Name: development of an ifn-&#947; elispot assay to assess varicella-zoster virus-specific cell-mediated immunity following umbilical cord blood transplantation
Uploaded: 2014-07-09T21:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Development of an IFN-ÃŽÂ³ ELISpot Assay to Assess Varicella-Zoster Virus-specific Cell-mediated Immunity Following Umbilical Cord Blood Transplantation at Jo

המחברים מבקשים להודות משתתפי מחקר והוריהם. אנחנו רוצים גם להודות לד&quot;ר Réjean לפוינט (צ&#39;אם נוטרדאם, מונטריאול, קנדה) לגישה לקורא ELISPOT, ד&quot;ר Lubo אלכסנדרוב לניתוח סטטיסטי, ודניס בלה, סנדרה קארון, סילבי ולואה ומרטין Caty למומחה טכני סיוע. נתמך על ידי מענקים ממבצע ד &#39;le Fonds לשפוך les projets דה המשוכלל ונדירות קליניק et d&#39;évalution des טכנולוגיות (CHU Sainte-Justine) לHS וPO, על ידי la Fondation מרכז דה Cancerologie צ&#39;ארלס-רונו, ועל ידי האגודה לוקמיה &amp; לימפומה של קנדה. ISF נתמכה על ידי מלגות מla Fondation CHU Sainte-ג&#39;סטין וle Fonds דה לה המשוכללת והנדירה du Québec-סנטה (FRQS). AJG היה זוכה במלגות מהמחלקה למיקרוביולוגיה, Infectiology ואימונולוגיה, אוניברסיטת מונטריאול (מלגת גבריאל-מרקיז), FRQS, והמכון הקנדי לבריאות המחקרesearch (CIHR). NM נתמכה על ידי la Fondation CHU Sainte-ג&#39;סטין, קרן קול, וFRQS.

פרוטוקול מחקר זה אושר על ידי מועצת המנהלים המוסדית אתיקה סקירה של CHU Sainte-ג&#39;סטין, מונטריאול, קוויבק, קנדה, שבה נערך המחקר. הסכמה מדעת שבקשה וקיבלה מכל משתתפי המחקר, הוריהם או אפוטרופוסים חוקיים. כל ההליכים שבוצעו בימים 1 ו 2 חייבת להתבצע בתנאים סטריליים (כלומר תחת ?...

שינויים ופתרון בעיות: מבחני IFN-γ ELISPOT שימשו כדי לבחון תגובות חיסונית בתיווך תא המכוון נגד מגוון רחב של חיידקים פתוגנים, כוללים סוג וירוס כשל חיסוני אנושי 1 (HIV-1) 24,25, וירוס הפטיטיס C (HCV) 26, 27, ושחפת Mycobacterium 28,29, רק כדי שם כמה. כאן אנו תיארתי את ההתפתחות ?...

