Name: the use of fluorescent target arrays for assessment of t cell responses in vivo
Uploaded: 2014-06-19T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo at JoVE.com

Detta arbete stöddes av projektbidrag # 1010395 (BQ och CP) och # 525.431 (CR), och en program Grant # 455395 (CP) från det nationella hälso-och medicinska forskningsrådet i Australien, en australiska Centrum för hepatit och HIV Virology EOI 2012 bidrag (CR och RJJ) och ett bidrag från Gordon och Greta Bootes Foundation (BQ och CR). Vi vill tacka Harpreet Vohra och Michael Devoy för deras utmärkta underhåll av JCSMR FACS laboratoriet, Australian Cancer Research Foundation Biomolecular Resource Facility, JCSMR, ANU, för peptidsyntes, och Dr David Boyle, CSIRO Animal Health Laboratories, Geelong, Australien för att ge moder HIV vaccinlager.

OBS: Möss som används inom ramen för detta protokoll hanterades i enlighet med riktlinjerna i Australian National University djurförsöks etikkommitté och möss avlivades genom halshuggning. 1. Dye och peptid Förberedelse <ol><li> Dye beredning OBS: Färgämnen är förspädda vid olika koncentrationer för att möjliggöra märkning av celler vid diskreta fluorescensintensiteter. CFSE används vid sju koncentrationer som görs via 3,5-faldig seriespädningar, och CTV och CPD ...

