Name: development of an ifn-&#947; elispot assay to assess varicella-zoster virus-specific cell-mediated immunity following umbilical cord blood transplantation
Uploaded: 2014-07-09T21:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Development of an IFN-ÃŽÂ³ ELISpot Assay to Assess Varicella-Zoster Virus-specific Cell-mediated Immunity Following Umbilical Cord Blood Transplantation at Jo

著者らは、研究参加者とその保護者に感謝したいと思います。また、統計分析のために、彼のELISPOTリーダー、博士Luboアレクサンドロフへのアクセスのために博士Réjeanラポイント（CHUMノートルダム、モントリオール、カナダ）を感謝したい、とデニス割い、サンドラ·キャロン、シルビーヴァロワや専門家の技術のためのマーティンキャティう援助。ルフォンドール操作LA財団センターデcancérologieチャールズ·ブリュノにより、HSとPOにレprojetsデRECHERCHEクリニークらD&#39;評価に関する研究DES技術（CHUサントジュスティーヌ）を注ぐ、との白血病リンパ腫協会によるからの補助金によってサポートされているカナダ。 ISFは、ラ·財団​​CHUサントジュスティーヌ、ル·フォン·デ·ラ·RECHERCHEデュケベックサンテ（FRQS）からの奨学金によってサポートされていました。 AJGは微生物学、Infectiology＆免疫学教室、モントリオール大学（ガブリエル·マーキス奨学金）、FRQS、健康研究のカナダの協会からの奨学金を受賞したeSearchは（CIHR）。 NMは、ラ·財団​​CHUサントジュスティーヌ、コール財団、FRQSによってサポートされていました。

この研究計画は、研究を行ったCHUサントジュスティーヌ、モントリオール、ケベック、カナダの機関倫理審査委員会によって承認された。インフォームドコンセントを求め、すべての研究参加者、両親または法的保護者から得られた。すべての手順は、1日目に行い、2（層流フードの下で、すなわち ）、無菌条件下で行わなければならない。ヒトの血液を処理するための標準的な安全?...

修正およびトラブルシューティング：IFN-γエリスポットアッセイは、ヒト免疫不全ウイルス1型（HIV-1）24,25、C型肝炎ウイルス（HCV）26を含む微生物病原体の種々に対して向けられた細胞性免疫応答を調べるために使用されてきた、 27、および結核菌 28,29は 、ほんの数名に。ここでは、小児UCBT受信者の回復にVZV特異的免疫再構築の相関を定義する希望を?...