בוצע לראשונה בשנת 1989, UCBT משמש יותר ויותר כחלק מהטיפול בהפרעות דם neoplastic וnonneoplastic שונות בילדים 1. VZV הוא alphaherpesvirus אדם cytopathic אשר גורם לשתי מחלות שונות, אבעבועות רוח (לאחר הדבקה ראשונית) והרפס זוסטר (לאחר הפעלה מחדש). בעקבות זיהום ראשוני, VZV נמשך לאורך כל חייו של המארח המוגן בתוך עצבי תחושה של גרעיני שורש הגבי. אחד הסיבוכים זיהומיות המאיימים ביותר הבאים UCBT קשור VZV 2-4. במרכז הקליני שלנו, בהעדר טיפול מונע VZV, ההיארעות המצטברת של מחלת VZV מחלה VZV לאחר 3 שנות postUCBT הייתה 46% 2. בחולים אלה, דה זיהום נובו עם או הפעלתו מחדש של VZV קשור לעתים קרובות עם הפצה קרביים למערכת העצבים המרכזית, ריאות וכבד 5-7. כטיפול מונע תוצאה מכך, acyclovir, valacyclovir או famciclovir מנוהל בדרך כלל UBמקבלי CT 8,9. עם זאת, אסטרטגיית טיפול זו אינה מביאה בחשבון את הפוטנציאל ההגנתי של לימפוציטים מסוג T או VZV ספציפי קינטיקה של הכינון מחדש של תגובות תא T הספציפיות VZV. בעיות פוטנציאליות הקשורים לשימוש המתרחב של טיפול מונע antiherpetic לטווח ארוך כוללות טיפול יתר) מטופל; ב) ההתפתחות של עמידות לתרופות אנטי 10,11; וג) ירידת ערך הכינון מחדש חיסוניים הספציפי VZV 12,13. בגלל זיהוי של לימפוציטים מסוג T הפונקציונלי VZV הספציפי בקורלציה עם הנוכחות של הגנה לטווח ארוך מפני זיהום VZV ותוצאה קלינית משופר 4,14,15, ניטור תגובות חיסוניים תא בתיווך המכוון נגד VZV במהלך התקופה לאחר ההשתלה עלול לגרום לשימוש מושכל יותר של נגיפים טיפול על ידי המאפשר רופאים כדי להבחין בין חולים שיפיקו תועלת מהטיפול מונע VZV מאלו שמערכת החיסון מסוגל לשלוט שכפול VZV 4,13. Assay ELISPOT γ-IFN נעשה שימוש נרחב לתגובות החיסונית בתיווך תא ניטור במגוון רחב של מערכות ניסיוניות ומצבים רפואיים. כתמים נוצרים בעקבות המחשוף של מצע chromogenic, שהניבו משקע נראה לעין ויציב באתר של התגובה. כל נקודה בודדת ובכך מייצגת את טביעת הרגל של תא לייצור ציטוקינים בודד. IFN-γ ELISPOT מודד לא רק את היכולת של תאים בודדים vivo לשעבר לייצר IFN-γ בתגובה לגירוי במבחנה עם אנטיגן מאותו המקור, אבל זה גם מספק הערכה של התדירות מגיב תאים באוכלוסיית תא נתון 16,17. בנוסף לרגישות הגבוהה שלו, IFN-γ ELISPOT הוא פשוט לביצוע, מה שהופך את השימוש בו אפשרי בהקשר של פרוטוקולים קליניים אישית שמטרה מנחה ייזום או הפסקה של טיפול אנטי. המפורטים להלן ההליך describes assay ELISPOT כי היא תוכננה במיוחד כדי לזהות ולמדוד את ייצור IFN-γ על ידי תאי הדם היקפיים mononuclear בעקבות גירוי במבחנה עם אנטיגנים VZV נגזרים.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="857">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Leucocep tube</td>
			<td style="width:101px;">VWR</td>
			<td style="width:143px;">89048-936/89048-932</td>
			<td style="width:397px;">12 ml or 50 ml tubes may be used depending on the volume of blood.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ficoll-Paque</td>
			<td style="width:101px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:143px;">17-1440-02</td>
			<td>Protect from light.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Benzonase nuclease</td>
			<td style="width:101px;">Novagen</td>
			<td style="width:143px;">70746-3</td>
			<td>Keep at -20 C.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">MultiScreenHTS-IP Filter Plate</td>
			<td style="width:101px;">Millipore</td>
			<td style="width:143px;">MSIPS4W10</td>
			<td>Sterile with pore size of 0.45 &#181;m.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Mouse anti-human IFN-&#947; capture antibody</td>
			<td style="width:101px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:143px;">551221</td>
			<td>NIB42 clone.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Pepmix VZV IE63&#160;</td>
			<td style="width:101px;">JPT Peptide Technologies</td>
			<td style="width:143px;">PM-VZV-IE63</td>
			<td>Dissolve contents of one vial in 40 &#956;L of DMSO. Use within 6 months.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Biotin-conjugated anti-IFN-&#947; monoclonal antibody</td>
			<td style="width:101px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:143px;">554550</td>
			<td>4SB3 clone.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Streptavidin conjugated with alkaline phosphatase&#160;</td>
			<td style="width:101px;">Bio-Rad Life Science</td>
			<td style="width:143px;">170-3554</td>
			<td>Dilute for use on the same day.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">BCIP/NBT</td>
			<td style="width:101px;">Bio-Rad Life Science</td>
			<td style="width:143px;">170-6432</td>
			<td>Protect from light.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

