A solid-phase enzyme-linked immunospot (ELISPOT) assay for enumeration of specific antibody-secreting cells.</a> J Immunol Methods. 65, 109-121 (1983).</li><li>Klinman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ELISPOT+assay+to+detect+cytokine-secreting+murine+and+human+cells.">ELISPOT assay to detect cytokine-secreting murine and human cells.</a> Curr Protoc Immunol. , (2008).</li><li>Yerly, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+cytotoxic+T-lymphocyte+epitope+variant+cross-recognition+and+functional+avidity+are+associated+with+hepatitis+C+virus+clearance.">Increased cytotoxic T-lymphocyte epitope variant cross-recognition and functional avidity are associated with hepatitis C virus clearance.</a> J Virol. 82, 3147-3153 (2008).</li></ol>

Преимущество анализов РИФ-основе, что они позволяют дискриминацию&gt; 250 населения жизнеспособным и полностью функциональный клеток-мишеней с одного животного-хозяина с помощью проточной цитометрии. Это обеспечивает уровень сложности для естественных условиях проточной цитомет?...

Т-клетки играют центральную роль в адаптивного иммунного ответа и часто становятся мишенью для манипуляций в иммунотерапии. CD4 + эффекторные Т клетки реагируют на чужеродный антиген по секреции цитокинов, которые регулируют многие аспекты иммунитета, а также может напрямую помочь В-клеток для производства антител. CD8 + цитотоксические Т-клетки (CTL) также может реагировать на чужеродный антиген по секреции цитокинов, а также играет центральную роль в непосредственно убивает клетки выражая чужеродный антиген. Фундаментальное взаимодействие, которое инициирует эти функции эффекторных Т-клеток включает взаимодействие Т-клеточного рецептора (TCR) с иностранными пептидов, отображаемых на молекул МНС на поверхности клеток. CD4 + Т-клетки распознают пептиды, представленные на молекул МНС класса-II на антиген-представляющих клеток и CD8 + Т-клетки распознают пептиды, представленные на молекул МНС класса-I, которые обычно отображаются на микробных клеток, инфицированных. В порядкеоценить роль Т-клетки играют в иммунного ответа, важно, что их эффекторные функции измеряются надежных и чувствительных методов. Общие методы оценки отклика клеток T включают в себя: МНС class-I/II/peptide тетрамером реактивность; продукция цитокинов по ELISPOT и внутриклеточного окрашивания цитокинов; и убивая мощности на 51 Cr-релиз анализов. Эти анализы, однако, как правило, выполняются экс виво со стимуляцией в пробирке, или обеспечивают ограниченное понимание функции Т-клеток. В идеале, при измерении Т-клеточные ответы, было бы полезно, чтобы оценить их на месте, в естественных условиях, как они происходят, без манипулирования Т-клеток с тем, чтобы избежать изменений в функциональных параметров, которые могут возникнуть через стимуляцию в пробирке. Некоторые из наиболее часто используемых в естественных Т-клеток функциональных анализов, основанный на измерении CTL, опосредованного умерщвление клетки-мишени импульсных с МНС класса I-связывающих пептидов, которые перечислены в естественных условияхчерез их обнаружения через флуоресцентного мечения витальных красителей, таких как CFSE. Хотя эти типы анализов может контролировать CTL, опосредованного убийство