<ol>
	<li>Quah, B. J., Wijesundara, D. K., Ranasinghe, C., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+target+array+killing+assay:+A+multiplex+cytotoxic+T-cell+assay+to+measure+detailed+T-cell+antigen+specificity+and+avidity+in+vivo.">Fluorescent target array killing assay: A multiplex cytotoxic T-cell assay to measure detailed T-cell antigen specificity and avidity in vivo.</a> Cytometry A. 81, 679-690 (2012).</li><li>Quah, B. J., Wijesundara, D. K., Ranasinghe, C., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+target+array+T+helper+assay:+a+multiplex+flow+cytometry+assay+to+measure+antigen-specific+CD4++T+cell-mediated+B+cell+help+in+vivo.">Fluorescent target array T helper assay: a multiplex flow cytometry assay to measure antigen-specific CD4+ T cell-mediated B cell help in vivo.</a> J Immunol Methods. 387, 181-190 (2013).</li><li>Quah, B. J., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+and+improved+methods+for+measuring+lymphocyte+proliferation+in+vitro+and+in+vivo+using+CFSE-like+fluorescent+dyes.">New and improved methods for measuring lymphocyte proliferation in vitro and in vivo using CFSE-like fluorescent dyes.</a> J Immunol Methods. 379, 1-14 (2012).</li><li>Mata, M., Paterson, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Th1+T+cell+responses+to+HIV-1+Gag+protein+delivered+by+a+Listeria+monocytogenes+vaccine+are+similar+to+those+induced+by+endogenous+listerial+antigens.">Th1 T cell responses to HIV-1 Gag protein delivered by a Listeria monocytogenes vaccine are similar to those induced by endogenous listerial antigens.</a> J Immunol. 163, 1449-1456 (1999).</li><li>Earl, P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+and+evaluation+of+multi-gene,+multi-clade+HIV-1+MVA+vaccines.">Design and evaluation of multi-gene, multi-clade HIV-1 MVA vaccines.</a> Vaccine. 27, 5885-5895 (2009).</li><li>Wild, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+evaluation+of+the+immunogenicity+of+C-type+HIV-1-based+DNA+and+NYVAC+vaccines+in+the+Balb/C+mouse+model.">Preclinical evaluation of the immunogenicity of C-type HIV-1-based DNA and NYVAC vaccines in the Balb/C mouse model.</a> Viral Immunol. 22, 309-319 (2009).</li><li>Takeshita, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+analysis+of+the+same+HIV+peptide+functionally+binding+to+both+a+class+I+and+a+class+II+MHC+molecule.">Molecular analysis of the same HIV peptide functionally binding to both a class I and a class II MHC molecule.</a> J Immunol. 154, 1973-1986 (1995).</li><li>Krutzik, P. O., Nolan, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+cell+barcoding+in+flow+cytometry+allows+high-throughput+drug+screening+and+signaling+profiling.">Fluorescent cell barcoding in flow cytometry allows high-throughput drug screening and signaling profiling.</a> Nature Methods. 3, 361-368 (2006).</li><li>Gilbert, D. F., Wilson, J. C., Nink, V., Lynch, J. W., Osborne, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplexed+labeling+of+viable+cells+for+high-throughput+analysis+of+glycine+receptor+function+using+flow+cytometry.">Multiplexed labeling of viable cells for high-throughput analysis of glycine receptor function using flow cytometry.</a> Cytometry A. 75, 440-449 (2009).</li><li>Quah, B. J., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+carboxyfluorescein+diacetate+succinimidyl+ester+(CFSE)+to+monitor+lymphocyte+proliferation.">The use of carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE) to monitor lymphocyte proliferation.</a> J Vis Exp. , (2010).