Name: development of an ifn-&#947; elispot assay to assess varicella-zoster virus-specific cell-mediated immunity following umbilical cord blood transplantation
Uploaded: 2014-07-09T21:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Development of an IFN-ÃŽÂ³ ELISpot Assay to Assess Varicella-Zoster Virus-specific Cell-mediated Immunity Following Umbilical Cord Blood Transplantation at Jo

الكتاب أود أن أشكر المشاركين في الدراسة وأولياء أمورهم. نود أيضا أن نشكر الدكتور Réjean ابونت (CHUM نوتردام، مونتريال، كندا) من أجل الوصول إلى القارئ له ELISPOT الدكتور LUBO الكسندروف للتحليل الإحصائي، ودينيس بليس، ساندرا كارون، سيلفي فالوا ومارتين لكاتي الخبراء التقنيين المساعدة. بدعم من المنح المقدمة من لو فون كوت عملية صب ليه PROJETS للبحوث كلينيك آخرون كوت دي évalution التقنيات (CHU سانت جوستين) إلى HS وPO، التي كتبها la مؤسسة مركز دي cancérologie شارل Bruneau ل، وجمعية سرطان الدم والاورام الليمفاوية من كندا. وأيد قوى الأمن الداخلي من خلال منح دراسية من مؤسسة لا CHU سانت جوستين ولو فون دي لا بحوث كيبيك-صحة (FRQS). كان AJG المستفيدة من المنح الدراسية من قسم علم الأحياء الدقيقة، علم المناعة وInfectiology، جامعة مونتريال (غابرييل ماركيز-منحة)، FRQS، والمعاهد الكندية للصحة Research (CIHR). وأيد NM كتبها la مؤسسة CHU سانت جوستين، ومؤسسة كول، وFRQS.

تمت الموافقة على هذا البروتوكول من قبل مجلس البحوث المؤسسية أخلاقيات استعراض CHU سانت جوستين في مونتريال، كندا، حيث أجريت الدراسة. وطلب الموافقة المسبقة والتي تم الحصول عليها من جميع المشاركين في الدراسة، والديهم أو الأوصياء القانونيين. كافة الإجراءات التي أجريت عل?...

التعديلات واستكشاف الأخطاء وإصلاحها: قد استخدمت المقايسات الإنترفيرون γ ELISPOT لدراسة الاستجابات بوساطة الخلايا المناعية الموجهة ضد مجموعة متنوعة من مسببات الأمراض الميكروبية، بما في ذلك فيروس نقص المناعة البشرية نوع 1 (HIV-1) 24،25، فيروس التهاب الكبد الوبائي (سي) <...

