Name: development of an ifn-&#947; elispot assay to assess varicella-zoster virus-specific cell-mediated immunity following umbilical cord blood transplantation
Uploaded: 2014-07-09T21:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Development of an IFN-ÃŽÂ³ ELISpot Assay to Assess Varicella-Zoster Virus-specific Cell-mediated Immunity Following Umbilical Cord Blood Transplantation at Jo

लेखकों अध्ययन में प्रतिभागियों और उनके माता पिता को धन्यवाद देता हूँ. हम भी अपने ELISpot पाठक, सांख्यिकीय विश्लेषण के लिए डॉ. Lubo Alexandrov के लिए उपयोग के लिए डॉ. Réjean Lapointe (दोस्त Notre-Dame, मॉन्ट्रियल, कनाडा) का शुक्रिया अदा करना, और डेनिस Blais, सैंड्रा Caron, Silvie Valois और तकनीकी विशेषज्ञ के लिए मार्टिन Caty होगा सहायता. Le Fonds डी &#39;आपरेशन ला Fondation केंद्र डे Cancerologie चार्ल्स-Bruneau द्वारा, एच एस और पीओ को लेस projets डी अति सूक्ष्म Clinique एट डी&#39; évalution des टेक्नोलॉजीज (चू सैंटे जस्टिन) डालना, और की लेकिमिया और लिंफोमा सोसायटी द्वारा अनुदान से समर्थन कनाडा. ISF ला Fondation चू सैंटे जस्टिन और ले Fonds डी ला Recherche डु क्यूबेक-Sante (FRQS) से छात्रवृत्ति के द्वारा समर्थित किया गया. AJG माइक्रोबायोलॉजी, Infectiology और इम्यूनोलॉजी, Université de मॉन्ट्रियल (गेब्रियल-मार्क्विस छात्रवृत्ति), FRQS विभाग से छात्रवृत्ति के प्राप्तकर्ता था, और स्वास्थ्य संस्थान कनाडा आरesearch (CIHR). समुद्री मील दूर ला Fondation चू सैंटे जस्टिन, कोल फाउंडेशन, और FRQS द्वारा समर्थित किया गया.

इस शोध प्रोटोकॉल अध्ययन आयोजित किया गया जहां चू सैंटे जस्टिन, मॉन्ट्रियल, क्यूबेक, कनाडा, के संस्थागत आचार समीक्षा बोर्ड द्वारा अनुमोदित किया गया था. सूचित सहमति की मांग की और सभी अध्ययन प्रतिभागियों, ...

संशोधन और समस्या निवारण: IFN-γ ELISpot assays मानव इम्यूनो वायरस टाइप 1 (एचआईवी -1) 24,25, हेपेटाइटिस सी वायरस (एचसीवी) 26 सहित माइक्रोबियल रोगज़नक़ों, की एक किस्म के खिलाफ निर्देशित सेल की मध्यस्थता प्रतिरक्षा प?...