</li><li>Quah, B. J., Warren, H. S., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+lymphocyte+proliferation+in+vitro+and+in+vivo+with+the+intracellular+fluorescent+dye+carboxyfluorescein+diacetate+succinimidyl+ester.">Monitoring lymphocyte proliferation in vitro and in vivo with the intracellular fluorescent dye carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester.</a> Nat Protoc. 2, 2049-2056 (2007).</li><li>Durward, M., Harms, J., Splitter, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen+specific+killing+assay+using+CFSE+labeled+target+cells.">Antigen specific killing assay using CFSE labeled target cells.</a> J Vis Exp. , (2010).</li><li>Hermans, I. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+VITAL+assay:+a+versatile+fluorometric+technique+for+assessing+CTL-+and+NKT-mediated+cytotoxicity+against+multiple+targets+in+vitro+and+in+vivo.">The VITAL assay: a versatile fluorometric technique for assessing CTL- and NKT-mediated cytotoxicity against multiple targets in vitro and in vivo.</a> J Immunol Methods. 285, 25-40 (2004).</li><li>Busch, D. H., Pamer, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell+affinity+maturation+by+selective+expansion+during+infection.">T cell affinity maturation by selective expansion during infection.</a> J Exp Med. 189, 701-710 (1999).</li><li>Savage, P. A., Boniface, J. J., Davis, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+kinetic+basis+for+T+cell+receptor+repertoire+selection+during+an+immune+response.">A kinetic basis for T cell receptor repertoire selection during an immune response.</a> Immunity. 10, 485-492 (1999).</li><li>Wang, X. L., Altman, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caveats+in+the+design+of+MHC+class+I+tetramer/antigen-specific+T+lymphocytes+dissociation+assays.">Caveats in the design of MHC class I tetramer/antigen-specific T lymphocytes dissociation assays.</a> J Immunol Methods. 280, 25-35 (2003).</li><li>von Essen, M. R., Kongsbak, M., Geisler, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+behind+functional+avidity+maturation+in+T+cells.">Mechanisms behind functional avidity maturation in T cells.</a> Clin Dev Immunol. , (2012).</li><li>Prussin, C., Metcalfe, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+intracytoplasmic+cytokine+using+flow+cytometry+and+directly+conjugated+anti-cytokine+antibodies.">Detection of intracytoplasmic cytokine using flow cytometry and directly conjugated anti-cytokine antibodies.</a> J Immunol Methods. 188, 117-128 (1995).</li><li>Foster, B., Prussin, C., Liu, F., Whitmire, J. K., Whitton, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+intracellular+cytokines+by+flow+cytometry.">Detection of intracellular cytokines by flow cytometry.</a> Curr Protoc Immunol. , (2007).</li><li>Czerkinsky, C. C., Nilsson, L. A., Nygren, H., Ouchterlony, O., Tarkowski, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+solid-phase+enzyme-linked+immunospot+(ELISPOT)+assay+for+enumeration+of+specific+antibody-secreting+cells.">A solid-phase enzyme-linked immunospot (ELISPOT) assay for enumeration of specific antibody-secreting cells.</a> J Immunol Methods. 65, 109-121 (1983).</li><li>Klinman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ELISPOT+assay+to+detect+cytokine-secreting+murine+and+human+cells.">ELISPOT assay to detect cytokine-secreting murine and human cells.</a> Curr Protoc Immunol. , (2008).</li><li>Yerly, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+cytotoxic+T-lymphocyte+epitope+variant+cross-recognition+and+functional+avidity+are+associated+with+hepatitis+C+virus+clearance.">Increased cytotoxic T-lymphocyte epitope variant cross-recognition and functional avidity are associated with hepatitis C virus clearance.</a> J Virol. 82, 3147-3153 (2008).</li></ol>