1989年に初めて行われ、UCBTは、ますます子供1における種々の新生物および非腫瘍性血液疾患の治療の一部として使用される。 VZVは（再活性化後）2異なる疾患、（一次感染後）水痘や帯状疱疹を引き起こす細胞変性人間アルファヘルペスウイルスである。一次感染後、VZVは後根神経節の感覚神経内守らホストの寿命を通じて持続します。 UCBT次の最も脅かす感染性合併症の一つは、VZV 2-4に関連している。当社の臨床センターでは、VZV予防がない場合には、VZV病のVZV疾患の累積発生率は3年でpostUCBTは46％であった。これらの患者において、 デノボでの感染又はVZVの再活性化は、多くの場合、中枢神経系、肺及び肝臓5-7に内臓の普及に関連している。その結果、アシクロビル、バラシクロビル、またはファムシクロビル予防は、一般的にUBに投与されているCTの受信者8,9。しかしながら、この治療戦略が考慮VZV特異的Tリンパ球またはVZV特異的T細胞応答の再構成の速度論の保護電位をとらない。長期的な抗ヘルペス予防の拡大使用に伴う潜在的な問題）は、患者過剰治療が含まれ; b）は、抗ウイルス薬剤耐性10,11の開発、およびC）VZV特異的免疫再構築12,13の減損。機能のVZV特異的なTリンパ球の検出は、VZV感染と臨床転帰の改善4,14,15からの長期的な保護の存在と相関するので、移植後の期間の間に、VZVに対して向け細胞性免疫応答を監視するウイルスのより合理的な使用をもたらすかもしれませんVZVの恩恵を受ける患者を区別するために医師を可能にすることによる治療は、免疫システムのVZV複製4,13を制御することができるものと予防。 IFN-γELISpotアッセイが広く、実験系および種々の臨床症状のモニタリング細胞媒介性免疫応答のために使用される。スポットは、反応部位に表示され、安定した沈殿物を生成し、発色基質の切断後に生成される。個々のスポットは、それによって個々のサイトカイン産生細胞のフットプリントを表しています。 IFN-γELISpotは、同族抗原とin vitroでの刺激に応答してIFN-γを産生する個々の細胞をex vivoでの能力を測定するだけでなく、所与の細胞集団16,17における細胞応答の頻度の推定値を提供する。その高い感度に加えて、IFN-γELISPOTは、抗ウイルス治療の開始や停止を誘導することを目的とし、個人の臨床プロトコルの文脈で可能なのを利用して、実行するのは簡単である。 describ下に詳述した手順エス具体VZV由来抗原によるインビトロ刺激後の末梢血単核細胞によるIFN-γの産生を検出し、測定するように設計されELISpotアッセイ。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="857">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Leucocep tube</td>
			<td style="width:101px;">VWR</td>
			<td style="width:143px;">89048-936/89048-932</td>
			<td style="width:397px;">12 ml or 50 ml tubes may be used depending on the volume of blood.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ficoll-Paque</td>
			<td style="width:101px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:143px;">17-1440-02</td>
			<td>Protect from light.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Benzonase nuclease</td>
			<td style="width:101px;">Novagen</td>
			<td style="width:143px;">70746-3</td>
			<td>Keep at -20 C.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">MultiScreenHTS-IP Filter Plate</td>
			<td style="width:101px;">Millipore</td>
			<td style="width:143px;">MSIPS4W10</td>
			<td>Sterile with pore size of 0.45 &#181;m.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Mouse anti-human IFN-&#947; capture antibody</td>
			<td style="width:101px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:143px;">551221</td>
			<td>NIB42 clone.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Pepmix VZV IE63&#160;</td>
			<td style="width:101px;">JPT Peptide Technologies</td>
			<td style="width:143px;">PM-VZV-IE63</td>
			<td>Dissolve contents of one vial in 40 &#956;L of DMSO. Use within 6 months.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Biotin-conjugated anti-IFN-&#947; monoclonal antibody</td>
			<td style="width:101px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:143px;">554550</td>
			<td>4SB3 clone.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Streptavidin conjugated with alkaline phosphatase&#160;</td>
			<td style="width:101px;">Bio-Rad Life Science</td>
			<td style="width:143px;">170-3554</td>
			<td>Dilute for use on the same day.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">BCIP/NBT</td>
			<td style="width:101px;">Bio-Rad Life Science</td>
			<td style="width:143px;">170-6432</td>
			<td>Protect from light.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

development of an ifn-&#947; elispot assay to assess varicella-zoster virus-specific cell-mediated immunity following umbilical cord blood transplantation

水痘帯状疱疹ウイルス（VZV）は、臍帯血移植（UCBT）以下の罹患率および死亡率の重要な原因である。このため、抗ヘルペス予防は、VZV感染に伴う合併症を防ぐために、小児UCBT受信者に体系的に投与されたが、その最適な期間を定義強い、エビデンスに基づくコンセンサスが存在していません。 T細胞媒介性免疫は、UCBTの予防を維持すべきかまたは中止することができるかどうかの指示を提供することができ、以下のVZV特異的T細胞応答の再構成を評価し、VZV感染の制御に関与するからである。そのためには、VZV特定γインターフェロン（IFN-γ）酵素結合免疫（エリスポット）アッセイは、照射された弱毒生VZVワクチンを用いたin vitro刺激に応答してTリンパ球によるIFN-γ産生を特徴づけるために開発されました。このアッセイは、VZV固有のCの、迅速な再現性かつ高感度な測定を提供エル臨床現場でのVZV特異的免疫の再構成を監視し、VZV抗原に対する免疫応答性を評価するのに適した免疫を媒介した。

上記に詳述IFN-γエリスポットプロトコルは大きさおよびVZV 4に対して向け細胞媒介性免疫応答の質を測定するために開発され、我々の研究室で最適化した。 VZV抗原の多様なソースは、刺激工程のために使用することができる。これらは、a）VZVから市販されている洗剤の不活化抽出物は、Vero細胞を18感染 ; IE63 15とORF4 19を含む特定のVZVコードされたタンパク質?...