أجريت لأول مرة في عام 1989، ويستخدم UCBT متزايد كجزء من علاج مختلف اضطرابات الدم والأورام لدى الأطفال nonneoplastic 1. جدري الماء هو alphaherpesvirus الإنسان والذي يسبب الاعتلال الخلوي اثنين من أمراض مختلفة، الحماق (بعد العدوى الأولية) والهربس النطاقي (بعد إعادة تنشيط). بعد الإصابة الأولية، VZV استمرت طوال حياة المضيف محمية داخل الأعصاب الحسية من العقد الجذرية الظهرية. واحد من المضاعفات المعدية الأكثر تهديدا التالية UCBT يرتبط مع VZV 2-4. في مركز السريرية لدينا، في غياب VZV الاتقاء، وكان معدل التراكمي للمرض جدري الماء مرض جدري الماء في 3 سنوات postUCBT 46٪ 2. في هؤلاء المرضى، وغالبا ما يترافق مع الإصابة من جديد أو تنشيط VZV مع نشر الحشوية إلى الجهاز العصبي المركزي والرئتين والكبد 5-7. كما يتم إدارتها نتيجة لذلك، الأسيكلوفير، valacyclovir أو famciclovir الوقاية عادة لUBالمتلقين CT 8،9. ومع ذلك، فإن هذه الاستراتيجية العلاج لا تأخذ بعين الاعتبار إمكانات واقية من الفيروس النطاقي الحماقي الخلايا الليمفاوية T معينة أو حركية إعادة تشكيل استجابات الخلايا التائية VZV محددة. المشاكل المحتملة المرتبطة التوسع في استخدام العلاج الوقائي antiherpetic المدى الطويل وتشمل أ) overtreatment المريض؛ ب) تطوير فيروسات مقاومة للأدوية 10،11؛ وج) ضعف المناعة من الفيروس النطاقي الحماقي إعادة محددة 12،13. لأن الكشف عن الفيروس النطاقي الحماقي وظيفية محددة الخلايا اللمفية تي يرتبط مع وجود حماية على المدى الطويل من عدوى جدري الماء وتحسين النتائج السريرية 4،14،15، ورصد الخلية بوساطة الاستجابات المناعية الموجهة ضد الفيروس النطاقي الحماقي خلال الفترة posttransplant قد يؤدي إلى استخدام أكثر عقلانية من فيروسات العلاج عن طريق تمكين الأطباء الممارسين للتمييز المرضى الذين سيستفيدون من العلاج الوقائي VZV من أولئك الذين قادرة على السيطرة على تكرار VZV 4،13 الجهاز المناعي. ويستخدم على نطاق واسع ELISPOT مقايسة-γ IFN للخلية الرصد بوساطة الاستجابات المناعية في مجموعة متنوعة من النظم التجريبية والحالات السريرية. يتم إنشاؤها البقع عقب انشقاق من ركيزة مولد اللون، وتوليد راسب وضوحا واستقرارا في موقع رد الفعل. كل بقعة الفردية مما يمثل البصمة خلية المنتجة للخلوى الفردية. الإنترفيرون γ ELISPOT يقيس ليس فقط قدرة الخلايا الفردية فيفو السابقين لإنتاج الإنترفيرون γ ردا على التحفيز في المختبر مع مستضد وما شابه ذلك، ولكنه يوفر أيضا تقديرا من وتيرة الاستجابة الخلايا في السكان خلية معينة 16،17. بالإضافة إلى حساسية عالية، والإنترفيرون γ ELISPOT واضح ومباشر على القيام بها، مما يجعل من الممكن استخدامه في سياق بروتوكولات سريرية شخصية تهدف إلى بدء أو وقف العلاج المضاد للفيروسات التوجيهية. الإجراء المفصلة أدناه describوفاق مقايسة ELISPOT التي تم تصميمها خصيصا لكشف وقياس إنتاج الإنترفيرون γ من قبل خلايا الدم المحيطية التالية في المختبر التحفيز مع مستضدات الفيروس النطاقي الحماقي مشتقة.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="857">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Leucocep tube</td>
			<td style="width:101px;">VWR</td>
			<td style="width:143px;">89048-936/89048-932</td>
			<td style="width:397px;">12 ml or 50 ml tubes may be used depending on the volume of blood.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ficoll-Paque</td>
			<td style="width:101px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:143px;">17-1440-02</td>
			<td>Protect from light.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Benzonase nuclease</td>
			<td style="width:101px;">Novagen</td>
			<td style="width:143px;">70746-3</td>
			<td>Keep at -20 C.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">MultiScreenHTS-IP Filter Plate</td>
			<td style="width:101px;">Millipore</td>
			<td style="width:143px;">MSIPS4W10</td>
			<td>Sterile with pore size of 0.45 &#181;m.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Mouse anti-human IFN-&#947; capture antibody</td>
			<td style="width:101px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:143px;">551221</td>
			<td>NIB42 clone.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Pepmix VZV IE63&#160;</td>
			<td style="width:101px;">JPT Peptide Technologies</td>
			<td style="width:143px;">PM-VZV-IE63</td>
			<td>Dissolve contents of one vial in 40 &#956;L of DMSO. Use within 6 months.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Biotin-conjugated anti-IFN-&#947; monoclonal antibody</td>
			<td style="width:101px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:143px;">554550</td>
			<td>4SB3 clone.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Streptavidin conjugated with alkaline phosphatase&#160;</td>
			<td style="width:101px;">Bio-Rad Life Science</td>
			<td style="width:143px;">170-3554</td>
			<td>Dilute for use on the same day.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">BCIP/NBT</td>
			<td style="width:101px;">Bio-Rad Life Science</td>
			<td style="width:143px;">170-6432</td>
			<td>Protect from light.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

development of an ifn-&#947; elispot assay to assess varicella-zoster virus-specific cell-mediated immunity following umbilical cord blood transplantation