Fördelen med FTA-baserade analyser är att de tillåter diskriminering av&gt; 250 viabla och fullt funktionell mål cellpopulationer från en enda värddjur genom flödescytometri. Detta ger en nivå av komplexitet till in vivo-flödescytometri baserade analyser, som inte har varit möjligt tidigare. Detta markeras i de två djurexperiment som visas ovan, där svaren på 7 olika virala epitoper vid 6 koncentrationer skulle kunna övervakas i replikat om 6 samtidigt i ett enda djur som tillåter parametrar sås...

T-celler spelar en central roll i det adaptiva immunsvaret och är ofta riktade för manipulation i immunoterapi. CD4 + T-celler svarar på främmande antigen genom att utsöndra cytokiner som reglerar många aspekter av immunitet och kan också direkt hjälper B-celler att tillverka antikroppar. CD8 + cytotoxiska T-celler (CTL) kan även reagera på främmande antigen genom att utsöndra cytokiner och spelar en central roll i att direkt döda celler som uttrycker ett främmande antigen. Den grundläggande interaktion som initierar dessa T-cell effektorfunktioner involverar interaktion av T-cellreceptorn (TCR) med främmande peptider som visas på MHC-molekyler på ytan av celler. CD4 + T-celler känner igen peptider som visas på MHC-klass-II-molekyler på antigenpresenterande celler och CD8 + T-celler känner igen peptider som visas på MHC-klass-I-molekyler som normalt visas på mikrob-infekterade celler. Föratt bedöma den roll T-celler spelar i ett immunsvar, är det väsentligt att deras effektorfunktioner mäts av tillförlitliga och känsliga tekniker. Vanliga metoder för T-cellsvar bedömning inkluderar; MHC class-I/II/peptide tetramer reaktivitet; cytokinproduktion av ELISPOT och intracellulär cytokin färgning; och dödar kapaciteten med 51 ^ Cr-frisättningsanalyser. Dessa analyser är emellertid vanligen utförs ex vivo med stimulering in vitro, eller ger begränsad insikt i T-cellfunktionen. Helst vid mätning svar T-cell det skulle vara fördelaktigt att bedöma dem på plats, in vivo när de uppstår, utan manipulation av T-celler för att undvika förändringar i funktionella parametrar som kan uppstå genom stimulering in vitro. Några av de mest använda in vivo T-cell-funktionella analyser är baserade på mätning av CTL-förmedlat dödande av målceller pulserade med MHC klass I-bindande peptider, som är uppräknade i vivovia sin upptäckt genom fluorescerande märkning med vitala färgämnen såsom CFSE. Även om dessa typer av analyser kan övervaka CTL medierad dödandet av målen när de råkar in vivo, har de tidigare haft en relativt begränsad förmåga att bedöma dödandet av flera mål som uppvisar olika koncentrationer och olika typer av peptidepitoper, som krävs för att möjliggöra kvalitativa parametrar som funktionell aviditet och epitop variant korsreaktivitet bedömas. Dessa analyser dessutom inte ge någon information om CD4 + T-cellsmedierade reaktioner. För att övervinna många av de begränsningar med nuvarande metoder som används för att bedöma T-cellssvar, har vi nyligen utvecklat en multiplex-analys baserad på fluorescensmålgrupp kedjor (frihandels), som möjliggör kontroll av T-cellsvar mot&gt; 250 målceller samtidigt i ett djur genom flödescytometri 1, 2. Frihandels består av lymfocyter märkta med SEVmänna koncentrationer och kombinationer av vitala färgämnen som CFSE, CTV och CPD möjliggör&gt; 250 cell kluster av unika fluorescens som ska genereras. Eftersom dessa celler förblir livskraftiga och fullt fungerande, kan de injiceras i djur för att möjliggöra övervakning av deras interaktion med effektor T-celler in vivo 3. Till exempel kan cellkluster FTA pulsas med MHC klass-I-bindande peptider för att medge utvärdering av antigen-specifik CTL-medierad avdödning av målceller ett. Dessutom kan cellkluster FTA även pulsas med MHC-klass-II-bindande peptider, vilket möjliggör bedömning av antigenspecifik T-hjälparceller (T H)-aktivitet genom att utvärdera aktivering (genom bedömning av aktiveringsmarkörer såsom CD69, CD44 och / eller CD62L) av B-celler i frihandelsavtalet som bär besläktade peptid 2. Sedan mer än 250 mål kan upptäckas samtidigt, är det möjligt att mäta CTL och T H svar mot många mål cell kluster pulsade med numerous peptider vid olika koncentrationer och inkluderandet av många replikat. FTA-analysen ger därför en oöverträffad nivå av T-cell effektor svar bedömning in vivo. Här beskriver vi i detalj konstruktionen av en FTA och visa hur de kan tillämpas för att bedöma T-cellssvar in vivo. Förfarandet beskriver konstruktionen av en FTA består av 252 urskiljbara cellkluster genom användning av tre vitala färgämnen, bestående av sex upprepningar av 42 cellkluster pulsade med MHC-klass-I och II-bindande peptider. Märkningen av 42 cellkluster förekommer i 10 ml konisk botten rör och det är bra att lägga dem i ett provrörsställ som visas i tabell 1. Kan Metoden anpassas för mindre antal urskiljbara kluster som krävs genom att minska mängden av märkning för varje färgämne utförs 1. Vi belyser nyttan av analysen genom att visa hur det kan mäta responses genereras av rekombinant pox-virus vaccination mot flera epitoper i en liten kohort av möss. Detta visar hur FTA-analysen kan användas för att mäta kumulativa svar och funktionell affinitet genom respektive användning av arean under kurvan (AUC) bedömningar och mätning av effektiv peptid koncentration som krävs för att generera halva maximala svar (EC 50).