Watch this Scientific Journal Video about Development of an IFN-ÃŽÂ³ ELISpot Assay to Assess Varicella-Zoster Virus-specific Cell-mediated Immunity Following Umbilical Cord Blood Transplantation at Jo

Development of an IFN-ÃƒÅ½Ã‚Â³ ELISpot Assay to Assess Varicella-Zoster Virus-specific Cell-mediated Immunity Following Umbilical Cord Blood Transplantation

単一細胞レベルでのサイトカイン産生を検出し、T細胞応答の両方の定量的および定性的特徴づけを提供するようなγインターフェロン（IFN-γ）のELISpotのような機能アッセイの新規世代水痘帯状疱疹に対して向けられた細胞性免疫応答を評価するために使用することができるウイルス（VZV）。

臍帯血移植後の水痘帯状疱疹ウイルス特異的細胞性免疫を評価するために、IFN-γELISPOTアッセイの開発

Varicella zoster virus (VZV) is a significant cause of morbidity and mortality following umbilical cord blood transplantation (UCBT). For this reason, ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Development of an IFN-&#947; ELISpot Assay to Assess Varicella-Zoster Virus-specific Cell-mediated Immunity Following Umbilical Cord Blood Transplantation

Enzyme-linked Immunospot Assay (ELISPOT):  Quantification of Th-1 Cellular Immune Responses Against Microbial Antigens

Enzyme-linked Immunospot Assay ELISPOT:  Quantification of Th-1 Cellular Immune Responses Against Microbial Antigens

酵素結合Immunospotアッセイ（ELISPOT）：微生物の抗原に対してのTh - 1細胞​​性免疫応答の定量化

Adaptive immunity is an important component to clearance of intracellular pathogens.  The ability to detect and quantify these responses in humans is an ...

Expanding Cytotoxic T Lymphocytes from Umbilical Cord Blood that Target Cytomegalovirus, Epstein-Barr Virus, and Adenovirus

臍帯血から細胞傷害性Tリンパ球の拡大をそのターゲットサイトメガロウイルス、エプスタイン - バーウイルス、およびアデノウイルス

Virus infections after stem cell transplantation are among the most common causes of death, especially after cord blood (CB) transplantation (CBT) where ...

Clinical Application of Sleeping Beauty and Artificial Antigen Presenting Cells to Genetically Modify T Cells from Peripheral and Umbilical Cord Blood

Clinical Application of Sleeping Beauty and Artificial Antigen Presenting Cells to Genetically Modify T Cells from Peripheral and Umbilical Cord Blood

の臨床応用<em&gt;眠れる森の美女</em遺伝的に末梢及び臍帯血由来のT細胞を変更する&gt;と人工抗原提示細胞

The potency of clinical-grade T cells can be improved by combining gene therapy with immunotherapy to engineer  a biologic product with the potential for ...

Isolation of Precursor B-cell Subsets from Umbilical Cord Blood

臍帯血から前駆B細胞サブセットの分離

Umbilical cord blood is highly enriched for hematopoietic progenitor cells at different lineage commitment stages. We have developed a protocol for ...

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

使用肺炎球菌植民に対するプロバイオティクスの影響を調査<em&gt;体外</em&gt;接着アッセイ

Adherence of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) to the epithelial lining of the nasopharynx can result in colonization and is considered a ...

A Flow Adhesion Assay to Study Leucocyte Recruitment to Human Hepatic Sinusoidal Endothelium Under Conditions of Shear Stress

せん断応力のヒト肝類洞内皮条件のことを白血球の募集を研究するフロー接着アッセイ

Leucocyte infiltration into human liver tissue is a common process in all adult inflammatory liver diseases. Chronic infiltration can drive the ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

治療薬にリンパ腫細胞の感度での役割を決定するために、好中球の単離と解析

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

The Isolation, Differentiation, and Quantification of Human Antibody-secreting B Cells from Blood: ELISpot as a Functional Readout of Humoral Immunity

単離、分化、および血液からヒト抗体を分泌するB細胞の定量化：体液性免疫の機能読み出しなどのELISpot

The hallmark of humoral immunity is to generate functional ASCs, which synthesize and secrete Abs specific to an antigen (Ag), such as a pathogen, and are ...

Use of a Monocyte Monolayer Assay to Evaluate Fc&#947; Receptor-mediated Phagocytosis

Use of a Monocyte Monolayer Assay to Evaluate FcÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â³ Receptor-mediated Phagocytosis

Fcγ受容体媒介食作用を評価するために、単球単層アッセイの使用

Although originally developed for predicting transfusion outcomes of serologically incompatible blood, the monocyte monolayer assay (MMA) is a highly ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

蛍光ベースのノイラミニダーゼ阻害アッセイ抗ウイルスのノイラミニダーゼ阻害剤クラスにインフルエンザウイルスの感受性を評価します

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...