الفيروس النطاقي الحماقي (VZV) هو سبب كبير من المراضة والوفيات التالية السري زرع دم الحبل السري (UCBT). لهذا السبب، يتم إدارتها بشكل منهجي الوقاية antiherpetic إلى المستلمين UCBT الأطفال لمنع المضاعفات المرتبطة عدوى جدري الماء، ولكن ليس هناك والتوافق على أساس أدلة قوية على أن يحدد مدته الأمثل. لأن الخلايا التائية الحصانة بوساطة هي المسؤولة عن السيطرة على العدوى الفيروس النطاقي الحماقي، وتقييم إعادة تشكيل استجابات الخلايا التائية VZV المحددة التالية UCBT يمكن أن توفر مؤشرات حول ما إذا كان ينبغي الحفاظ على الوقاية أو يمكن وقفها. تحقيقا لهذه الغاية، تم تطوير انترفيرون غاما VZV محددة (الإنترفيرون γ) انزيم مرتبط immunospot (ELISPOT) مقايسة لتوصيف إنتاج الإنترفيرون γ بواسطة الخلايا اللمفية تي ردا على التحفيز في المختبر مع المشع الحية الموهنة لقاح جدري الماء. ويوفر هذا الاختبار قياس السريع، واستنساخه وحساسة من VZV ج محددةالذراع بوساطة الحصانة مناسبة لرصد إعادة تشكيل VZV الحصانة محددة في عملية إعداد سريرية وتقييم الاستجابة المناعية لمستضدات الفيروس النطاقي الحماقي.

وقد تم تطوير بروتوكول ELISPOT-γ IFN المفصلة أعلاه والأمثل في مختبرنا لقياس حجم ونوعية الخلية بوساطة الاستجابات المناعية الموجهة ضد جدري الماء 4. مصادر متنوعة من VZV المستضد يمكن استخدامها للخطوة التحفيز. وتشمل هذه: أ) المنظفات متوفرة تجاريا مقتطفات المعطل من VZV الخلاي...

Watch this Scientific Journal Video about Development of an IFN-ÃŽÂ³ ELISpot Assay to Assess Varicella-Zoster Virus-specific Cell-mediated Immunity Following Umbilical Cord Blood Transplantation at Jo

Development of an IFN-ÃƒÅ½Ã‚Â³ ELISpot Assay to Assess Varicella-Zoster Virus-specific Cell-mediated Immunity Following Umbilical Cord Blood Transplantation

أجيال جديدة من المقايسات وظيفية مثل انترفيرون غاما (الإنترفيرون γ) ELISPOT، الذي كشف عن إنتاج السيتوكينات على مستوى خلية واحدة وتقديم كل من توصيف الكمي والنوعي للاستجابات الخلايا التائية يمكن استخدامها لتقييم الاستجابات بوساطة الخلايا المناعية الموجهة ضد الحماق النطاقي فيروس (جدري الماء).