целей, когда они происходят в живом организме, они ранее были сравнительно ограниченные возможности для оценки убийства нескольких целей, представляющих различные концентрации и различных типов пептидных эпитопов, который необходим, чтобы позволить качественные параметры, такие как функциональные алчность и Эпитоп вариант перекрестной реактивности в оценке. Эти анализы также не дает никакой информации о CD4 + Т-клеток опосредованных реакций. Чтобы преодолеть многие из ограничений с нынешних методов, используемых для оценки Т-клеточные реакции, мы недавно разработали многозальный анализа на основе флуоресцентных целевых массивов (ССТ), которая позволяет осуществлять мониторинг Т-клеточного ответа против&gt; 250 клеток-мишеней одновременно в одном животного проточной цитометрии 1, 2. ССТ состоят из лимфоцитов, меченных нескольконцентрации Eral и комбинации витальных красителей, как CFSE, CTV и ДСП, позволяющих&gt; 250 клеток кластеры уникальной флуоресценции, которые будут созданы. Так как эти клетки остаются жизнеспособными и полностью функциональным, они могут быть введены в животных, чтобы обеспечить контроль за их взаимодействие с эффекторных Т-клетках в естественных условиях 3. Например, клеточные кластеры FTA может быть импульсным с МНС класса пептидов-I-связывания, чтобы позволить оценку антиген-специфических ЦТЛ, опосредованной гибели клеток-мишеней 1. Кроме того, кластеры клеток FTA также может быть импульсным с МНС класса-II-связывающих пептидов, позволяя оценка антигена специфические Т-хелперных клеток (T H) путем оценки активности активацию (по оценке маркеров активации CD69, таких как CD44, и / или CD62L) В-клеток в пределах ЗСТ несущих родственный пептид 2. Поскольку более 250 мишени могут быть обнаружены одновременно, можно измерить ЦТЛ и Т H ответы против многих кластеров клеток-мишеней с п импульсныхumerous пептиды в различных концентрациях и включение многих повторов. FTA анализ, следовательно, обеспечивает беспрецедентный уровень Т-клеточного эффекторной оценки реакции в естественных условиях. Здесь мы опишем подробно строительство ЗСТ и показать, как они могут быть применены к оценке Т-клеточные реакции в естественных условиях. Процедура описывает конструкцию ЗСТ, состоящей из 252 различимых кластеров клеток за счет использования трех жизненно важных красителей, состоящих из 6 повторами 42 кластеров клеток импульсных с МНС класса-I и II-связывающих пептидов. Маркировка 42 кластеров клеток происходит в 10 мл коническую дном трубки и это полезно, чтобы заложить эти в стойке трубки, как показано в таблице 1. Этот метод может быть отрегулирован для меньшим числом различаемых кластеров в соответствии с требованиями уменьшения количества маркировки каждого красителя производится 1. Мы подчеркиваем полезность анализа, показывая, как он может измерять отвэс генерируемые рекомбинантного оспа-вирусной вакцинации против нескольких эпитопов в небольшой группе мышей. Это показывает, насколько этот анализ FTA может быть использован для измерения кумулятивные ответы и функциональный алчность через, соответственно, использование площади под кривой (AUC) оценки и измерения эффективной концентрации пептида, необходимого для генерации половиной ответов максимальные (EC 50).