development of an ifn-&#947; elispot assay to assess varicella-zoster virus-specific cell-mediated immunity following umbilical cord blood transplantation

נגיף אבעבועות רוח זוסטר (VZV) הוא גורם משמעותי לתחלואה ותמותה לאחר השתלת דם טבורי (UCBT). מסיבה זו, טיפול מונע antiherpetic מנוהל באופן שיטתי לנמעני UCBT ילדים כדי למנוע סיבוכים הקשורים לזיהום VZV, אבל אין הסכמה שמגדירה את משך הזמן האופטימלי שלו חזקה, המבוסס על ראיות. בגלל חסינות תא בתיווך T היא אחראית על הבקרה של זיהום VZV, הערכה מחדש של תגובות תא T הספציפיות VZV הבא UCBT יכול לספק אינדיקציות באשר לשאלה האם יש לשמור טיפול מונע או יכול להיות שהופסק. לשם כך, assay אינטרפרון גמא הספציפי VZV (IFN-γ) Immunospot צמוד אנזים (ELISPOT) פותח כדי לאפיין ייצור IFN-γ על ידי לימפוציטים מסוג T בתגובה לגירוי במבחנה עם חיסון VZV מוקרן חי מוחלש. assay זה מספק מדידה מהירה, לשחזור ורגישה של ג הספציפי VZVell תיווך חסינות מתאימה לניטור הכינון מחדש של חסינות ספציפית VZV בסביבה קלינית והערכת תגובה חיסונית לאנטיגנים VZV.

פרוטוקול ELISPOT γ-IFN שפורט לעיל פותח ומותאם במעבדה שלנו כדי למדוד את הגודל והאיכות של תגובות תא בתיווך חיסונית המכוונות נגד VZV 4. מקורות שונים של אנטיגן VZV יכולים לשמש לשלב הגירוי. אלה כוללים: א) תמציות מומתים חומר ניקוי זמין מסחרי מVZV נגועים תאי Vero 18; ב) בריכות ח...

Watch this Scientific Journal Video about Development of an IFN-ÃŽÂ³ ELISpot Assay to Assess Varicella-Zoster Virus-specific Cell-mediated Immunity Following Umbilical Cord Blood Transplantation at Jo

Development of an IFN-ÃƒÅ½Ã‚Â³ ELISpot Assay to Assess Varicella-Zoster Virus-specific Cell-mediated Immunity Following Umbilical Cord Blood Transplantation

דורות רומן של מבחני פונקציונליים, כגון אינטרפרון גמא (IFN-γ) ELISPOT, אשר לזהות ייצור ציטוקינים ברמת התא הבודד ולספק גם אפיון כמוני ואיכותי של תגובות תא T יכולים לשמש כדי להעריך תגובה חיסונית בתיווך תא המכוון נגד אבעבועות רוח זוסטר וירוס (VZV).