وضع النطاقي الحماقي الفيروسات محددة بوساطة خلية الحصانة ELISPOT الفحص لتقييم الإنترفيرون γ-عقب الحبل السري زرع الدم

Varicella zoster virus (VZV) is a significant cause of morbidity and mortality following umbilical cord blood transplantation (UCBT). For this reason, ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Development of an IFN-&#947; ELISpot Assay to Assess Varicella-Zoster Virus-specific Cell-mediated Immunity Following Umbilical Cord Blood Transplantation

Enzyme-linked Immunospot Assay (ELISPOT):  Quantification of Th-1 Cellular Immune Responses Against Microbial Antigens

Enzyme-linked Immunospot Assay ELISPOT:  Quantification of Th-1 Cellular Immune Responses Against Microbial Antigens

انزيم مرتبط Immunospot الفحص (ELISPOT) : القياس الكمي للردود TH - 1 المناعة الخلوية ضد مولدات المضادات الجرثومية

Adaptive immunity is an important component to clearance of intracellular pathogens.  The ability to detect and quantify these responses in humans is an ...

Expanding Cytotoxic T Lymphocytes from Umbilical Cord Blood that Target Cytomegalovirus, Epstein-Barr Virus, and Adenovirus

توسيع الخلايا اللمفاوية T السامة للخلايا من دم الحبل السري أن الفيروس المضخم للخلايا الهدف، فيروس ابشتاين بار، واتش

Virus infections after stem cell transplantation are among the most common causes of death, especially after cord blood (CB) transplantation (CBT) where ...

Clinical Application of Sleeping Beauty and Artificial Antigen Presenting Cells to Genetically Modify T Cells from Peripheral and Umbilical Cord Blood

Clinical Application of Sleeping Beauty and Artificial Antigen Presenting Cells to Genetically Modify T Cells from Peripheral and Umbilical Cord Blood

السريرية تطبيق<em&gt; الجمال النائم</em&gt; ومستضد تقديم الخلايا الاصطناعية لتعديل وراثيا خلايا T من دم الحبل السري والمحيطية

The potency of clinical-grade T cells can be improved by combining gene therapy with immunotherapy to engineer  a biologic product with the potential for ...

Isolation of Precursor B-cell Subsets from Umbilical Cord Blood

عزل مجموعات فرعية B-الخلية السلائف من دم الحبل السري

Umbilical cord blood is highly enriched for hematopoietic progenitor cells at different lineage commitment stages. We have developed a protocol for ...

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

التحقيق في آثار البروبيوتيك على المكورات الرئوية الاستعمار باستخدام<em&gt; في المختبر</em&gt; الالتزام الفحص

Adherence of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) to the epithelial lining of the nasopharynx can result in colonization and is considered a ...

A Flow Adhesion Assay to Study Leucocyte Recruitment to Human Hepatic Sinusoidal Endothelium Under Conditions of Shear Stress

تدفق التصاق الفحص لدراسة توظيف الكرية البيضاء لالكبدي الإنسان جيبية البطانة Endothelium تحت ظروف إجهاد القص

Leucocyte infiltration into human liver tissue is a common process in all adult inflammatory liver diseases. Chronic infiltration can drive the ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

عزل وتحليل العدلة لتحديد ما دورها في الغدد اللمفاوية حساسية الخلية وكلاء العلاجية

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

The Isolation, Differentiation, and Quantification of Human Antibody-secreting B Cells from Blood: ELISpot as a Functional Readout of Humoral Immunity

عزل، التمايز، والكمي للالإنسان الأجسام المضادة إفراز خلايا B من الدم: ELISPOT باعتبارها قراءات الوظيفية للالخلطية الحصانة

The hallmark of humoral immunity is to generate functional ASCs, which synthesize and secrete Abs specific to an antigen (Ag), such as a pathogen, and are ...

Use of a Monocyte Monolayer Assay to Evaluate Fc&#947; Receptor-mediated Phagocytosis

Use of a Monocyte Monolayer Assay to Evaluate FcÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â³ Receptor-mediated Phagocytosis

استخدام الوحيدات أحادي الطبقة الفحص لتقييم البلعمة بوساطة مستقبلات Fcγ

Although originally developed for predicting transfusion outcomes of serologically incompatible blood, the monocyte monolayer assay (MMA) is a highly ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

مضان القائم على النورامينيداز تثبيط الفحص لتقييم مدى حساسية فيروسات الأنفلونزا إلى والنورامينيداز المانع فئة من الأدوية المضادة للفيروسات

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...