पहली बार 1989 में प्रदर्शन किया, UCBT तेजी बच्चे 1 में विभिन्न neoplastic और nonneoplastic रक्त विकारों के इलाज के भाग के रूप में प्रयोग किया जाता है. VZV दो विभिन्न रोगों, छोटी चेचक (प्राथमिक संक्रमण के बाद) और दाद दाद (पुनर्सक्रियन के बाद) का कारण बनता है, जो एक कोशिकाविकृति संबंधी मानव alphaherpesvirus है. प्राथमिक संक्रमण के बाद, VZV पृष्ठीय रूट ganglia का संवेदी तंत्रिकाओं के भीतर आश्रय मेजबान के जीवन भर बनी रहती है. UCBT निम्नलिखित सबसे धमकी संक्रामक जटिलताओं का एक VZV 2-4 के साथ जुड़ा हुआ है. हमारे नैदानिक ​​केन्द्र में, VZV प्रोफिलैक्सिस के अभाव में, 3 साल में VZV रोग VZV रोग का संचयी घटना postUCBT 46% 2 था. इन रोगियों में, डी नोवो साथ संक्रमण या VZV के पुनर्सक्रियन अक्सर केंद्रीय तंत्रिका तंत्र, फेफड़ों और जिगर 5-7 करने के लिए आंत का प्रसार के साथ जुड़ा हुआ है. परिणामस्वरूप, acyclovir, valacyclovir या फैम्सिक्लोविर प्रोफिलैक्सिस सामान्यतः यूबी को administrated है के रूप मेंसीटी प्राप्तकर्ताओं 8,9. हालांकि, इस इलाज की रणनीति को ध्यान में VZV विशेष टी लिम्फोसाइट या VZV विशेष टी सेल प्रतिक्रिया के पुनर्गठन के कैनेटीक्स की रक्षात्मक क्षमता नहीं ले करता है. लंबी अवधि के antiherpetic प्रोफिलैक्सिस के विस्तार के उपयोग के साथ जुड़े संभावित समस्याओं क) रोगी overtreatment शामिल हैं; ख) एंटीवायरल दवा प्रतिरोध 10,11 के विकास; और ग) VZV विशिष्ट प्रतिरक्षा पुनर्गठन 12,13 की परेशानी होती है. कार्यात्मक VZV विशेष टी लिम्फोसाइट का पता लगाने posttransplant अवधि के दौरान VZV के खिलाफ निर्देशित सेल की मध्यस्थता प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं की निगरानी, ​​VZV संक्रमण से लंबी अवधि के संरक्षण की उपस्थिति और बेहतर नैदानिक ​​परिणाम 4,14,15 के साथ संबद्ध क्योंकि एंटीवायरल की एक अधिक तर्कसंगत उपयोग में परिणाम हो सकता है VZV से लाभ होगा, जो रोगियों को अलग करने के लिए चिकित्सा चिकित्सकों को सक्षम करने से उपचार जिनकी प्रतिरक्षा प्रणाली VZV प्रतिकृति 4,13 नियंत्रित करने में सक्षम है उन से प्रोफिलैक्सिस. IFN-γ ELISpot परख व्यापक रूप से प्रायोगिक प्रणाली और नैदानिक ​​स्थितियों की एक किस्म में निगरानी सेल की मध्यस्थता प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के लिए प्रयोग किया जाता है. स्पॉट प्रतिक्रिया के स्थल पर एक दृश्य और स्थिर वेग पैदा करने, एक वर्णजनीय सब्सट्रेट की दरार निम्नलिखित उत्पन्न कर रहे हैं. प्रत्येक व्यक्ति मौके जिससे एक व्यक्ति साइटोकाइन उत्पादक सेल के पदचिह्न का प्रतिनिधित्व करता है. IFN-γ ELISpot आत्मीय प्रतिजन के साथ इन विट्रो उत्तेजना के जवाब में IFN-γ निर्माण करने के लिए व्यक्ति की कोशिकाओं पूर्व vivo की क्षमता का आकलन न केवल, लेकिन यह भी एक दिया सेल आबादी 16,17 में कोशिकाओं जवाब की आवृत्ति के एक अनुमान प्रदान करता है. इसकी उच्च संवेदनशीलता के अलावा, IFN-γ ELISpot एंटीवायरल उपचार की दीक्षा या समाप्ति का मार्गदर्शन करने के उद्देश्य से व्यक्तिगत नैदानिक ​​प्रोटोकॉल के संदर्भ में संभव इसके इस्तेमाल कर रही है, प्रदर्शन करने के लिए सरल है. प्रक्रिया describ नीचे विस्तृततों विशेष रूप से VZV व्युत्पन्न एंटीजन के साथ इन विट्रो उत्तेजना के बाद परिधीय रक्त mononuclear कोशिकाओं द्वारा IFN-γ के उत्पादन का पता लगाने और मापने के लिए डिज़ाइन किया गया है कि एक ELISpot परख.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="857">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Leucocep tube</td>
			<td style="width:101px;">VWR</td>
			<td style="width:143px;">89048-936/89048-932</td>
			<td style="width:397px;">12 ml or 50 ml tubes may be used depending on the volume of blood.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ficoll-Paque</td>
			<td style="width:101px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:143px;">17-1440-02</td>
			<td>Protect from light.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Benzonase nuclease</td>
			<td style="width:101px;">Novagen</td>
			<td style="width:143px;">70746-3</td>
			<td>Keep at -20 C.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">MultiScreenHTS-IP Filter Plate</td>
			<td style="width:101px;">Millipore</td>
			<td style="width:143px;">MSIPS4W10</td>
			<td>Sterile with pore size of 0.45 &#181;m.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Mouse anti-human IFN-&#947; capture antibody</td>
			<td style="width:101px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:143px;">551221</td>
			<td>NIB42 clone.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Pepmix VZV IE63&#160;</td>
			<td style="width:101px;">JPT Peptide Technologies</td>
			<td style="width:143px;">PM-VZV-IE63</td>
			<td>Dissolve contents of one vial in 40 &#956;L of DMSO. Use within 6 months.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Biotin-conjugated anti-IFN-&#947; monoclonal antibody</td>
			<td style="width:101px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:143px;">554550</td>
			<td>4SB3 clone.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Streptavidin conjugated with alkaline phosphatase&#160;</td>
			<td style="width:101px;">Bio-Rad Life Science</td>
			<td style="width:143px;">170-3554</td>
			<td>Dilute for use on the same day.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">BCIP/NBT</td>
			<td style="width:101px;">Bio-Rad Life Science</td>
			<td style="width:143px;">170-6432</td>
			<td>Protect from light.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