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">RPMI</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">R8758</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Fetal calf serum</td>
			<td style="width:71px;">Serana</td>
			<td style="width:119px;">FCS-500</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">CTV</td>
			<td style="width:71px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">C34557</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">CFDA, SE</td>
			<td style="width:71px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">C1157</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">CPD</td>
			<td style="width:71px;">eBioscience</td>
			<td style="width:119px;">65-0840-90</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">anti-B220 PerCp-Cy5.5</td>
			<td style="width:71px;">eBioscience</td>
			<td style="width:119px;">110730</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">anti-CD69 brilliant violet 605</td>
			<td style="width:71px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">104529</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">PKH-26</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">PKH26GL-1KT</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">EQUIPMENT:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Material Name</td>
			<td style="width:71px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalogue Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments (optional)</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Vortex</td>
			<td style="width:71px;">Scientific Industries Inc&#160;</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:71px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Flow cytometer (Fortessa or equivalent with blue, red and violet laser source)</td>
			<td style="width:71px;">BD Bioscience</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the use of fluorescent target arrays for assessment of t cell responses in vivo

Förmågan att övervaka T-cellsvar in vivo är viktig för utvecklingen av vår förståelse av immunsvaret och utformningen av immunterapier. Här beskriver vi användningen av fluorescerande mål array (FTA)-teknik, som utnyttjar vitala färgämnen såsom karboxifluorescein succinimidylester (CFSE), violett laser exciterbara färgämnen (CellTrace Violet: CTV) och röd laser exciterbara färgämnen (Cell Proliferation Dye eFluor 670: CPD ) att kombinatoriskt etikett mus lymfocyter i&gt; 250 urskiljbara fluorescerande cell kluster. Cell kluster inom dessa frihandels kan pulsas med major histocompatibility (MHC) klass-I och MHC klass II-bindande peptider, och därigenom agera som målceller för CD8 + och CD4 +-T-celler, respektive. Dessa frihandels cellerna förblir livskraftiga och fullt fungerande, och kan därför administreras i möss för bedömningar av CD8 + T-cell-medierad dödandet av FTA målceller och CD4 + T-cell-mediterade help av FTA B cell målceller i realtid in vivo genom flödescytometri. Eftersom&gt; 250 målceller kan bedömas på en gång, tekniken tillåter övervakning av T-cellsvar mot flera antigenepitoper vid flera koncentrationer och i flera replikat. Som sådan, kan tekniken mäta T-cellsvar på både en kvantitativ (t.ex. kumulativa storleken på svaret) och en kvalitativ (t ex. Funktions aviditet och epitop-korsreaktivitet av svaret) nivå. Häri beskriver vi hur dessa frihandelsavtal är konstruerade och ge ett exempel på hur de kan användas för att bedöma T-cellssvar som induceras av ett rekombinant poxvirus vaccin.

Som ett exempel på användningen av FTA-analysen, var en BALB / c mus immuniserad med rekombinant vacciniavirus (VV) som uttrycker HIV-I-epitoper (VV-HIV) och svar till HIV-I CTL-epitoper, Gag, Gag mut, Env och Pol, VV CTL epitoper F2L och F2L mut, och HIV-I T H cellepitop, Gag Th (enligt 2) bedömdes med hjälp av en 252 parameter FTA-analys (Figur 1B). Epitop varianter av Gag (Gag mut) och F2L (F2L mut) uttrycks inte i VV-HIV-vektor och därför svar mot dessa epitoper är refle...

Watch this Scientific Journal Video about The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo at JoVE.com

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

Användning av fluorescerande Target matriser för bedömning av T-cellssvar<em&gt; In vivo</em

Förmågan att övervaka T-cellssvar i detalj in vivo är viktig för utvecklingen av vår förståelse av immunsvaret. Här beskriver vi användning av fluorescerande mål arrayer (frihandelsavtal) i en in vivo cellanalys T som bedömer&gt; 250 parametrar samtidigt med flödescytometri.

The ability to monitor T cell responses in vivo is important for the development of our understanding of the immune response and the design of ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

Retroviral Transduction av T-cell receptorer i Mus T-celler

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Preparation and Use of HIV-1 Infected Primary CD4+ T-Cells as Target Cells in Natural Killer Cell Cytotoxic Assays

Beredning och användning av HIV-1 infekterade Primär CD4 + T-celler som målceller i Natural Cytotoxiska Killer Cell analyser

 Natural killer (NK) cells are a vital component of the innate immune response to virus-infected cells. It is important to understand the ability of NK ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

Introduktion Shear stress i studien av bakteriell vidhäftning

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Induktion av transplantat-mot-värd-sjukdom och<em&gt; In Vivo</em&gt; T cell övervakning med en MHC-matchade musmodell

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

Transplantation av Tail Hud att Studera Allogen CD4 T-cellsvar hos möss

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

In Vitro och In Vivo bedömning av T, B och myeloida celler suppressiv aktivitet och humorala svar från transplantation mottagare

The main concern in transplantation is to achieve specific tolerance through induction of regulatory cells. The understanding of tolerance mechanisms ...

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

In Vivo Test för påvisande av Antigen-specifika T-cell cytolytisk funktion använder en Vaccination modell

Current methodologies for antigen-specific killing are limited to in vitro use or utilized in infectious disease models. However, there is not a protocol ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolering av Salmonella typhimurium-innehållande Phagosomes från makrofager

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

Ett sug Blister protokoll att studera mänsklig T-cell Recall Svaren In Vivo

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

Utvärdering av Zika Virus-specifika T-cell svar i Immunoprivileged organ av infekterade Ifnar1- / - möss

The Zika virus (ZIKV) can induce inflammation in immunoprivileged organs (e.g., the brain and testis), leading to the Guillain-Barr&#233; syndrome and ...