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">RPMI</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">R8758</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Fetal calf serum</td>
			<td style="width:71px;">Serana</td>
			<td style="width:119px;">FCS-500</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">CTV</td>
			<td style="width:71px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">C34557</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">CFDA, SE</td>
			<td style="width:71px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">C1157</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">CPD</td>
			<td style="width:71px;">eBioscience</td>
			<td style="width:119px;">65-0840-90</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">anti-B220 PerCp-Cy5.5</td>
			<td style="width:71px;">eBioscience</td>
			<td style="width:119px;">110730</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">anti-CD69 brilliant violet 605</td>
			<td style="width:71px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">104529</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">PKH-26</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">PKH26GL-1KT</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">EQUIPMENT:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Material Name</td>
			<td style="width:71px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalogue Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments (optional)</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Vortex</td>
			<td style="width:71px;">Scientific Industries Inc&#160;</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:71px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Flow cytometer (Fortessa or equivalent with blue, red and violet laser source)</td>
			<td style="width:71px;">BD Bioscience</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the use of fluorescent target arrays for assessment of t cell responses in vivo

Способность контролировать Т-клеточные реакции в естественных условиях имеет важное значение для развития нашего понимания иммунного ответа и разработке иммунотерапии. Здесь мы опишем использование люминесцентные целевого массива технологии (FTA), которая использует жизненные красители, такие как карбоксифлуоресцеин сукцинимидиловым эфиром (CFSE), фиолетовый лазерных возбудимых красителей (CellTrace Фиолетовый: CTV) и красный лазер возбудимых красителей (пролиферации клеток Краска eFluor 670: CPD ) в комбинаторно этикеток лимфоциты мыши в&gt; 250 различимых кластеров люминесцентных клеток. Сотовые кластеры внутри этих ССТ может быть импульсным с главного комплекса гистосовместимости (МНС) связывающие пептиды класса I и МНС класса-II и тем самым выступать в качестве клеток-мишеней для CD8 + и CD4 + Т-клеток, соответственно. Эти FTA клетки остаются жизнеспособными и полностью функциональным, и, следовательно, могут быть введены мышам с целью оценки CD8 + Т-клеточно-опосредованного убийства ССТ клеток-мишеней и CD4 + Т-клеток-медитировал Хельр FTA B клетки-мишени клеток в реальном времени в естественных условиях с помощью проточной цитометрии. С&gt; 250 клеток-мишеней может быть оценена сразу, техника позволяет контролировать Т-клеток ответов против нескольких антигенных эпитопов в нескольких концентрациях и в нескольких повторах. Таким образом, способ может измерять Т-клеточные реакции как на количественном (например, совокупный величины ответа) и качественными (например, функциональной. Авидности и эпитоп-перекрестной реактивности в ответ) уровне. В данном случае мы описываем, как эти ССТ построены и дают пример того, как они могут быть применены для оценки Т-клеточные реакции, вызванные рекомбинантной вакцины вируса оспы.

В качестве примера использования анализа FTA, BALB / C мышей иммунизировали рекомбинантным вирусом коровьей оспы (VV), выражающей эпитопы ВИЧ-I (VV-ВИЧ) и ответы на эпитопов ВИЧ-I ЦТЛ, Gag, Gag MUT, Env и Pol, В.В. CTL эпитопы F2, F2, и MUT, и клеточный эпитоп ВИЧ-I T H, Gag Th (как описано в пункте 2) были оцен?...

Watch this Scientific Journal Video about The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo at JoVE.com

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

Использование флуоресцентных целевых массивов для оценки Т-клеточные ответы<em&gt; В естественных условиях</em

Способность контролировать Т-клеточные реакции в деталях в естественных условиях имеет важное значение для развития нашего понимания иммунного ответа. Здесь мы опишем использование люминесцентных целевых массивов (ССТ) в в естественных условиях Т-клеток анализа, который оценивает&gt; 250 параметров одновременно с помощью проточной цитометрии.

The ability to monitor T cell responses in vivo is important for the development of our understanding of the immune response and the design of ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

Ретровирусные трансдукция Т-клеточных рецепторов в мышь Т-клеток

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Preparation and Use of HIV-1 Infected Primary CD4+ T-Cells as Target Cells in Natural Killer Cell Cytotoxic Assays

Подготовка и использование инфицированных ВИЧ-1 Первичная CD4 + Т-клеток в качестве клеток-мишеней в естественных киллеров сотовый Цитотоксические Анализы

 Natural killer (NK) cells are a vital component of the innate immune response to virus-infected cells. It is important to understand the ability of NK ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

Представляем напряжения сдвига в изучении бактериальной адгезии

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Индукционная трансплантат против хозяина и<em&gt; В Vivo</em&gt; Т-клеток Мониторинг Использование MHC соответствием мышиной модели

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

Трансплантация кожи хвоста изучать Аллогенная лимфоцитов CD4 ответов у мышей

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

In Vitro и In Vivo Оценка T, B и миелоидных клеток подавляющих активность и гуморальные ответы от пересадки получателей

The main concern in transplantation is to achieve specific tolerance through induction of regulatory cells. The understanding of tolerance mechanisms ...

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

В естественных условиях Assay для обнаружения антиген специфические Т-лимфоцитов цитолитического функции с помощью вакцинации модели

Current methodologies for antigen-specific killing are limited to in vitro use or utilized in infectious disease models. However, there is not a protocol ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Изоляция Salmonella typhimurium-содержащих Phagosomes от макрофагов

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

Всасывания блистер протокол для изучения человеческий Т-клеточный вспомнить ответы в естественных условиях

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

Оценка ответов Зика вирус специфических Т-клеток в Immunoprivileged органах зараженных Ifnar1- / - мышей

The Zika virus (ZIKV) can induce inflammation in immunoprivileged organs (e.g., the brain and testis), leading to the Guillain-Barr&#233; syndrome and ...