development of an ifn-&#947; elispot assay to assess varicella-zoster virus-specific cell-mediated immunity following umbilical cord blood transplantation

छोटी चेचक दाद वायरस (VZV) गर्भनाल रक्त प्रत्यारोपण (UCBT) निम्नलिखित रुग्णता और मृत्यु दर का एक महत्वपूर्ण कारण है. इस कारण से, antiherpetic प्रोफिलैक्सिस VZV संक्रमण के साथ जुड़े जटिलताओं को रोकने के लिए बाल चिकित्सा UCBT प्राप्तकर्ताओं को व्यवस्थित ढंग से प्रशासित, लेकिन इसके इष्टतम अवधि को परिभाषित करता है कि कोई मजबूत साक्ष्य आधारित आम सहमति नहीं है. टी सेल की मध्यस्थता प्रतिरक्षा UCBT प्रोफिलैक्सिस बनाए रखा जाना चाहिए या बंद किया जा सकता है के रूप में संकेत प्रदान कर सके निम्नलिखित VZV विशेष टी सेल प्रतिक्रिया के पुनर्गठन का आकलन करने, VZV संक्रमण के नियंत्रण के लिए जिम्मेदार है. इस प्रयोजन के लिए एक VZV विशिष्ट गामा इंटरफेरॉन (IFN-γ) एंजाइम से जुड़ी immunospot (ELISpot) परख विकिरणित रहते तनु VZV वैक्सीन के साथ इन विट्रो उत्तेजना के जवाब में टी lymphocytes द्वारा IFN-γ उत्पादन चिह्नित करने के लिए विकसित किया गया था. यह परख VZV विशिष्ट सी की एक तेजी से प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य और संवेदनशील माप प्रदान करता हैपक्ष एक नैदानिक ​​सेटिंग में VZV विशिष्ट उन्मुक्ति के पुनर्गठन की निगरानी और VZV एंटीजन को प्रतिरक्षा जवाबदेही का आकलन करने के लिए उपयुक्त उन्मुक्ति मध्यस्थता.

ऊपर विस्तृत IFN-γ ELISpot प्रोटोकॉल परिमाण और VZV 4 के खिलाफ निर्देशित सेल की मध्यस्थता प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की गुणवत्ता मापने के लिए विकसित किया है और हमारी प्रयोगशाला में अनुकूलित किया गया था. VZV प्रतिज...

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Development of an IFN-ÃƒÅ½Ã‚Â³ ELISpot Assay to Assess Varicella-Zoster Virus-specific Cell-mediated Immunity Following Umbilical Cord Blood Transplantation

ऐसे एकल कोशिका के स्तर पर cytokine उत्पादन का पता लगाने और टी सेल प्रतिक्रिया की दोनों मात्रात्मक और गुणात्मक लक्षण वर्णन प्रदान जो गामा इंटरफेरॉन (IFN-γ) ELISpot, के रूप में कार्यात्मक assays के उपन्यास पीढ़ियों छोटी चेचक दाद के खिलाफ निर्देशित सेल की मध्यस्थता प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का आकलन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है वायरस (VZV).

गर्भनाल रक्त प्रत्यारोपण के बाद एक IFN-γ का आकलन करने के लिए ELISpot परख छोटी चेचक दाद वायरस विशेष सेल की मध्यस्थता प्रतिरक्षा का विकास

Varicella zoster virus (VZV) is a significant cause of morbidity and mortality following umbilical cord blood transplantation (UCBT). For this reason, ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Development of an IFN-&#947; ELISpot Assay to Assess Varicella-Zoster Virus-specific Cell-mediated Immunity Following Umbilical Cord Blood Transplantation

Enzyme-linked Immunospot Assay (ELISPOT):  Quantification of Th-1 Cellular Immune Responses Against Microbial Antigens

Enzyme-linked Immunospot Assay ELISPOT:  Quantification of Th-1 Cellular Immune Responses Against Microbial Antigens

एनजाइम से जुड़े Immunospot (ELISPOT) परख: TH-1 माइक्रोबियल प्रतिजनों के खिलाफ सेलुलर प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की मात्रा

Adaptive immunity is an important component to clearance of intracellular pathogens.  The ability to detect and quantify these responses in humans is an ...