פיתוח של חסינות ELISPOT Assay להעריך γ-IFN אבעבועות רוח, זוסטר וירוס ספציפי לתא בתיווך לאחר השתלת דם טבורים

Varicella zoster virus (VZV) is a significant cause of morbidity and mortality following umbilical cord blood transplantation (UCBT). For this reason, ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Development of an IFN-&#947; ELISpot Assay to Assess Varicella-Zoster Virus-specific Cell-mediated Immunity Following Umbilical Cord Blood Transplantation

Enzyme-linked Immunospot Assay (ELISPOT):  Quantification of Th-1 Cellular Immune Responses Against Microbial Antigens

Enzyme-linked Immunospot Assay ELISPOT:  Quantification of Th-1 Cellular Immune Responses Against Microbial Antigens

Enzyme-linked Immunospot Assay (ELISPOT): כימות Th-1 תגובות חיסוניות נגד אנטיגנים נייד מיקרוביאלית

Adaptive immunity is an important component to clearance of intracellular pathogens.  The ability to detect and quantify these responses in humans is an ...

Expanding Cytotoxic T Lymphocytes from Umbilical Cord Blood that Target Cytomegalovirus, Epstein-Barr Virus, and Adenovirus

הרחבת לימפוציטים מסוג T ציטוטוקסיים מדם טבורים שציטומגלווירוס יעד, וירוס אפשטיין באר, וadenovirus

Virus infections after stem cell transplantation are among the most common causes of death, especially after cord blood (CB) transplantation (CBT) where ...

Clinical Application of Sleeping Beauty and Artificial Antigen Presenting Cells to Genetically Modify T Cells from Peripheral and Umbilical Cord Blood

Clinical Application of Sleeping Beauty and Artificial Antigen Presenting Cells to Genetically Modify T Cells from Peripheral and Umbilical Cord Blood

יישום קליני של<em&gt; יפהפה נרדם</em&gt; ומלאכותי תאי מציגי אנטיגן גנטי לשינוי תאי T מדם טבורים היקפי וטבורים

The potency of clinical-grade T cells can be improved by combining gene therapy with immunotherapy to engineer  a biologic product with the potential for ...

Isolation of Precursor B-cell Subsets from Umbilical Cord Blood

בידוד של קבוצות משנה מבשר B-cell מדם טבורים

Umbilical cord blood is highly enriched for hematopoietic progenitor cells at different lineage commitment stages. We have developed a protocol for ...

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

חוקר את ההשפעות של פרוביוטיקה על דלקת ריאות התיישבות שימוש<em&gt; במבחנה</em&gt; Assay דבקות

Adherence of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) to the epithelial lining of the nasopharynx can result in colonization and is considered a ...

A Flow Adhesion Assay to Study Leucocyte Recruitment to Human Hepatic Sinusoidal Endothelium Under Conditions of Shear Stress

תזרים הידבקות Assay ללמוד יקוציט גיוס לבדית אדם סינוסי תנאי האנדותל של מתח שאר

Leucocyte infiltration into human liver tissue is a common process in all adult inflammatory liver diseases. Chronic infiltration can drive the ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

בידוד נויטרופילים וניתוח כדי לקבוע את תפקידם רגישות תאים לימפומה לסוכנים טיפוליים

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

The Isolation, Differentiation, and Quantification of Human Antibody-secreting B Cells from Blood: ELISpot as a Functional Readout of Humoral Immunity

הבידוד, בידול, וכימות של האדם נוגדן מפריש תאים B מדם: ELISPOT בתור Readout פונקציונלי של חסינות הלחות

The hallmark of humoral immunity is to generate functional ASCs, which synthesize and secrete Abs specific to an antigen (Ag), such as a pathogen, and are ...

Use of a Monocyte Monolayer Assay to Evaluate Fc&#947; Receptor-mediated Phagocytosis

Use of a Monocyte Monolayer Assay to Evaluate FcÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â³ Receptor-mediated Phagocytosis

שימוש Assay מונוציטים חד שכבתי להערכת Fcγ קולטן בתיווך Phagocytosis

Although originally developed for predicting transfusion outcomes of serologically incompatible blood, the monocyte monolayer assay (MMA) is a highly ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

קרינה המבוססת Assay Neuraminidase העיכוב להעריך את הרגישות של שפעת וירוסים אל Neuraminidase המונע המחלקה של תרופות אנטי-ויראליות

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...