Expanding Cytotoxic T Lymphocytes from Umbilical Cord Blood that Target Cytomegalovirus, Epstein-Barr Virus, and Adenovirus

गर्भनाल रक्त से साइटोटोक्सिक टी लिम्फोसाइटों विस्तार कि लक्ष्य Cytomegalovirus, Epstein-बर्र वायरस, और adenovirus

Virus infections after stem cell transplantation are among the most common causes of death, especially after cord blood (CB) transplantation (CBT) where ...

Clinical Application of Sleeping Beauty and Artificial Antigen Presenting Cells to Genetically Modify T Cells from Peripheral and Umbilical Cord Blood

Clinical Application of Sleeping Beauty and Artificial Antigen Presenting Cells to Genetically Modify T Cells from Peripheral and Umbilical Cord Blood

के नैदानिक ​​अनुप्रयोग<em&gt; स्लीपिंग ब्यूटी</em&gt; और कृत्रिम कोशिकाओं को पेश करने के लिए आनुवंशिक रूप से परिधीय और गर्भनाल रक्त से टी कोशिकाओं को संशोधित एंटीजन

The potency of clinical-grade T cells can be improved by combining gene therapy with immunotherapy to engineer  a biologic product with the potential for ...

Isolation of Precursor B-cell Subsets from Umbilical Cord Blood

अग्रदूत बी सेल सबसेट के गर्भनाल रक्त से अलगाव

Umbilical cord blood is highly enriched for hematopoietic progenitor cells at different lineage commitment stages. We have developed a protocol for ...

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

एक का प्रयोग न्यूमोकोकल औपनिवेशीकरण पर प्रोबायोटिक्स के प्रभाव की जांच<em&gt; इन विट्रो</em&gt; पालन परख

Adherence of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) to the epithelial lining of the nasopharynx can result in colonization and is considered a ...

A Flow Adhesion Assay to Study Leucocyte Recruitment to Human Hepatic Sinusoidal Endothelium Under Conditions of Shear Stress

कतरनी तनाव के मानव यकृत Sinusoidal अन्तःस्तर जिन स्थितियों को Leucocyte भर्ती अध्ययन के लिए एक फ्लो आसंजन परख

Leucocyte infiltration into human liver tissue is a common process in all adult inflammatory liver diseases. Chronic infiltration can drive the ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

न्युट्रोफिल अलगाव और विश्लेषण करने के लिए चिकित्सीय एजेंट लिंफोमा सेल संवेदनशीलता में उनकी भूमिका का निर्धारण करने के लिए

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

The Isolation, Differentiation, and Quantification of Human Antibody-secreting B Cells from Blood: ELISpot as a Functional Readout of Humoral Immunity

Humoral प्रतिरक्षण के एक कार्यात्मक readout के रूप में ELISPOT: अलगाव, भेदभाव, और मानव की मात्रा रक्त से एंटीबॉडी स्रावित बी प्रकोष्ठों

The hallmark of humoral immunity is to generate functional ASCs, which synthesize and secrete Abs specific to an antigen (Ag), such as a pathogen, and are ...

Use of a Monocyte Monolayer Assay to Evaluate Fc&#947; Receptor-mediated Phagocytosis

Use of a Monocyte Monolayer Assay to Evaluate FcÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â³ Receptor-mediated Phagocytosis

मूल्यांकन करने के लिए एक Monocyte Monolayer परख का उपयोग Fcγ रिसेप्टर की मध्यस्थता Phagocytosis

Although originally developed for predicting transfusion outcomes of serologically incompatible blood, the monocyte monolayer assay (MMA) is a highly ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

प्रतिदीप्ति आधारित neuraminidase निषेध परख विषाणु-विरोधी की neuraminidase अवरोध करनेवाला वर्ग के लिए इन्फ्लूएंजा वायरस की संवेदनशीलता का आकलन करने के लिए

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...